DESCRIPCIN DE LOS SIMBOLOS

A continuacin figuran los signos grficos que aparecen en los

envases y empaque de los productos MP Diagnostics. Tales
smbolos son de uso comn en dispositivos mdicos y su empaque.
Se explican en detalle en los estndares Britnicos y Europeos BS
EN 980: 2003.

HCV BLOT 3.0 Usar antes de Producto sanitario

Sinnimo: para diagnstico in
ENSAYO DE WESTERN BLOT Fecha de Caducidad vitro
Instrucciones de Uso Cdigo de lote Nmero de catlogo.
Sinnimo: Sinnimo:
Nmero de Lote Nmero de referencia
Nmero de Serie Nmero para pedido

FECHA DE REVISION: 11/11 Lmite de Precaucin, leer

MAD 0011-SPN-0 temperatura instrucciones de uso

(Kit de 18 anlisis): 11130-018

(Kit de 36 anlisis): 11130-036 Fabricante Representante
autorizado en la
Comunidad Europea

NOMBRE Y USO PREVISTO Contenido suficiente

para <n> ensayos Consulte instrucciones
de uso
El ensayo HCV BLOT 3.0 MP Diagnostics (MPD) es un
Inmunoensayo enzimtico cualitativo para la deteccin in vitro de
anticuerpos contra el VHC en suero o plasma humanos. Su uso
No reutilizar
previsto es como una prueba especfica complementaria en muestras
que presentan reactividad repetida al usarse procedimientos especficos
tales como ELISA
PRINCIPIOS QUMICOS Y BIOLGICOS DEL
INTRODUCCIN
PROCEDIMIENTO

Se ha identificado al VHC como la causa principal de transmisin
parenteral de la hepatitis no-A y no-B. Las pruebas de tamizaje
actualmente se encuentran disponibles para el diagnstico de la
infeccin por hepatitis C. Generalmente estos ensayos de deteccin
implican antgenos de la regin estructural (cpside) as como uno o
ms antgenos especficos de regiones no estructurales del virus (NS3,
NS4, NS5). En repetidas muestras reactivas en las pruebas de tamizaje
se requieren adems exmenes ms especficos para confirmar el
HCV seropositivo, ya que es posible tener reacciones falso-positivas
con la actual prueba de tamizaje disponible HCV ELISA.
Los exmenes confirmatorios suplementarios deben de incluir
antgenos virales individuales as como controles negativos
apropiados. El producto HCV BLOT 3.0 MP Diagnostics
incluye antgenos estructurales y no estructurales del VHC y se
considera como ensayo confirmatorio suplementario para detectar la
presencia de anticuerpos de VCH.
Las tiras de nitrocelulosa contienen cuatro protenas recombinantes
de la cpside, NS3, NS4, y NS5 de las regiones del genoma del HCV.
Las protenas del HCV se expresan como protenas de fusin
del GST, por lo que una banda GST de control es incluida para
indicar la reactividad del GST nativo. Las tiras de blot tambin
contienen una banda de control inmunoglobulina G y una banda
anti- IgG. Las tiras individuales de nitrocelulosa se incuban con
suero diluido o muestras de plasma y controles. Los anticuerpos
especficos del HCV, si se encuentran en la muestra, se adherirn a
las protenas del VCH de las tiras. Las tiras se lavan para eliminar los
materiales que no se unieron y despus se incuban con anticuerpos
humanos anti IgG purificados por afinidad, conjugados con fosfatasa
alcalina. Los anticuerpos conjugados se adhieren a cualquier
complejo antgeno- anticuerpo formado en el Blot. Los conjugados
no adheridos se remueven por lavado. El sustrato BCIP/NBT se
aade para visualizar las bandas de protena reactiva en las tiras sobre
los Blots.
 COMPONENTES DEL EQUIPO
Descripcin del Componente
TIRAS DE NITROCELULOSA
Con antgenos recombinantes
TIRAS DE
ANTIGENO estructurales y no estructurales
del VHC. Dos controles adicionales
(anti-IgG humana e IgG humana)
Mantngase secas y lejos de la luz.
CONTROLES NO REACTIVOS
Suero humano normal inactivado no
reactivo para
el antgeno de superficie de Hepatitis
B (HBsAg), anticuerpos para VIH-1,
VIH-2 y HCV.
Contiene azida sdica y timerosal
como conservante.
CONTROL REACTIVO
Suero humano inactivado con altos
ttulos de anticuerpos HCV. No-
reactivo para anti VIH-1/2, anti-HTLV-
I/II y HBsAg.
Contiene azida sdica y timerosal
como conservante.
TAMPN DE TRABAJO
CONCENTRADO (10x)
Tampn Tris con suero de cabra
normal inactivado Contiene
timerosal como conservante.
TAMPN DE LAVADO
CONCENTRADO (20x)
Tampn Tris con Tween 20.Contiene
timerosal como conservante.
CONJUGADO
Anti-IgG humana de cabra
conjugada con fosfatasa alcalina.
Contiene azida sdica como
conservante.
SUSTRATO
Solucin de 5-bromo-4-cloro-3-
Indol -fosfato (BCIP) y nitro-tetrazolio
(NBT).
POLVO DE BLOTTING
Leche descremada.
Bandeja de incubacin, cada una
con 9 pocillos.
Instrucciones de uso
Pinzas
Nota: El contenido de reactivos proporcionado es suficiente para 4
ensayos distintos.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para uso diagnstico in vitro nicamente
2. Para uso exclusivo por profesionales.
3. Consulte el prospecto del producto para obtener informacin
sobre los componentes potencialmente peligrosos.
INFORMACIN SANITARIA Y SEGURIDAD
PRECAUCIONES: E s t e kit contiene productos de origen
humano. Ningn mtodo de anlisis permite ofrecer una
garanta absoluta que los hemoderivados no transmitan una
infeccin.
Cantidad MANIPULE LAS MUESTRAS Y CONTROLES REACTIVOS
FUERTES Y DBILES Y LOS CONTROLES NO REACTIVOS COMO
Disponible en SI FUERAN POTENCIALMENTE INFECCIOSOS. Se
Tiras de 18 o recomienda manipular los componentes del ensayo y las muestras de
36 tiras conformidad con las prcticas correctas de laboratorio. As
mismo deben desecharse siguiendo los procedimientos de seguridad
establecidos.
El Control Reactivo, y el Control No Reactivo contienen timerosal
y azida sdica, mientras que el tampn de trabajo concentrado y el
tampn de lavado concentrado contienen timerosal y el Conjugado
1 vial contiene azida sdica. La azida sdica puede reaccionar con el cobre
(80 l) y el plomo que se utilizan en ciertas tuberas y formar sales
explosivas. Aunque las cantidades utilizadas en este kit son
pequeas, los materiales que contienen azida deben eliminarse
con volmenes relativamente grandes de agua para evitar la
acumulacin de azidas metlicas en las tuberas. A continuacin
figuran frases relativas a los riesgos (R) correspondientes.
1 vial R20/21/22 Nocivo por inhalacin, al contacto con la piel y por ingestin
(80 l)
El Sustrato contiene 5-bromo-4-chloro-3-indolil fosfato y nitro azul
de tetrazolio que se clasifica en su caso por las Directivas
de la Comunidad Econmica Europea (CEE) como nocivos (Xn). A
continuacin figuran frases relativas a los riesgos (R) correspondientes
1 frasco R20/21/22 Nocivo por inhalacin, al contacto con la piel y por
(20 ml) ingestin.
1. Evite contaminacin microbiana de los reactivos cuando abra
y retire las alcuotas de viales o frascos originales.
1 frasco 2. No pipetee con la boca.
(70 ml)
3. Manipule las muestras, las tiras de nitrocelulosa, los
controles reactivos fuertes y dbiles y los controles no
reactivos como si fueran potencialmente infecciosos.
1 vial 4. Use bata de laboratorio y guantes desechables mientras realiza
el ensayo. Deseche los guantes en bolsas para
(120 l)
residuos biopeligrosos. Lvese bien las manos al finalizar
5. Es muy recomendable que esta prueba se lleve a cabo en una
1 frasco cmara de bioseguridad.
(100 ml)
6. Mantenga el material alejado de alimentos y bebidas.
7. En caso de accidente o contacto con los ojos,
10 paquetes enjuague inmediatamente con agua y acuda con un mdico.
(1g cada uno)
8. Consulte a su mdico inmediatamente en el caso de ingerir
2o4 materiales contaminados o hacer contacto con heridas abiertas u
bandejas otro tipo de lesiones en la piel.
1 copia
9. Limpie derrames de material potencialmente infeccioso de
1 par inmediato con papel absorbente y desinfecte el rea contaminada
con solucin de hipoclorito de sodio al 1% antes de reanudar el
trabajo. El hipoclorito de sodio no debe utilizarse en el caso de
derrames que contengan cido a menos que el rea se seque
previamente con papel absorbente. El material utilizado (incluidos
los guantes desechables) debe ser desechado como material
potencialmente biopeligroso. No utilice el autoclave para material
que contenga hipoclorito de sodio.
10. Esterilice en autoclave todos los materiales usados y
contaminados a 121C a 150 psi durante 30 minutos antes
de desecharlos. Por otra parte, descontamine los materiales en
una solucin de hipoclorito sdico al 5% de 30 a 60 minutos
antes de desecharlos en una bolsa para residuos biopeligrosos.
11. Descontamine todos los productos qumicos y reactivos usados
aadindoles un volumen de hipoclorito de sdico suficiente
como para conseguir una concentracin final de al menos 1%.
 Djelos en reposo por 30 minutos para lograr una
descontaminacin eficaz.
12. No recomendamos la reutilizacin de las bandejas de incubacin.
PRECAUCIONES ANALTICAS
1. Se pueden utilizar muestras de suero, plasma con EDTA o citrato.
Las pruebas de plasma con heparina no se deben de utilizar
ya que pueden causar reacciones no especficas a la banda
del ncleo del VHC.
2. El desempeo ptimo de la prueba requiere de un
CUMPLIMIENTO ESTRICTO al procedimiento descrito en estas
Instrucciones de Uso. Cualquier modificacin del
procedimiento puede provocar resultados errneos.
3. NO INTERCAMBIE NI SUSTITUYA LOS REACTIVOS DE
UN LOTE DEL KIT POR LOS DE OTRO. Los controles y las
tiras de Western Blot se combinan para dar un funcionamiento
ptimo. Use nicamente los reactivos que se suministran con el
kit.
4. No utilice los componentes del kit despus de la fecha de
caducidad que figura en la caja.
5. Evite la contaminacin microbiana de los reactivos al abrir y
extraer partes alcuotas de los viales o frascos originales ya que
esto reducira de forma prematura el periodo de validez de
los kits y dara resultados errneos. Al extraer partes alcuotas de
los viales utilice tcnicas aspticas, como pipetas o puntas
de pipetas desechables.
6. Los controles del kit deben analizarse al mismo tiempo que
las muestras clnicas en cada serie de anlisis.
7. Para evitar la contaminacin cruzada, use una punta de
pipeta nueva para cada alcuota de la muestra.
8. Para obtener resultados ptimos, dispense todos los
reactivos mientras todava estn fros y vulvalos a guardar a 2
C- 8 C lo antes posible.
9. Se aconseja lavar el material de vidrio que se vaya a utilizar para
los reactivos con cido clorhdrico 2M y aclararlo bien con agua
destilada o desionizada antes de usarlo.
10. Utilice slo agua destilada o desionizada de calidad reactivo para
diluir los reactivos.
11. Todos los reactivos deben mezclarse antes de su uso.
12. La solucin conjugada de trabajo, el tampn de lavado diluido y el
tampn de transferencia deben estar recin preparados.
13. La solucin del conjugado de trabajo debe prepararse en un
recipiente o vaso de precipitado de polipropileno.
14. No exponga los reactivos o realice el anlisis en un rea que
contenga un alto nivel de vapores de desinfectantes
qumicos (por ejemplo: vapores de hipoclorito) durante las
etapas de almacenaje e incubacin. El contacto inhibe la
reaccin de color. Asimismo, no exponga los reactivos a luz
intensa.
15. De preferencia, el ensayo debe llevarse acabo a temperatura
ambiente. (25C 3C).
16. Asegrese de colocar las tiras con los nmeros hacia arriba.
17. En los ensayos de Western Blot es importante utilizar un agitador
con plato basculante y no un agitador rotativo. De otra manera el
desempeo del kit puede verse comprometido. La velocidad de
agitacin y el ngulo de inclinacin recomendados son,
respectivamente, de 12 a 16 ciclos por minuto y de 5 a 10
grados.
18. Asegrese que el equipo automatizado, si este es utilizado, se
haya sido validado antes de su uso.
19. Asegrese de aadir las muestras sin que toquen las tiras. La
bandeja se puede inclinar y aadir la muestra en la parte baja se
acumula el tampn. De este modo se evitar la formacin
de puntos negros debidos a la adicin de muestra a la banda
20. Evite el uso de congeladores con funcin de descongelacin
automtica para conservar los reactivos y las muestras.
CONSERVACIN
1. Almacene el kit HCV MPD 3.0 MPD y sus componentes a una
temperatura entre 2C y 8C, cuando no se encuentre en uso.
2. Todos los reactivos y tiras se mantendrn estables hasta la
fecha de caducidad marcada en el kit si son almacenadas a
una temperatura entre 2C y 8C. No congele los reactivos.
A. Tiras de Antgeno
Evite exposicin innecesaria de las tiras de antgenos a
la luz.
B. Reactivos
Almacene los reactivos e n sus viales o frascos
originales. stos debern estar tapados para su
almacenamiento.
Dispense todos los reactivos mientras stos se
encuentren a una temperatura de entre 2C y 8C y
almacnelos tan pronto como sea posible.
Se pueden formar precipitados cuando el sustrato se
conserva entre 2C y 8C. Esto no afectar el
rendimiento del kit.
PRECAUCIN: Evite exposicin innecesaria del sustrato a la luz.
RECOLECCION DE MUESTRAS, TRANSPORTACIN Y
ALMACENAJE
Se puede usar suero, plasma con EDTA o citrato. Las muestras
de plasma con heparina p r e f e r i b l e m e n t e no deben s e r
usadas ya que pueden causar reacciones no especficas a la banda
del ncleo del VHC.
Asegrese de que los cogulos o las clulas sanguneas hayan sido
separados por centrifugacin antes del almacenamiento.
Las muestras deben conservarse a una temperatura de 2C a 8C si
los ensayos se van a ejecutar en los 7 das posteriores a la
recoleccin o congelar a una temperatura de -20C o inferior si
la prueba se va a retrasar por ms de 7 das. Es preferible usar
muestras transparentes, no hemolizadas. Las muestras lipmicas,
ictricas o contaminadas (por partculas o bacterias) deben filtrarse
(0.45m) o centrifugarse antes de la prueba.
Las muestras pueden estar inactivadas, pero esto no es un requisito
para su ptimo desempeo.
Inactivar como se muestra a continuacin:
1. Afloje la tapa del contenedor de muestras.
2. Desactive la muestra calentndola en bao mara a 56C durante
30 minutos.
3. Deje enfriar la muestra antes de ajustar la tapa.
4. La muestra puede conservarse congelada hasta el anlisis.
 Procedimiento:
MATERIAL ADICIONAL NECESARIO Y NO
SUMINISTRADO 1. Utilizando las pinzas extraiga con cuidado del
tubo la cantidad de TIRAS necesarias y
coloque cada tira en su pozo con el nmero hacia
Agua desionizada o destilada
arriba. Incluya tiras para los controles reactivo y
Guantes desechables no reactivo.
Plataforma agitador basculante (diseada con un rango de
velocidad de balanceo de 12 a 16 ciclos por minuto y con 2. Agregue 2 ml TAPN DE LAVADO DILUIDO 2 ml
movimiento a una inclinacin de 5 a 10 para lavar las a cada pozo.
membranas de manera uniforme.)
Pipetas y puntas del volumen adecuado. 3. Incube las tiras durante 1-2 minutos a 2
Aspirador con depsito de hipoclorito sdico. temperatura ambiente (25C 3C) en un minutos
Bao mara a 56C (opcional) agitador basculante (velocidad de 12 a 16
Hipoclorito de sodio para la descontaminacin. oscilaciones por minuto) Extraiga el tapn por
aspiracin.

4. Agregue 2 ml de TAMPN DE TRABAJO a 2 ml

PREPARACIN DE LOS REACTIVOS cada pocillo

5. Aada 20 l de suero de los pacientes o 20 l

1. TAMPON DE LAVADO DILUIDA de controles, segn corresponda en cada una de
a) El TAMPON DE LAVADO DILUIDA, debe ser preparado fresco, los pozos. Tener precaucin para evitar aadir
previo a su uso. las muestras directamente en las tiras.
b) Diluir 1 (un) volumen de de TAMPON DE LAVADO
CONCENTRADO (20X) concentrado con 19 volmenes de agua de 6. Cubra la bandeja con la con la tapa suministrada 60
grado reactivo. Mezclar bien. e incube durante por 1 hora a temperatura minutos
ambiente (25 3C) en el agitador basculante
2. TAMPON DE TRABAJO
a) El TAMPN DE TRABAJO, debe ser preparado fresco, previo a
su uso. 7. Destape la bandeja con cuidado para evitar
b) Diluir 1 (un) volumen de TAMPON DE TRABAJO salpicaduras p o r mezclado de las muestras.
CONCENTRADO (10X) con 9 volmenes de agua de grado Incline la bandeja para aspirar la mezcla de
reactivo. Mezclar bien. los pozos. Cambie las puntas del aspirador
c) Agregar 1g de POLVO DE BLOTTING por cada 20ml del entre muestras para evitar la contaminacin
TAMPON DE TRABAJO diluido preparado en el paso 2(b) cruzada.
anterior. Agite hasta que el polvo se disuelva.
d) Mezclar nuevamente antes de dispensar. 8. Lave 3 veces cada tira con 2 ml de TAMPN
DE LAVADO DILUIDO dejando que se empapen 3 x 2 ml
3. SOLUCIN DE TRABAJO DE CONJUGADO por 5 minutos en agitador basculante entre
Nota: Prepare l a solucin en envase de polipropileno/vaso cada lavado.
de precipitado.
(a) SOLUCIN DE TRABAJO DE CONJUGADO, debe ser 9. Aada 2 ml de SOLUCIN D E T R A B A J O
D E CONJUGADO a cada pozo. 2 ml
preparado fresco, previo a su uso.
(b) Prepare la solucin de CONJUGADO DE TRABAJO diluyendo
el CONJUGADO 1:1000 en TAMPON DE TRABAJO, por 10. Cubra la bandeja e incube durante 1 hora a
temperatura ambiente (25 3C) en el agitador 60
ejemplo, 5 ul de CONJUGADO a 5 mL de TAMPON DE
basculante. minutos
TRABAJO.

4. SOLUCIN DE SUSTRATO (listo para usarse) 11. Aspire el CONJUGADO de los pozos. Lave
a) Vierta el volumen requerido del frasco. Utilice una pipeta limpia. como en el paso 8. 3 x 2 ml
Tapar firmemente despus de su uso.

12. Aada 2 ml de SOLUCIN De SUSTRATO 2 ml

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA a cada pozo.

Nota: a) Aspirar todos los productos qumicos y reactivos 13.
utilizados con un aspirador que contenga
hipoclorito de sodio.
b) Todas las incubaciones se debern llevar a cabo en 14.
una plataforma o agitador basculante.
Precaucin:
Algunas muestras pueden causar manchas oscuras en el punto de
la tira en la que se aadieron. Para evitar este problema, asegrese 15.
que:
i. La muestra sea aadida nicamente despus de haber agregado
el TAMPON DE TRABAJO.
ii. Incline ligeramente la bandeja elevando e l extremo superior
o inferior. El tampn de trabajo debe fluir hacia la zona ms 16.
baja de la bandeja. Adicione la muestra en la zona en la que
se haya acumulado el tampn de trabajo. Cuando se hayan,
dispensado todas las muestras, devuelva la bandeja a su
posicin a su posicin original. Siempre asegrese que las tiras
se mantengan hmedas durante el proceso.
iii. Otra opcin, si no se desea inclinar la bandeja, es dispensar las
muestras en el extremo superior o inferior del pozo. De esta
forma, si aparecen manchas oscuras, la lectura de los
resultados de la tira no se ver afectada
Cubra la bandeja e incube durante 15 minutos en 15
el agitador con plataforma de balanceo. minutes
Aspire el SUSTRATO y enjuague las tiras 3 x 2 ml
un mnimo de tres veces con agua grado
reactivo para detener la reaccin (si el lavado
insuficiente durante esta etapa puede provocar la
aparicin de un fondo obscuro).
Utilizando unas pinzas, coloque las tiras con
suavidad sobre t o a l l a s de papel. Cbralas
con toallas de papel y squelas. Otra
posibilidad es dejar que las tiras se sequen en los
pozos de la bandeja.
Coloque las tiras en la hoja de trabajo
(papel blanco no absorbente). No aplique cinta
adhesiva sobre las bandas reveladas. Observe
las bandas (vase interpretacin de los
resultados) y califique los resultados. Para el
almacenamiento, mantenga las tiras en la
oscuridad.
 RESUMEN DE LOSPROTOCOLOS DE ENSAYO La comparacin con estas bandas se realiza con el fin de asignar
Reactivos Cantidad Duracin una clasificacin de reactividad para cada antgeno de la tira.
Tira de nitrocelulosa 1 -
Tampn de lavado 2 ml 2 min
PATRN INTERPRETACIN
Tampn de trabajo 2 ml -
Muestra 20 l 60 min 1. No reactividad -
Tampn de Lavado 3 x 2 ml 3 x 5 min 2. Reactividad < 1+ control
Conjugado 2 ml 60 min 3. Reactividad = 1+ control 1+
Tampn de Lavado 3 x 2 ml 3 x 5 min 4. Reactividad > 1+ y <3+ control 2+
5. Reactividad = 3+ control 3+
Sustrato (Listo para su uso 2 ml 15 min
6. Reactividad > 3+ control 4+
Agua destilada 3 x 2 ml -
PERFIL DE LA TIRA INTERPRETACIN
CANTIDADES DE REACTIVOS NECESARIAS
Ausencia de bandas de 1+, o ms de 1+ de NEGATIVO
PARA DIVERSOS NMEROS DE TIRAS
intensidad
NMERO DE TIRAS A UTILIZAR
- Presencia de 2 o ms bandas con 1+ o ms
REACTIVOS 3 6 9 15 20 27 36 de 1+
Tampn de - Presencia de una sola banda en el CORE POSITIVO
Lavado 1X (ml) 60 100 140 240 300 400 520 de 2+, o ms de 2+ de intensidad
-Cualquier tira individual de 1+ o ms de 1+
Tampn de
trabajo 1X (ml) pero no cumple con el patrn para criterio INDETERMINADO
20 40 60 80 100 120 160
positivo
Conjugado ( l) 11 17 23 35 45 59 77
Reactividad slo en esta banda GST de 1+ o ms de 1+ se considera
Sustrato (ml) 11 17 23 35 45 59 77
NEGATIVO.
Polvo de
1 2 3 4 5 6 8
BLOTTING
(g) (g) Reactividad en esta banda GST de 1+ o ms de 1+ acompaado de
reactividad a alguno o mas antgenos de VHC se INDETERMINADO.

CONTROL DE CALIDAD Una muestra que haya sido considerada no-reactiva en la prueba de
tamizaje o confirmatoria de VHC de otro fabricante, puede resultar
Los controles reactivo y no reactivo deben ser corridos en cada reactiva en MPD HCV BLOT 3.0 debido a la presencia de
ensayo. De acuerdo con los resultados obtenidos en cualquier eptopes nicos en esta prueba confirmatoria.
ensayo q u e se consideren vlidos, se deben cumplir las
siguientes condiciones:
CARACTERSTICAS ESPECFICAS DE DESEMPEO
1. BANDAS DE CONTROL (Anti-IgG Y CONTROL IgG)
Las dos bandas de control (anti-IgG y IgG, consulte el siguiente
Se evalu el desempeo de MPD HCV BLOT 3.0 para la deteccin de
diagrama de abajo) deben tener reacciones diferentes en todas las
anticuerpos en VHC a travs del anlisis de las muestras de sangres
tiras reactivas. La presencia bandas anti-IgG indica que el suero se
de donadores, pacientes con el anticuerpo al VHC, pacientes
aadi en el paso inicial de la incubacin. La ausencia de la banda de
con enfermedades relacionadas al VHC y pacientes con
control anti-IgG, y la presencia de la banda de control y la presencia de
enfermedades sin relacin al VHC. Adems, se prob en
la IgG en la tira, indicara una falla al agregar el suero del paciente. Si
paneles comerciales de seroconversin disponibles.
no hay bandas en ninguna de las tiras reactivas en una prueba,
incluyendo las bandas de control, entonces esto indicara una falla en
Sensibilidad
la tcnica o en uno de los reactivos del equipo.
Se estudiaron 330 muestras reactivas de anti-VHC ELISA, de las
cuales 329 muestras se detectaron como reactivas a travs de MPD
2. CONTROL NO-REACTIVO
HCV BLOT 3.0. El resultado negativo se confirm en el ELISA como
nicamente la presencia de las bandas de control IgG y Anti-IgG deben
falso positivo. La sensibilidad se calcul como >99.9%.
de ser reactivas en una tira No Reactiva (Fig. 1c)
La sensibilidad tambin se evalu al usar 14 paneles comerciales de
3. CONTROL REACTIVO
seroconversin y 4 paneles de titulacin de antgenos bajos o mixtos
Todas las bandas de protena recombinante VHC deben de ser
comercialmente disponibles. Se compar el desempeo de MPD HCV
reactivas con el suero de control reactivo. Adems, las bandas de
BLOT 3.0 con el de Chiron VHC RIBA 3.0.
control anti-IgG y las bandas de control IgG deben de ser
reactivas. Las bandas de control GST deben de ser no-reactivas. (Fig
Adems el MPD HCV BLOT 3.0 pudo detectar las muestras de
1b).
genotipo de VHC (genotipo 1a a 6) en el panel de genotipo BBI
VHC (PHW 201).

INTERPRETACIN DE RESULTADOS Especificidad

Se probaron un total de 200 muestras de donadores de sangre.
El siguiente diagrama representa los antgenos y controles recubiertos De stas, 193 muestras fueron negativas, mientras que 7
en el MPD HCV BLOT 3.0. muestras arrojaron un resultado indeterminado. Adems se evalu
un total de 280 muestras clnicos con infecciones virales y
bacterianas agudas, prenatal, antenatal, lipmicas, ictricos y
hemolizadas. El MPD HCV BLOT 3.0 mostr una alta especificacin
en estas muestras.
Core

Localice e identifique la intensidad de las b a n d a s c ontrol. La

intensidad 3+ es la b a n d a anti-IgG y la intensidad 1+ es la
b a n d a de control IgG. Estos deben de ser visibles en todas las
tiras. La intensidad en cualquier b a n d a reactiva se le compara
con estas dos b a n d a s d e re fe re n c i a .
 LIMITACIONES DEL MTODO BIBLIOGRAFA

El ptimo desempeo de la prueba requiere de un estricto apego 1. Choo Q-L., et al. 1989. Isolation of a cDNA clone derived from a
al procedimiento de la prueba descrita. Las alteraciones al bloodborne Non-A, Non-B viral hepatitis genome. Science;
procedimiento podran conllevar a resultados inusuales. 244:
359-62.
Un resultado NEGATIVO no excluye la posibilidad de exposicin o
infeccin de VHC. Un resultado INDETERMINADO no debe 2. Kuo G., et al. 1989. An assay for circulating antibodies to a major
usarse como base en un diagnstico de infeccin de VHC. La etiologic virus of human Non-A, Non-B hepatitis. Science;
reactividad de 244:
1+ en el antgeno VHC solo puede ser una reactividad no especfica, 362-364.
un indicador de una infeccin previa resuelta o una indicacin de una
temprana seroconversin. 3. Kleinman S., Alter H., Busch M., et al. 1993. Increased detection of
hepatitis C virus infected blood donors by a multiple antigen HCV
Recomendamos realizar la prueba entre dos y seis meses enzyme immunoassay. Transfusion; 32: 805-813.
despus con un muestra fresco.
4. Van der Poel C. L. Reesink H., W., Schaasberg W. et al. 1990.
INDETERMINADO los sueros se pueden probar a travs de PCR para Infectivity of blood seropositives for hepatitis C virus
determinar mejor si una persona ha estado expuesta o si se antibodies. Lancet; 335:558-560.
infect con VHC.
5. Colombo M., Kuo G., Choo Q-L., et al. 1989. Prevalence of
antibodies to hepatitis C virus in Italian patients with heptocellular
carcinoma, Lancet; 2: 1006-8.
GARANTA LMITADA, EXENCIN DE
RESPONSABILIDAD 6. Bruix J., Barrera J., Calvert X. et al. 1989. Prevalence of antibodies
to hepatitis C virus in Spanish patients with
El fabricante garantiza exclusivamente que el kit de anlisis hepatocellular carcinoma and hepatic cirrhosis, Lancet; 2: 1004-6.
funcionar como un ensayo diagnstico in vitro de acuerdo con
las especificaciones y limitantes descritas en el Instrucciones de Uso
del producto, cuando se use de conformidad con las
instrucciones citadas en el mismo. El fabricante rehsa cualquier MP Biomedicals Asia Pacific Pte. Ltd.
garanta, explcita o implcita incluida la garanta explcita o 2 Pioneer Place
implcita relativa a la comercializacin, adecuacin para el uso o Singapore 627885
supuesta utilidad para cualquier fin. El fabricante solo se obliga a la Tel. No. : + 65 6775 0008
sustitucin del producto, o reintegro del precio de compra del Fax. No. : + 65 6774 6146
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 FIGURA 1

3 + BANDA DE CONTROL
(INCORPORACIN DE
SUERO)

Core

NS3-1

NS3-2 PROTEINAS
VHC

NS4

NS5

GST BANDA DE CONTROL

Las bandas virales especficas se visualizan
con: 1+BANDA DE CONTROL
a) Suero reactivo dbil
b) Control reactivo fuerte
c) Control no reactivo
(Nota: se indica esta posicin de la banda
GST aunque la banda no es visible debido a
que estos sueros son no reactivos con GST)
 DIAGRAMA PARA RESOLUCIN DE PROBLEMAS

Aparecen bandas que Las tiras son

no son las del control defectuosas
No aparecen las bandas
de suero en controles
esperadas o muestran
negativos
Aparecen una intensidad dbil. Aparece un fondo fuerte en la
manchas oscuras tira con ausencia o
en las tiras presencia
Manchas blancas en de bandas positivas.
las tiras
Comprobar control positivo

Ausencia de banda
del control de suero
1. Estn agrietadas.
1. Se ha dado la vuelta 2. Contienen burbujas de aire
a las tiras durante el que provocan la aparicin de
ensayo. puntos blancos en zonas de
2. Las bandejas no se reaccin lo bastante grandes
han lavado como para evitar la deteccin.
Los pozos de la
adecuadamente antes 3. Muestran puntos negros
bandeja o el control han
de su utilizacin. debido al crecimiento mictico
podido sufrir una
3. Disolucin deficiente que se origin a partir de la
contaminacin cruzada.
del polvo de BLOTTING. apertura inicial de los tubos de
las tiras. Sin embargo, si los
puntos negros aparecen un
tiempo despus de la apertura
1. Tiras sobre reveladas inicial del tubo, este problema
(Interrupcin de es debido a unas condiciones
reaccin antes). inadecuadas de conservacin
por parte del usuario.
1. Contaminacin 2. Lavado incompleto.
bacteriana o mictica
Control positivo dbil Control positivo OK
de la muestra del
anlisis.
2. Precipitacin de 1.No se aadi suero.
complejos inmunes 2.Se ha dado la vuelta a las
en muestras de tiras durante el ensayo.
anlisis envejecidas. 3.No se aadi e conjugado.
3. Contaminacin
bacteriana o mictica Puede que el problema Puede que el problema 4.No se aadi el sustrato.
en tiras por una est provocado por los est provocado por la
conservacin reactivos. muestra del anlisis.
inadecuada.
4. Tiras fsicamente 1.Los reactivos no estn 1. Dilucin errnea de la
daadas, agrietadas preparados adecuadamente. muestra del anlisis.
2. Dilucin errnea del 2.Muestra del anlisis
o rayadas.
5. No se han lavado conjugado. contaminada con el
3. Reactivos inestables por conjugado.
adecuadamente las
tiras entre los exposicin a temperatura 3. Las muestras del anlisis
distintos pasos del inadecuada. muestran fuertes complejos
ensayo. 4. Conjugado contaminado inmunes.
con IgG humana. 4. La IgG de la muestra del
5. pH del sustrato incorrecto anlisis est deteriorada o
por exposicin a una intensa desnaturalizada por ciclos
luz ultravioleta o a un agente repetidos de congelacin o
reductor. por una conservacin
6. Alta concentracin de inadecuada.
fosfato en bandejas, 5. Se ha utilizado un agitador
reactivos o agua. rotativo en lugar de un plato
7. Se ha utilizado un agitador basculante.
de plataforma rotativa en 6. La muestra del anlisis
lugar de uno de plataforma puede ser un falso positivo
de balanceo. de ELISA.