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ESTUDIO MICROBIOTICO DE LAS BACTERIAS Y SISTEMAS DE

COLORACIN
(INFORME)
INTRODUCCIN

Las bacterias son seres generalmente unicelulares que pertenecen al grupo de los
protistos inferiores. Son clulas de tamao variable cuyo lmite inferior est en las 0,2 y
el superior en las 50; sus dimensiones medias oscilan entre 0,5 y 1. Las bacterias
tienen una estructura menos compleja que la de las clulas de los organismos superiores:
son clulas procariotas. Igualmente son muy diferentes a los virus, que no pueden
desarrollarse ms dentro de las clulas y que slo contienen un cido nucleico.

Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el hombre: la presencia


de una flora bacteriana normal es indispensable, aunque grmenes son patgenos.
Anlogamente tienen un papel importante en la industria y permiten desarrollar
importantes progresos en la investigacin, concretamente en fisiologa celular y en
gentica. Para hacer un estudio de estos microorganismos, se suele recurrir a tcnicas
especiales que van a permitir el acondicionamiento del material para dicho estudio. Los
colorantes y coloraciones se usan en estudios macro y microscpicos, por ejemplo: para
estudios de la actividad bioqumica de los microorganismos, clasificacin de los
microorganismos, etc.

Para efectuar una observacin del microorganismo, los mtodos de coloracin son
diversos y adems, constituyen un tem ms que posibilita realizar una clasificacin, es
decir, que hay tcnicas que permiten hacer un diagnstico informando cmo reacciona
una clula microbiana a ciertas manipulaciones fsicas y qumicas con los colorantes (ej:
mtodos de Gram-Nicole, cido-alcohol resistencia, etc.). El descubrimiento del
microscopio de contraste de fases y el uso del microscopio electrnico para exmenes de
microorganismos, han dejado de lado muchas de las tcnicas de coloracin. A pesar de
ello, los colorantes y las coloraciones se siguen usando en trabajo de diagnstico y de
investigacin por ser de un manipuleo sencillo y de fcil comprensin e interpretacin. A
continuacin realizaremos un estudio microbitico aplicando algunas tcnicas de
coloracin.
OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Preparar frotis a partir de cultivos bacterianos en diferentes medios, y realizar una


determinada tincin para la identificacin de la estructura, forma, disposicin, etc.,
de las bacterias.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Clasificar las bacterias en grampositivas y gramnegativas.

Identificar la importancia que tiene cada una de las coloraciones utilizadas en el


estudio de las bacterias.

Identificar las formas bsicas en que se puede visualizar la morfologa bacteriana


en una tincin.
1. TEORA RELACIONADA

Las bacterias, junto con los protozoarios, algas microscpicas, hongos microscpicos
(incluyendo levaduras) y virus, constituyen los llamados microorganismos. El trmino
microorganismo no tiene un significado taxonmico preciso sino que agrupa a todos los
organismos de dimensiones microscpicas (< 0.1 mm) aunque presenten grandes
diferencias entre si. As por ejemplo incluye organismos procariotas (bacterias), eucariotas
(hongos, protozoarios, algas) y virus. Tambin difieren notablemente en el tamao aunque
sean todos microscpicos; en una escala comparativa tenemos:

Protozoarios > levaduras > bacterias > virus

Bacterias

Aunque existen miles de especies de bacterias diferentes, los organismos individuales


presentan una de las tres formas generales siguientes:

- elipsoidal o esfrica
- cilndrica o en forma de bastn
- espiral o helicoidal.

Las bacterias esfricas o elipsoidales se denominan COCOS. Muchas bacterias con esta
forma presentan modelos de agrupacin que derivan de los diversos planos de divisin
celular. As tenemos:

* cocos en pares (diplococos)----------- Ej. Neisseria


* cocos en cadena ---------------------- Ej. Streptococcus
* cocos en racimo ---------------------- Ej. Staphylococcus
* cocos en ttradas -------------------- Ej. Pediococcus
* cocos en cubos ----------------------- Ej. Sarcina
* cocos sin distribucin especial

Las clulas bacterianas cilndricas se denominan BACILOS o BASTONES y presentan


otros modelos de agrupacin. As tenemos:

* bastones en cadena -------------------------------- Ej. Bacillus


* bastones en letras chinas o empalizadas ------------ Ej. Corynebacterium
* bastones sin distribucin especial

Las bacterias helicoidales se presentan en general como clulas individuales,


independientes; pero las clulas de las distintas especies presentan notables diferencias
de longitud, nmero y amplitud de las espiras y rigidez de la pared.

La observacin y examen de las bacterias se puede realizar de dos maneras


fundamentales:
observando los microorganismos vivos sin teir.
observando las clulas fijadas, teidas con colorantes.

Las bacterias vivas, en suspensin acuosa tienen propiedades pticas similares a las del
agua y, por lo tanto, son difciles de observar con el microscopio de campo claro debido a
la falta de contraste con el medio que las rodea.

Aunque las bacterias no difieren en sus propiedades pticas del medio externo, si son
muy diferentes desde el punto de vista qumico; esto es lo que permite distinguir las
bacterias por tincin, pues generalmente el colorante reacciona con la clula bacteriana
pero no lo hace con el medio.

La coloracin de las bacterias tiene como fines:

* aumentar el contraste de las clulas con el medio que las rodea. Esto implica mejorar la
visualizacin de las bacterias y permitir la distincin de formas y tamao.
* diferenciar grupos bacterianos por su reaccin frente a determinados colorantes.
* revelar la presencia de distintas estructuras internas.

Colorantes

Son compuestos qumicos que poseen un grupo cromforo que otorga color a la molcula
y un grupo auxocromo que otorga al colorante la capacidad de disociarse
electrolticamente y por lo tanto, formar sales. El grupo auxocromo es el que facilita la
unin del colorante a otras sustancias con carga elctrica.

Los colorantes se clasifican como colorantes naturales y sintticos. Los colorantes


naturales son utilizados principalmente con fines histolgicos. La mayora de las tinciones
bacterianas son realizadas con colorantes sintticos, en su mayora anilinas, las cuales
derivan del benzeno.

Colorantes cidos, bsicos y neutros. Los colorantes ms usados son sales, las cuales
estn constituidas por un in cargado positivamente y un in cargado negativamente. Por
ejemplo, azul de metileno es actualmente la sal cloruro azul de metileno.

a) Tincin bsica es aquella en que el color est dado por el ion cargado positivamente.
b) Tincin cida es aquella en que el color est dado por el ion cargado negativamente.
c) Tincin neutra es aquella resultante de mezclas entre soluciones acuosas de ciertos
colorantes cidos y bsicos.

Una reaccin de tincin se debera a una combinacin de reacciones fsicas y qumicas.

El pH del medio tiene gran influencia en la tincin ya que permite una mayor o menor
disociacin electroltica del grupo auxocromo, permitiendo de esta manera una mayor o
menor afinidad por los grupos qumicos sobre los cuales se une.
Si se aumenta el pH del medio existe una mayor afinidad del colorante por la bacteria,
sucediendo lo contrario si el pH se hace ms cido.

La fijacin de colorantes a la clula bacteriana se facilita con el uso de mordientes, con los
que forman compuestos insolubles (yodo, fenol, cido tnico, oxalato de amonio, etc.).

Algunos de los colorantes ms empleados en microbiologa son: azul de metileno, violeta


de genciana, fucsina bsica, safranina, verde de malaquita, etc.

Tinciones

Las tinciones pueden clasificarse en: tinciones simples, diferenciales y especiales.

a) Tinciones simples. Son aquellas en que se utiliza un solo colorante. Las bacterias se
tien en forma homognea de la misma coloracin.

La utilidad de esta tincin es relativa, ya que slo es factible observar forma y agrupacin
celular.

b) Tinciones diferenciales. Permiten establecer diferencias tintoriales entre grupos de


bacterias, debido a ello son las ms utilizadas en la identificacin de bacterias. Estas
tinciones se basan en la aplicacin de dos colorantes en etapas sucesivas entre las que
se aplican mordientes y compuestos qumicos decolorantes; de esta forma las bacterias
de diferente afinidad tintorial se observan teidas de distinto color.

c) Tinciones especiales. Permiten poner de manifiesto alguna estructura especial de la


clula bacteriana, ej.: material nuclear, membrana citoplasmtica, flagelos, cpsulas,
esporas, etc.

d) tinciones negativas: Los colorantes no tien el microorganismo, sino el entorno,


aumentando de este modo su contraste. La muestra se extiende sobre una gota del
colorante (nigrosina)

En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas:
extensin, fijacin, tratamiento con colorantes y observacin.
2. FLUJOGRAMAS

2.1 Frotis.

2.1.1 A partir de un cultivo en medio lquido.

Esterilizar asa redonda

Tomar una gota del cultivo lquido

Colocarla en el portaobjetos

Extender la gota uniformemente

Secar al aire

Fijar por calor

Dejar enfriar

Teir

2.1.2 A partir de un cultivo en medio slido.

Colocar gota de solucin salina en el portaobjetos

Esterilizar asa en punta

Tomar una colonia de cultivo slido

Colocarla sobre la gota de solucin salina

Mezclar y extender en el portaobjetos


Secar al aire

Fijar por calor

Enfriar

Teir

2.1.3 Frotis de secrecin faringea.

Visualizar el rea de las amgdalas con el bajalengua

Tomar una muestra de secrecin faringea con el escobilln

Extender uniformemente la muestra sobre Frotar y hacer


el portaobjetos presin
sobre la zona

Secar al aire

Fijar con calor

Colorear

2.2 Coloraciones o tinciones.

2.2.1 Coloracin con azul de metileno.

Realizar frotis de secrecin faringea

Fijar con calor

Cubrir la lamina con azul de metileno por 2 min.

Lavar con agua destilada


Secar al aire

Observar al microscopio con objetivo de inmersin

Reportar la morfologa y
disposicin de las bacterias

2.2.2 Coloracin de Gram.


Muestra (medio slido o lquido)

Secar al aire

Fijar con calor

Cubrir el portaobjeto con cristal de violeta 1 min.

Lavar con agua destilada

Adicionar lugol 1 min.

Lavar con agua destilada

Decolorar con alcohol acetona 1 min.

Lavar con agua destilada

Cubrir la lamina con fucsina bsica 30 seg.

Lavar con agua destilada

Secar

Observar al microscopio con objetivo de inmersin


Reportar la morfologa y
disposicin de las bacterias

2.2.3 Coloracin de Zielh-Neelsen (cidos alcohol resistentes)

Realizar frotis muestra de tierra

Secar al aire

Fijar con calor

Cubrir portaobjetos con fucsina bsica

Calentar 10 min.

Enfriar

Lavar con agua destilada

Adicionar cido metileno 2min

Lavar con agua destilada

Secar

Observar al microscopio con objetivo de inmersin

Reportar la morfologa y
disposicin de las bacterias

2.2.4 Coloracin de Schaeffer-Fulton (esporas)


Realizar frotis cultivo Bacillus sp. 18-
24h.

Secar

Fijar con calor

Cubrir portaobjeto con verde de malequita

Calentar 30seg

Enfriar

Lavar con agua destilada

Adicionar safranina al 5% 1 min.

Lavar con agua destilada

Secar

Observar al microscopio con objetivo de inmersin

Reportar lo observado

2.2.5 Coloracin de Hiss (cpsula)

cultivo de
Realizar frotis Klebsiella
pneumonie de 36-
48h.
Secar
con colorante de Hiss
o solucin acuosa de 1%
Cubrir portaobjetos de cristal violeta
Solucin acuosa al
Lavar 20% de sulfato de
Cu.
Secar

Observar al microscopio con objetivo de inmersin

Reportar lo observado

3. RESULTADOS

3.1 Coloracin con azul de metileno

Las bacterias se observaron de color azul, en forma de una mezcla de bastones y esferas.

3.2 Coloracin de Gram

Las bacterias para los dos frotis (cultivo en medio slido y lquido) se observaron de color
rojo-fucsia, tenan forma de esferas en racimos.

3.3 Coloracin De Zielh-Neelsen (cido Alcohol Resistentes)

Los bacilos cido alcohol resistente se ven rojos o fucsias, los dems se ven azules.

3.4 Coloracin De Shaeffer-Fulton (Esporas)

Solo se pudo apreciar esferas de color rojo.

3.5 Coloracin de Hiss (Cpsula )

La cpsula se observa como un halo alrededor de la bacteria de color violeta plido, la


bacteria se ve violeta intensa o morado.

4. ANLISIS DE RESULTADOS

4.1 Coloracin con azul de metileno


Los microorganismos adquirieron un color azul, por su forma los podemos clasificar en
staphilococos, streptococos y cocobacilos.(ver anexo 1)

Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales,


puesto que la mayor parte del material no celular no se tie.

4.2 Coloracin de Gram

Los microorganismos adquirieron un color rojo lo que indica que son gramnegativos, estos
adquieren esta coloracin debido a que contienen una pared celular estructuralmente muy
diferente a la de los microorganismos Gram positivos, que adquieren un color violeta.

En cuanto a la forma, se puede decir que eran Staphilococos.(ver anexo 2)

En todas las tinciones ordinarias se sabe que la pared celular no se tie, sino solo el
protoplasma fuertemente reducido por el proceso de fijacin.

Nota: Al realizar la tincin de Gram, se debe tener la precaucin de no utilizar cultivos


bacterianos muy viejos, ya que los resultados obtenidos pueden inducir a error; as en
cultivos bacterianos relativamente viejos de bacterias Gram(+), algunas se observan como
Gram(-), ello se debe a la acidificacin paulatina del cultivo, disminuyendo la afinidad
tintorial.

4.3 Coloracin De Zielh-Neelsen (cido Alcohol Resistentes)

La diferencia en la coloracin no se debe a reacciones qumicas con ciertos componentes


de la pared sino a la estructura fsica de la misma.

La cido-alcohol resistencia es conferida por la presencia de grandes cantidades de esas


sustancias creas sobre la pared celular, a la que se unen estrechamente las molculas
del primer colorante que se hace actuar y resisten los lavados con cidos inorgnicos
diludos (HCl, H2SO4, HNO3) y alcohol, pues los lpidos residuales estn unidos
fuertemente a la pared y no toman el segundo colorante de contraste.(ver anexo 3)

4.4 Coloracin De Shaeffer-Fulton (Esporas)

Debido a la coloracin roja se puede decir que presentaban clulas vegetativas, adems
debido a su forma clasificamos a la bacteria como Staphilococos. (ver anexo 4)

Los datos importantes que se obtienen como resultado de esta coloracin son:
presencia o ausencia de esporas
deformacin o no del cuerpo celular
posicin dentro del cuerpo celular
En base a la posicin de la espora dentro de la clula se las clasifica en:

terminales (espora en el extremo del cuerpo celular)


centrales (espora en el centro del cuerpo celular)
centrales a terminales o subterminales (posicin intermedia)

4.5 Coloracin de Hiss (Cpsula ) (ver anexo 5)

5. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

5.1 Fundamento qumico celular de la coloracin de Gram

Tincin de Gram. Se considera hasta el momento como la tincin bacterias ms


importante. Permite una primera clasificacin de las bacterias en gram-positivas, teidas
en azul-violeta, y gram-negativas, organismos rojos. Se encuentra en el principio de toda
investigacin bacteriolgica puesto que de su resultado depende la marcha ulterior para el
aislamiento e identificacin del germen.

El mecanismo de la tincin de gram aun no se entiende del todo. Se supone que se basa
en una diferencia de permeabilidad entre las paredes celulares de los organismos
grampositivos y gramnegativos: el yodo forma con el cristal violeta un barniz que se une al
protoplasto. Este barniz no es soluble en agua, pero si lo es en alcohol-acetona. En la
decoloracin la pared celular de las bacterias grampositivas no permite la salida del
colorante, mientras que esto es lo que sucede en las gramnegativas. Los grmenes
gramnegativos quedan sin teir despus del lavar con alcohol y se tien de rojo con el
colorante de contraste, fucsina, mientras los grampositivos mantienen el color violeta.

Se ha deducido que la pared celular desempea un papel importante para la tincin de


gram por las siguientes observaciones: si se tratan clulas grampositivas con lisocima
estas se transforman en protoplastos. Los protoplastos se tien con el violeta de
genciana, pero pierden el color al lavar con alcohol, puesto que no hay pared celular que
lo impida. De este modo los grmenes grampositivos cuya estructura de pared celular ha
llegado a desintegrar se hacen gramnegativos; finalmente es de importancia para el
diagnstico saber que los clostridios grampositivos que tienden a la autolisis, es decir a la
alteracin de la pared celular, se vuelven gramnegativos en los cultivos viejos.
5.2 Cul es la finalidad de fijar con calor los frotis bacterianos?

Cualquier tincin precisa una fijacin previa de la preparacin que en la mayoria de los
casos se hace en la llama. Con la fijacin se pretende adherir fuertemente la preparacin
al portaobjetos, matar al germen, conservar las estructuras visibles de la clula y mejorar
su capacidad de tincin.

5.3 Importancia del lugol en la tcnica de Gram

El lugol es importante debido a que se utiliza como mordiente, para fijar el colorante sobre
el sustrato. Este refuerza la accin de un colorante.

5.4 Qu son los colorantes cidos y bsicos?Cmo actan?

COLORANTES BSICOS

Son sales, que estn en relacin con el componente bsico de su molcula. Su grupo
aminado forma una sal con un cido, el cual es soluble en agua; tie estructuras cidas
(lacas de hematoxilina, fucsina bsica, azul de metileno, verde de metileno). Existen
sustancias tales como las Basofilas, que muestran afinidad por colorantes bsicos
alcalinos.

COLORANTES CIDOS (colorante aninico)

Son sales que estn con relacin con el componente cido de su molcula; tie
estructuras bsicas, contenidas en el citoplasma celular (eosina, fucsina cida), son
colorantes citoplasmticos. Adems, se dan sustancias tales como las cido filas, las
cuales logran la afinidad por medio de este tipo de colorantes.

Dependiendo de la fraccin cromgena (generadora de color) el colorante ser cido


(cuando posee carga negativa) o bsico (cuando posee carga positiva)

Durante la coloracin las fracciones cromgenas se ligan a componentes tisulares de


carga contraria.

5.5 Qu otras tcnicas de coloracin se conocen para observar estructuras o


tipos de microorganismos?

RODAMINA-AURAMINA
Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen afinidad para
los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a las bacterias, que
aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo verdoso. El permanganato
de potasio, empleado como contraste, evita la fluorescencia inespecfica. Todos los
microorganismos cido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoarios parsitos, se
tien con estos colorantes.

Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramiria es que luego los frotis pueden


ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tincin
con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De esta forma, los
resultados positivos pueden ser confirmados con las coloraciones tradicionales, que
adems permiten la diferenciacin morfolgica.

NARANJA DE ACRIDINA

El fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su forma nativa o


desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la
fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentracin. El naranja de
acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el
microorganismo est vivo y roja si est muerto. De todos modos, como el colorante se
intercala en el cido nucleico, el germen viable se inactivar poco tiempo despus de la
tincin.

El uso de naranja de acridina para detectar la presencia de bacterias en los hemocultivos


ha sido ampliamente aceptado. De hecho, una gran cantidad de estudios ha demostrado
que la tincin de hemocultivos con naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo
ciego para la deteccin inicial de hemocultivos positivos.

BLANCO DE CALCOFLOR

Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflor aumentando
considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras muestras. Segn fue descrito por
Hageage y Harrington, este colorante se emplea en lugar de KOH al 10% para el examen
inicial de los materiales clnicos. Tambin se emplea para aumentar la visualizacin de los
elementos morfolgicos de los cultivos puros de los hongos. En algunos laboratorios ha
suplantado al azul de lactofenol en muchas aplicaciones. Los organismos fluorescen con
luz blanco-azulada o verde manzana, segn la fuente luminosa que se utilice.

TINCIN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)

Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en
su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las
condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas
extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.) formndose una espora por cada forma
vegetativa. Al finalizar el proceso de esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la
espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una
nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de las
bacterias productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su
estudio y observacin son de enorme inters.

TINCIN DE KSTER PARA LA DIFERENCIACIN DE BRUCELAS.

La preparacin fijada se tie con safranina alcalina, se decolora con cido sulfrico diluido
y finalmente se tie en contraste con azul de metileno. Las brucelas y las rickettsias
tambin se presentan como pequeas estructuras cocoides rojas, en grupos porque se
encuentran localizadas intracelularmente, ante un fondo azul claro.

Esta tincin tiene un valor extraordinario para el diagnstico diferencial, puesto que
permite la deteccin de brucelas en la placenta de una vaca que ha abortado, an
cuando exista una contaminacin masiva con bacterias de la putrefaccin. Es unas de las
pocas tinciones que proporciona un diagnstico puramente microscpico. Un aborto por
brucela puede ser diagnosticado microscpicamente en tanto el investigador aplique las
precauciones necesarias, teniendo en cuenta la eliminacin de Coxiella burnetti.

Otra tincin que permite un diagnostico (casi) vlido en la tincin capsular de


Romanowski-Giemsa para el B. Anthracis, en la que el cuerpo del bacilo aparece azul y la
cpsula rosa. Con esta tcnica el diagnstico, en que se requiere gran rapidez, se
establece en minutos. Otras tinciones que no se utilizan de modo rutinario pero si para
precisar un diagnstico son la empleadas par la observacin de cpsulas, esporas y
flagelos.

COLORACIN DE HONGOS

Una de las tcnicas ms empleadas para observar estos microorganismos, es la de


Guegun, por lo que con ella se pueden observar distintas estructuras presentes.

La solucin colorante empleada es:

Acido lctico ....................... 100 g


Sudn III .............................. 0,1 g
Azul de algodn .................. 0,1 g
Sol. de I2 alcohlica. ...... 10 a 30 gotas

Algunos de los elementos del hongo aparecen as diferenciados:

grasas: color rosa o rojo debido al Sudn III (colorante liposoluble). Esto se debe a que el
colorante es ms soluble en los lpidos que en el solvente que lo contiene (alcohol) y
tiende a abandonar la solucin para ser incorporado en el interior de las gotas de lpidos
presentes en la preparacin (proceso de difusin y solubilidad).
glicgeno: aparece de color caoba debido a la presencia del iodo.

almidn: aparece de color azul debido al iodo.


CONCLUSIN

Por medio del anterior laboratorio realizado y con la ayuda de la bibliografa citada
podemos concluir los siguientes aspectos:

El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de


ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la
clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es
la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos
diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de
actividad respiratoria, etc.

La observacin y examen de las bacterias se puede realizar de dos maneras


fundamentales:
Observando los microorganismos vivos sin teir.
Observando las clulas fijadas, teidas con colorantes

La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna


afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con
frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con
intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, otros
colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con
los constituyentes celulares cargados positivamente. A los primeros se les
denomina bsicos, mientras a os segundos como bsicos.

Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada
con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia
se denomina mordiente; un mordiente habitual es el cido tnco. El mordiente se
combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr
atacar el colorante.
BIBLIOGRAFA

FEY, Hans. Compendio de bacteriologa general mdica. Ed Acribia. Espaa. 1978.


p 35-37.

Disponible en pgina web:

http://coli.usal.es/web/educativo/micro2/tema02.html

http://www.danival.org/notasmicro/tincion/_madre_tincion.html

http://bilbo.edu.uy/~microbio/morfologia.html
http://www.microbiologia.com.ar/bacteriologia/general.php?
Mostrar=introduccion
http://www.manant.unt.edu.ar/Departamentos/Ecologia/microbiologia/examen_
coloracion.htm
http://agronomia.uchile.cl/webcursos/microbiologiagral/pagina
%20microbiologia1/word/Guia_Lab_07_(1).doc