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DETERMINACION Y PRESENCIA DE MICROORGANISMOS FECALES

(COLIFORMES Y ENTEROCOCOS) EN AGUAS DE RIEGO AGRICOLA
DEL DISTRITO DE SANTA MARIA.

El distrito santa María perteneciente a provincia de Huaura, región Lima. Es uno de los distritos
que utiliza el agua de río para realizar el riego agrícola, basándonos en investigaciones
anteriores en las cuales se determinaron que las aguas de río empleadas para el riego agrícola
presentaban presencia de microorganismos fecales y parásitos. Nuestra investigación se basa
en la determinación de microrganismos fecales en aguas de riego agrícola (vegetales de tallo
corto), ya que estos cultivos están destinados al consumo de los pobladores del distrito de Santa
María.

MATERIALES Y MÉTODOS

LUGAR DE ESTUDIO:

El presente estudio se realizara en un periodo que abarcara desde mayo del 2016 a julio del
2016. Se investigarán 10 tipos de muestras de aguas de riego agrícola. Los muestreos se
llevaron a cabo en el distrito de Santa María.

El estudio bacteriológico se realizara en el Laboratorio de Microbiología de los
alimentos de la Facultad de Bromatología y Nutrición de La Universidad
Nacional
José Faustino Sánchez Carrión, Huacho, región Lima.

ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS

En el presente estudio se llevarán a cabo las siguientes determinaciones
Microbiológicas.

 Cuantificación de coliformes fecales.

 Detección y recuento de microorganismos fecales.

 Aislamiento e identificación de coliformes y enterococos.

MUESTREO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

El muestreo se realizara en horas de la mañana, por ser la hora en que se
realiza el regado con aguas de regadíos. La unidad de muestra será las aguas
de regadíos, tomándose en cada punto (tres muestras), una muestra de cada
regadío de distintos lugares de en estudio.
Las muestras serán colocadas en frascos esterilizados de primer uso, tal como
son se recolecta y transportadas en un culer al Laboratorio de Microbiología
de los alimentos de la Facultad de Bromatología y Nutrición de La Universidad
Nacional José Faustino Sánchez Carrión, Huacho, región Lima.

ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS

en un tubo de CLVBB y en otro de agua de peptona y se les incubó a 44 ± 0. P. -3 II) RECUENTO DE COLIFORMES Se inoculó 1 ml de cada dilución en tubos de caldo lactosa bilis (2%) verde brillante (CLVBB). Los tubos CLVBB seleccionados fueron confirmados mediante la siembra en agar bilis lactosa rojo neutro cristal violeta (VRBA). repitiéndose esta observación a las 48 horas de incubación. obteniéndose la dilución 10-1 De ésta. se realizó la prueba del indol en el agua de peptona y se observó si los tubos de CLVBB presentaron gas.1%). Se calculó el NMP con el número de tubos positivos por dilución y la tabla respectiva (Apéndice 3). y se les incubó a 35 – 37º C. La presencia de coliformes se manifestó por colonias de color rojo oscuro y con diámetro mayor a 5 mm. obteniéndose la dilución 10-2.1º C. Después de 24 horas. Se anotó el número de tubos confirmados en cada dilución como positivos de coliformes y se calculó el NMP de coliformes (Apéndice 3). • Detección y recuento de coliforme: Técnica del Número Más Probable (NMP). 0. se extrajo 1 ml y se transfirió a un tubo que contenía 9 ml de A. De la misma manera. 0. incubado a 35 – 37º C durante 24 horas. se anotaron los tubos que mostraron producción de gas y quedaron seleccionados para la determinación de coliformes fecales (CF). III) DETERMINACIÓN DE COLIFORMES FECALES Se inoculó un asa de cada tubo CLVBB seleccionado.En el presente estudio se llevaran a cabo las siguientes determinaciones microbiológicas: • Cuantificación de coliformes fecales.1%. P. Pasadas 24 horas.1% (A. se obtuvo la dilución 10 . utilizándose 3 tubos por cada dilución. 1999) I) PREPARACIÓN DE DILUCIONES Se pesaran 10 g representativos de la muestra de vegetal y se homogenizara con 90 ml de agua peptonada al 0. TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) PARA RECUENTO DE COLIFORMES PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE COLIFORMES (MÉTODO 3. ICSMF. . Aquellos tubos gas positivo luego de 48 horas de incubación también fueron considerados.

se tomó una colonia representativa (nucleada.Los cultivos que resultaron simultáneamente. se consideraron como coliformes fecales. Se anotaron los tubos positivos por dilución y se determinó el NMP de coliformes fecales (Apéndice 3). y partir de cultivos de 24 horas en agar nutritivo inclinado se inocularon los medios IMViC. E) Prueba del Citrato Sódico Se sembraron tubos de agar citrato de Simmons. _ B) Prueba del Indol Se inocularon tubos de caldo triptona o de agua de peptona y se incubaron a 35 – 37º C. se seleccionaron colonias individuales y se sembraron cada una en agar nutritivo inclinado y en caldo lactosado.6 ml de la solución de naftol y 0. Se agitaron los tubos y se dejaron en reposo durante 2 a 4 horas. Luego de 48 horas de incubación.2 ml de la solución de hidróxido potásico. Pasado ese tiempo. Luego de 24 horas de incubación. Pasadas las 24 horas. D) Prueba de Voges-Proskauer Se inocularon tubos de caldo glucosa tamponado y se incubaron a 35 –37º C. se añadió a cada tubo 0. Luego de ser incubados a 35 – 37º .3 ml del reactivo de Kovacs y se agitó.2 – 0. por picadura en la columna de agar y por estría en la superficie inclinada. la aparición de un color rojo oscuro en la superficie de la capa de alcohol amílico indicó un resultado positivo. A partir de los cultivos gas positivos en caldo lactosado. para ser incubadas a 35 – 37º C. para ser incubados a 35 – 37º C durante 24 horas. Pasadas las 24 horas. se tiñó una extensión por el método de Gram para confirmar la presencia de bacilos Gram negativos no esporulados. gas e indol positivos. IV) PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE COLIFORMES (IMVIC) A) Técnica para el aislamiento y purificación de cultivos Se sembró un asa de cada tubo de CLVBB gas positivo a coliformes fecales en placas de agar eosina azul de metileno. se añadió a cada tubo 0. se añadió a cada tubo 5 gotas de la solución de rojo de metilo y se agitó. C) Prueba del Rojo de Metilo Se inocularon tubos de caldo glucosa tamponado y se incubaron a 35 – 37º C durante 5 días. Se anotó como positivo cuando apareció un color rojo bien definido y como negativo si el color fue amarillo. La aparición de un color rosa a carmesí se anotó como prueba positiva. Al cabo de 10 minutos. con o sin brillo metálico) de cada placa y se resembró en una placa de agar nutritivo. para ser incubada a 35 – 37º C.

fundamentalmente hortalizas que crecen a ras de suelo (Martínez L. Contaminación por basuras Es la presencia de residuos orgánicos (restos de comida.C durante 48 horas. La contaminación microbiológica del agua de riego es una de las principales causas que restringen la comercialización de productos cosechados.El Paso (región denominada Paso del Norte) mediante la detección de organismos indicadores de contaminación fecal. identificaron la calidad microbiológica del agua del Río Bravo. construidos fundamentalmente de cemento. neumáticos. Juan Pedro Flores-Margez1‡. se pudo deducir la calidad microbiológica. etc. proveniente de drenes y canales que desembocan en ambos lados de la frontera Juárez.) e inorgánicos (escombros. ANTECEDENTES Según Evangelina Olivas-Enrique . Se identificaron y cuantificaron los indicadores fecales Cryptosporidium y Giardia por técnicas de separación inmunomagnética e inmunofluorescencia. así como para las personas que entran en contacto con el agua del río.) en canales de regadío arrojados por . Dentro de los microrganismos más perjudiciales en cuanto a la salud de las personas. en ambas fronteras se encontró un número mayor del parásito Giardia que de Cryptosporidium. Vibrión cholerae. con los cuales se creen cámaras donde sedimente los sólidos y ascienda el material flotante. La mejor alternativa para evitar esta práctica es la implementación de pozos sépticos. animales muertos. no siendo segura en el 100% de las muestras ni para actividades recreativas ni aptas para riego agrícola. bloques o ladrillos. Salmonella typhi y Shigella. Actualmente la presencia indiscutible de enteropatógenos en el agua del Río Bravo constituye un riesgo para la salud pública. 2003). etc. El líquido aclarado fluye por una salida hasta zanjas subterráneas llenas de material poroso en donde se infiltra el líquido y se oxida aeróbicamente. Eréndira Soto-Mejía1. Es común que letrinas en zonas rurales tengan sistemas de alcantarillado que evacuen las aguas negras en canales de regadío por ser una alternativa fácil y rápida. Enrique Salazar-Sosa3 y Manuel Fortis-Hernández3 (año 2011) en el estudio de indicadores fecales y patogenos en agua descargada al Rio Bravo. Jaime Iglesias-Olivas2. asimismo. los que permiten inferir la presencia de patógenos intestinales. el arrojo de animales muertos a cauces y deyecciones animales liberadas a cursos de agua. el cual fue visible por el cambio del color verde claro del medio al azul. El material sólido decantado y flotante se descompone anaeróbicamente por varios meses hasta que se llene para luego ser removidos mecánicamente por camiones municipales o manualmente con baldes. y como negativo cuando no lo fue. envases de artículos de consumo diario. presentes en alimentos que han tenido contacto con aguas contaminadas son: Escherichia coli. tarros de pintura. se anotó como reacción positiva si hubo crecimiento. principalmente para los agricultores que la manejan y en el riego por la contaminación de los productos agrícolas de consumo humano. residuos vegetales. otros indicadores fueron las bacterias coliformes totales y Escherichia coli. pañales desechables. Mónica Serrano- Alamillo1. bolsas plásticas. Tipos de contaminación Contaminación por organismos patógenos: La contaminación microbiológica del agua se debe en gran medida a inadecuados sistemas de alcantarillado de zonas rurales y urbanas. Con base en que estos indicadores deben ser cero en el agua para beber y utilizando referencias para cuerpos de agua. Se observó un número mayor de parásitos y bacterias en las muestras del lado mexicano.

si no existen. La contaminación por aceites y grasas para la agricultura genera obstrucción de los filtros de malla o grava en sistemas de riego por goteo. perjudicando cultivos o caminos vecinales. (Martínez L. estos residuos no se eliminan durante el retrolavado de los filtros. por lo tanto. residuos de comida) genera contaminación del agua por su contenido de aceites y grasas y fosfatos contenidos principalmente en los detergentes. debido a esta razón. caseríos o pueblos por donde circula los canales. 2003) . deteriorando la imagen de la agricultura local. en épocas críticas. se debe hacer un esfuerzo por fomentar prácticas como el compostaje para el reciclaje orgánico y los residuos inorgánicos depositarlos en basureros municipales. lavado de ropa. como las baterías de auto. Aumenta el costo del agua ya que obliga a hacer limpiezas intensas y más frecuentes de los canales. La sola presencia de uno de estos compuestos puede dificultar la comercialización de hortalizas producidas en el lugar. obliga a hacer limpiezas con detergentes y escobillas en los filtros y su frecuencia dependerá del grado de contaminación del agua por estos compuestos. enterrarlos bajo tierra lejos de los domicilios (Martínez L. lo cual genera un costo adicional por mano de obra además de interrumpirse el suministro de aguas hacia los predios vecinos durante las faenas de limpieza lo cual. es común que. La contaminación por fosfatos provenientes fundamentalmente de los detergentes provoca un notable aumento del crecimiento y desarrollo de plantas acuáticas dentro de los cauces de aguas lo cual genera un aumento de la altura de agua en los canales. Servicios de recolección de basuras en lugares de muy baja densidad poblacional o a grandes distancias de centros poblacionales es prácticamente nula. Algunos desechos liberan compuestos tóxicos. Una de las soluciones más practicadas para abatir este problema consiste en limpiar los cauces y remover las plantas acuáticas. pueden generar estrés hídrico moderado a severo dependiendo del número de días. 2003). se produzcan desbordes de agua deteriorando los canales. Contaminación por residuos líquidos domiciliarios La liberación difusa y frecuente de aguas grises o servidas (aguas para uso en aseo personal. es instalar un desgrasador a la salida del lavaplatos y limpiarlo cuando este se llene.habitantes de villorrios. pilas o tarros de pintura. La solución a nivel de hogares para disminuir el contenido de grasas en el agua. por lo tanto.