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Invest Clin 45(2): 121 - 130, 2004

Frecuencia de la mutación ∆F508 en
pacientes venezolanos afectados con fibrosis
quística.
Alisandra Morales-Machin, Lisbeth Borjas-Fajardo, Lennie Pineda, Sandra González,
Wilmer Delgado, Wiliam Zabala y Erika Fernández.
Unidad de Genética Médica, Facultad de Medicina, Universidad del Zulia, Maracaibo,
Venezuela.
Palabras clave: Fibrosis quística, mutación ∆F508, reacción en cadena de la
polimerasa.

Resumen. La Fibrosis Quística (FQ), es la enfermedad autosómica recesi-
va severa más frecuente en poblaciones caucásicas, en las que tiene una inci-
dencia de 1/2500 individuos. Se caracteriza por una alteración generalizada
de las glándulas exocrinas y es producida por más de mil mutaciones de un
gen localizado en la región 7q31, que codifica una proteína llamada Regula-
dor de la Conductancia Transmembrana de FQ (RCTFQ). La mutación más
frecuente es la ∆F508, que consiste en la deleción del codón que codifica a la
fenilalanina en la posición 508. El objetivo de este trabajo fue determinar la
frecuencia de la mutación ∆F508 en pacientes venezolanos afectados con FQ
mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (RCP). Se estudiaron 30 pa-
cientes pertenecientes a 28 familias, que por clínica y 2 determinaciones de
cloruros en sudor > 60 meq/L fueron diagnosticados como afectados con FQ.
La detección de la mutación se realizó a partir de amplificación por RCP de
un segmento del gen de FQ de 98 pares de bases (pb) que contiene el codón
que codifica a la fenilalanina en la posición 508 y el cual está ausente en los
que tienen la mutación. La frecuencia del alelo ∆F508 fue de 26,79%, distri-
buídos en 6 homocigotos ∆F508 y 7 heterocigotos compuestos ∆F508/X. El
resto de las mutaciones, no ∆F508, representaron el 73,21%. La frecuencia
del alelo ∆F508 en esta muestra es menor a la reportada en países europeos.
En América Latina se ha observado una gran heterogeneidad en su frecuencia,
esta variación podría explicarse por los diferentes patrones de mestizaje dados
por migración externa y de las alteraciones moleculares de FQ que existen en
la población que se analice. En este trabajo, la mutación ∆F508 proviene de
abuelos en su mayoría (79,41%) nacidos en países mediterráneos y en Colom-
bia y en las no ∆F508, los abuelos son nacidos preferentemente en Venezuela
(79,27%) y Colombia (17,07%).

Autor de Correspondencia: Alisandra Morales-Machin, Unidad de Genética Médica, Facultad de Medicina, Uni-
versidad del Zulia, Hospital Universitario de Maracaibo. Maracaibo, Venezuela.

Cystic Fibrosis (CF) is the most common and severe autosomal recessive disease in Caucasian populations.130 Key words: Cystic fibrosis. Aceptado: 19-01-2004. y la frecuencia estimada nica de la FQ. sal. Frequency of ∆F508 mutation in venezuelan patients with cystic fibrosis. con una inci. polymerase chain reaction.41%) who were born in Mediterranean countries and Colombia. La Fibrosis Quística (FQ). We studied thirty patients of twenty eight fam- ilies who were diagnosed with CF based on their clinical features and sweat chloride level > 60 mEq/l in two determinations. This variation results from mixed populations with a different genetic background influenced by ex- ternal migration and CF molecular alterations. tales como: presentar una o Investigación Clínica 45(2): 2004 . Detection of the mutation was performed from the amplification of a 98 pair of bases (pb) CF gene seg- ment which contains the codon that encodes fenilalanine in the 508 position by PCR. This PCR product is absent in those who have the mutation. It is characterized by a generalized disturbance in exocrine glands and it is caused by over one thousand mutations at the cystic fibrosis conductance regulator gene (CFTR) mapped at 7q31. manifestándose dencia de 1 en 2.21%.122 Morales-Machin y col. The reminder mutations (no ∆F508) repre- sent 73. while the no ∆F508 mutations come from grandparents who were born in Venezuela (79. 45(2): 121 . Dada la gran variabilidad clí- es de 1 en 42. which exists in the analyzed populations.733. In this study. pulmonar obstructi- cuente en la población blanca.500 nacidos vivos y una en la piel por sudor con alto contenido de frecuencia de portadores de 1 en 25 (1-4). On the other hand. se han establecido criterios de portadores es de 1 en 104 personas (5). Es una enfermedad con variabilidad fe- En Venezuela se ha publicado que la fre.27%) and Colombia (17. The ∆F508 allelic frequency was 26. ∆F508 mutation. Abstract. The ∆F508 frequency in our sample is less than the reported in European countries. Invest Clín 2004. diagnósticos. es la enfer. with an incidence of 1 in 2500 live births.79%. The aim of this study was to determine the fre- quency of the ∆F508 mutation in Venezuelan patients with CF using the Poly- merase Chain Reaction (PCR). distributed in six homozygous and seven compound heterozygote ∆F508/X. the ∆F508 mutation comes mainly from grandpar- ents (79. Recibido: 06-06-2002. con síntomas de carácter predominante- medad autosómica recesiva severa más fre. ∆F508 is the most frequent mutation worldwide and it consists in a deletion of the codon that encodes fenilalanine at the 508 protein´s position. INTRODUCCIÓN La FQ cursa con un incremento de la viscosidad del moco en diferentes órganos. mente gastrointestinal.07%). vo crónico y genitourinario. notípica que puede simular varios cuadros cuencia del fenotipo en la población general clínicos (6-8). a ∆F508 frequency highly heteroge- neous has been observed in Latin-American countries.

se estudiaron mentara la frecuencia de FQ fuera de Euro. La primera Zulia. atendidos en la (pb) en el gen. resultando en la deleción Unidad de Genética Médica de la Universi- del aminoácido fenilalanina en la posición dad del Zulia (UGM-LUZ) de Maracaibo. humanas y que. molecularmente los 56 progenitores de pa. Ve- 508 de la proteína. que corresponde a un perío- o diferencia de potencial nasal alterado do temprano de la divergencia de las razas (9. el alelo ori- positivo para FQ ( elevación de los niveles ginado en las comunidades de agricultores séricos de tripsina inmunoreactiva) junto a procedentes del Asia Menor. Se utilizó un control negati- prevalentes. muestra un gradiente noroeste-sureste con una frecuencia máxima. quienes estarían protegi. 22. revela- membrana de FQ (RCTFQ) que funciona do por las sondas KM19 y XV2C. durante las migraciones y los procesos de en sudor mayor de 60 meq/L utilizando la sedentarización que comenzaron en el suro- técnica de Iontoforesis con Pilocarpina en riente del continente y avanzaron lenta- dos o más ocasiones. Han sido más analizado. durante el pe- mutaciones en ambos alelos del gen de FQ. temente la preservación ancestral de un santes de la enfermedad y sus frecuencias segmento genómico que incluye al gen varían en las diferentes poblaciones (9. entre los cuales el haplotipo B. Según esta hipótesis.10). Este fenómeno sugiere fuer- reportadas más de 1000 mutaciones cau. respectivamente. Escherichia ciones de Cl– en sudor mayor de 60 mEq/L. La hipótesis señalada. La segunda hipótesis. pertene- teado dos hipótesis complementarias apoya. locarpina (26). nos clínicos característicos y 2 determina- rotoxinas del Vibrio cholerae. coli y Salmonella typhi (21-24) y esta pro. utilizando la técnica de Iontoforesis con Pi- tección haría que la presión selectiva au. o un examen de pesquizaje neonatal fundador. Así mismo. 16). mutado (12. o his. utilizando la Reacción en Cadena fica en gradiente de este alelo en Europa de la Polimerasa (RCP). que nar la frecuencia de la mutación ∆F508 en consiste en la deleción de 3 pares de bases pacientes afectados con FQ. diagnóstico de FQ por la presencia de sig- dos de la acción deshidratante de las ente. se diseminó un incremento en la concentración de Cl. cientes a 28 familias evaluadas en la Unidad das por evidencias de tipo experimental y de Genética Médica de la Universidad del poblacional. 17).130. La mutación más frecuente a nivel mundial El objetivo de este trabajo fue determi- (66%) (18) es la denominada ∆F508. nezuela. o identificación de dos mente hacia el noroccidente. La distribución geográ. tipos determinados por marcadores genéti- mada regulador de la conductancia trans. probablemente. Mide 250 kilobases (Kb). 45(2): 121 . gradiente observado se debe a un efecto nos.2%) (19) y mínima en Turquía (21. cos. es apoyada (7q31) en el año 1985 y fue clonado en el por el fenómeno de desequilibrio de liga- año 1989 (11-14).Frecuencia de la mutación ∆F508 en pacientes venezolanos afectados con fibrosis quística 123 más características fenotípicas de FQ. 2004 .3%) (20). sugiere que el toria de FQ en hermanos o primos herma. Se estudiaron 30 individuos. 25). en Dinamarca MATERIALES Y MÉTODOS (87. a quienes se les realizó historia clíni- sugiere que existe una ventaja selectiva de ca familiar y en los cuales se estableció el los heterocigotos. ha sido el como un canal de cloro (15. fue favore- El gen de la FQ fue identificado en la cido por una ventaja selectiva para los hete- banda 31 del brazo largo del cromosoma 7 rocigotos. donde esas enfermedades son más esos pacientes. ríodo neolítico. vo (C-) representado por un individuo vene- Vol. miento entre el alelo ∆F508 y varios haplo- tiene 27 exones y codifica una proteína lla. Para explicar este hecho se han plan.

. extensión a 72°C durante 1 tado con FQ heterocigoto compuesto para min y una extensión prolongada a 72°C de la mutación ∆F508. fía con película Polaroid instantánea 667. Estos iniciadores cons.2 µL de agua ultrapura. sencia de un fragmento de 98 pb y el alelo ción ∆F508 se le extrajo a cada individuo 5 mutado por un fragmento de 95 pb. rrespondientes a los llamados heteroduplex. de la Facultad de Medicina de la Uni. desnaturalización prolongada a 94°C duran- sitivos. dente de isonimia entre las parejas. y la dife- y CF2 5’. se mg/mL de Bromuro de Etidio. ron molecularmente 30 afectados con FQ. con cada reacción y se colocó en un controlador 2 determinaciones de Cl– en sudor. Monterrey. RESULTADOS tan de 24 bases cada uno y limitan un seg- mento de 98 pb en cuyo interior se localiza Se estudiaron 28 familias y se analiza- el codón que codifica para el aminoácido fe. loró con el estadístico χ2. El montaje de En 2 familias se estudiaron 2 hermanos la RCP se realizó con 200 ng de ADN genó. en gel de poliacrilamida al 12% en buffer Se registró el lugar de nacimiento de Tris-EDTA-Borato 1 x. los cuatro abuelos de los afectados. con el siguiente programa: sin la mutación ∆F508 y dos controles po. Se utilizaron los iniciadores CF1 5’. (28) y este trabajo fue va- GTT TTC CTG GAT TAT GCC TGG CAC. digerido con Hae III.3 µL de obtenidos en el estudio molecular: 14. térmico programable PTC-100 de la MJ Re- res de 60 mEq/L y con patrón molecular search. México. También se usó un 12 min (28). ción se separaron por electroforesis vertical ción sin ADN. Inc. El gráfico de la mutación. sano. obtenido de un afec. 5 µL de En la Tabla I se observan los resultados cada iniciador. 1. sin signos clínicos de FQ.GTT GGC ATG GTT TGA TGA rencia de la frecuencia alélica entre varios CGC TTC. 3 µL de MgCl2. gel se coloreó con una solución de 5 Para la realización de este trabajo. versidad Autónoma de Nuevo León (UANL). mediante la La diferencia observada entre el traba- RCP.3’ donados por el Dr. La detección de la mutación ∆F508 se los cuales son el resultado del apareamien- realizó a través de la amplificación de parte to de los 2 alelos. países latinoamericanos y Venezuela se va- rrera. µL de solución amortiguadora 10X. alineamiento a 62°C ∆F508 y otro (C2+). con la Se utilizó como marcador de peso mo- finalidad de conocer el probable origen geo. jo de Arias y col. meno. durante 45 seg. El alelo normal se evidenció por la pre- Para el análisis molecular de la muta. Hugo Ba. del exon 10 del gen de FQ. co- la técnica Fenol Sevag (27). a la cual se le extrajo el ácido rrespondientes a ambos fragmentos (95 y desoxirribonucleíco (ADN) genómico según 98 pb) y dos bandas de mayor tamaño. ca Médica de LUZ. afectados. se visualizó contó con el consentimiento informado de en un transiluminador de luz ultravioleta las familias estudiadas y la aprobación del (Hoefer Mod. uno (C1+) obtenido de un afecta. Los productos de la amplifica- control de sistema (CS) o mezcla de reac. lecular el ∅ 174.5 µL de Taq polimerasa por de los afectados con FQ resultaron homoci- Investigación Clínica 45(2): 2004 . obser- conteniendo 25.29% dNTP´s y 0. En 5 familias se recogió antece- mico en un volumen de 45 µL de reacción. 5 vándose consanguinidad parental en 4.3’ lorada utilizando el estadístico d. nilalanina en la posición 508.124 Morales-Machin y col. zolano. En los mL de sangre periférica anticoagulada con heterocigotos se observaron dos bandas co- EDTA 5 mM. UVTM-25) y se tomó fotogra- Comité de Bioética de la Unidad de Genéti. te 5 min y 30 ciclos de: desnaturalización a do con FQ homocigoto para la mutación 94°C durante 1 min.

5 No ∆F508 (X/X) 17 60. La Fig. bia.79 41 73. 23.1 28 Chile 36 72 21 29. Los alelos no ∆F508. ∆F508 o genotipo X/X. Colombia.29 0 0 Heterocigoto ∆F508/no ∆F508 7 25 14 7 12.53% en Europa y 20. En todos los progenito.29 8 8 14.88% eran nacidos en Colom- ∆F508 (X).59% en Vene- En la Tabla II se observa la frecuencia zuela.71 Total 28 100 56 15 26. miento de los abuelos de los afectados. la cual venezolanos afectados con FQ en este tra. 1 se muestra el patrón mole- 25% fueron heterocigotos compuestos cular de los afectados homocigotos ∆F508/X. 2004 .79%.5 7 12. 2 representa la procedencia La frecuencia del alelo ∆F508 en los probable de las mutaciones de FQ.79 Este trabajo gotos para el alelo ∆F508 (∆F508/∆F508).27% fa- Vol. en 2 alelos no se logró determinar el de la mutación ∆F508 en diferentes países lugar de origen. En la Fig. heterocigotos compuestos ∆F508 fue corro. por lo cual se patrón molecular no se detectó la mutación asume la presencia de dos mutaciones no ∆F508.21% de los alelos restantes eran no los en un 55. ∆F508 provinieron de familias cuyos abue- El 73. mayo- latinoamericanos incluyendo Venezuela.4 39 Venezuela 49 98 53 54 28 28 56 15 26.71 34 0 0 34 60. 45(2): 121 . Italia y Portugal. ritariamente correspondieron a 79. España.2 41 Cuba 72 144 49 34 38 Colombia 24 48 17 35. la X representa un alelo no ∆F508/∆F508. Los 19 alelos borada la presencia de la mutaciòn ∆F508.71% no se pudo evidenciar la puestos ∆F508/X y de los afectados en cuyo presencia de alelos ∆F508.Frecuencia de la mutación ∆F508 en pacientes venezolanos afectados con fibrosis quística 125 TABLA I ESTUDIO MOLECULAR DE AFECTADOS CON FIBROSIS QUÍSTICA Genotipos Pacientes Alelos Alelos∆F508 Alelos No ∆F508 (X) n % (n) n % n % Homocigoto ∆F508/∆F508 4 14.21 TABLA II FRECUENCIA DE LA MUTACIÓN ∆F508 EN DIFERENTES PAÍSES Países Afectados Alelos Frecuencia Referencia N % Argentina 114 228 130 57 35 Brasil 190 380 180 47 37 México 10 20 13 59.130. de los heterocigotos com- ∆F508 y 60. lo- res de los homocigotos ∆F508 y en 7 de los calizados en 5 países: Venezuela. fue determinada a través del lugar de naci- bajo fue de 26.

Varios estudios han demostrado 30 una variación considerable en la distribu- ción de la mutación ∆F508 en diferentes 20 poblaciones. Investigación Clínica 45(2): 2004 . 80 17. homocigoto ∆F508/∆F508). Cs: Control de sistema (mezcla de reacción sin ADN). En Euro- pa esta frecuencia decrece progresivamente Fig.3 a 27% en Turquía (20.66% de Europa. las cuales son el resultado del apareamiento del fragmento de 95 y de 98 pb. 33) y 20. 34). (32. 2. 30) y Norteamérica 75% (11). Heteroduplex: Dos bandas de mayor tamaño. 1.126 Morales-Machin y col. Diagnóstico molecular de la mutación ∆F508 en afectados con Fibrosis Quística. M: Marcador de peso molecular (∅174 digerido con Hae III). Bélgica y Francia 80% 0 Venezuela Colombia Europa (3. A1: Patrón molecu- lar de afectado con Fibrosis Quística homocigoto ∆F508/∆F508. A2: Patrón molecular de afectado con Fibrosis Quística heterocigoto compuesto ∆F508/X. 70 D F508 60 NO D F508 DISCUSIÓN 50 La mutación ∆F508 es la alteración 40 molecular más frecuente en los pacientes con FQ. Heterocigoto com- puesto ∆F508/X).6% en España (31).07% de Colombia y 3. 45 a 55% en Italia Quística. M Cs C+1 C+2 C. Entre las poblaciones con ma- 10 yor frecuencia reportada se encuentran: Di- namarca 88% (19). A1 A2 A3 M 194pb Heteroduplex 118 pb 98pb 95pb Fig. A3: Patrón molecular de afectado con Fibrosis Quística sin la mutación ∆F508 (X/X). C+1: Control positivo 1 (afectado con Fibrosis Quística. milias con abuelos nacidos en Venezuela. C–: Control negativo (individuo sin Fibrosis Quística). C+2: Control positivo 2 (afectado con Fibrosis Quística. Lugar de nacimiento de los abuelos de hacia la zona del Mediterráneo siendo de 48 los pacientes afectados con Fibrosis a 50.

01. dieron asiento a distintas ondas migrato- El primer reporte de la frecuencia del rias.4% (40) y 48% (41) con variaciones en mestiza resultante de la mezcla racial entre los diferentes departamentos y regiones es. el sur de Europa y Co- se sabe tiene menor frecuencia de muta. La mezcla con población negra tam- tinoamérica resulta de particular interés. estudio. lombia e incluso mutaciones propias de la ción ∆F508 en relación con el Norte de Eu. La variación de la frecuencia de esta abuelos venezolanos asciende a 79. 2004 . principalmente 35. p < 0. en el cual se analizaron princi. En Chile la frecuencia mutación ∆F508.27%.Frecuencia de la mutación ∆F508 en pacientes venezolanos afectados con fibrosis quística 127 El rastreo de la mutación ∆F508 en La. de procedencia española e mutación ∆F508 varía sustancialmente en.33%) en este pués del descubrimiento de nuestro conti. La frecuencia de 26. En México la frecuencia del Estos resultados son sugerentes de que exis- alelo oscila entre 10% (37) y 50. es de 29.79% del alelo mericanas fue un estudio realizado en ∆F508 encontrada en la muestra de 56 cro- Argentina. nos sugiere la aplicación de análi- nente. así como el obviamente diferente ancestro troducido y diseminado a través de procesos indígena de las diferentes poblaciones que de migración y mestizaje.42. mutación en Latinoamérica puede explicar.1% (29).88% eran de origen co- cativas en la distribución del alelo ∆F508 lombiano. En ten diferencias en la frecuencia del alelo Brasil. en la muestra analizada (36) p < 0. mutaciones no ∆F508 (X). ropa. que como tales como Africa. FQ No ∆F508 detectadas (68. es heterogénea. La tudiadas. Cuba y Co.59% de los abuelos de los pacien- p < 0.130.001. con la mutación ∆F508 en el gen de FQ.6% plicar las variaciones en la frecuencia de la en Santander (41). la frecuencia promedio reportada es ∆F508 dependiendo de la población que se de 47%. venezolano y el 55. Vol. región. 45(2): 121 . con una frecuencia por Arias y col para pacientes venezolanos.2% (42). en Colombia la La composición de la población vene- frecuencia a nivel nacional varía entre zolana. sis adicionales para determinar otras muta- dores la mayor fuente de mutaciones de FQ ciones ya reportadas y frecuentes en países provino del Sur de Europa (43). Con respecto a Chile. el canos. con el valor más bajo de 25% en el contribución de estos tres grupos puede ex- Departamento Bolívar y el más alto 66. el porcentaje de cos. analice. En Cuba se ha reportado tracción étnica diferencial según localidad. Según el origen geográfico de los alelos En relación a estos países latinoameri. Mientras que en los pacientes con tre diferentes grupos poblacionales y étni. que es posible que este alelo haya sido in.53% de origen del Como se observa. ya bién debe influir en la variación observada. nativos y de negros. mosomas analizados en el presente estudio palmente descendientes de italianos y de difiere significativamente de la reportada otros grupos europeos. la frecuencia de la Sur de Europa. seguidos de 23. alelo ∆F508 para las comunidades latinoa. una frecuencia de 34% (39). tes con la mutación ∆F508 eran de origen lombia no se observaron diferencias signifi. Según reportes de varios investiga. de 57% (36). quienes encuentran una frecuencia del ale- te más reciente se encontró una frecuencia lo ∆F508 de 54% (28) d: 39. del alelo ∆F508 de 63% (35). italiana. europeos del Sur. Brasil (38) y México (29) solo el 20.01. La alta frecuencia de mutaciones de se por el proceso de mestizaje iniciado des. pudiendo esto reflejar a su vez ex- poblacional (38). en otro repor. se observa que la frecuencia en este cual fue determinado a través del lugar de estudio es significativamente baja si se nacimiento de los abuelos paternos y mater- compara con la reportada en Argentina nos de los afectados. con marcada heterogeneidad intra.

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