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METODOLOGIA DE INVESTIGACION

Obtencin de muestras de races con suelo rizosfericos


Colectaron aproximadamente 50 g de races con suelo adherido, se depositan en bolsas de
polietileno debidamente identificadas y se transportan en una caja trmica (10 1C). Ramos y
Gonzales (2015)
Medios selectivos de crecimiento

Para la preparacin de medio de cultivo Nfb semilquido, pesar los reactivos antes mencionados;
en seguida mezclar en un matraz Erlenmeyer con ayuda de un agitador y se aplica calor para
que se diluya el agar.
Aislamiento de bacterias rizosfricas fijadoras de nitrgeno aerobias
Para el aislamiento se utiliza suelo rizosfrico o muestras de raz. tomar 2 cm de raz por planta
colocndose en solucin salina de NaCl al 0.086 % e incubarlo por 72 h a 32 C, de cada tubo
tomar un ml del extracto, en seguida realizar siembras en tubos con medio Nfb semilquido
incubndose a 32 C por 48 h. Pasado este tiempo los tubos presentan el halo caracterstico del
genero Azospirillum las cuales fueron sembradas en medio Nfb solido con rojo congo. Se
realizaron diluciones seriadas hasta 10 10 de cada raz y se realizaron recuentos en cajas Petri.
Estas se incubaron a 32 C por 24 h. En este medio de cultivo A.brasilense y A. lipoferum, toman
un color rojo escarlata que permite la diferenciacin de otros gneros bacterianos.
Descripcin de colonias y pruebas bioqumicas
Despus de aislar las bacterias desarrollar medio Nfb slido.
Para identificar delas cepas aisladas se utilizaron las siguientes pruebas.
Prueba de la catalasa, permite la identificacin de bacterias del genero Azospirillum.
Prueba de movilidad, se utiliza para el reconocimiento del crecimiento lateral en
siembras por picadura en caldo de agar, para genero Azospirillum.
Prueba de tincin de Gram, este sistema de identificacin de bacilos Gran negativos
especficos para el gnero Azospirillum.

Determinacin de nitrgeno en hojas de lechuga

Segn el mtodo desarrollado por Kjeldahl consta de tres etapas:


1. Digestin: conversin del Nitrgeno (proveniente de las protenas, por ejm) en
ion amonio.
2. Destilacin: separacin por arrastre con vapor del amoniaco y posterior
solubilizaran en una solucin acida de concentracin conocida.
3. Valoracin: medicin de la cantidad de acido neutralizado por el amoniaco
disuelto, lo que indica la cantidad de Nitrgeno presente en la muestra inicial.

La determinacin de nitrgeno por este mtodo, consiste en digerir la


muestra en cido sulfrico concentrado con catalizadores, esto convierte los
compuestos orgnicos en dixido de carbono, agua y el nitrgeno de aminas se
convierte en Sulfato de Amonio NH4HSO4, Este sal se le agrega una solucin
de hidrxido de sodio esto libera el amoniaco de la sal y se destila en una
solucin de cido brico con algn indicador.