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IDENTIFICACIN DE Clostridium sspp.

, EN SISTEMAS DE PRODUCCIN BOVINA


TRADICIONAL Y SILVOPASTORIL EN PREDIOS DE SAN MIGUEL DE SEMA, BOYAC
IDENTIFICATION Clostridium Spp., IN TRADITIONAL AND SILVOPASTORILE CATTLE
PRODUCTION SYSTEMS IN SAN MIGUEL DE SEMA, BOYAC
Aldemar Zuiga1 Diego Ortiz2 Carlos Julio Tunjano3
1

Zootecnista, MSc (c) en Agroforestera tropical U.D.CA, Salud Animal - Corpoica, Mosquera,Colombia:
alzunigalopez@yahoo.com
2
MV, MSc, PhD Universidad Nacional de Colombia , Salud Animal, Corpoica, Mosquera, Colombia: dortizort@yahoo.com.
3
Lic Biologa, Especialista en Epidemiologa, MSc (c) en Agroforestera tropical U.D.C.A. Bogot Colombia:
tunja1@yahoo.com

RESUMEN
Las explotaciones de ganadera bovina Colombia se ven afectadas frecuentemente por casos
de mortalidad sbita, la cual esta estrechamente relacionada con infecciones de Clostridium
spp, la cual se encuentra distribuida mundialmente en distintos tipos de ambientes; suelo,
agua, plantas y tracto gastrointestinal de animales. La investigacin identific y cuantific
UFC/g de bacterias anaerobias patgenas de Clostridium spp., asociadas al suelo en sistemas
de produccin tradicional bovina y sistemas agroforestales (silvipastoril), de la misma manera
busc correlacionar la influencia de las variables climticas de la zona con la cantidad de
bacterias encontradas por sistema de produccin.
Mediante aislamiento microbiolgicos y tcnicas bioqumicas se identificaron aislamientos de
Clostridium septicum, Clostridium botulinum, Clostridium beijirinckii, Clostridium perfringens y
Clostridium bifermentans, cuyas concentraciones se correlacionaron con el comportamiento de
las variables climticas registradas durante la fase experimental, concluyendo que la presencia
de Clostridium spp. es independiente del funcionamiento del sistema productivo y de las
variables climticas en ellos encontradas.
Palabras clave: Sistema silvopastoril, sistema tradicional, Clostridium septicum, Clostridium
botulinum, API 20, variabilidad climtica, factores de riesgo.
SUMMARY
Cattle farms in Colombia are frequently affected by cases of sudden mortality, which is closely
related to Clostridium spp infections, which is distributed worldwide in different types of
environments; soil, water, plants and animal gastrointestinal tract. The research identified and
quantified UFC/g of pathogenic anaerobic bacteria Clostridium spp, associated ground systems
of traditional cattle production and agroforestry systems (silvipastoril), just as he sought to
correlate the influence of climatic variables in the area with the amount of bacteria found by
production system.
By microbiological and biochemical techniques isolation strains of Clostridium septicum,
Clostridium botulinum, Clostridium beijirinckii, Clostridium perfringens and Clostridium
bifermentans, whose concentrations were correlated with the behavior of the climatic variables
recorded during the pilot phase were identified, concluding that the presence of Clostridium spp.
It is independent of the operation of the productive system and climatic variables found in them.
Keywords: silvopastorile system, traditional system, Clostridium septicum, Clostridium
botulinum, API 20, climate variability, risk factors.

INTRODUCCIN
En el municipio de San Miguel de Sema, departamento de Boyac Colombia, se present en el
ao 2010 un episodio de mortalidad bovina; fueron cerca de de 200 animales en pastoreo, de
las razas Holstein y Normando, los cuales segn los productores, murieron despus de las
inundaciones generadas en diversas zonas del municipio aledaas a la laguna de Fquene,
durante la temporada de lluvias en el ao (ICA 2010).
Los antecedentes de muerte repentina del ganado en Colombia se reportan desde mediados
de los noventa, en la altillanura colombiana, all murieron ms de 6.000 bovinos, en especial
vacas recin paridas y novillas de buena condicin corporal, en eventos asociados al
denominado sndrome de muerte sbita (Benavides, 2004).
Las investigaciones realizadas en la bsqueda de la etiologa de estos eventos, concluyen que
las muertes son atribuidas principalmente a la presencia de bacterias del genero Clostridium
asociadas al suelo como una de las principales causas es el incremento de su actividad
microbiana en condiciones de temperatura elevadas y despus de fuertes temporadas de
lluvias (Gomes, 2011; Ortiz & Villamil, 2008).
Con base en la investigacin realizada por Parra et al; (1996) Ortiz & Benavides (2000). en
donde se determin el grado de responsabilidad que tenan las neurotoxinas tipo C y D de C
botulinum en la mortalidad de bovinos afectados por sndrome neuroparaltico en la Orinoquia
Colombiana, tambin encontraron que los principales factores de riesgo asociados fueron: el
consumo de huesos por parte de los animales, la no no quema de cadveres de animales
muertos repentinamente y la no quema de la sabana nativa en poca de verano.
De la misma manera Ortiz (2010) realiz el aislamiento y caracterizacin molecular de bacterias
anaerobias asociadas al suelo en zonas ganaderas con mortalidad bovina, asociada a la
presencia de Clostridium spp, en los municipios de Mariquita, Puerto Lpez, Nemocn y Ubat;
detectando una prevalencia del 27,3%. Concluyendo que los niveles de temperatura y
precipitacin elevadas, favorecen la aparicin de brotes epidemiolgicos
y casos de
mortalidad sbita, asociados con las prcticas de eliminacin de los cadveres como principal
factor de riesgo.
Entendiendo que los Clostridios son habitantes naturales del suelo; su dinmica puede estar
ligada a variaciones climticas (temperatura y precipitacin); los sistemas silvopastoriles
modifican las condiciones del suelo y crean condiciones micro climticas en los ambientes en
los cuales estn establecidos, modificando la proliferacin microbiana. El objetivo del trabajo
fue identificar la presencia de bacterias del genero Clostridium spp., encontradas en muestras
de suelo en sistemas de produccin bovina tradicional y silvipastoril tomadas de predios del
municipio de San Miguel de Sema, (Departamento de Boyac) y establecer la relacin con sus
variables climticas.
MATERIALES Y METODOS
Localizacin del rea de estudio: El municipio de San Miguel de Sema (Departamento de
Boyac) se encuentra enmarcado dentro de las coordenadas geogrficas: 5 31 15 de latitud
Norte y a los 73 43 39 al Oeste del meridiano de Greenwich y su extensin total es de 90
km2.
Seleccin de unidades de muestreo (fincas); El estudio es de carcter exploratorio y en su
ejecucin se procedi bajo los lineamiento de un estudio epidemiolgico de tipo transversal,
siendo el propsito en este caso, tipificar y cuantificar las UFC/g de Clostridium spp.
Se tom como universo de muestreo la base de predios consolidada por Ortiz en 2008 2011;
base esta que consulta el censo predial bovino reportado por las Estadsticas Fondo Nacional del
Ganado, 2006, con un total de 564 predios para la regin del Valle de Ubat y Chiquinquir, de

all se escogieron tres fincas del sistema tradicional y tres de sistema silvopastoril con similares
caractersticas de manejo agronmico entre si.
Se obtuvieron un total de 24 muestras de suelo para analizar, cuatro por predio, tomando 10
submuestras por finca distribuidas al azar.
Anlisis de muestras para identificacin de Clostridium spp: Se tomaron 15 g de cada una de
las muestras de suelo, se deshidrataron a 37 C y se tamizaron, se tom 1 gramo y se coloc
en una solucin de etanol al 50% por 30 minutos a 37C. Despus de este tiempo se tom y
deposit un gramo de suelo en 9 mililitros de Solucin Salina al 0,7%, y se someti a choque
trmico. Se inoiculo la muestra en caldo tioglicolato con trozos de carne (TTC). Las siembras se
incubaron en cmaras de anaerobiosis con catalizador Anaerogen por 48 horas a 37C, de
alli se ttomo una muestra de alli se sembro en caldo infusin cerebro corazn (BHI), el cual se
incub por 48 horas a 37C en condiciones de anaerobiosis.
Se tom 0,1 ml de cada muestra en BHI y se realiz una siembra masiva en superficie de agar
sangre al 5% por duplicado, y se incubaron por 72 horas a 37C en anaerobiosis. Se evalu el
nivel de hemolisis y se procedi a realizar coloraciones de Gram y Verde de malaquita, para
identificar el crecimiento de bacilos Gram positivos esporulados. P
posteriormente se seleccionaron los cultivos las cuales se aislaron nuevamente por duplicado
en Agar Sangre al 5% mediante la tcnica de aislamiento por estra, icubadas a 37 por 72 horas
en condiciones de anearobiosis Anaerogen.
Lla identificacin bioqumica se realizo mediante el uso de kit de tipificacin microbiolgica
(API 20A), en realizando una suspensin de las colonias despus de una incubacin de 18 a
24 horas, concentrada en medio lquido correspondiente al patrn de McFarland 3 (910 8
mo/ml).
Variables climatolgicas: precipitacin, temperaturas mximas y mnimas y humedad relativa,
fueron registradas diariamente en campo mediante Datalogger, Pluvimetro Walmur, EXTECH
INSTRUMENTES CORPORATION en los predios experimentales durante el mes de junio del
2010 y junio del 2011. la informacin se tabul por variables y se analizaron las estadsticas
descriptivas. Una vez se obtuvo la base de datos depurada, se realiz el anlisis de
frecuencias, para una variable especfica (Londoo, 1996; Dean et al., 1992).
RESULTADOS
En la caracterizacin de los sistemas de produccin se encontr la similitud en los sistemas
evaluados en el manejo de los hatos, el factor gentico, nutricional de salud animal y
manipulacin de las praderas. en la tabla 1 estn los resultados microbiolgicos encontrados
de acuerdo al sistema de produccin Sistema Silvo Pastoril (SSP), Sistema Tradicional (ST)
Tabla 1. Caractersticas del de cultivos microbiolgicos de Clostridium spp de las muestras tomadas en campo, en
sistemas silvopastoril y sistema tradicional poca seca junio del 2010 a junio 2011.

El reporte de las concentraciones obtenidas en cada una de las muestras de los suelos
analizados en UFC/g de muestra analizada (Unidades formadoras de colonia por gramo) as
como los resultados consolidados indican la identificacin bioqumica de Clostridium spp.,
correspondiente a la temporada seca del primer muestreo (junio 2010) y se presentan los
resultados de la identificacin bioqumica de Clostridium spp., correspondiente a la temporada
seca del segundo muestreo (Febrero de 2011).
En promedio durante la poca seca y con un nivel de certeza del 95%, los niveles de unidades
formadoras de colonias de Clostridium spp. independientemente de la especie, fueron mayores
en el sistema silvopastoril que en el sistema tradicional (365.167UFC/gr) tabla 1., lo cual podra
estar relacionado con el incremento de los niveles de humedad y ausencia de oxigeno
factores de crecimiento de este tipo de bacterias (Grecs et al., 1982)
Tabla 2. Caractersticas de cultivos microbiolgicos de Cclostridium spp. de las muestras tomadas en campo,
en sistemas silvopastoril y sistema tradicional poca lluvia junio del 2010 a junio 2011.

Se encontr que en la poca seca existe un mayor nmero de UFC de Clostridium en el SSP
(593.417UFC/gr) con respecto con el sistema tradicional, lo que podra estar relacionado con
las condiciones de microclima generado por el sistema, en donde el manejo y regulacin
hdricas se ve modificado por la abundancia de rboles, datos que a su vez concuerdan con la
diferencia con el sistema tradicional reportado por (Mnedez et. al., 2000)
En la tabla 2 se muestra el primer muestreo de la temporada de lluvias, en donde se identifica
la presencia de los Clostridium spp. Los clostridios patgenos encontrados fueron (C.
botulinum y C. septicum), el primero de ellos hallado en un predio con sistema Tradicional
(Silencio) y el segundo asociado a un sistema silvopastoril (Nueva Zelanda). En las restantes
muestras, se encontraron bacterias del gnero C. beijirinckii, en los predios El diamante y El
Prado del sistema tradicional y en Berln del sistema silvopastoril; al igual que C. bifermentans,
en la finca la Bonita del sistema silvopastoril.
.

Figura 1. Tendencias de la presencia de clostridium patgenos en UFC/g por poca y sistema

La distribucin de las UFC/g por sistema y temporada permiti establecer se obtuvo una
tendencia al crecimiento ms marcado en el trnsito de la primera poca seca a la primera
poca de lluvias a favoreciendo su crecimiento en el sistema tradicional. En el trnsito de la
primera poca de lluvias a la segunda de sequa se observa que se mantiene el crecimiento en
el sistema silvopastoril y un decrecimiento marcado en el sistema tradicional, siendo la
tendencia desde esta ltima poca hacia la segunda de lluvias decreciente en los dos sistemas,
y ms marcado en el tradicional.
Al observar el comportamiento en terminos de frecuencia y por niveles de patogenicidad, la
presencia de bacterias del gnero Clostridium spp. aisladas, se encontr
en todos los
periodos de lluvia y sequa y a su vez en ambos sistemas, parece ser que las condiciones
ambientales no afectan la presencia de estas poblaciones microbianas.

Comportamiento de las variables ambientales.


Los registros climatolgicos determinaron los cambios en el tiempo durante el desarrollo del
estudio
Tabla 3. Resumen de variables climticas en los sistemas de produccin.

En el anlisis de lLos datos de temperatura por finca y por sistema durante la fase experimental
de 12 meses, se encontr que el comportamiento cuantitativo de la s temperaturas mnimas y
mximas de los sistemas observados, mantienen unas tendencias similares: con variaciones

en un intervalo de 10 a 12, 4C entre ellas para las temperaturas mnimas mensuales en


el SSP, y entre 18.3C a 21,6C. sSus temperaturas mximas. Para el sistema tradicional
el intervalo de temperaturas mnimas mensuales estuvo entre 9,6 a 11,3C y para las
mximas de 19C a 22,2C (Figura 1 y 2) al parecer los estadsticos permiten predecir que
el comportamiento de las temperaturas en el sistema silvopastoril son homogneas, con
varianzas menores y asimetras ms estrechas, generando un microclima que puede favorecer
la proliferacin de clostridios.
Por otra parte se encontr que los porcentajes promedio de humedad relativa en cada sistema
se comportan de manera diferente de tal manera que el sistema silvopastoril alcanzando
valores pico de humedad relativa mensual de 77,8 % , mientras el sistema tradicional valores
de 73,4 %.variables climticas que quizs tuvieron influencia en las presencia de poblaciones y
sus UFCufc debido a su efecto anaerbico sobre el suelo, es probable entonces que, una
mayor temperatura, humedad relativa, precipitacin en el SSP frente al sistema tradicional
puede a explicar la presencia de Clostridium en dicho sistema, lo cual corrrobora lo
encontrado por Mndez et al., (2000), quien encuentra que los sistemas agroforestales
(rboles en lnea en los sistemas silvopastoriles) tiene influencia en la reduccin de la
temperatura (1-2oC) en el potrero abierto que est bajo la influencia de la proyeccin de la
sombra de la copa de los rboles, donde se presenta una reduccin de temperatura. Variables
que pueden modificar las condiciones y favorecen las ploriferacin de las poblaciones de
Clostridium spp,
Los Estudios de Yeager et al., 2005, concluyen que el suelo de los bosques afectados por
fenmenos climticos como inundaciones o incendios, tienden a disminuir la biomasa del suelo
y la proporcin de bacterias que fijan nitrgeno y oxidan el amonio, constituyndose en
ambientes favorables para la proliferacin de Clostridium spp. sin embargo, se identifican
poblaciones de Clostridium spp,. en los ambos sistemas observadosestudiados.
En cuanto la presencia de Clostridium septicum y Clostridium botulinum en el suelo, se tienen
reportes de distintos autores, en lo que respecta a la asociacin de estas bacterias con
enfermedades en los bovinos (Garca y McKay, 1970; Miwa, 1975; Hang ombe et al., 2000),
pero ninguno de ellos establece una relacin de sus hallazgos con sistemas agrosilvopastoriles.
,
En lLa comparacin de los dos sistemas de produccin con base a los anlisis estadstico se
obtiene que no hay diferencias significativas entre ellos, de la misma manera es posible
identificar concentraciones de Clostridium spp, inferiores en el sistema silvopastoril en la poca
de lluvias y mayores en las poca seca. Igualmente se evidenci en este caso que estas
concentraciones de UFC/g de clostridium spp encontradas, son independientes de las
condiciones climticas que se generen al interior de los sistemas, aunque se sugiere ampliar la
muestra y el anlisis de variables como temperatura y composicin qumica y biolgica de los
suelos y ciclos del agua, para precisar los efectos del sistema en la dinmica de crecimiento
de las bacterias
En el presente estudio el efecto de la temperatura promedio durante la fase experimental fue
de 15.4C para el sistema tradicional y 15,06 C, para el sistema silvopastoril valores que se
encuentran entre el rango de crecimiento para estas bacterias reportados. de la misma manera
otros estudios muestran que la temperatura juega un rol importante en la esporulacin de los
Clostridium spp, indica que la temperatura ptima para el crecimiento del Clostridium botulinum
es de 37 C la cual presenta buen crecimiento que se evidencia a partir de la formacin de
unidades de turbidez nefelomtricas (10000 aprox); y de la misma manera para valores de 14
C temperatura muy cercana a la encontrada en este estudio, (Grecz y Arvay, 1982).
Un efecto indirecto atribuido a la precipitacin sobre el suelo asociado a la presencia de los
Clostridium spp, esta atribuido al aumento de las concentraciones de agua superficial , de tal
manera que se aumenta el factor anaerobico y la disminucin de O 2 libre en el suelo y de
manera simultnea propicia las condiciones fsicas para que los clostridios floten hacia la
superficie. Desmarais, et al,2002 reportan haber encontrado que se eleva el nmero de E.coli y
Clostridium perfrigens en sedimentos superficiales a lo largo de las orillas de los ros, cerca al
borde del agua, de igual manera que hallaron aumentos en nmeros de colonias de

Clostridium perfrigens en muestras de subsuelos, en pocas secas posteriores a un periodo de


lluvias intenso.
CONCLUSIONESonclusin
Se identificaron cepas patgenas de Clostridium entre las que se destacan Clostridium
botulinum agente causal de las intoxicaciones alimentarias en bovinos y de la patologa
conocida con el nombre de botulismo, enfermedad neuroparaltica de curso agudo que mata en
forma sbita los animales en mejores condiciones. Clostridium septicum la presencia de
cepas de bacterias del genero Clostridium spp., encontradas bacteria agrupada en el grupo de
bacterias necrotizantes que lesionan el msculo y que el ganadero reconoce como carbn,
enfermedad que afecta masa musculares y es de curso agudo y finalmente Clostridium
perfringes responsable de las patologas entricas en animales jvenes, altamente patgeno y
poco diagnosticado.
Este tipo de bacterias es responsable de gran parte de la mortalidad de animales de la zona y
de su diagnstico adecuado depende el establecimiento de programas de prevencin y control
de las mismas.
en suelos de sistemas de produccin silvopastoril y sistemas tradicional, dentro de las cuales
se identificaron cepas patgenas de C. botulinum, C. septicum, C. beijirinckii C.bifermentans C.
perfringens. El hallazgo de cepas Clostridium spp. En los predios estudiados su presencia y su
comportamiento poblacional UFC/g son independientes de las variables climticas y el tipo de
sistema de produccin.

BIBLIOGRAFIA
Benavides Ortiz, E. (2009). Causas de muerte sbita en bovinos en pastoreo en las sabanas de
Amrica Tropical. Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias (Colombian journal of animal
science and veterinary medicine),17(2), 182-192.
Desmarais, T. R., Solo-Gabriele, H. M., & Palmer, C. J. (2002). Influence of soil on fecal
indicator organisms in a tidally influenced subtropical environment.Applied and environmental
microbiology, 68(3), 1165-1172.
Garcia, M. M., & McKay, K. A. (1970). Pathogenic microorganisms in soil: an old problem in a
new perspective. Canadian Journal of Comparative Medicine,34(2), 105.
Gomes, J. (2011). Gnero Clostridium spp. Microbiologia Clnica Veterinaria VET 3225, rea de
bacteriologia 2011-2. Universidade Federal do Rio Grande do Sul, UFRGS. Disponible desde
Internet e: http://www6.ufrgs.br/labacvet/files/Clostridium201102.pdf (com acceso 24/11/2011)
Grecz, N & Arvay, L (1982). Effect of Temperature on Spore Germination and Vegetative Cell
Growth of Clostridium botulinum. Applied and environmental microbiology, 43, 331- 347
Hang ombe, B., Isogai, E., Lungu, J., Mubita, C., Nambota, A ., Kirisawa,R., Kimura, K & Isogai,
H. (2000). Detection and characterization of Clostridium species in soil of Zambia. Comparative
immunology, microbiology and infectious diseases, 23, 277- 284
Miwa, T. (1975). Clostridia in soil of the Antarctica. Japanese journal of medical science &
biology, 28, 201-213
Mendez, E., Beer, J. Faustino, J. & Otalora, A. (2000) Plantaciones de rboles en lnea.

Ortiz D. & Benavides E (2000). Las neurotxinas tipo c y d de Clostridium botulinum son
responsables de parte de la mortalidad de bovinos afectados por el sndrome neuroparaltico en
cuatro fincas de la Orinoquia colombiana. Revista de medicina Veterinaria. 2, 9 20.
Ortiz D. y Villamil L.C. (2008). Bacterias anaerobias del suelo responsable de la muerte sbita
bovina en sabanas tropicales: investigaciones realizadas en Colombia. Revista Corpoica
Ciencia y Tecnologa Agropecuaria ,9, 102 112.
Ortiz; D., Villamil; L & Martnez E. (2010). Aislamiento y caracterizacin molecular de bacterias
anaerobias asociadas al suelo en zonas ganaderas con problemas de muerte sbita. Revista
Colombiana de Ciencias Pecuarias. Universidad de Antioquia, 24., 406.
Parra, J., Olarte, L., Barrera, J & Acevedo, L (1996). Diagnstico y alternativas de control al
problema de la mortalidad bovina en un rea del departamento del Vichada. CORPOICA, 113
Smith L & Holdema L. (1968) . The Patogenic Anaerobic Bacteria. Springfiel, Illinois. United
States: Charles C Thomas Publisher.
Yeager, C., Northup, D., Grow,C., Barns,S & Kuske,C. (2005) . Changes in Nitrogen-Fixing and
Ammonia-Oxidizing Bacterial Communities in Soil of a Mixed Conifer Forest after Wildfire.
Applied and environmental microbiology , 71 , 27132722.