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El crecimiento de Azotobacter

Por lo general, Azotobacter se cultiva en un medio slido libre de nitrgeno.


Despus de algunas veces (6 meses) de edad de crecimiento de
Azotobacter se transfiere a un medio slido fresco para renovar el
crecimiento. Este procedimiento se repite peridicamente para que la
cultura se puede mantener en buen estado
Produccion de azotobacter
yo. cultura materna: Un puro crecimiento de cualquier organismo en
pequea escala se denomina como cultura madre. cultura madre siempre se
prepara en un matraz cnico de 500 o 1000 ml. Capacidad y luego esta
cultura madre se utiliza para la produccin adicional.

Para este propsito, se toman matraces cnicos de un litro a la que se


aadieron 500 ml de caldo de medio libre de nitrgeno y estos frascos son
entonces conectados con algodn no absorbente, esterilizado en un esclavo
auto durante 15-20 minutos a una presin de 75 libras para un 15 minutos.
Los matraces se inocularon con la cultura madre con la ayuda de inocular
aspticamente aguja. Los matraces se transfieren al agitador y la agitacin
se hace por 72-90 horas a fin de obtener un crecimiento ptimo de las
bacterias en caldo. Las bacterias se multiplican por mtodo binario es decir,
la divisin celular. Despus de unos 90 das, el nmero de mililitros por hora
de aproximadamente 100 crores. El crecimiento total de las bacterias en
este caldo de cultivo iniciador significa madre o la cultura, lo que se debe
hacer con cuidado, ya que an ms su pureza de biofertilizante o calidad de
biofertilizante depende de cmo se prepara la cultura madre.

ii. Produccin a gran escala: Azotobacter se multiplica en gran escala por


dos formas a saber. Fermentador y Shaker. El fermentador es ms
automtico y mtodo preciso de la multiplicacin de cualquier
microorganismo. En este mtodo, el medio se toma en un fermentador y
luego esterilizado. Despus de esto el pH del medio se ajusta y se aade 1%
de cultivo madre. Con el fin de obtener un ptimo crecimiento de la oferta
de temperatura y el oxgeno requerido Azotobacter se ajusta de modo que
el caldo concentrado se hace. Este caldo concentrado del cultivo se mezcla
entonces con un vehculo previamente esterilizado y bio-fertilizantes se
preparan. Dependiendo de la demanda y la oferta adecuada fermentador se
selecciona.

En el segundo mtodo es decir, mtodo de agitacin, un medio adecuado se


prepara transferido a matraz cnico de capacidad adecuada. Estos matraces
se esterilizaron despus en un autoclave a presin de 15 libras por 15
minutos. Cada matraz se inoclulated con la cultura madre de 10 ml y se
transfieren a la coctelera para la multiplicacin en donde se encuentren,
durante 72-90 horas. Este caldo se mezcla con un vehculo adecuado
previamente esterilizado. De este modo se prepara biofertilizante, lleno de
bolsas de plstico y se almacena en un lugar fresco

Seleccin de soporte:

Un portador es nada ms que una sustancia que tiene la materia orgnica


de alto, mayor capacidad de retencin de agua y es compatible con el
crecimiento de organismo. Con el fin de transportar el biofertilizante y se
convierte en fcil de usar vehculo adecuado se selecciona. Generalmente
lignito fresco, el compost y el suelo de turba son vehculos adecuados para
Azotobacter. Fuera de estos portadores de lignito es el ms adecuado para
este organismo, ya que es ms barato, mantiene organismo vivo durante
ms tiempo y no baja la calidad de biofertilizantes.

El lignito viene en las nubes y por lo tanto se muele en polvo fino por la
mquina de pulir. Sus finesses deben ser 250 a 300 de malla. El pH de la
portadora se ajust a neutro mediante la adicin de CaCO3. El lignito,
naturalmente, tiene una variedad de micro-organismo y por lo tanto se
esteriliza en autoclave a 30 lbs. Presin durante 30 minutos. Despus de
esto el caldo se mezcla con lignito 1: 2 proporcin en siguiente mtodo.

bandejas galvanizadas son esterilizados y usados. Para estas bandejas,


lignito previamente esterilizado se transfiere y se aade el caldo de
entonces (lignite2: caldo 1) y se mezcla adecuadamente. Las bandejas se
mantienen entonces uno sobre el otro durante 10-12 horas para permitir
que el organismo se multiplique en el portador. A continuacin, esta mezcla
se introduce en bolsas de plstico de 250 g o 500 g de capacidad. Las
bolsas de plstico son adecuadamente. Las bandejas se mantienen
entonces uno sobre el otro durante 10-12 horas para permitir que el
organismo se multiplique en el portador. A continuacin, esta mezcla se
introduce en bolsas de plstico de 250 g o 500 g de capacidad. Las bolsas
de plstico son lo suficientemente estancos. Toda la informacin necesaria,
como el nombre de biofertilizante, mtodo de uso fecha de caducidad, etc.
est impreso en bolsas de plstico. De esta manera biofertilizante est
dispuesto a vender o utilizar. Si biofertilizante se utiliza inmediatamente a
continuacin, las bolsas se almacenan en un lugar fresco de lo contrario,
deben ser almacenados en el almacenamiento en fro con el fin de
mantener biofertilizante de buena calidad.
De acuerdo con las normas del ISI, un gramo de biofertilizante
inmediatamente despus de que se hiciera debera tener uno crore clulas
de bacterias y 15 das antes de la fecha de caducidad de un gramo de
fertilizante biolgico debe tener 10 lakh bacterias. Si biofertilizante se
almacena a 15-20 0C entonces se mantendr vigente durante 6 meses. Sin
embargo, en 0 a 4 0C (almacenamiento en fro) las bacterias permanecern
activas durante 2 aos. Los perodos de almacenamiento se deciden
despus de probar el biofertilizante para que las condiciones particulares de
almacenamiento, como temperatura y humedad.

Utilice de Azotobacter como biofertilizante:


Planta necesita de nitrgeno para su crecimiento y Azotobacter fija el
nitrgeno atmosfrico no simbiticamente. Por lo tanto, todas las plantas,
rboles, vehculos, obtener beneficiado. Sin embargo, especialmente los
cereales, verduras, frutas, rboles, caa de azcar, algodn, uvas, pltano,
etc. son conocidos para obtener los requisitos, adems de nitrgeno
Azotobacter. Azotobacter tambin aumenta la germinacin de las semillas.
Semillas en germinacin tener por ciento menos si se inocula puede
aumentar la germinacin en un 20-30%.

Cmo aplicar Azotobacter bio-fertilizante?


a. la inoculacin de la semilla:
Sobre la base de la eficiencia de Azotobacter, otros microorganismos
presentes en el suelo, los beneficios obtenidos a partir de biofertilizante y el
gasto que se haya fijado de utilizar Azotobacter - bio-fertilizantes, a razn
de 250 g biofertilizante por 10-15 kg. Si uno sabe que esta proporcin luego
tomar una determinada cantidad de semilla para inocular. La cantidad
necesaria de biofertilizante fresco se asegura y suspensin se hace
mediante la adicin adecuada, cantidad de agua. Esta suspensin se aplica
uniformemente a la semilla, se seca a continuacin la semilla en el cobertizo
y se siembra. Algunos pegatinas se utilizan con el fin de ADHER
biofertilizante a las semillas. Verbigracia. Azcar moreno o arebia goma.

segundo. la inoculacin de plntulas:


Este mtodo se utiliza de la inoculacin cuando se utilizan plantas de
semillero para crecer el cultivo. En este mtodo, las plantas de semillero se
requieren para un acre se inoculan con 4-5 paquetes (2-2,5 kg). Para ello, en
una cantidad adecuada cubo de agua se toma y se aade biofertilizante a
partir de estos paquetes al cubo y se mezcla adecuadamente. Las races o
plantas de semillero se sumergen en esta mezcla para permitir que las
races para obtener inculos. Estas plntulas se trasplantan a continuacin,
por ejemplo, Tomate, arroz, cebolla, col, cultivos, flores.
do. Auto inoculacin o la inoculacin del tubo:
En este mtodo de 50 litros de agua se toma en un tambor y se aade 4-5
kg de Azotobacter biofertilizante y se mezclan adecuadamente. Se
requieren conjuntos de un acre de tierra se sumergen en esta mezcla. Los
tubrculos de patata se sumergen en la mezcla de biofertilizante y la
siembra se realiza.

re. Aplicacin al suelo:


Este mtodo es ms utilizado para los cultivos frutales, caa de azcar y
rboles. En el momento de la plantacin de rboles frutales 20 g de
fertilizante biolgico mezclado con compost es para ser agregado por
sappling, cuando los rboles se hicieron maduraron se aplica la misma
cantidad de biofertilizante.

En la caa de azcar despus de dos a tres meses de la siembra es decir,


antes de la puesta a tierra de hasta 5-6 kg de biofertilizante por acre se
aplica mediante la mezcla con compost o tierra. Aunque, Azotobacter fija el
nitrgeno no simbiticamente, sino que tambin fija el nitrgeno
atmosfrico en la regin rhizospere suelo es decir, alrededor de las plntulas
o rboles. Biofertilizante aplica a las semillas o plntulas de las bacterias
mantendr en torno a las semillas o plntulas y el uso de carbono orgnico
para su metabolismo. Cuando las semillas son germinadas o plntulas fijan
en el suelo que se van o exudan exudados de las races que se convierten
en alimento de estas bacterias. Crecen en estas sustancias que incluyen
azcares, cidos orgnicos y aminocidos y fijar el nitrgeno atmosfrico
ms eficiente. El nitrgeno as fijado por estas bacterias se convierte en
disponible para las plantas despus de muerto y la degradacin de las
clulas bacterianas.

Azotobacter y Fijacin de Nitrgeno:


Azotobacter pertenece a la familia Azotobacteriaceae. Estos son Gram-
negativas, no simbiticas, diaztrofos aerbicas. Las clulas jvenes en
forma de barra varan desde 2,0 hasta 7,0 a 1,0 hasta 2,5 m y de vez en
cuando una clula adulta puede aumentar hasta 10 a 12 m, y ser clulas
ovales, esfricas o en forma de varilla. Azotobacter puede crecer bien en
medio nutriente sencilla libre de N que contiene fuentes de fosfato,
magnesio, calcio, molibdeno, hierro y carbono. Su versatilidad catablica en
la utilizacin de varios compuestos aromticos tales como cido
protocatquico, 2-4-D (cido 2,4-diclorofenoxiactico), 2-clorofenol, 4-cloro-
fenol, 2,4,6-chlorotriphenol, anilina, lindano, tolueno , p-hidroxibenzoato de
metilo, benzoato y el benceno es as docu-mentado. Azotobacter aporta
cantidades significativas de N2 fijado en, sobre o cerca de una planta. El
requisito de energa para el proceso de N2fixation se cumple por una muy
alta tasa de metabolismo aerbico que contribuye a la alta demanda de
oxgeno para el mantenimiento de la tensin de oxgeno Intracel-lular
mnimo, un requisito de la nitrogenasa sensible al oxgeno para lograr
N2fixation. diazotrficas bacterias en la rizosfera de plantas utilizan los
productos de N2fixation para su propio crecimiento y liberan poco mientras
estn vivos. Cuando las bacterias mueren, slo una pequea cantidad de N2
fijo es asimilado por la planta. N2fixation por bacterias heterotrficas en la
rizosfera del arroz se desarrolla en respuesta a una deficiencia en la
disponibilidad de la N2 combinado. Cuando N2 fijo no est fcilmente
disponible para el crecimiento de la planta, las plantas se vuelven
N2deficient donde rhizobcteria contribuyen de manera significativa. Las
mayores tasas de actividad Nitro-genase raz asociada se midieron en las
plantas deficientes en N. En las bacterias nativas el proceso de N2fixation es
inhibida por N2in combinado el medio ambiente. El proceso N2fixation en
bacterias de raz asociado puede fijar N2gas en presencia de niveles de
represin de N2and combinado exportar una porcin principal de la
nitrogenasa amonaco producido o N orgnico 2 subproducto de sus clulas
en la rizosfera y / o races. As, las plantas que forman asociaciones con
bacterias deseadas tienen una fuente adicional de N2available combinado
para el crecimiento. Este microbio posee tres complejos nitrogenasa
genticamente distintas y la expresin de estos Nitro-genase vara con
vanadio, molibdeno y amonio en el medio de cultivo. Nitrogenasa-I se
expresa slo cuando el molibdeno est presente en el medio, nitrogenasa-II
se expresa slo cuando el vanadio est presente mientras nitrogenasa-III se
expresa cuando tanto el molibdeno y el vanadio estn ausentes.

Ventajas de Azotobacter: 1. Azotobacter contribuye beneficios moderados

2. Azotobacter es ms pesado organismo respiracin y requiere una gran


cantidad de carbono orgnico para su crecimiento.

3. Es mal competidor de nutrientes en el suelo y por lo tanto sus sustancias


promotoras del crecimiento, sustancias de accin fungisttica.

4. Puede beneficiar a los cultivos por la fijacin de nitrgeno, sustancias


promotoras del crecimiento, sustancias estticas hongos.

5. Azotobacter es menos eficaz en suelos con pobre contenido de materia


orgnica.

6. Mejora la germinacin de semillas y crecimiento de las plantas

7. Se desarrolla incluso en suelos alcalinos.


8. Azotobacter es tolerante a niveles altos de sales.
Conclusin:
Azotobacter es un amplio espectro biofertilizante y se puede utilizar como
inoculante para la mayora de los cultivos agrcolas. Anteriormente, su
utilidad como biofertilizante no era una prioridad debido a su poblacin
relativamente baja en la rizosfera de la planta. Sin embargo, el tratamiento
con la siembra de varios cultivos Azotobacter provoc un aumento del
rendimiento. Adems, debido a su funcin nutricional N2 bien conocido, se
reconoce ahora a desempear un papel mltiple en la ayuda plantas de
cultivo para mejorar su potencial de crecimiento, el rendimiento y el
mantenimiento de la salud del suelo para la agricultura sostenible. Por lo
tanto existe un renovado inters en este rhizobacterium. Sin embargo, la
comprensin cuantitativa de los factores ecolgicos que controlan el
funcionamiento de los sistemas biolgicos N2fixation de la bacteria en los
campos de cultivo es esencial para la promocin y la adopcin con xito de
la tecnologa de produccin de bio-fertilizantes.

Biofertilizantes NewsAzotobacter: Por Julio-End, Unidad Bio-fertilizantes que


est plenamente operativo
Para el beneficio de la comunidad agrcola, Estacin de Investigacin
Agrcola Regional (ARSA), Tirupati, pronto ser la introduccin de un
~bio-fertilizantes de produccin de pleno derecho de la UNITA como
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sorprendente influencia sobre los precios de los fertilizantes qumicos
nitrogenados, los precios de los fertilizantes nitrogenados casi se han
duplicado en los ltimos 3-4 aos. Esto ha necessiated para buscar la fuente
ms barata de nitrgeno para satisfacer las necesidades de los cultivos.
Esto tiene el rejuvenecimiento de la microbiologa del suelo para aprovechar
la fijacin biolgica del nitrgeno.
Azotobacter spp:
Estas son las bacterias de vida libre que crecen bien en un medio libre de
nitrgeno. Estas bacterias utilizan el gas nitrgeno atmosfrico para su
sntesis de protena celular. Esta protena celular es entonces mineralizada
en el suelo despus de la muerte de las clulas Azotobacter contribuyendo
as a la disponibilidad de nitrgeno de las plantas de cultivo.

Caractersticas de Azotobacter:
Azotobacter es bacterias Gram negativas, polimrfica es decir, son de
diferentes tamaos y formas. Su tamao vara desde 2-10x1-2.5 m., Clula
joven posee flegella peritricoso y se utilizan como sistema locomotor.
Antigua poblacin de bacterias incluye encapsulado formas y han mejorado
resistente al calor, desecacin y condiciones adversas. Los germina quiste
en condiciones favorables para dar clulas vegetativas. Tambin producen
polysachharides. Azotobacter spp., Son sensibles a pH cido, niveles altos
de sales y la temperatura por encima de 350C.

Hay cuatro importantes especies de Azotobacter viz. A.Chroococcum,


A.agilis, A.paspali y A.vinelandii de los cuales A.chroococcum se encuentra
ms comnmente en nuestros suelos.
La fijacin de nitrgeno por Azotobacter:
Las especies de Azotobacter son conocidos para fijar en un promedio de 10
mg.of N / g de azcar en cultivo puro en un medio libre de nitrgeno. Un
mximo de 30 mg. N fijado por gramo de azcar fue reportado por Lopatina.
Sin embargo, Azotobacter es un mal competidor de nutrientes en el suelo.
La mayora de las cepas de Azotobacter eficientes necesitaran para oxidar
unos 1000 kg de materia orgnica para la fijacin de 30 kg de N / ha. Esto
no suena realista para nuestros suelos que tienen un estatus muy bajo de
carbono activo. Adems, el suelo est habitado por una gran variedad de
microbios otherr, todos los cuales compiten por el carbn activo.

Azotobacter en el suelo:
En los suelos de la India, la poblacin de Azotobacter es no ms de 10 000 a
1 lakh / g de suelo. La poblacin de Azotobacter est influenciada
principalmente por otros microorganismos presentes en el suelo. Hay
algunos micro-organismo que estimulan la Azotobacterpopulation en el
suelo lo que aumenta la fijacin de nitrgeno por Azotobacter. Por otra parte
hay algunos microorganismos que afectan adversamente a la poblacin
Azotobacter y por lo tanto se ve obstaculizada proceso de fijacin de
nitrgeno. Por ejemplo cephallosporium se encuentra ms comnmente
organismos en el suelo que limita el crecimiento de Azotobacter.

Azotobacter tambin produce algunas sustancias que comprueban los


patgenos de las plantas tales como Alternaria, Fusarium y
Helminthosporium. Por lo tanto Azotobacter tambin acta como un agente
de control biolgico.

Funciones de Azotobacter: Azotobacter fija de forma natural el nitrgeno


atmosfrico en la rizosfera. Hay diferentes cepas de Azotobacter cada
producto qumico ha variado, biolgicos y otros personajes. Sin embargo,
algunas cepas tienen una mayor capacidad de fijacin de nitrgeno que
otros .. Azotobacter utiliza de carbono para su metabolismo a partir de
sustancias simples o compuestos de carbonoso en la naturaleza. Adems de
carbono, Azotobacter tambin requiere calcio para la fijacin del nitrgeno.
Del mismo modo, un medio utilizado para el crecimiento de Azotobacter se
requiere tener presencia de nitrgeno orgnico, micronutrientes y la sal con
el fin de mejorar la capacidad de fijacin de nitrgeno de Azotobacter.
Adems, la fijacin de nitrgeno, Azotobacter tambin produce, Thiomin,
riboflavina, Nicotin, cido indol acitic y giberalin. Cuando Azotobacter se
aplica a semillas, germinacin de semillas se mejora en una medida
considerable, por lo que tambin controla enfermedades de las plantas
debido a las sustancias anteriores producidos por Azotobacter.

Seleccin de cepas de Azotobacter:


Despus del aislamiento de Azotobacter del suelo su pureza se ensay en el
laboratorio en una forma pura. En el suelo frtil spp.A.Chroococcum se
encuentra, comnmente. El organismo es de naturaleza aerbica, requiere
oxgeno para su crecimiento. En la cultura antigua se forma Malinin qumica
que da el color negruzco a la cultura. El organismo se encuentra un lugar
destacado en suelos alcalinos o neutros. Las cepas de azotobacterias varan
en su capacidad de fijacin de nitrgeno que depende del pH del suelo,
cultivo y la atmsfera de la tierra. Por lo tanto la capacidad de fijacin de
nitrgeno de las cepas se prueba con frecuencia. Con el fin de obtener
cepas ms eficientes de Azotobacter uno tiene que llevar a cabo diferentes
pruebas o experimentos en casa de cristal, ollas y earthern campo bajo la
direccin de micro-bilogos, algunos de ellos se explican a continuacin;

Prueba de reduccin de Azetylene: Las diferentes cepas de Azotobacter en


forma pura se cultivan en el laboratorio en matraces cnicos separados.
Estos matraces se mantienen entonces en un agitador durante
aproximadamente 72 a 50 horas a fin de obtener pleno crecimiento de
bacterias en el medio de los cuales 10-15 ml., De ambos se transfiere a una
botella, a esta botella se aaden 10 ml de gas acetileno y la botella se cierra
con sacabocados y se deja reposar en el cobertizo durante 2-4 horas para
que la reaccin de la enzima nitrogenasa con gas acetileno. Durante este
perodo, el acetileno se convierte en etileno. Porcentaje de ambos los gases
se mide por cromatografa. La cepa que tiene ms enzima nitrogenasa
forma ms gas etileno. Naturalmente, se seleccionar esta cepa para su uso
posterior.
experimento de cultivo de la mezcla: Despus de tener diferentes cepas
analizadas en el laboratorio y cepas eficientes seleccionados prxima
prueba viene el experimento de cultivo en macetas. En esta prueba, ollas
earthern se limpian adecuadamente y desinfectados con algunos
disinfectent laboratorio comn y rellenan con cantidad uniforme de suelo de
jardn ya esterilizado.
Strain encontrado eficaz en el ensayo de reduccin de acetileno se
seleccionan y se multiplica en una forma pura. El caldo se mezcla con liquite
y inoculante as preparada se utiliza para inocular las semillas. Las semillas
se secan a continuacin en el cobertizo y se siembran en macetas. Las
plantas de control inoculadas se mantienen adecuados para la comparacin.
Las plantas se regaron segn y cuando sea necesario y se dejan crecer
durante aproximadamente 45 a 60 das. Las diferencias entre las plantas
inoculadas y no inoculadas con respecto a la altura, el contenido de
nitrgeno de la planta y el suelo, se anotan el peso seco de las plantas.
cepas eficientes se utilizan para las pruebas de campo.

Prueba de Campo: Las cepas encontr eficiente bajo se requieren


condiciones de casa de cristal para someterse a la prueba de campo, que es
la prueba ms importante desde el punto de vista del agricultor. Cepas
encontradas eficiente en la casa de cristal y las pruebas acetylent cuando
se utiliza en el campo se requieren para competir con flora autctona para
su nutricin. cepas eficientes de Azotobacter se aplican a las semillas de
especial y sembrados. Un adecuado control se mantiene para comparacin.
Todos los dems factores se mantienen similares a excepcin de la
inoculacin de semillas con cepas eficientes de Azotobacter.
Tras el vencimiento se observaron datos sobre rendimiento y se hace
comparacin. Tales experimentos se repiten para 3 a 4 aos en diferentes
lugares. De estos datos se selecciona una cepa eficiente y se utiliza para la
produccin de Azotobacter a gran escala. Estas cepas se almacenan en
condiciones de almacenamiento en fro o en el refrigerador. Para la
produccin de bio-fertilizantes, siempre es ser recomendable utilizar ms de
una cepa en el lado ms seguro.

La experiencia de biofertilizante en Rusia:


Los experimentos de campo realizados en Rusia con Azotobacter como
biofertilizante para el trigo, la cebada, el maz avena, caa de azcar, etc.
revelaron que el rendimiento de Azotobacter era media a baja. Los
experimentos sobre el uso de Azotobacter para la inoculacin de semillas de
diversos cultivos tambin se han llevado a cabo en otros pases como India.
Los resultados de estos experimentos indican que los beneficios obtenidos
de la inoculacin de semillas con biofertilizante eran marginales en el suelo
con pobre contenido de materia orgnica. Si bien en suelos ricos resultados
fueron muy alentadores.

Los suelos de campo estn habitadas por un gran nmero de especies


microbianas. La coexistencia de las poblaciones relativas de cada una de las
especies se determina por factores ecolgicos que prevalecen en el suelo.
Estas varias especies de sobrevivir en el suelo mientras se mantiene un
equilibrio de la poblacin es de entre diversas especies microbianas dentro
de ciertos lmites.