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procesamientodeespermatozoidesporlapiscinayengradientededensidadeseficazenlaeliminacindelosespermatozoidescondaoenelDNA

JAssistReprodGenet.2012Jun29(6):557563.

PMCID:PMC3370043

PublicadoenInternetel2012Mar13.doi:10.1007/s108150129742x

procesamientodeespermatozoidesporlapiscinayengradientede
densidadeseficazenlaeliminacindelosespermatozoidescondaoenel
DNA
VarshiniJayaraman, DineshUpadhya,PratapKumarNarayan,ySatishKumarAdiga
DivisindeMedicinaReproductiva,LaboratoriodeEmbriologaClnica,KasturbaMedicalCollegedelaUniversidaddeManipal,Manipal,576104India
VarshiniJayaraman,telfono:+918202922085,Email:varsh1981@gmail.com.
Autorcorrespondiente.
Recibido201128OctAceptado201229Feb.
DerechosdeautorSpringerScience+BusinessMedia,LLC2012

EsteartculohasidocitadoporotrosartculosenPMC.

Abstracto

Ir:

Propsito
eldaodelADNpuedeocurrirduranteelprocesamientodelosespermatozoides,locualinfluynegativamenteen
lacapacidaddelosespermatozoidesdefertilizar.Elpresenteestudiofuediseadoparacompararlaeficaciade
gradienteylapiscina,yaseasolooencombinacin,paraeliminarlosespermatozoidescondaoenelDNA.
mtodos
Untotalde51sujetosquevisitanlaclnicadeinfertilidadUniversidadconlosparmetrosnormozoosprmicos,se
incluyeronoligozoospermiayteratozoospermia.lascaractersticasdelsemenseanalizaronmediantecriterios
estndartransferasamediadaensayodemarcadodelextremoterminaldesoxinucelotidyldUTPnickseemple
paralaevaluacindedaosenelADN.
resultados
ElporcentajedeespermatozoidesTUNELpositivasdespusdelprocesamientodeespermafuesignificativamente
menorennormozoosprmicos(P<0,05),oligozoosprmicos(P<0,001)ylasmuestrasteratozooesprmicas(P
<0,01).NoseobservarondiferenciasenlaincidenciadeTUNELespermapositivaentrelasdiferentestcnicas,lo
quesugierequesoncomparables.
conclusiones
preparacindelosespermatozoidessehaencontradoparadarlugaraunenriquecimientodeespermatozoidescon
cromatinaintacta,loqueesprobablequemejorelasposibilidadesdelograrunembarazoviable.
Palabrasclave:EspermadaoenelADN,laseleccinespermtica,lapreparacindelsemen,enlapiscina,
gradientededensidad

introduccin

Ir:

Laaplicacindetcnicasdereproduccinasistida(ART)harevolucionadoeltratamientodelainfertilidad.A
travsdelosaos,conundesplazamientodelareproduccinasistidadelasmerasindicacionesginecolgicasams
deindicacionesandrolgicas,sehaproducidounaumentodelosinvestigadoresadesarrollartcnicasms
sofisticadasparasepararlosespermatozoidesfuncionalesdelasquesoninmviles,tienenmalamorfologaoson
incapacesdefertilizarovocitos[1].Elhechodequelafertilizacinsepuedelograrconmuypocos
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espermatozoidesporinyeccinintracitoplasmticadeespermatozoides(ICSI)nodebeimpedirquelanecesidadde
unamayoratencinalrecuperarlamayorcantidaddeespermatozoidesnormalescomoseanecesario,yaseaparala
IIUoFIV.
Unatcnicaidealprocesamientodeespermatozoidesdebesersuaveyquerecuperaunapoblacinde
espermatozoidesmuyfuncional[1].Centrifugacindeseriedelsemensesabequeinducenladisfuncinmediada
porespermatozoidesatravsdelaproduccindeespeciesreactivasdeloxgenoporlosespermatozoidesy
leucocitos[26].Porlotanto,lastcnicasdeseleccindeespermatozoidesmssuavestalescomocentrifugacin
engradientededensidaddobleyprocedimientosnadaruphanevolucionadoyseaplicanampliamenteenla
prcticaclnica[5,7,8].Lastasasdexitoasociadosaestosprocedimientos,sinembargo,noesptimatalvez
porquelaseleccindeespermasebasaactualmenteencriteriosestndar,talescomolaviabilidad,motilidady
morfologa.
Nuestramejorcomprensindelafisiologadelosespermatozoidesyelnfasisenelpapeldelaintegridaddel
gametomasculino,tantoenlafertilizacinylaembriognesis,hadadolugaraunaumentodelademandade
tcnicasdeseparacindeespermatozoides.Losestudioscomparativosrealizadosanteriormentesobrelosmtodos
depreparacindeespermahaninvestigadoesencialmenteresultadoscomoelporcentajederecuperacinylos
parmetrosseminalesconvencionales[913].Enlosltimosdas,sehanrealizadomuchosestudios,setratade
identificarunmtododepreparacindelosespermatozoideseficazqueproduciraelmximonmerode
espermatozoidesgenticamentecompetente[14de19de].Losresultadosdeestosestudios,sinembargo,son
concluyentespararecomendarcualquiermtododeseleccinespecfica[20,21].Envistadelaslagunas
existentesenlazonamencionadaanteriormente,elpresenteestudioserecogiparalaidentificacindeunatcnica
delavadodeespermaadecuadoparaeliminarelespermaquellevaADNdefectuoso.

materialesymtodos

Ir:

Asignaturas
LospacientesquevisitanlaclnicadefertilidaddeKasturbaMedicalCollegeparticiparonenelestudio,despusde
laprovisindeunconsentimientoinformadoporescrito.Lasmuestrasdesemenseobtuvierondepacientescon
parmetrosnormozoosprmicos(n:11),oligozoospermiamoderadaygrave(n:20)yteratozoospermia(N:20)para
averiguarlaeficaciadediversastcnicasdepreparacindelosespermatozoides.Sepidiatodoslospacientespara
proporcionarmuestrasdesemendespusde35dasdeabstinenciaeyaculatoria.muestrasdesemenseprodujeron
pormasturbacindirectamenteenunrecipientedeplsticoestril,enunahabitacinespecialmenteprevistopara
estefinysituadoadyacenteallaboratorio.
Elanlisisdelsemen
Despusdelalicuefaccin,elprocesamientoyelanlisisdelsemenserealizdeacuerdoalasrecomendacionesde
laOrganizacinMundialdelaSalud[22].Elvolumenseminalsedeterminenunaconcentracinde
espermatozoidestuboysegraduseevaluporelmtodoconvencionalutilizandoMaklercmaraderecuento
(SefiMedicalInstruments,Israel)yexpresadaenmillones/ml.Lamotilidaddelespermaseevaluenalmenos
100espermatozoidesyseexprescomoporcientodeespermatozoidesmviles(sumadeprogresinrpida,ms
espermaprogresinlenta).MorfologadelosespermatozoidesfueevaluadaportincinShorryviabilidaddelos
espermatozoidesporeosinanigrosinamancha.
Tcnicasdepreparacindelosespermatozoides
Lamuestradesemensedividientrespartesigualesdespusdeunexamenderutinayseprocesadeacuerdocon
lostresmtodosmencionadosacontinuacin:
Nadar Unaalcuotade0,5mldesemenconjuntosemezclsuavementecon1mldemediodepreparacindelos

espermatozoidesprecalentado,suplementadocon0,1%dealbminadesuerohumano(SigmaAldrich,St.Louis,
Catlogo#A1653)enuntubodeensayo.acontinuacin,lacentrifugacinserealiza200xgdurante8min.
Posteriormente,sedescartelsobrenadanteyselavconmediodeprecalentadoa100gy45gdurante8min,
respectivamente.Despusdeesto,200ldemediodepreparacindelosespermatozoidesseaadicuidadosamente
alapastillafinal.Eltuboseinclinaenunngulode45Cyseincubdurante1ha37Cenunincubadorde

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dixidodecarbono.Acontinuacin,lasfraccionesdesobrenadanteysedimentoseseparyseevaluaronparala
concentracindeespermatozoides,lamotilidad,viabilidad,morfologanormalylaintegridaddelADN.
Gradientededensidad Losgradientes80/40(Pureception,SAGE,EE.UU.)sepreparenuntubode14ml,

seguidoporcapasde0,5mldesemenycentrifugacina200xgdurante20min.Elgradienteseretira,dejandoel
sedimento,sinmolestias.Elsedimentoselavdosveces(200xg,5min)en1mldemediodepreparacindelos
espermatozoidesprecalentadoyelsedimentofinalfuesuperpuestacon200ldemediodepreparacindelos
espermatozoides,seguidodeincubacina37Cenunincubadordedixidodecarbonopor30min.A
continuacin,lasfraccionesdesobrenadanteysedimentoseseparyseevaluaronparalaconcentracinde
espermatozoides,lamotilidad,viabilidad,morfologanormalylaintegridaddelADN.
gradientededensidadyswimup Losgradientes80/40(Pureception,SAGE,EE.UU.)sepreparenuntubode

14ml,seguidoporcapasde0,5mldesemen.Laprimeracentrifugacinserealiza200xgdurante20min.El
gradienteseretira,dejandoelsedimento,sinmolestias.Treslavadosdelprecipitadosellevaronacabocon1mlde
mediodepreparacindelosespermatozoidesprecalentadoa200g,100gy45g,respectivamente,para8
min.Elsedimentofinalsecubricon200ldemediodepreparacindelosespermatozoides.Eltuboseinclina
entoncesenunngulode45Cyseincubdurante30mina37Cenunincubadordedixidodecarbono.A
continuacin,lasfraccionesdesobrenadanteysedimentoseseparyseevaluaronparalaconcentracinde
espermatozoides,lamotilidad,viabilidad,morfologanormalylaintegridaddelADN.
ensayodeTUNEL
ElkitcomercialqueutilizafluorescenadUTPparamarcarlossitiosdefragmentacindeADNseutilizeneste
estudio(ApoAlertDNALafragmentacinAssayKit,Cat#630108Clonetech,Japn).Suspensindeespermase
extendisobreunportaobjetosysefijaen4%deparaformaldehdoysepermeabilizaroncon0,1%TritonX100.
EstofueseguidodeetiquetadoTUNELa37Cdurante1horaaoscuras.Elnegativoyelcontrolpositivotambin
serealizaron,respectivamente,porlaomisindelaenzimaTdTsiguiendolasinstruccionesdelkitypreincubando
muestrasdeespermafijasypermeabilizadasconDNasaI(40UI/ml)durante10minatemperaturaambientepara
producirroturasenelADN.ClulasTUNELpositivasmostraronunafuertefluorescenciaverdenuclearquese
observbajoelmicroscopiodefluorescencia(ImagerA1,Zeiss,Alemania)equipadoconunfiltrodeexcitacin
490nm(Fig.1).Untotalde500espermatozoidesseevaluaronencamposaleatoriosydaoenelADNse
exprescomoporcentajedeespermatozoidesTUNELpositiva.
Higo.1
ensayodeTUNELenespermatozoideshumanos,40aumentosRojo
espermatozoidesintactosVerdeespermatozoidesconfragmentacindel
ADN
anlisisestadstico
Estadsticasdescriptivasbsicas(mediaerrorestndar)secalcularonparadiferentesparmetrostalescomoel
conteodeespermatozoides,lamotilidadtotalmotilidadprogresivarpida,lamorfologanormaldelespermatozoide
yelporcentajedeTUNELespermapositivodelosdiferentesgruposutilizandoelpaqueteestadsticoparaCiencias
Sociales(SPSS)yesresumenenlaTabla1.Elanlisisestadsticodelosmediosentrelosdiferentesgruposde
estudioseharealizadomedianteecuacioneslinealesgeneralizados(GEE).Unvalordep<0,05fueconsiderado
estadsticamentesignificativo.
tabla1
lascaractersticasdelsemenyeldaodelADNmedianteelensayode
TUNELendiversasmuestras

resultados

Ir:

Recuentodeesperma
Muestrasoligozoospermictenanunasignificativa(Precuentodeesperma<0,001)inferiorenlafraccinno
procesadoencomparacinconmuestrasnormozoosprmicosyteratozooesprmicas(Tabla1).Conrespectoal
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rendimientodelosespermatozoides,enmuestrasnormozoosprmicos,oligozoospermicyteratozooesprmicas,
nadarhastacedidosignificativamente(P<0,001)mayornmerodeespermatozoidesencomparacintantocon
gradientededensidadylacombinacindegradientededensidadyswimup(Tabla1).
motilidadprogresivarpidaycompleta
Enlafraccinnoprocesada,muestrasoligozoospermicyteratozooesprmicastenansignificativamentemenor
proporcindeespermatozoidesmvilesyrpidosprogresivatotalencomparacinconmuestras
normozoosprmicos(P<0,001).Despusdelapreparacindeesperma,todoslostresprocedimientosprodujeron
unaproporcinsignificativamentemayordeespermatozoidesconmotilidadprogresivarpidaycompletaen
comparacinconlafraccinsinprocesar(P<0,05).
Enlasmuestrasnormozoosprmicos,aunquetodaslastrestcnicascedidoaumentodelaproporcinde
espermatozoidesmvilestotalesencomparacinconlafraccinnoprocesada,elmtododecombinacintuvieron
significativamentemenorproporcindeespermatozoidesmvilestotales(P<0,05)encomparacinconlosotros
dosmtodos.Enlasmuestrasoligozoospermicyteratozooesprmicas,mientrasquelacomparacindelastres
tcnicas,nadarhastamtodotuvoelporcentajemsalto(P<0,05)deespermatozoidesmvilestotalesen
comparacintantocongradientededensidadylatcnicadecombinacin,loquesugierequeswimupeseficazen
larecuperacindemximonmerodemvilesespermatozoides(Tabla1).
Mientrasquetodoslostresprocedimientostenanunporcentajesignificativamentemayordeespermaprogresiva
rpida(G3)encomparacinconlafraccinnoprocesada(P<0,001),nohubodiferenciasentreestastcnicasen
lasmuestrasnormales.Enlasmuestrasoligozoospermicyteratozooesprmicas,nadarhastatuvieronmayorrpida
deespermaprogresivaencomparacincongradientededensidadylacombinacindegradientededensidady
swimup(P<0,05).
lamorfologadelosespermatozoidesnormales
Muestrasteratozooesprmicasoligozoospermictuvieronsignificativamente(P<0,001)menorporcentajede
espermatozoidesmorfolgicamentenormalesenlafaccinnoprocesadaencomparacinconmuestras
normozoosprmicos.Despusdelprocesamientodeesperma,enmuestrasnormozoosprmicos,latcnicade
combinacintuvieronunmayorporcentajedeespermatozoidesmorfolgicamentenormales(P<0,01).Enlas
muestrasoligozoospermicyteratozooesprmicas,mientrasquenohubodiferenciasentrelastcnicasdegradiente
dedensidadydecombinacin,dentrodelapiscinahabaunnmerosignificativamentemenorporcentajede
espermatozoidesmorfolgicamentenormalesencomparacinconcualquiera(P<0,001),loquesugierefaltade
efectividaddelamismaenlarecuperacindeespermatozoidesmorfolgicamentenormales(tabla1).
espermatozoidesTUNELpositivas
Oligozoospermicmuestrasyteratozooesprmicastuvieronunligeroaumentodelporcentajedeespermatozoides
TUNELpositivoenlosnormozoospermicsfraccinnoprocesadaencomparacin.Estadiferenciafue
estadsticamenteinsignificantesinembargo.ElporcentajedeespermatozoidesTUNELpositivasdespusdel
procesamientodeespermafuesignificativamentemenorennormozoosprmicos(P<0,05),oligozoosprmicos(P
<0,001)ylasmuestrasteratozooesprmicas(P<0,01)(Tabla1,Fig.2).Adems,nohubodiferenciaenla
incidenciadeTUNELespermapositivaentrelasdiversastcnicasquesugierequetodoslostressoncomparables
enrendimientoaunapoblacindeespermatozoidesconbajodaodelADN.
Higo.2
Capacidaddediversastcnicasdelavadoparaeliminarlosespermatozoides
espermatozoidescondaoenelDNA
Curiosamente,enmuestrasoligozoospermicyteratozooesprmicas,hubounaumentoestadsticamentesignificativo
enelporcentajedeespermaTUNELpositivoenlasfraccionesdegrnulosdespusdelapreparacinporgradiente
dedensidad(P<0,05)ylatcnicadecombinacin(P<0,01)encomparacinconlafraccinsinprocesar(.
Figs3y4).Elmismoefectotambinseobservenmuestrasnormozoosprmicos.Ladiferenciaerasinembargo,
estadsticamenteinsignificante(datosnomostrados).

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Higo.3
PorcentajedeespermatozoidesTUNELpositivasenelestadonatural,pelletsyfraccionesdel
sobrenadantedespusdegradientededensidad
Higo.4
PorcentajedeespermatozoidesTUNELpositivasenlosnoprocesados,
pelletysobrenadantefraccionesdespusdelacombinacindegradientede
densidadnadarhasta

discusin

Ir:

LacomparacindediferentestcnicasdepreparacindesemenenrelacinconeldaodeADNdeespermaha
sidoelfocodeunacantidadsustancialdeinvestigacin.Sinembargo,nohayconsensoenlaliteraturasobreeste
tema[20,21].Portanto,elpresenteestudiohasidodiseadoparacomprenderlamagnituddeldaoenelADN
enuneyaculadoycmolasdiferentestcnicasdeprocesamientodeespermatozoidespuedeneliminarlos
espermatozoidesconelADNdaado.Comolamayoradelasmuestrasencontradasenclnicasdeinfertilidadson
subptimasenlacalidad,ademsdemuestrasnormozoosprmicos,sehanincluidomuestrasoligozoospermicy
teratozooesprmicasmoderados.
Enlaprcticaclnicaactual,losresultadosdelamayoradelosestudiossobrelafertilidadyADNdeespermade
puntodedaoaunamayorutilidaddelaspruebasdeADNdeespermaenrelacinconlaconcepcinnaturalyla
inseminacinintrauterina(IIU)enlugardetcnicasdereproduccinasistida[23].Estopodraserdebidoaqueen
tcnicas,talescomoFIVoICSI,aunqueunaltoporcentajedeespermatozoidesenunamuestrapuedehaber
daadoelADN,comoconsecuenciadelprocesamientodeesperma,espermatozoidesconmnimacantidaddedao
enelADNansepuedeseleccionar[24].Enapoyodelargumentoanterior,recientementesehapuestode
manifiestoqueunndicedefragmentacindelADNdealto(DFI%)entrelosespermatozoidesenelsemenprimas
serelacionconpocasprobabilidadesdexitodespusdelainseminacinintrauterina(IIU)[25].Unestudiode
seguimientoposteriorrealizadoidentificmstardequeelefectoobservadosedebaaquelaspoblacionesde
espermatozoidespreparadosqueenrealidadfueronutilizadosparalainseminacintodostenanbaja(46%)y
normalDFI%[26].As,el"impactonegativo"dedaoenelADNdeespermaprocedentedeuneyaculadocon
30%DFIestasociadaconlapoblacindeespermaseleccionado,peroocultaalinvestigadorcomo'falso'valor
normalparaDFI.
Porelcontrario,eldaodelADNtambinsehainformadoquesurgenduranteelprocesamientodelos
espermatozoides.Estudiosanterioreshandemostradoquelaincubacindesemenatemperaturaambiente[27]oa
37C[28]despusdesuaislamientoporcentrifugacinengradientededensidadpuedeconduciraunaumento
enlosnivelesdefragmentacindelADNdelosespermatozoides.Unarelacinimportanteentreelprocesamiento
deespermaylafragmentacindelADNesque,encasodeunnmerocrticodelosespermatozoidesenlamuestra
desementenercromatinaintacta,elprocesamientodelosespermatozoidesenrealidadpuederesultarenel
enriquecimientodeestosespermatozoides,loqueaumentalasposibilidadesdelograrunembarazoviable.Porlo
tanto,paramejorarlacapacidaddediagnsticodedaosenelADNdelesperma,serecomiendaeltrabajo
metodolgicodedistinguirsilosniveleselevadosdeADNobservadoenuneyaculadosepuedentransmitiralas
generacionesfuturasdeverdad[24].
Lamayoradelosestudiossobremtodosdepreparacindeespermahanexploradoresultadoscomolastasasde
recuperacin,porcentajedeespermatozoidesmvilesyotrosparmetrosseminalesconvencionales.Losresultados
delarelativamentemenornmerodeestudiosqueinvestigaronelefectodelaelaboracindeespermatozoidesyla
integridaddelADNnosonconcluyentes,conpruebassuficientespararecomendarcualquiertcnicaespecfica.
Aunqueambastcnicasenlapiscinaydegradientededensidadsehanencontradoparasereficazenlaobtencin
deunapoblacindeespermatozoidesconbajoporcentajedeespermadeapoptosis[19],unacombinacinde
gradientededensidadydentrodelapiscinasehainformadoqueesfavorableparalaFIVcomoespermaprepar
porestemtodoseencontrquetenantasasmselevadasdelamotilidadylareduccindelafragmentacindel
ADNencomparacinconotrosmtodos[29].Percollcentrifugacinengradientededensidadparalasmuestras
teratozooesprmicasyaquellosconinfertilidadidiopticaTambinseharecomendado[17].
Porotraparte,aunquelacentrifugacinengradientededensidadfuecomparableanadaruptcnicaenla
recuperacindeespermatozoidesconmotilidadmejorada,seencontraronespermatozoidesrecuperadosdespusde
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lapiscinadeposeermayorintegridaddelADN[15,30].Unestudioposteriorqueseanalizlainfluenciadela
calidaddelsemeninicialsobrelaintegridaddelADNdelespermatraseltratamientodelespermatambinapoy
estaafirmacin,concluyendoquelosespermatozoidesprocesadosporlapiscinatenalaintegridaddelADN
superiores[16].Nosehaencontradoelprocesamientodesemenmediantecentrifugacinengradientede
densidadparamejorarlastasasdefragmentacincidodesoxirribonucleicoapoptticosdeesperma,loquellevaa
losautoresasugerirelusodeotrastcnicasdeprocesamientodesemenenpacientesconfragmentacindelADN
subyacente[31].
Ennuestroestudio,noseencontrarondiferenciasenlaincidenciadeespermatozoidesTUNELpositivoenlas
fraccionesdelsobrenadantedelasdiversastcnicas,entodoslostrestiposdemuestras,loquesugierequetodoslos
tressoncomparablesencederunapoblacindeespermatozoidesconbajadaoenelADN.Sehainformadode
que,aunquegradientediscontinuoeliminaespermamorfolgicamenteanormalesyeltratamientodentrodela
piscinadisminuyeDFIyHDSdelosespermatozoides,ambosmtodossoneficacesparaeldesarrollodelembrin[
18].Elprimerestudioquecomparalosefectosdelacentrifugacinengradientededensidadytcnicasnadar
arribasobrelaapoptosisdeespermatozoidesusandocitometradeflujotambinsugierenquetantolosmtodosde
preparacindeespermapermitenlaobtencindeunapoblacindeespermatozoidesconbajoporcentajede
espermadeapoptosis[19].Losresultadosdenuestroestudioapoyanlasconclusionesanteriores.
Curiosamente,enmuestrasoligozoospermicyteratozooesprmicas,encontramosunaincidenciasignificativamente
mayordeespermatozoidescondaodelADNenlasfraccionesdepelletsdelgradientededensidadyla
combinacindegradientededensidadydelatcnicadentrodelapiscinaencomparacinconelsemensin
procesar.Aunqueseobservelmismoefectoenmuestrasnormozoosprmicos,fueestadsticamenteinsignificante.
Eldaogenticoenelespermapuedeoriginarseapartirdeunacombinacindeambosfactoresintrnsecosy
extrnsecos.UnacantidadexcesivadeROSproducidosporleucocitosseminalesocomoconsecuenciadela
granulacincentrfugadecentrifugacinengradientenoseleccionadaesperma/densidadsehaconocidopara
ponerenpeligrolaintegridaddelADN.Sobrelabasedelapresenteobservacin,lahiptesisdequelospasosde
losdosmtodos,yaseadeincubacinocentrifugacininduceapoptosisatravsdeunmecanismodependientede
ROS.
Protocolosdecentrifugacinrepetidautilizadosenlapreparacindeespermasonconocidosparaintroducireldao
delADNiatrognicayporlotantolasestrategiasparaminimizareldaodelADNcolateralsehansugerido[32].
Hoyenda,hemosavanzadoprotocolosquepermitenlaseleccindeespermatozoidesenbaseasusultra
morfologaestructuralosuperficialescargosporelectroforesisynuevosconocimientossobrelabiologamolecular
delosespermatozoidesinclusohanimpulsadoeldesarrollodeestrategiasdeseleccinmolecular,talescomola
seleccindeespermatozoidesmediadaporcidohialurnico,laanexinaVseparacinmagnticadeclulas
activadas(MACS),ylafiltracindelanadevidriomolecularanexinaV.Laseleccindelosespermatozoides
basadaengradientededensidadcombinadayelmtodoZetasehansugeridoparamejorarelresultadodelaICSI[
33].Sinembargo,laintegridaddelADNcomprometidaobservadaenlasfraccionesdepelletsdelgradientede
densidadylatcnicadecombinacinenelpresenteestudionosinsisteenvolveraexaminarlastcnicasde
procesamientodeespermatozoidesexistentesyrecomendarlavalidacinderesultadossimilaresconestudiosde
unamuestradegrantamao,enlosaosvenir.
Comotodoslostresmtodosempleadosenelpresenteestudioarrojunapoblacindeespermatozoidesconun
menordaoenelADNencomparacinconlafraccinnoelaborados,sesugierequeestosmtodosson
comparables.Enelcontenidodelarte,delatransformacin,losespermatozoides,elriesgodelautilizacindeun
espermatozoidegenticamenteincompetentepareceserbajalaeleccindeunmtodoidealseragobernadaporla
finalidadparalaqueseindica.Paraconcluir,lapreparacindelosespermatozoidessehaencontradoparadarlugar
aunenriquecimientodeespermatozoidesconcromatinaintacta,loqueesprobablequemejorelasposibilidadesde
lograrunembarazoviable.

Reconocimiento

Ir:

LaayudafinancieraproporcionadaporKasturbaMedicalCollege,UniversidaddeManipalMs.VarshiniJ(N
Cuentasa/200809)Seagradece.

Notasalpie

Ir:

Cpsula
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LaimportanciacrucialdelaintegridaddelADNespermticoeneldesarrollo/embrinfertilizacinexigelacomprensindela
medidaenlaquelapreparacindelespermapuedeeliminarelADNdaadoesperma.Lapiscinaygradientededensidad,
tantosolacomoencombinacinsehanencontradoparasereficazenestesentido.

referencias

Ir:

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