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El ncleo tiene una estructura interna que organiza el material gentico y localiza
algunas funciones nucleares en sitios concretos, ej., la transcripcin de un gen se realiza
en el nuclolo. El ncleo contiene a los cromosomas, compuestos de cromatina
(protenas + ADN), que se condensa durante la mitosis para dar a resultado un
cromosoma. El nmero y el tamao de los cromosomas varan considerablemente de una
especie a otra. El ADN en se asocia a unas protenas histonas, que logan empaquetar el
ADN de tal manera de enrollar una hebra de 2 metros para que entre en el ncleo. Las
histonas tienen gran proporcin de AA bsicos, cargados positivamente que facilitan la
unin con la molcula de ADN cargada negativamente.
Existen 5 tipos importantes de histonas (H1, H2A, H2B, H3 y H4). La unidad bsica
estructural de la cromatina es el nucleosoma, un octmero de histona sujetado por una
H1 afuera y con 1.6 vueltas de ADN sobre s. Cada nucleosoma se separa por un
fragmento de alrededor unas 200 bases. Se denomina core del nucleosoma al ncleo
formado por octmeros de histonas. Este empaquetamiento, da como resultado una fibra
de cromatina de aproximadamente 10nm de dimetro, pero an se puede empaquetar
ms en fibras de 30nm.
Centrmero.
A su vez, se le unen mltiples protenas formando una estructura llamada cinetocoro, las
fibras del huso se adhieren a ste y las cromtidas se desplazan por las fibras hasta
llegar al polo opuesto, cumpliendo una funcin estructural. En humanos, se repite una
secuencia de ADN satlite , consiste en 172 pares de bases repetidas en tndem a lo
largo de millones de bases. Por su gran tamao, a los centrmeros de los mamferos se le
unen unos 30 o 40 microtbulos, mientras que en la levadura se une uno solo.
Telmeros.
Para algunos investigadores los telmeros son el plstico que envuelve la parte final de
los cordones de zapatos, que evita que se deshilachen, hasta que con el uso, lentamente
se van gastando. Estos protegen a los extremos de los cromosomas humanos del
proceso de envejecimiento, esto se traduce en la clula como un acortamiento lento de
las secuencias con los aos. La telomerasa cobra funcin primordial en mantener este
mecanismo, pues esta enzima ha sido catalogada como bsica para la vida, esta se
encarga de mantener a la clula joven. Una actividad alta de la telomerasa hace que la
longitud de los telmeros se mantenga y se retrase el deterioro celular. Los
descubridores de estas molculas han sido galardonados con el Nobel de Medicina 2009.
Correlacin estructura-funcin.
Por un lado, la acetilacin neutraliza la carga de la cola que interacciona con el ADN,
por lo que se reduce la fuerza del enrollamiento, el ADN se libera y se puede expresar. La
acetilacin se produce en residuos cargados positivamente, como lisina. Se han
estudiado muchos activadores transcripcionales y se lleg a que su funcin era la de
acetilar las histonas.
Por el otro, las protenas no histnicas HMG 14 y 17 (High Mobility Group) separan la
H1 del core para mantener una parte de la cromatina descondensada.
Por ltimo, la metilacin del ADN tambin sirve para controlar la transcripcin. Los
residuos de citosina se pueden metilar en el C5, se activa una protena llamada MeCp2 y
se inhibe la transcripcin. Su funcin en profundidad no se conoce, pero se cree que
consiste en un mecanismo importante de regulacin llamado imprinting, que regulan la
expresin.
Ciclo celular.
Un ciclo eucariota tipo dura 24 horas (clulas humanas en cultivo). Visto al microscopio,
el ciclo se divide en dos etapas: Mitosis e interfase. La mitosis es la divisin del ncleo,
separacin de los cromosomas y divisin celular (citocinesis). Esta dura un 5% del ciclo,
el resto es ocupado por la interfase. El ADN se duplica solo en la interfase, en la fase S
(sntesis). Esto, origina dos etapas vacas (gap) entre la interfase y la mitosis, que se las
llama fase G. La fase G1 consiste en una clula metablicamente activa y en
crecimiento. La fase G2 consiste en una fase de continuo crecimiento y sntesis de
protenas, preparndose para la divisin.
La progresin de las clulas a travs del ciclo esta estrictamente regulado por seales
internas o externas (hormonas). Existen puntos de coordinacin, ejemplo, el punto
START se encuentra en la G1 y regula el pasaje a la S. Una vez que las clulas pasan por
el START, siguen el ciclo. Pero si no hay disponibilidad de nutrientes, la clula para su
ciclo en START y entran en un estado de reposo G0. Hay otros puntos de control que
aseguran que la clula pase de fase en fase a medida que cumpla con determinados
requisitos. Una clula en G1 no puede pasar a la mitosis porque no tendra duplicado su
ADN. Si el ADN no est replicado o est lesionado, detiene el ciclo celular para que sea
duplicado o reparado respectivamente. En mamferos, la detencin en estos puntos de
control esta mediada por la accin de una protena conocida como p53, la cual proviene
de un gen daado en canceres, la p53 pierde funcin y las clulas se replican sin
importar de la mutacin gentica. Otro punto importante est en la fase S, para
conseguir que el genoma se replique una sola vez y se produzca la divisin celular. Hay
mecanismos como las protenas MCM, que impiden que la clula en G2 vuelva a
sintetizar ADN.
Mitosis
Meiosis
Todas las clulas somticas se dividen por mitosis, pero los gametos se dividen por
meiosis, un tipo de divisin celular que genera clulas hijas haploides y con material
gentico recombinado. Este proceso se realiza tras dos rondas de divisin consecutivas,
primero sucede la interfase (con duplicacin de ADN), luego la meiosis I y finalmente la
meiosis II. La primera fase de la meiosis difiere de la mitosis en que en la meiosis hay
recombinacin de los cromosomas (profase) y en el anafase se separan los cromosomas
(no as las cromtidas). Consideremos un paso a paso:
Segunda divisin meitica. Cada clula 2c y n entra en la profase II, donde se centran
en la placa ecuatorial en la metafase II, los microtbulos del huso mittico se unen al
cinetocoro de cada cromosoma, se separan las cromtidas en polos opuestos y terminan
dos clulas con la mitad de los cromosomas (n) y cantidad de ADN c.
El ADN sirve para expresar informacin dentro de la clula mediante la sntesis de ARNs
y protenas, expresando determinados genes del genoma. El primer paso en la
regulacin de un gen se da en la transcripcin del ADN a ARN, transformando el ARN
para transformar el transcripto funcional. En este proceso se transcribe continuamente
una sola hebra de ADN, formndose un dplex apareado ADN-ARN.
Las tres polimerasas requieren la misma protena de unin a la secuencia TATAA. La ARN
polimerasa I transcribe exclusivamente al ARNr, presente en repeticiones en tndem, con
un promotor de unas 150 pb reconocidas por factores de transcripcin que se unen de
forma cooperativa. La ARN polimerasa III transcribe el ARNt y algunos ARNs implicados
en el splicing y transporte de protenas. Estos genes tienen los promotores dentro de la
secuencia codificante.
ARN ribosmico. El 80% del ARN en la clula es de este tipo, luego de que el
transcripto se corta por enzimas especficas, se metilan las secuencias codificantes del
gen, desconocindose la funcin de esta reaccin.
ARN transferencia. Una ribozima (enzima que tiene ARN en el sitio activo) se encarga
de cortar para eliminar los intrones, se le agrega la secuencia CCA en el extremo 3 y se
modifican las bases. Estos hechos son muy importantes: primero, la secuencia CCA se
mantiene en todos los ARNt y sirven para la unin de AA en la sntesis proteica. Otro
aspecto de la maduracin de este ARN es que se modifican las bases (el 10%),
produciendo nucletidos modificados.
Otro proceso que ocurre en la maduracin del ARNm es el corte y empalme o splicing,
que consiste en la eliminacin de intrones (secuencias de ADN no codificante,
componen el 90% de las secuencias). Los pre-ARNm tienen secuencias al finalizar y al
comenzar cada intrn (pegadas a los exones) y en un punto medio del intrn conocido
como punto de ramificacin. Los pre-ARNm cortan la secuencia cuando comienza el
primer exn, este extremo se une con el punto de ramificacin formando un lazo y por
ltimo se corta el extremo donde se termina el intrn, eliminndose y unindose los
exones. Este proceso sucede tantas veces como intrones existan. Este proceso ocurre en
unos complejos denominados espliceosomas, compuestos de protenas y ARNsn (de
pequeos tamaos), luego salen al citoplasma y llegan al ribosoma donde se traducen. Si
alguno de estos procesos fallan, el ARNm queda en el ncleo trancado. Los ARNsn son
los encargados de reconocer las secuencias consenso y cortar ah.
Existe lo que se llama corte y empalme alternativo, un proceso por el que se puede
generar transcriptos alternativos cortando en diferentes lugares de la secuencia, por
ejemplo, omitindose un exn y eliminarlo tal si fuese un intrn, resultando una
secuencia ms pequea que codificar para una protena distinta. Consiste en un
proceso que regula la expresin gnica con especificidad tisular y del desarrollo.
Uno de los primeros tpicos a investigar de los genetistas fue para conocer si el ncleo,
citoplasma o el gameto entero era importante para la fecundacin. As, se llevaron varios
estudios que demostraron que se puede fertilizar un ovulo con el ncleo de un
espermatozoide, denominndose a este proceso transferencia nuclear somtica o
clonacin. Sin embargo, si a las clulas se le introduca el ncleo de una clula
determinada y diferenciada, se iba perdiendo la capacidad de desarrollo del cigoto. Esto
sugiri que los ncleos de algunas clulas diferenciadas pueden seguir siendo
totipotentes y que los ncleos de clulas desarrolladas tienen aun potencial de
desarrollo, pero ms limitada.
La primera clonacin de mamferos fue en 1997, donde Ian Wilmut clon una oveja a
partir de un ncleo de una clula somtica de esta especie (glndula mamaria). La unin
del oocito con la clula de glndula mamaria se realizo por medio de un pulso de
corriente, que desestabiliz las membranas nucleares y permiti la fusin celular. Los
embriones resultantes fueron transferidos al tero de una oveja embarazada, y de los
434 oocitos utilizados solo uno sobrevivi: Dolly. Esto sugiere que las clulas somticas
pueden ser totipotentes, aun en etapas adultas. La clonacin tambin se dio en vacas,
ratones, gatos, etc; pero muchos de los clones murieron a temprana edad por desarrollar
enfermedades debilitantes.
Otro asunto que desvel a los genetistas fue el de la expresin gentica diferencial, para
conocer porqu haba ms de 200 tipos celulares si todas tenan el mismo genoma. En
1960, se lleg a la conclusin que los genes no utilizados en las clulas son silenciados y
que nicamente un pequeo porcentaje del genoma se expresa en cada clula, siendo lo
que le da la especificidad (los genes no se crean ni se destruyen, se activan o silencian).
La tecnologa y los nerds han llegado a la gentica, desarrollando varias tcnicas para
localizar ARN en una clula, determinar la funcin de los genes y/o alterar protenas
especificas. Estas se resumen a continuacin:
b) Interferencia.
EXPRESION GENETICA DIFERENCIAL.
1. Nivel transcripcional.
1. Nivel traduccional.
i.Estabilidad del RNAm. Una vez que el RNAm llega al citoplasma, no hay
garanta que sea traducido, ya que puede ser degradado por
exonucleasas o por su corta vida media. Cuanto mas persiste un
transcripto en el citosol, mayor ser la probabilidad de que sea traducido
a protenas. Para esto, se agrega un casquete de glcidos en su extremo
5 y una cola poli-A en su extremo 3, lo que aumenta la estabilidad del
mismo. En algunos ejemplos como la casena, los RNAm son estabilizados
selectivamente en momentos especficos. El RNAm de la casena tiene
una vida media de 1.1 hr normalmente, pero en la glndula mamaria
activa tiene una vida media de 28.5 hr, dado que se requiere esta
protena constantemente para la lactognesis.
TEORIAS DE LA DIFERENCIACION.
REORGANIZACION CELULAR.
Muchos estudios han apuntado a investigar que es lo que dirige la reorganizacin de las
clulas para formar rganos y tejidos. Muchos de stos apuntan al rol protagnico de la
superficie celular, quien expresa diferentes tipos de protenas que contribuyen a darle
identidad a la celular. En 1964, Malcolm Steinberg propuso la hiptesis de adhesin
diferencial, un modelo que explica la reorganizacin celular en funcin de la forma
termodinmicamente ms estable. Es decir, si tenemos clulas A-B, donde las uniones
AA son ms intensas que las AB o las BB, entonces las clulas A van a estar todas en el
centro (donde maximizan el nmero de uniones posibles) y las B van a estar en situacin
perifrica.
Las cadherinas parecen ser las molculas responsables de esta adhesin diferencial,
son molculas de adhesin calcio dependientes (como su nombre lo indica). Las
cadherinas tienen un dominio extracelular y uno citoslico unido al citoesqueleto de
actina, haciendo posible cierto grado de movimiento. Hay varios tipos de cadherinas: la
cadherina E la encontramos en tejidos epiteliales, la cadherina P en clulas trofoblsticas
y la cadherina N en SNC del desarrollo.
Estas molculas ensamblan clulas juntas para unirse al mismo tipo de cadherina de otra
clula. As, dependiendo de la afinidad que muestran los distintos tipos de cadherinas, se
va a producir la reorganizacin de clulas en tejidos. Steinberg experiment en juntar
dos grupos de clulas que expresaban diferente cantidad de cadherinas, las mezclaron y
obtuvo que las que expresaban ms cadherinas tenan ms cohesin, encontrndolas en
el centro.
INTERACCION CELULAR.
Las clulas son estructuras que interaccionan entre ellas y el medio que las rodea
mediante distintas vas. Uno de los casos mejor estudiados es la interaccin del epitelio
con las clulas mesenquimticas subyacentes (mesnquima clulas dispersas). En el
pollo, la epidermis le indica a la dermis que se condense y sta le indica a la epidermis
que forme estructuras especializadas como pelos, plumas, etc.
La muerte celular programada o apoptosis es una etapa normal del desarrollo que se
alcanza por vas de sealizacin de este estilo. En un ser humano adulto, mueren unas
1.011 clulas por da y son remplazadas por otras. Se calcula que en un ao, la masa de
clulas que perdemos por apoptosis equivale a la de nuestro peso corporal. Es necesaria
para varios procesos, recorta estructuras innecesarias (mamas masculinas), controla el
nmero de clulas en tejidos especficos y esculpe rganos complejos (retina, corazn).
Algunas clulas como los eritrocitos estn destinadas a la apoptosis, mantenindose
vivas siempre y cuando exista un factor de crecimiento como la eritropoyetina. Esta
molecula sintetizada en el rin, acta a travs de la va JAK-STAT, activando el factor de
transcripcin stat 5. Los ratones con mutaciones en el gen de la caspasa3 o caspasa9
mueren cerca del nacimiento debido a un masivo crecimiento en el SN, nacen con
membranas interdigitales y otras estructuras; lo que sugiere el rol de la caspasa en la
induccin de la apoptosis.
La idea que tenamos hace pocos aos de que somos lo que est escrito en nuestros
genes est cambiando a pasos agigantados La epigentica (del griego epi, en o sobre,
y -gentica) hace referencia a la regulacin heredable de la expresin gnica sin cambio
en la secuencia de nucletidos. El trmino fue acuado por C. H. Waddington en 1953
para referirse al estudio de las interacciones entre genes y ambiente que se producen en
los organismos. Una de las fuentes de mayores modificaciones de los genes es por el
factor ambiental y puede afectar a uno o varios genes con mltiples funciones. Por medio
de la regulacin epigentica se puede observar como es la adaptacin al medio
ambiente dada por la plasticidad del genoma el cual tiene como resultado la formacin
de distintos fenotipos dependientes del medio ambiente al que sea expuesto el
organismo. Estas modificaciones que se dan presentan un alto grado de estabilidad y al
ser heredables esto permite que se puedan mantener en un linaje celular por muchas
generaciones.
En los organismos diploides las clulas somticas tienen dos copias del genoma. Por lo
tanto, cada gen autosmico est representado por dos copias o alelos, cada una de ellas
heredada de un progenitor en la fertilizacin. En la gran mayora de los genes de los
autosomas, la expresin de ambos alelos sucede simultneamente. Sin embargo, una
pequea proporcin de los genes (<1%) est "impresa", es decir, que su expresin
depende de slo uno de los alelos. La expresin del alelo depende, por tanto, de su
origen parental. Un ejemplo de enfermedades genticas humanas relacionadas con la
impronta son el sndrome de Angelman y el sndrome de Prader-Willi, ambos ligados a la
misma regin del cromosoma 15.
Un gen impreso, es decir, cuando tiene uno de los dos alelos silenciado, es
funcionalmente haploide, lo que elimina la proteccin que confiere ser diploide contra
mutaciones recesivas, adems, su expresin puede ser desregulada epigenticamente.
Por tanto, estos genes representan locus susceptibles de ser alterados funcionalmente
tanto gentica como epigenticamente.
POLARIDAD ANTERIO-POSTERIOR.
Genes de segmentacin.
Genes pair-rule. Estos genes son regulados por los genes gap y son
responsables de dividir al embrin en reas que son precursoras del plan
segmentario, mediante bandas verticales de ncleos. Una banda expresan
un gen pair-rule, la siguiente no, la siguiente si y as sucesivamente. El
resultado es una la aparicin de bandas que dividen al embrin en 15
subunidades, donde cada hilera tiene un gen pair-rule particular. Es el caso
de hairy, even-skipped, urnt, fushi tarazu, etc. Mutacin en un gen de regla
par genera un embrin con menos segmentos de los normales.
Luego que se establecen los limites de cada segmento, se activan los genes selectores
hometicos para determinar la identidad funcional de cada segmento. Uno de estos es
el gen antennapedia, que especifica segmentos de la cabeza y primeros dos segmentos
torcicos. El complejo bitorax define el tercer segmento torcico y los segmentos
abdominales. Estos genes (tambin denominados hox) se encuentran en muchas
especies de la escapa evolutiva, tienen un dominio homeobox que reconocen secuencias
de ADN y sus mutaciones causan transformacin de la identidad/funcin de un
segmento. Por ejemplo, una mutacin de antennapedia puede hacer que en vez de dos
antenas en la cabeza, la mosca tenga dos patas.
POLARIDAD DORSOVENTRAL.
(La verdad que la gentica est bien demenos, no se la deseo a nadie, es el curso mas
embolante que he tenido en estos tres aos de facultas).
Desarrollo gonadal.
En mamferos, las clulas germinales primordiales migran hacia la cresta urogenital
donde se encuentran los primordios gonadales. De ah, forman una gnada
indiferenciada o bipotencial, que se va a diferenciar en ovarios o testculos
dependiendo de la presencia del gen SRY y asociados. La determinacin sexual primaria
es la determinacin de las gnadas donde el cromosoma Y es fundamental. Una persona
XXXXY, por mas que tenga 5 cromosomas X, va a ser hombre debido a la presencia del
cromosoma Y.
El gen DAX1 es un gen del cromosoma X sensible a la dosis que inhibe a SRY. Sin
embargo, esta inhibicin es dependiente de la dosis y solo inhibe si se encuentra
aumentado, ejemplo, en mujeres XX. Por lo tanto, los hombres producen DAX1 en su
cromosoma X pero ste es insuficiente para inhibir a SRY y se produce diferenciacin
masculina. A su vez, el gen WNT4 es quien activa a DAX1 para que inhiba a SRY, por lo
que se encarga de la diferenciacin hacia las gnadas femeninas.
Por lo tanto, vemos que la determinacin sexual secundaria no es un evento simple que
depende solo del gen SRY, sino que esa es la teora mas aceptada hasta el momento.
Diferenciacin gonadal.
Una vez que se determina que gnada vamos a formar, se debe diferenciar adoptando
una identidad propia mediante la secrecin de productos de stas gnadas recin
formadas. La determinacin sexual secundaria es la diferenciacin del fenotipo
extragonadal con una fase embrionaria y otra en la pubertad. Como dijimos
anteriormente, esta determinacin es estimulada por las hormonas sexuales que se
producen en cada gnada: FIM (Sertoli) & testosterona (Leydig) en el hombre y
estrgenos en la mujer (teca).
Estas anomalas han sido la base para entender alguno de los procesos genticos
importantes en nuestra vida. El 10% de estas enfermedades estn ligadas al cromosoma
X, por lo que el hombre es el sexo ms sensible a sufrirlas dado que contiene un solo
cromosoma X. Por lo tanto, sea una enfermedad dominante o recesiva, el hombre
siempre la va a expresar porque contiene solo un cromosoma X y siempre va a expresar
nicamente el alelo enfermo. Sin embargo, las mujeres presentan un segundo
cromosoma X que las salva de presentar la enfermedad, siempre y cuando se trate de
una enfermedad recesiva y tengan un alelo con estructura normal en el otro cromosoma
X. Desarrollaremos aqu algunas anomalas y/o enfermedades que producen cambios en
la determinacin sexual del paciente.
Estructurales. Afectan la posicin fsica de un sector del cuerpo. Es el caso del pie
equinovaro causado por el oligoamnios. Dentro de las anomalas estructurales,
tenemos:
El 60% de los defectos congnitos son de causa desconocida, el resto pueden tener
causas hereditarias, genticas o por teratgenos. Se conocen muchos teratgenos
actualmente causantes de disrupciones, la mayora producen sus efectos en un periodo
de sensibilidad critico del desarrollo entre la 3ra y 8va semana, ya que aqu sucede la
organognesis.
El acido retinoico es un teratgeno bastante comn que en grandes cantidades puede
producir ausencia de orejas, mandbula, paladar hendido, anomala en el cayado artico
y en el SNC.
El alcohol es un teratgeno frecuente que produce el sndrome alcohlico fetal. Esto se
descubri en 1973 donde los RN presentaban cabeza pequea, labio superior delgado,
puente nasal bajo y desarrollo disminuido del SNC. En estos pacientes se ha observado
defectos en la migracin neuronal, apoptosis aumentada y esto puede llegar a retraso
mental.
Sumado a estos, los metales pesados como cinc, plomo y mercurio, o virus y bacterias
patgenas tambin pueden inducir defectos congnitos. Tambin, se sabe que la
exposicin de madres a radiaciones ionizantes aumenta la prevalencia de estos defectos.