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b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
- Buffer TAE
2) Preparacin de soluciones:
Objetivo: Que el practicante formule mediante clculos estequiometricos la preparacin de
soluciones y buffers para las necesidades en un laboratorio de Biologa Molecular:
Tarea: Desarrollar la practica en el anexo N 1
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo
b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno
e) Excelente
Anexo N1
1. Disolucin de Primers:
Cuanto de Agua PCR debo aadir a Primers liofilizados con 74.4 nMoles para obtener una
concentracin final de 200 uM?
Cuanto de Agua PCR debo aadir a este? Para obtener una solucin al 20uM?
Cuanto de Agua PCR debo aadir a Primers liofilizados con 58.6 nMoles para obtener una
concentracin final de 200 uM?
Cuanto de Agua PCR debo aadir a este? Para obtener una solucin al 10uM?
2. Clculos de Master Mix PCR
Concentra
cin final
H2O PCR
Concen
tracin
inicial
--
Buffer 10X
10X
1X
MgCl2
25mM
2.5mM
dNTPs
2.5mM
0.2mM c/u
Primer
Forward
Primer
Reverse
Taq
polimerasa
10uM
1uM
10uM
1uM
5U/ul
1U/ul
Volumen
por
reaccin
Volumen
(ul) para
tubos
--
25 ul
Componente
Concentra
cin final
H2O PCR
Concentr
acin
inicial
--
Buffer 5X
5X
1X
MgCl2
50mM
2.5mM
dNTPs
2.5mM
0.2mM c/u
Primer
Forward
Primer
Reverse
Taq
polimerasa
20uM
1uM
20uM
1uM
5U/ul
1U/ul
Volumen Volumen
por
(ul) para
reaccin tubos
--
12.5 ul
Cuanto de cada reactivo debo aadir si mi artculo de referencia me indica que el protocolo es el
siguiente?:
10 mM tris HCl (pH 8.3), 50mM Kcl, 1.5mM MgCl2, 200 uM de cada desoxinucleosido trifosfato,
1.25 taq DNA polimerasa y 0.5uM de cada Primer. Cada muestra tendr 10ng de ADN. En volumen
final de 12.5 ul
NOTA: Dejar los primers a una concentracin en la que solo baste 1ul de Primers para obtener la
concentracin final deseada.
Se tiene en Stock los siguientes reactivos:
Mix 2X: Taq DNA polimerasa 50U/ml, 400uM de cada desoxinucleosido trifosfato, 3mMMgCl2
200 g/L
150 g/L
100 g/L
50 g/L