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Rev.MVZ Crdoba 18(Supl):3648-3657, 2013.

ORIGINAL

Evaluacin in vivo de Lactobacillus plantarum como


alternativa al uso de antibiticos en lechones

In vivo evaluation of Lactobacillus plantarum as an alternative to


antibiotics uses in piglets

Henry Jurado-Gmez,1* Ph.D, Cristina Ramrez T,2 Ph.D, Javier Martnez B,1 M.Sc.

1
Universidad de Nario, Facultad de Ciencias Pecuarias, Departamento de Produccin y Procesamiento
Animal, Programa de Zootecnia. Pasto, Colombia. Grupo de Investigacin en Procesos Biotecnolgicos
Aplicados en la Produccin Animal. 2Universidad del Valle, Escuela de Ingeniera de Alimentos, Grupo
de Investigacin en Ingeniera de los Procesos Agroalimentarios y Biotecnolgicos GIPAB. Cali,
Colombia. *Correspondencia: henryjugam@gmail.com

Recibido: Abril de 2012; Aceptado: Enero de 2013.

RESUMEN

Objetivos. Evaluar el efecto in vivo de Lactobacillus plantarum como alternativa al uso de antibiticos
en lechones. Materiales y mtodos. 50 lechones fueron distribuidos en 5 tratamientos (n=10). (T0:
sin probitico; T1: con L. plantarum 1 H1; T2: con L. plantarum 1 H2; T3: con probitico comercial;
T4: sin probitico comercial). Las cepas fueron identificadas molecularmente. Para la elaboracin de
los inculos se utilizaron 10 g/L azcar blanco; 15 g/L leche de soya; 150 g/L suero de leche; 15
g/L salvado de trigo y se analiz la viabilidad a temperatura ambiente y refrigeracin. El efecto de
los inculos probiticos se evalu en ganancia de peso, sobrevivencia y presentacin de diarrea. La
determinacin del contenido de inmunoglobulina A se hizo por turbidimetra; colesterol total y BUN
por espectofotometra. El recuento de polimorfonucleares neutrfilos mediante extendido de sangre.
Resultados. Las cepas correspondieron molecularmente a Lactobacillus plantarum. La produccin
de los inculos, para el caso de L. plantarum 1 H1 y L. plantarum 1 H2 se almacenaron por 21 y 12
das a temperatura de refrigeracin manteniendo viabilidades altas. Los animales sometidos a los
tratamientos T1 y T2 no presentaron episodios de diarrea y la mayor ganancia de peso vivo final, as
como las concentraciones ms altas de IgA, polimorfonucleares neutrfilos, colesterol total y BUN
fueron menores en T1 y T2. Se comprob la adherencia de L. plantarum 1 H1 y L. plantarum 1 H2
en el intestino grueso. Conclusiones. La utilizacin de probiticos con L. plantarum 1 mostraron un
efecto positivo en la salud, sobrevivencia y ganancia de peso de los lechones tratados.

Palabras clave: Diarrea, Lactobacillus plantarum, probiticos, tratamientos (Fuentes: CAB).

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Jurado-Gmez - Evaluacin in vivo de Lactobacillus plantarum 3649

ABSTRACT

Objectives. To evaluate the in vivo effect of Lactobacillus plantarum in piglets as an alternative to


antibiotics. Materials and methods. Fifty piglets were allocated into 5 (n=10) treatment groups
(T0: without probiotics; T1:with L. plantarum 1 H1; T2:with L. plantarum 1 H2; T3: with commercial
probiotics; T4:without commercial probiotics). The strains were molecularly identified. The inoculate
preparation used was 10 g/L white sugar, 15 g/L soy milk, 150 g/L whey, 15 g/L wheat bran, analyzing
their feasibility at room temperature and refrigeration. The probiotics inoculate were evaluated in weight
gain, survival and presentation of diarrhea. Immunoglobulin A was evaluated by turbidimetry, total
cholesterol and BUN by spectrophotometry. The count of neutrophils by blood extension. Results. The
Lactobacillus plantarum strains corresponded molecularly. The production of inoculate for the case of
L. plantarum 1 H1 and L. plantarum 1 H2 was stored for 21 and 12 days in a refrigerated environment
while maintaining high viabilities. T1 and T2 had no episodes of diarrhea and higher final live weight
gain and higher concentrations of IgA, and polymorphonuclear neutrophil. Total cholesterol and BUN
were lower in T1 and T2. We confirmed the accession of L. plantarum 1 H1 and L. plantarum 1 H2
in the intestine. Conclusions. The use of probiotic L. plantarum 1 showed a positive effect on the
health, survival and weight gain of the piglets treated.

Key words: Diarrhea, Lactobacillus plantarum, probiotics, treatment (Sources: CAB).

INTRODUCCIN MATERIALES Y MTODOS

El destete de los lechones ocasiona estrs Sitio de estudio. El presente estudio se


y cambios en su inmunidad, presentando realiz en el Laboratorio de Microbiologa de la
desequilibrio en su microflora intestinal ya que Universidad del Valle, sede de Melndez (Cali,
patgenos como Escherichia coli, Clostridium Colombia), y en la finca La Sierra, (Candelaria,
perfringens, Salmonella spp., y rotavirus Valle del Cauca, Colombia).
colonizan el tracto gastrointestinal; causando
diarrea post destete (1). Los antibiticos han sido Identificacin molecular de Lactobacillus
utilizados para prevenir infecciones entricas, sin plantarum. Medi ante ampl i fi caci n del
embargo, los patgenos desarrollan resistencia gen ribosomal 16S por la tcnica del PCR,
cruzada (2) con implicaciones negativas para la utilizando como molde el DNA genmico
salud humana y animal. extrado directamente de las muestras. Los
primers (oligonucletidos sintticos) utilizados
Una alternativa al uso de antibiticos, es la para la reaccin del PCR fueron p27f y p1401r,
utilizacin de microorganismos vivos con homlogos a las extremidades conservadas
caractersticas probiticas en la dieta que del gen RNA ribosomal 16S de bacterias.
depende en parte de la cepa utilizada, pues, no Estos anlisis fueron efectuados en el Centro
todas tienen la misma capacidad de modulacin Pluridisciplinar de Pesquisas Qumicas, Biolgicas
de la microflora intestinal o la misma capacidad y Agrcolas (PQBA) de la Universidade Estadual
para unirse a las clulas intestinales. Lactobacillus de Campinas, So Paulo, Brasil.
plantarum se ha utilizado en cerdos para el
control de bacterias entricas (3), e influenciar Tratamientos. Se trabaj con un total de 50
las comunidades gastrointestinales. lechones, distribuidos en cinco tratamientos,
10 lechones por tratamiento: T0 (Control) sin
En este estudio se propuso la sustitucin o adicin de probitico ni antibitico, nicamente
complemento al uso de antibiticos mediante la con concentrado de iniciacin; T1: L. plantarum 1
utilizacin de inculos probiticos de Lactobacillus H1, y concentrado de iniciacin; T2: L. plantarum
plantarum junto con la racin de iniciacin libre 1 H2, y concentrado de iniciacin; T3: probitico
de antibiticos en fase de precebo y as, lograr comercial, y concentrado de iniciacin; T4: Sin
un mejor control de las infecciones que causan adicin de probitico. Se us el concentrado de
diarrea. Adems, se evalu su efecto en los preiniciacin e iniciacin con antibiticos como
pesos vivos finales, niveles de inmunoglobulina promotores de crecimiento.
A, colesterol total y nitrgeno ureico, eficacia de
la colonizacin por microscopa electrnica de alta Se evaluaron los diferentes tratamientos por un
resolucin y anlisis microbiolgicos de muestras perodo de seis semanas, que correspondi a la
histolgicas del intestino grueso y materia fecal duracin de la fase de precebo.
en los grupos seleccionados.
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Elaboracin de inculos. Utilizando el medio de Evaluacin del efecto de las cepas probiticas
cultivo seleccionado conocido para este ensayo seleccionadas en la ganancia de peso,
como medio 4 (10 g/L azcar blanco; 15 g/L sobrevivencia y presentacin de diarrea
leche de soya comercial; 150 g/L suero de leche en diferentes tratamientos. Se tomaron
pasteurizado; 15 g/L salvado de trigo comercial). datos semanales comenzando desde el primer
Para el proceso de elaboracin la fermentacin da de inicio del experimento relacionados con
se interrumpi al final de la fase logartmica a sobrevivencia, mortalidad, consumo y conversin
temperatura ambiente (29.5C) y refrigeracin alimenticia de los lechones. El diagnstico de las
(4C) por 3 semanas, en volmenes de 250 ml diarreas se bas en parmetros como: heces
y 2 L, midindose la viabilidad en UFC/ml. lquidas, olor e identificacin microbiolgica
hecha en laboratorio.
Inclusin de los probiticos en la racin. Se
procedi a evaluar los probiticos de L. plantarum Evaluacin del efecto inmunoestimulante.
y probitico comercial a nivel de laboratorio, Mediante la tcnica de turbidimetra se determin
antes y despus de su inclusin en la racin la concentracin de inmunoglobulina A.
de iniciacin. La cantidad de inculo probitico
aadido (relacin v/p) fue del 20% (v/v), Evaluacin de los niveles de colesterol
segn lo recomendado por otros autores (4). El srico y nitrgeno ureico en sangre (BUN).
probitico comercial, se suministr siguiendo las Estas muestras fueron tomadas al inicio y final
instrucciones para su adicin. del experimento en ayunas (7 a.m.).

La inclusin de los probiticos se realiz Evaluacin del epitelio intestinal y


mezclando los inculos de L. plantarum con el colonizacin por bacterias lcticas. Se
concentrado de iniciacin, con una poblacin realizaron cortes histolgicos de ciego, colon
microbiana producida durante la fermentacin transverso y recto de los tratamientos a los
no menor de 109 UFC/ml. No se trabaj con cuales se les aplic el inculo probitico,
el concentrado de pre-iniciacin recomendado utilizando dos animales por tratamiento mediante
para las primeras cuatro semanas despus del microscopia electrnica de alta resolucin
destete, por cuanto contena antibiticos. efectuada en el laboratorio de Microscopa
Electrnica de la Universidad del Cauca. La
Posteriormente, se introdujo el concentrado en verificacin de la presencia y viabilidad de las
bolsas plsticas selladas al vaco; se las incub bacterias cido-lcticas en el epitelio intestinal
por 3 das a 32oC. Finalmente, se procedi a se efectu mediante anlisis microbiolgico de
suministrarla a los animales directamente en materia fecal y de intestino de los diferentes
los comederos de tolva durante toda la duracin tratamientos efectuados.
del experimento, es decir, por un perodo de seis
semanas. Diseo y anlisis estadstico. Se utiliz un
diseo completamente al azar, para un nmero
Ensayos de desafo in vivo. Los animales igual de repeticiones. Las diferencias entre los
utilizados fueron de la misma edad al momento tratamientos se observaron por la prueba de
del destete (28 das), machos, cuyo rango de peso Duncan usando el paquete estadstico S.A.S. (5).
vivo al inicio del experimento estuvo entre 8.05
y 8.1 kg y condiciones de manejo homogneas, RESULTADOS
en donde el sistema de alimentacin se bas
en el suministro del alimento directamente en Los resultados de la identificacin molecular
los comederos de tolva y repartido con una indicaron que las secuencias parciales del gen
frecuencia de 3 veces al da por las primeras que codifica para el RNA ribosomal 16S de las
cuatro semanas y luego dos veces al da en las dos cepas de L. plantarum 1 H1 y L. plantarum 1
ltimas semanas. La inclusin de los probiticos H2 presentaron una similitud del 97 al 99%, y
en la racin se realiz por mezclado directo de los del 95% respectivamente con las secuencias
inculos con una poblacin microbiana producida del gen del RNA ribosomal 16S de los linajes L.
durante la fermentacin no menor de 109 UFC/ml, plantarum, L. pentosus, L. paraplantarum y L.
para poder conseguir posteriormente poblaciones plantarum subsp. argentorantensis, incluyendo
mnimas de 107 UFC/g en la racin de iniciacin, de los linajes tipo cuyos N de acceso Genbak
modo que continen presentando una viabilidad son D79210, D79211, AJ306297 y AJ 640078.
adecuada, para de esta manera, ser suministrada Tambin presentaron entre el 99 y 100% de
a los lechones destetos. El suministro de estos similaridad con las secuencias del gen RNA
inculos probiticos junto con la racin y las ribosomal 16S de aislados de Lactobacillus spp.,
diferentes mediciones del experimento se hicieron presentes en las bases de datos consultadas
durante un perodo de seis semanas. Genbak y RDP.
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Para el proceso de elaboracin de los inculos, Al observar las viabilidades para un perodo de 21
la fermentacin se interrumpi al final de la das, las dos bacterias seleccionadas presentaron
fase logartmica, es decir, a las doce horas, y altas viabilidades tanto en refrigeracin como
posteriormente, se evalu la viabilidad (UFC/ml) y a temperatura ambiente. Los valores de pH,
pH a temperatura ambiente (29.5C) y refrigeracin presentaron un ligero incremento con respecto a
(4C) en volmenes 250 ml y dos litros en perodos los dems perodos de tiempo. Sin embargo, esa
de: 12 horas, 7, 12 y 21 das para cada volumen. variacin en el comportamiento de su crecimiento
con respecto al perodo de 12 das, permiti
Los resultados de la fermentacin del medio escoger este perodo de viabilidad en el tiempo
4 (10 g/L azcar blanco; 15 g/L leche de soya para L. plantarum 1 H2, ya que garantizaba una
comercial; 150 g/L suero de leche pasteurizado; constante en el crecimiento logartmico desde
15 g/L salvado de trigo comercial) por un periodo el da 1 hasta el da 12 de almacenamiento en
de 12 horas en un volumen de 250 ml indican refrigeracin.
la alta viabilidad de los inculos probiticos L.
plantarum 1 H1 (2.0 x 1014 UFC/ml con pH de 3.73 Los resultados de la fermentacin del medio 4
y 9.0 x 1013 UFC/ml con pH de 3.53 a temperatura por un perodo de 12 horas en un volumen de
de refrigeracin y ambiente respectivamente) y L. 2 litros indican la alta viabilidad de L. plantarum
plantarum 1 H2 (2.0 x 1014 UFC/ml con pH de 3.68 1 H1 (3.0 x 1014 UFC/ml con pH de 4.09 y 2.0 x
y 3.51 a temperatura de refrigeracin y ambiente 1014 UFC/ml con pH de 4.05 a temperatura de
respectivamente), confirmando los resultados refrigeracin y ambiente respectivamente), y de L.
obtenidos en la cintica y que permitieron escoger plantarum 1 H2 (3.0 x 1014 UFC/ml con pH de 3.94
este medio 4 como el mejor para la produccin y 4.0 a temperatura de refrigeracin y ambiente
de los inculos, lo que garantiz una alta respectivamente), confirmando los resultados
viabilidad en la racin de iniciacin, as como, obtenidos tanto en un volumen de 250 ml como
una buena colonizacin dado que se instalaran en la cintica y que confirman que este medio 4
ms fcilmente por presentar valores de pH muy fue el mejor para la produccin de los inculos.
cercanos a los de lechones en fase de precebo.
Al evaluar la viabilidad por un perodo de 7 das,
Al evaluar la viabilidad de las dos bacterias se pudo determinar al igual que en un volumen
seleccionadas por un perodo de 7 das, de 250 ml, se mantiene una alta viabilidad tanto
presentaron una alta viabilidad tanto a a temperatura de refrigeracin como ambiental,
temperatura de refrigeracin como ambiental, con valores de 3.0 x 1014 UFC/ml con pH de 4.0 y
con valores de 2.0 x 1014 con pH de 3.83 y 2.0 2.0 x 1014 UFC/ml con pH de 4.0 respectivamente
x 1012 UFC/ml con pH de 3.57 respectivamente para L. plantarum 1 H1 y, de 1.0 x 1014 UFC/ml
para L. plantarum 1 H1 y, de 2.0 x 1014 con pH con pH de 3.91 y 4.0 para L. plantarum 1 H2.
de 3.76 y 4.0 x 1012 UFC/ml con pH de 3.57
respectivamente para L. plantarum 1 H2. La viabilidad en el tiempo para un perodo de 12
das mostraron una diferencia marcada para L.
La viabilidad para un perodo de 12 das mostr plantarum 1 H2, ya que present un crecimiento
una diferencia marcada, por cuanto L. plantarum ptimo en refrigeracin (5.0 x 1013 UFC/ml con
1 H1 present valores superiores de 6.0 x pH de 3.95), a diferencia de la temperatura
1013 UFC/ml en refrigeracin, mientras que a ambiental (2.0 x 109 UFC/ml con pH de 3.94).
temperatura ambiente (25C) fue de 1.0 x 109 Estos resultados concuerdan con los obtenidos
UFC/ml. En cuanto al pH, presentaron valores en un volumen de 250 ml y confirman que para
de 3.51 y 3.43. Para el caso de L. plantarum la produccin de los inculos que han de ser
1 H2 indic ser de igual manera, ms viable incorporados a la racin de iniciacin, se pueden
en refrigeracin (1.0 x 10 10 UFC/ml) que a mantener en refrigeracin hasta por 12 das con
temperatura ambiental (9.0 x 109 UFC/ml). Para L. plantarum 1 H2 y tendrn una viabilidad alta
el caso del pH, present valores de 3.60 y 3.46. y un pH casi igual al de los lechones en fase de
precebo.
Estos resultados dieron el primer parmetro para
la produccin de los inculos, ya que permitira Por el contrario, L. plantarum 1 H1 podra ser
mantener en refrigeracin hasta por 12 das almacenado por ms tiempo en refrigeracin
los inculos de L. plantarum 1 H2 manteniendo dada su alta viabilidad (1.0 x 1014 UFC/ml con
una viabilidad alta y un pH cercano al de los pH de 4.09), coincidiendo con los resultados
lechones destetos. Por el contrario, L. plantarum encontrados en un volumen de 250 ml. Sin
1 H1 podra ser almacenado por ms tiempo en embargo, tambin mostr una alta viabilidad a
refrigeracin dada su alta viabilidad. temperatura ambiente (1.0 x 1014 UFC/ml con
pH de 3.85).
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Al observar las viabilidades para un perodo de En la evaluacin por 24 horas en la finca, se


21 das, se pudieron apreciar claras diferencias pudo observar que L. plantarum 1 H1 y L.
con respecto a los resultados encontrados en un plantarum 1 H2 presentaron viabilidades altas
volumen de 250 ml. De esta manera, L. plantarum de 3.0 x 1014 UFC/ml, con pH de 3.94 y pH de
1 H1 present la viablidad ms alta a temperatura 3.95 respectivamente. Al comparar los resultados
de refrigeracin (1.0 x 1014 UFC/ml con pH de anteriores, se apreci que las viabilidades fueron
4.09), que L. plantarum 1 H2 (1.0 x 1010 UFC/ similares, considerando las condiciones de finca
ml con pH de 4.01). En ambos microorganismos y los volmenes inoculados de racin.
no hubo crecimiento a temperatura ambiental.
En la evaluacin por 3 das en la finca, L.
Teniendo en cuenta los resultados anteriores, plantarum 1 H1 y L. plantarum 1 H2 presentaron
una vez efectuada la fermentacin por 12 horas, viabilidades altas de 3.0 x 1014 UFC/ml, con
para el caso de L. plantarum 1 H1 podra ser pH de 4.0 y pH de 3.99 respectivamente. Esto
almacenado hasta por 21 das en refrigeracin. indica que, adems que estos microorganismos
Para el caso de L. plantarum 1 H2 se podra colonicen y se adhieran ms fcilmente al
almacenar por 12 y 21 das con viabilidades altas. tracto gastrointestinal de los lechones, tambin
Sin embargo, se tom la decisin de almacenarlo facilitara el manejo y almacenamiento de
slo por 12 das, ya que la fermentacin de estos esta racin inoculada con probiticos, ya que
inculos en el concentrado de iniciacin se hara los volmenes de concentrado utilizados la
en condiciones de la finca y por lo tanto, no se produccin porcina son elevados.
contaba con un manejo adecuado de variables
como temperatura y humedad relativa, ni de Los resultados de la viabilidad del probitico
incubadoras donde efectuar la fermentacin. comercial muestran una alta viabilidad en agua
Adems, as se garantiza en parte mayor estril con un valor de 8.0 x 1012 UFC/ml, con
disponibilidad de sustrato para el crecimiento de pH de 4.0, con respecto al medio 4 que fue de
L. plantarum 1 H2 (Figuras 1 y 2). 1.0 x 107 UFC/ml, con pH de 4.2. Esto indica que
la eleccin de este producto comercial de uso
Con respecto a la evaluacin de la inclusin de veterinario para cerdos fue adecuada como una
los inculos probiticos en la racin a nivel de medida de comparacin, especialmente con los
laboratorio por 24 horas, se encontr que L. inculos de L. plantarum 1.
plantarum 1 H1 y L. plantarum 1 H2 mostraron
unas viabilidades altas de 2.0 x 1012 UFC/ml con En los ensayos de desafo in vivo, fue efectuado
pH de 4.01 y 3.0 x 1012 UFC/ml con pH de 3.99 un anlisis microbiolgico para verificar la
respectivamente. presencia de bacterias acido-lcticas en las
heces de los lechones antes del suministro de
L. plantarum 1 H2 las raciones con probiticos, encontrndose
que no hubo presencia de BAL, lo cual puede
ser caracterstico de lechones destetos, dado el
cambio brusco que sufren al cambiar de la fase
de lactancia a la de precebo (6).

En cuanto al peso vivo final, existieron diferencias


significativas (p<0.05) entre el grupo tratado con
Lactobacillus plantarum 1 H2 (T2) y los dems
tratamientos (T0, T1, T3 y T4). Tambin se
presentaron diferencias significativas (p<0.05)
Figura 1. Viabilidad de Lactobacillus plantarum 1 H1. entre el grupo tratado con Lactobacillus plantarum
1 H1 (T1) con respecto a los tratamientos T0,
L. plantarum 1 H2 T3 y T4; y entre el tratamiento T4 (Antibitico)
y los tratamientos T0 (Control) y T3 (Probitico
comercial). Entre el tratamiento T3 y T0 no hubo
diferencias significativas (p>0.05).

Para el caso de la ganancia final de peso,


existieron diferencias significativas (p<0.05)
entre el grupo tratado con Lactobacillus plantarum
1 H2 (T2) y los dems tratamientos (T0, T1,
T3 y T4). Tambin se presentaron diferencias
significativas (p<0.05) entre el grupo tratado con
Figura 2. Viabilidad de Lactobacillus plantarum 1 H2.
Lactobacillus plantarum 1 H1 (T1) con respecto a
los tratamientos T0 y T3; y entre el tratamiento
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T4 (Antibitico) y los tratamientos T0 (Control) y con respecto a los dems tratamientos, logrando
T3 (Probitico comercial). Entre el tratamiento T1 un incremento en el potencial de crecimiento
y T4, as como, entre T3 y T0 no hubo diferencias y estimulacin de la respuesta inmune de
significativas (p>0.05) entre ellos (Tabla 1). los lechones. Esto se pudo evidenciar, en los
casos con episodios de diarrea aguda para los
Tabla 1. Peso vivo inicial, peso vivo final y ganancia de tratamientos: T0 (5), seguido del T3 (3) y el
peso final en los lechones al final de la fase T4 (2), y con una morbilidad del 50, 30 y 20%
de precebo. respectivamente.
Peso Vivo Peso Vivo Ganancia de Peso
Tratamiento
inicial (kg) final (kg) Vivo (kg) Posteriormente se tom cada tratamiento
para cada variable: Concentracin de IgA,
T0 8.05 25.75 d 17.7 c
Concentracin de Polimorfonucleares Neutrfilos,
T1 8.1 28 b 19.9 b Niveles de Colesterol Total y BUN. Cada tratamiento
T2 8.1 29 a 20.9 a refleja su efecto sobre la variable de respuesta
T3 8.05 26 d 17.95 c
observando la media o mediana, pues bien, los
tratamientos T0 y T1 generan diferencias en valor
T4 8.05 27 c 18.95 b
absoluto en su efecto, es decir, en el caso de la
Letras diferentes en una misma columna indican diferencias concentracin de inmunoglobulina el efecto del
estadsticamente significativas. tratamiento T1 incrementa su valor casi el doble
con respecto a la concentracin producida por el
El coeficiente de variacin presentado en estos tratamiento 1. En el caso de niveles de colesterol,
valores fue bajo en forma general por debajo el tratamiento T3 difiere significativamente
del 10%, siendo un coeficiente de variacin (p<0.05) del tratamiento T2 superndolo en
excelente y que indica que los datos obedecen a miligramos %. En BUN el tratamiento T0 gener
condiciones de trabajo uniformes y homogneas, un efecto mayor en la variable mientras que
reduciendo la variacin en los resultados. el tratamiento T3 present el menor valor en
trminos de promedio sobre la misma (Tabla 2).
Los valores de la conversin alimenticia para
los tratamientos T0, T1, T2, T3 y T4 fueron En la tabla 2 se puede observar como el
respectivamente de: 1.59, 1.42, 1.35, 1.57 y coeficiente de variacin es bajo en forma general
1.49. Con respecto a la conversin alimenticia, por debajo del 10%, siendo un coeficiente de
existieron diferencias significativas (p<0.05) entre variacin excelente y que indica que los datos
el grupo control (T0) y los tratamientos T1, T2 y obedecen a condiciones de trabajo uniformes
T4. No se presentaron diferencias significativas y homogneas, reduciendo la variacin en los
(p>0.05) entre T0 y T3 (probitico comercial). resultados.
Tambin hubo diferencias significativas (p<0.05)
entre el grupo T3 y los tratamientos T1, T2 Los resultados de la verificacin de la presencia y
y T4. El tratamiento T4 present diferencias viabilidad de las bacterias cido-lcticas indicaron
significativas (p<0.05) con respecto a los valores de 2.35 x 105, 1.5 x 105 y 8.0 x 104 en
tratamientos T1y T2. Finalmente, el tratamiento ciego, colon transverso y recto respectivamente
T1 mostr diferencias significativas (p<0.05) en para el tratamiento T2 (L. plantarum 1 H2).
relacin a T2. Para el T1 (L. plantarum 1 H1), present valores
de 1.0 x 105, 1.3 x 105 y 1.1 x 105 en ciego,
La eficiencia con que fue utilizado el alimento clon transverso y recto respectivamente. En el
por los lechones fue adecuada, en donde los tratamiento Testigo (T0) no hubo crecimiento de
grupos tratados con L. plantarum 1 mostraron las BAL en las diferentes secciones estudiadas.
la mejor eficiencia en el aprovechamiento del
alimento, siendo en todos los casos la media de Los resultados de la evaluacin de epitelio
la conversin alimenticia inferior a 2.0, lo cual intestinal y adhesin bacteriana de L. plantarum
se considera ptimo bajo estas condiciones. 1 H1 y L. plantarum 1 H2, mediante microscopia
Adems, estos valores de conversin alimenticia electrnica se muestran en las figuras 3 y 4.
estn dentro de los parmetros manejados en
la finca La Sierra de CERVALLE con valores Esta adhesin es favorecida gracias a que en los
ptimos de 1.5. inculos evaluados la inclusin del prebitico de
salvado de trigo que permite una mejor adhesin
Durante el tiempo de utilizacin de los probiticos de las bacterias al epitelio intestinal. Adems que
de L. plantarum 1 H1 y L. plantarum 1 H2 en los la leche de soya suministra tambin parte de
tratamientos T1 y T2 respectivamente, no se prebiticos, rafinosa y estaquiosa que favorecen
presentaron episodios de diarrea contribuyendo esta adhesin.
a la mejora de la salud de los animales tratados
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Tabla 2. Media, Mediana, Desviacin tpica y Coeficiente


de variacin para cada tratamiento.
Coef. var.
Tratamiento Tamao Media Mediana Desv. tp.
(%)

Concentracin inmunoglobulina A (IgA)


T0 3 174 173 2.65 1.52%
T1 3 333 332 2.65 0.79%
T2 3 300 299 2.65 0.88%
T3 3 300 300 1.00 0.33%
T4 3 267 267 2.00 0.75%
Total 15 274.8 299 56.50 20.56%
Concentracin polimorfonuclear neutrfilos
T0 3 49 48 4.58 9.35%
T1 3 55 55 2.00 3.64%
T2 3 65 66 2.65 4.07%
T3 3 51 50 2.65 5.19%
T4 3 60 59 2.65 4.41%
Total 15 56 55 6.59 11.77%
Nivel colesterol total
T0 3 116.93 117.2 0.93 0.79%
T1 3 113.83 114 1.16 1.02%
T2 3 93.80 92.8 2.65 2.82%
T3 3 137.87 138.8 1.97 1.43%
T4 3 97.36 97.38 0.05 0.05%
Total 15 111.96 114 16.37 14.62%
Nitrgeno Ureico en Sangre (BUN)
T0 3 9.70 9.6 0.26 2.73%
Figura 4. Microfotografa electrnica de la mucosa
T1 3 7.83 7.83 0.03 0.38%
del intestino grueso del cerdo. Se observa
T2 3 8.76 8.75 0.04 0.41%
una bacteria de L. plantarum 1 H2, en ella
T3 3 7.20 7.1 0.26 3.67%
T4 3 9.63 9.63 0.03 0.31%
se aprecia el material electrodenso que
Total 15 8.62 8.75 1.03 11.93%
conforma la pared celular.

Las unidades de las variables fueron las siguientes: IgA (VN: hasta
200mg/100 ml), Polimorfonucleares neutrfilos (VN: 42-75 %), Colesterol
total (VN: Hasta 220 mg%) y BUN (VN: Hasta 22 mg%). DISCUSIN

El anlisis filogentico confirm la similaridad


de L. plantarum 1 H1 y L. plantarum 1 H2 en
un agrupamiento soportado con alto valor de
bootstrap (100%), relacionado con los linajes
tipo de las especies de Lactobacillus plantarum,
L. pentosus, L. paraplantarum y L. plantarum
subsp. argentorantensis.

La versatilidad de Lactobacillus plantarum se


debe al tamao de su genoma, el cual es 50%
ms grande que la mayora de las BAL y tiene
una gran capacidad metablica, que le permite
utilizar una gran variedad de fuentes de carbono;
propiedad que resulta de un gran nmero de
genes involucrados en el transporte y utilizacin
de azcar, y un metabolismo verstil del piruvato,
Figura 3. Corte transversal de la mucosa intestinal. En el cual tiene el potencial de producir D y L-lactato,
su lmina propia se ven clulas plasmticas formato, acetato, etanol, acetona y 2,3-
(P) productoras de anticuerpos, en respuesta butanediol (7,8). Las BAL tienen la capacidad
a un proceso inflamatorio causado por un
de crecer en una variedad de sustratos (9,10).
agente externo. Se observa edema (Ed) del
tejido conectivo como parte de la respuesta
inmune. En la parte inferior del corte aparece Marin et al (9), evaluaron la supervivencia de
una glndula intestinal (Gi) compuesta por las cepas Lactobacillus plantarum LPBM10 y
clulas cilndricas (Cc) y clulas caliciformes Lactobacillus casei ATCC 393, en sustratos de
(Ca), referente histolgico que identifica el pulpa de uchuva y solucin de glucosa (14% p/p),
intestino grueso. Azul de Toloudina. 100x. y almacenamiento a 4C durante 15 das. A los 15
das obtuvieron viabilidades en pulpa y solucin
Jurado-Gmez - Evaluacin in vivo de Lactobacillus plantarum 3655

de glucosa, para L. plantarum de 3.23 3.35 x seleccionados en la racin de iniciacin y las


109 y 1.64 1.57 x 109 UFC/ml, y para L. casei dosis de UFC/gramo, coinciden con los estudios
de 5.40 2.36 x 108 y 7.34 7.88 x 108 UFC/ llevados a cabo por Boucort et al (20). Los
ml, respectivamente. Los autores concluyeron probiticos utilizando Lactobacillus mejoran la
que con niveles superiores a 106, son unos de los ganancia diaria de peso y reducen la incidencia
criterios considerados para definir un alimento de muerte prematura, al establecer una barrera
con probiticos. Estos resultados coinciden con profilctica contra desrdenes gastrointestinales
los encontrados para un perodo de 12 das (11- (21,22).
12) a temperatura de refrigeracin y confirman
que L. plantarum 1 H1 y especialmente L. Un aspecto importante fue la disminucin de
plantarum 1 H2 son viables a esta temperatura. costos en la alimentacin, dado que no se
empleara los antibiticos requeridos para este
Young et al (13) investigaron el efecto de perodo de precebo, los cuales representan un
almacenamiento en frio sobre la viabilidad de L. valor de US$ 292.94 /tonelada de concentrado.
plantarum en jugo de tomate fermentado, con
viabilidades mayores de 106 UFC/mL an despus Los probiticos de L. plantarum 1 tuvieron un
de 4 semanas de almacenamiento a 4C. Estos efecto favorable en la salud de los lechones,
resultados coinciden con los encontrados a los por cuanto no se presentaron casos de diarrea
21 das en la viabilidad de L. plantarum 1 H2 y durante el experimento, ya que los probiticos
especialmente para L. plantarum 1 H1 a 4C (14). tienen una actividad inhibitoria sobre bacterias
patgenas, refuerzan la inmunidad mucosal y
La concentracin del probitico comercial que disminuyen el pH en el ciego, incrementando los
se use es importante y segn algunos productos Lactobacillus (22,23).
tienen una concentracin de 6.0 x 1010 UFC/100
gramos. En cambio, si la viabilidad durante Cuando el destete ocurre a los 35 das, la altura
1 da 3 das de fermentacin en el medio 4 de las vellosidades se reduce de 410 a 299 m
junto con el concentrado de iniciacin mostr un en tan slo tres das, y es ms dramtica cuando
valor de 3.0 x 1014 UFC/ml y si se toma como se desteta a los 21 y 28 das, ocasionando una
ejemplo, 2000 gramos de este concentrado al prdida en el rea de superficie para la ab
cual se le adiciona el 20% de probitico. Entonces sorcin de nutrientes caracterizado tambin
la concentracin de los inculos probiticos por diarreas (24). Estos trastornos podran ser
(L. plantarum 1) daran un valor de 6.0 x 1015 contrarrestados con la aplicacin de inculos
UFC/100 gramos de concentrado de iniciacin, probiticos de L. plantarum 1 en la racin de
presentando una concentracin microbiana iniciacin, evidenciados en los tratamientos T1
muy superior comparada con el probitico y T2 (25-26). Otros autores como Ro-Prez
comercial. Adems, el tipo de microorganismos y Rodrguez-Membribe (27), sostienen que el
y la cantidad de estos es muy diferente, por efecto de los probiticos se da principalmente a
cuanto el producto comercial utiliza las cepas de nivel de leon, con un incrementado nmero de
Bifidobacterium bifidum, L. casei, L. acidophilus y BAL; y en menor proporcin, a nivel de ciego y
Streptococcus faecium. Los inculos probiticos clon proximal.
estudiados corresponden a una sola cepa usada
por separado (15). Los resultados obtenidos en el estudio constituyen
una herramienta valiosa contra el uso indiscri
Los mejores resultados se encontraron en los minado de antibiticos en la porcicultura, en
lechones que en la fase de precebo recibieron el donde cada da se buscan nuevas alternativas
tratamiento con los probiticos de L. plantarum que promueven una produccin ms limpia sin
1 H2, seguido de L. plantarum 1 H1 (16). el uso de aditivos que pongan en riesgo la salud
Esto coincide con lo reportado por Shim et humana y animal (28).
al (17), segn lo cual, los lechones tratados
con probiticos asimilan mayor cantidad de Mare et al (29) determinaron que L. plantarum
nutrientes y aumentan su peso vivo ms que 423 se adhera fuertemente al leon y clon
aquellos que no fueron tratados (18). Adems, posterior y L. salivarius 241 al duodeno en los
mejoran la absorcin de nutrientes, la produccin lechones antes del destete. El elevado nmero de
de vitaminas y cidos grasos de cadena corta, la cepa 241 se adhiri en el duodeno y el coln
que adicionalmente acidifican el lumen intestinal, posterior de los lechones en fase de precebo,
todo lo cual mejora la digestibilidad de los mientras que la cepa 423 se localiz en el leon.
nutrientes (19). Adems, estas cepas se adhieren a las diferentes
secciones del tracto intestinal, dependiendo de
La metodologa usada en esta investigacin la edad de los lechones. Estos resultados de L.
para el mtodo de inclusin de los probiticos salivarius coinciden con el sitio de adhesin de
3656 REVISTA MVZ CRDOBA Volumen 18 Suplemento 2013

L. plantarum 1 H1 y L. plantarum 1 H2 que se sean de gran utilidad dado que son aislados de
identificaron por microscopa electrnica y por la misma especie a la cual se les suministr en
los anlisis microbiolgicos en clon transverso. la racin de iniciacin (30).

Lactobacillus es altamente efectivo en la


colonizacin de mucosa, tal como el tracto Agradecimientos
gastrointestinal. Un organismo de administracin
efectivo debe estar normalmente presente en el A la empresa Cerdos del Valle S.A. (CERVALLE),
tracto gastrointestinal del organismo hospedador Cali, Colombia, por la financiacin de esta
y dirigirse con precisin a los sitios mucosales investigacin. A la Escuela de Ingeniera de
de infeccin y adherirse a la superficie de las Alimentos; al Dr. Germn Bolvar. A todas
mucosas. Los Lactobacillus poseen ambas personas que de una u otra manera colaboraron
caractersticas, lo cual permitira que el L. para el desarrollo del estudio.
plantarum 1 estudiado en esta investigacin,

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