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ESTRS OXIDATIVO A NIVEL NEURONAL

Integrantes:

Barrios Rondn Alejandra Ana C.


Quispe Machaca Yanira Alina
Rosas Quispe Beatriz Karely

1. ESTRS.OXIDATIVO:
El estrs oxidativo en los sistemas biolgicos es un desequilibrio
entre la produccin de especies reactivas de oxgeno (ROS) y de
nitrgeno (RNS) y los mecanismos encargados de eliminarlos o
reparar los daos que generan. Estas especies, en
concentraciones moderadas, tienen un papel importante como
reguladores en procesos de sealizacin e incluso protegen a
las clulas contra el estrs oxidativo contribuyendo a
reestablecer la homeostasis redox. Sin embargo, a altas
concentraciones los radicales libres resultan perjudiciales para
los organismos, produciendo oxidacin de lpidos y protenas,
activacin de factores de transcripcin y dao en el DNA que
puede desencadenar la muerte celular.
1.1
Tipos de radicales libres y sus derivados :
Como se ha mencionado anteriormente existen dos
principales tipos de especies reactivas, las especies
reactivas del oxgeno o ROS y las de nitrgeno o RNS. En
cada uno de estos dos grupos podemos encontrar especies
que son radicales libres o derivados de estos radicales. Los
radicales libres se definen como especies qumicas
caracterizadas por poseer uno o ms electrones
desapareados que se forman como intermediarios de
reacciones qumicas, a partir de la ruptura hemoltica de
una molcula y, en general, son extremadamente
inestables y presentan, por tanto, gran poder reactivo y
una vida media muy corta. Entre las ROS la ms abundante

es el superxido ( O2 ) que se convierte en perxido de

hidrogeno ( H 2 O2 ) o en el radical hidroxilo ( OH )


espontneamente o mediante enzimas. Entre las RNS la
especie mayoritaria es el xido ntrico (NO.) que da lugar a
otras RNS como el peroxinitrito (ONOO).
2. SISTEMA NERVIOSO Y LOS RADICALES LIBRES

El sistema nervioso es especialmente vulnerable a las especies


reactivas del oxgeno (ROS) por los siguientes motivos.
(1) El alto consumo de oxgeno del cerebro para las
necesidades de alta energa, es decir, el alto consumo de
O2, se traduce en exceso de ROS.
El cerebro, que representa slo el 2% del peso corporal, consume el
20% del total oxgeno inspirado. El cerebro procesa gran parte de
O2 por unidad de masa de tejido. Una de las principales razones para
la elevada captacin de O2 por el cerebro es la gran cantidad de
adenosina trifosfato (ATP) necesaria para su normal actividad (4 x
10 12 ATP molculas de cada minuto). La gran cantidad de ATP es
necesaria para mantener la homeostasis de los iones intracelulares
neuronales frente aberturas y cierres de canales inicos asociados
con la propagacin de la neurosecrecin. La fuerte dependencia del
cerebro a los fosfatos oxidativos hace que el cerebro sea vulnerable a
las interrupciones de suministro de O2.
(2) Las membranas neuronales son ricas en cidos grasos
poliinsaturados (PUFA), que son particularmente vulnerables
a los ataques de radicales libres.
Los lpidos de la membrana neuronal son ricos en cidos grasos
poliinsaturados (PUFA). Los PUFAs son particularmente vulnerables al
ataque de los radicales libres debido al doble enlace, dentro de la
membrana que permite la fcil eliminacin de iones de hidrgeno por
ROS tal como OH.
(3) El glutamato excito txico es el principal efector que
causa estrs oxidativo.
Aunque mltiples factores pueden precipitar el estrs oxidativo
intracelular, el neurotransmisor glutamato es el principal efector de
este proceso en el cerebro, principalmente a travs de la activacin
de sus receptores ionotrpicos. La activacin de cualquiera de los tres
receptores glutamatrgicos ionotrpicos (NMDA, kainato, o AMPA)
causan muerte celular por excitotoxicidad. El glutamato es una
potente neurotoxina y su toxicidad est mediada por ROS. En la
regin sinptica la recaptura de glutamato se acompaa de la
liberacin simultnea de ascorbato por el transportador de glutamato,
mientras que la carnosina se libera junto con el glutamato. El receptor

de glutamato NMDA posee un sitio de regulacin redox sensible a


grupos sulfhidrilo hacindolo un mecanismo de retroalimentacin
negativa. La activacin de los receptores NMDA lleva a la liberacin
de H2O2 y de NO. El NO juega un papel importante en este proceso
al regular la liberacin de glutamato.
(4) El alto trfico de Ca2+ a travs de las membranas
neuronales y la interferencia del aumento del transporte de
iones Ca2+ intracelular, a menudo conduce a ROS.
El alto trfico de Ca2+ a travs de membranas neuronales interfiere
con el transporte de iones (por ejemplo, por la interrupcin del
metabolismo energtico) y puede producir aumentos rpidos en la
liberacin intracelular del Ca2+, que a menudo conduce a
ROS. Aumento de Ca2+ intracelular libre activa al xido ntrico sintasa
(nNOS), fosfolipasa A2, y calpana.
(5) La oxidacin de los neurotransmisores puede generar O2 y
quinonas que reducen el glutatin.
Varios neurotransmisores pueden autoxidarse. La dopamina, su
precursor L DOPA, serotonina y norepinefrina pueden reaccionar con
O2 para generar no slo O 2 sino tambin quinonas/ semiquinonas
que pueden reducir el glutatin reducido (GSH) y unirse a grupos de
sulfhidrilo de protena (SH). La oxidacin puede ser catalizada por
iones de metal de transicin, pero cuando el O 2 se encuentra en
exceso, puede reaccionar con norepinefrina, dopamina y serotonina
para iniciar su oxidacin, que luego contina con la produccin de
ms ROS, quinonas, etc. La monoamino oxidasa (MAO) existe en dos
formas, MAO-A y -B.
MAO-A oxida preferentemente aminas
hidroxiladas tales como serotonina y noradrenalina y se encuentra
principalmente
en
las
neuronas
catecolaminrgicas. MAO-B
preferentemente oxida las aminas no hidroxiladas y se localiza en
neuronas serotoninrgicas. Ambas oxidasas estn presentes en las
clulas gliales y son capaces de oxidar la dopamina
En comparacin con otros rganos, la red neuronal puede ser
especialmente vulnerables a lesiones mediadas por ROS debido a los
siguientes factores anatmicos, fisiolgicos, y las propiedades
bioqumicas del cerebro.
3.-SISTEMA DE DEFENSA ANTIOXIDANTES:

Los seres vivos, que dependen del oxgeno para la obtencin de


energa metablica en forma de ATP, producen adems especies
moleculares oxidantes cuya reactividad y potencial citotxico debe
ser estrictamente controlada. Dicho control se lleva a cabo por
molculas conocidas como antioxidantes. Una porcin del oxgeno
que respiramos se reduce, por una va alternativa de la citocromo
oxidasa, dando lugar a formas moleculares parcialmente reducidas de
oxgeno (ROS, de Reactive Oxygen Species) responsables del
fenmeno conocido como Estrs Oxidativo (EO).
Los antioxidantes son mecanismos moleculares que las clulas han
desarrollado a lo largo de su evolucin para contrarrestar los efectos
deletreos del Estrs oxidativo, existe una gama muy variada de
antioxidantes que proporciona al organismo una cobertura defensiva
muy eficaz.
Los antioxidantes ejercen proteccin basndose en la transferencia de
electrones a las especies reactivas para de esta forma saturar su
afinidad.
Los antioxidantes son aquellas molculas capaces de prevenir y/o
evitar la oxidacin de otra molcula, bien por interaccin y
estabilizacin de especies reactivas, bien por la transformacin de
stas en configuraciones ms estables y de reactividad reducida. Su
funcin homeosttica es de gran importancia, ya que mantienen a las
especies reactivas por debajo de sus umbrales citotxicos.
Pueden actuar de la siguiente manera:
1. Disminuyendo la concentracin de oxidantes.
2. Evitando la iniciacin de la reaccin en cadena al barrer (cubrir
o detener una reactividad qumica muy alta), los primeros
radicales libres que se forman, funcionan de la siguiente
manera:
3. Unindose a iones metlicos para evitar la formacin de
especies reactivas.
4. Transformando los perxidos en productos menos reactivos.
5. Deteniendo la propagacin y el aumento de radicales libres.
En general todos los Radicales libres son electrfilos (que aceptan
electrones), causando la produccin de otro radical libre menos
reactivo y todava inestable que reacciona con otra molcula para
producir otro radical libre, continuando as una reaccin en cadena.
Los barredores de radicales libres reaccionan con stos, formando
Radicales libres que terminan esta reaccin en cadena. Los
barredores pueden definirse como aquellas sustancias que donan e- a
otras, reducindolas y hacindolas menos reactivas. Los sistemas
antioxidantes trabajan en forma coordinada en una serie de pasos

metablicos, por ejemplo en los sistemas enzimticos el

O2

al ser

metabolizado por la SOD se produce H 2 O2 , los perxidos a su vez


son metabolizados hasta e H 2 O

O2

por la catalasa o la glutatin

peroxidasa que acta en forma acoplada con la glutatin reductasa.


Estos sistemas antioxidantes disminuyen con la edad, en ciertos
procesos patolgicos y bajo condiciones ambientales como la
contaminacin atmosfrica.

FIG. () Reduccin monovalente del oxgeno molecular. El


oxgeno se reduce por la va alternativa de citocromo oxidasa
por un mecanismo secuencial, monovalente, por el que capta
electrones de forma progresiva y da lugar a las especies
reactivas superxido, perxido de hidrgeno y radical
hidroxilo.
3.1 Clasificacin:
a) Antioxidantes primarios:
Enzimas como la glutatin peroxidasa (GSH-Px), superxido
dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatin s-transferasa (GST),
que previenen la formacin de nuevos radicales libres
convirtiendo los existentes en molculas menos perjudiciales,
evitando de esta forma sus efectos adversos. De igual manera
esta clasificacin engloba a protenas que facilita el secuestro de
metales de transicin involucrados en la formacin de algunas
especies reactivas de oxgeno.
b) Antioxidantes secundarios:
Compuestos que participan en reacciones antioxidantes y que se
encuentra de forma endgena en los organismos o son
incorporados a travs de la dieta. Este es el caso de la vitamina
A, la albumina, el cido rico, la vitamina C, la vitamina E y
otros.
c) Antioxidantes terciarios:
Enzimas que participan en funcin de la reparacin de
biomolculas daadas por los radicales libres como las
endonucleasas, exonucleasas y metionina sulfxido reductasa.

La proteccin antioxidante, para ser eficaz, requiere la actuacin


sincronizada de tres enzimas, la superxido dismutasa (SOD), la
catalasa (Cat.) y la glutatin peroxidasa (Gpx). Se trata de reducir a las
especies reactivas superxido y perxido de hidrgeno a molculas
ms estables, evitando as, la formacin de la especie oxigenada ms
reactiva, el radical hidroxilo (OH).

FIG. () Actividad sincronizada de enzimas antioxidantes en la


metabolizacin de radicales superxido y perxido de hidrgeno e
inhibicin de la formacin de radicales hidroxilo. La actuacin de la
SOD junto a las actividades catalasa y Gpx de forma sincronizada
(lneas azules) es la forma ms eficaz de reducir las
concentraciones de superxido y perxido de hidrgeno. Este
mecanismo defensivo tiene como principal objetivo evitar la
interaccin entre ambos o bien del perxido de hidrgeno con
metales de transicin (lneas anaranjadas) impidiendo as la
formacin de radicales hidroxilo.

3.- Sistema Enzimtico de defensa Celular:


En el tejido nervioso las elevadas necesidades energticas que
impone el mantenimiento de los biopotenciales se suplen
esencialmente por la oxidacin total de la glucosa, consecuentemente
el cerebro es una estructura altamente oxigenada; esto, unido a las
altas concentraciones de hierro y de sustancias fcilmente oxidables
como las catecolaminas y los lpidos poliinsaturados aumentada la
susceptibilidad de este rgano al ataque de los radicales libres.

El control de la formacin de ROS, que podra conducir a la perdida


neuronal por activacin de la apoptosis, es un evento importante para
el adecuado funcionamiento del cerebro. Por esta razn a
continuacin se describen algunas de las caractersticas del sistema
antioxidante primario en el sistema nervioso.
a) Superxido dismutasa:
Bajo este nombre se incluye a una familia de metaloproteinas
ampliamente distribuida en la naturaleza. Estas enzimas, presentes
en todas las clulas que utilizan en su metabolismo al oxgeno,
catalizan la reaccin de dismutacion del radical superxido a perxido
de hidrogeno por lo que constituyen el primer medio enzimtico de
defensa antioxidante.
SO

H 2 O2 (+ 2 H

+O2
O2 existen dos formas de superxido dismutasa,
A nivel extracelular
ambas difieren entre s por los grupos prostticos metlicos que
forman parte de su estructura y se nombran superxido dismutasa Mn
dependiente (SOD Mn) y superxido dismutasa Cu/Zn dependiente
(SOD Mn/Zn) respectivamente.
En los espacios intersticiales y en los fluidos extracelulares del tejido
nervioso se encuentra una tercera forma denominada SOD
extracelular (EC-SOD), que es una glucoprotena tetramrica
caracterizada por contener como grupo prosttico a los iones
metlicos Cu y Zn, as como por presentar un nivel de expresin
menor que el de las superxido dismutasa restantes.
La EC-SOD no es inducida por sustrato u otros oxidantes, y su
regulacin en las clulas individuales de los tejidos de mamferos,
responde de un modo coordinado a la presencia de citosina. Se cree
que esta elimina las molculas del radical anin superxido producido
por la NAD (P) H oxidasa unida alas membrana formada por clulas
inflamatorias.
La superxido Cu/Zn dependiente se expresa marcadamente en el
espacio intermembranoso mitocondrial, y el citosol de las clulas
nerviosas como una protena soluble que existe en formas isomericas,
diferentes entre s, por el contenido de iones metlicos.
La forma Mn dependiente es una protena que se puede localizar a
nivel citoplasmtico, aunque se expresa fundamentalmente a nivel de
la matriz mitocondrial; un hecho esencial para la supervivencia de la

dela vida aerobia y el desarrollo de la resistencia celular a la toxicidad


inducida por las sustancias reactivas de oxgeno.
Esta enzima es un homotetrmero de 96kDa que contiene en cada
subunidad un tomo de Mn que cambia a su estado de oxidacin
desde Mn (III) a n (II), volviendo de nuevo a Mn(III) durante los dos

pasos que constituyen la reaccin de dismutacion de O 2


b) Glutatin peroxidasa (GSH-Px)
Existen dos tipos de glutatin peroxidasa, una selenio dependiente
(Se- GSH-Px) y otra que no contiene selenio (GSH-Px); ambas
caracterizadas por la necesidad de utilizar glutatin reducido (glutamil cisteinil glicina) como agente reductor durante la
transformacin de H 2 O2 hasta H 2 O.
GSH Px
H 2 O2

2 H2 O +

+
GSH-

ROOH +
2GSH

ROH +

H2 O

La Se-GSH-Px es una protena tetramrica, en la cual cuatro tomos


de selenio (cada uno por separado) son empleados como sustituyente
del azufre contenido en la cistena que forma parte del centro activo.
Esta enzima est formada por subunidades idnticas que contienen
un residuo de solestoneina; esencial para el avance de la actividad
cataltica a desarrollar
La actividad enzimtica de la GPx selenio dependiente (GPx SE), que
posibilita la reduccin de perxido de hidrogeno y de perxidos
orgnicos ( H 2 O2 y ROOH), se ve muy afectada por el contenido en
selenio de la dieta; un hecho no observado en el caso de a glutatin
peroxidasa no dependiente de selenio que en cambio solo presenta
actividad frente a perxidos orgnicos.
En los mamferos se han encontrado al menos cuatro formas de GPx
Se que es expresada de forma ubicua por diferentes genes, aunque el
nivel de cada isoforma vara dependiendo del tipo de tejido; una de
estas formas isomericas, la GPx1, se expresa a nivel mitocondrial y
citosolica. Por su parte, la GPx4 se localiza tanto En la fraccin
citosolica como en las membranas, donde reduce de forma directa y

conjuntamente con la GPx1, a los hidroperxidos de los fosfolpidos,


perxidos de cidos grasos e hidroperxidos de colesterol que se
producen en las membranas peroxidadas y en las lipoprotenas
oxidadas.
La GPX1 se encuentra predominantemente en eritrocito, rin e
hgado, ya la GPX4 se expresa mayoritariamente en clulas del
epitelio renal en los testculos. La Gox2 citosolica (PX-G1) y la GPX3
extracelular (GPX-P) se detectan escasamente en la mayora de los
tejidos excepto en el tracto intestinal y el rin respectivamente.
La mayor parte de la actividad glutatin peroxidasa se desarrolla el
citosol, aunque tambin se presenta en la matriz mitocondrial, por lo
H 2 O2
que juega un papel protagnico la hora d eliminar el
generado por la SOD y la monoaminoxidasa (MAO), una enzima
relacionada con el metabolismo de los neurotransmisores
monoaminico.
c) CATALASA (CAT)
La catalasa en una protena tetramrica formada por cuatros
subunidades idnticas dispuestas tetradricamente y que contiene
cuatro grupos de ferro-protoporfirina por molcula. Esta enzima con
actividad peroxidasa se encarga de catalizar la conversin de
perxido de hidrogeno a H 2 O y O2 mediante una reaccin en la
que se utilizan como agentes reductores a molculas capaces de
ceder tomos de hidrogeno, como el metanol, etanol, cido frmico,
fenoles, etc.
La actividad cataltica de la catalasa se desarrolla solo cuando en el
medio existen concentraciones elevadas de H 2 O2
de forma tan
ficiente

que

la

concentracin de

enzima
H 2 O2 .

2 H 2 O2

puede

ser

saturada

por

ninguna

Catalas

2 H2 O

La catalasa e hall principalmente en los peroxisomas, aunque se ha


descrito cierta actividad para esta enzima en las mitocondrias y en el
citosol. En el tejido nervioso la actividad e la catalasa es pobre; un
hecho que conjuntamente con los bajos niveles de GSH-Px hacen al
cerebro un rgano vulnerable a la accin del perxido de hidrogeno y
a otras especies reactivas.

d) Glutatin s-transferasa (GST)


La GST citosolica son un grupo de protenas dimricas codificadas por
genes independientes que se clasifican como Alpha, Kappa, Mu,
Omega, Pi, Sigma, Theta, y Zeta, atendiendo a la secuencia de
aminocidos, sustrato especifico y propiedades.
Sus subunidades contienen sitios para el glutatin reducido (GSH), as
como uno para sustratos hidrofbicos. Estos determinan la
selectividad ante los sustratos por degradar.
Estas enzimas conjugan al GH con productos de la peroxidacion
(epxidos, ortoquinonas y aldehdos como el 4-hidroxinonenal) para
convertirlos en sustancias menos toxicas, solubles en agua y por
tanto ms fcilmente excretables.

4.APOPTOSIS
EN
LAS
NEURODEGENERACIONES:
RELACIN CON EL ESTRS OXIDATIVO

SU

Actualmente se conoce que aumento en los niveles de ROS producen


que la neurona pre-sinptica libere el neurotransmisor excitatorio
glutamato que es captado por el receptor NMDA en la neurona postsinptica, la entrada de glutamato (Glut) junto con la presencia de
especies reactivas llevan a un aumento de los niveles intracelulares
de Ca+2. El incremento excesivo del Ca+2 intracelular es un aspecto
que influye de forma determinante en la activacin de una serie de
enzimas dependientes de calcio, dentro de las que destacan las
endonucleasas (catalizan fragmentacin del
DNA), fosfolipasa
(mecanismo del cido araquidnico) y proteasas, as como a la xido
ntrico sintetasa (NOS). La fosfolipasa A2 y la xido ntrico sintetasa,
participan respectivamente en la formacin del radical superxido
(O2-) y xido ntrico (NO), que al reaccionar forman el peroxinitrito
(ONOO-), que causa dao y muerte cerebral. La produccin excesiva
de NO facilita que este radical acompleje el Fe unido al azufre
presente en los centros activos de algunas enzimas, provocando de
esta forma la inhibicin de la CTE y de la respiracin celular.
El aumento de los niveles de calcio y xido ntrico en la mitocondria
hace que disminuya la produccin de ATP y se forme el poro de
transicin mitocondrial (MTP), el dficit de ATP no permite el
funcionamiento de las bombas dependientes de ATP que se
encuentran en la membrana citoplasma, este hecho provoca una
entrada masiva de agua (H2O) y sodio (Na+) y salida de potasio (K+),

estos cambios en la permeabilidad de las membranas facilitan la


liberacin de los componentes mitocondriales, como es el caso del
factor inductor de apoptosis (AIF) y del citocromo C, que se une al
ATP, as como a las protenas caspasa-9 y Apaf-1 para formar un
complejo conocido como apoptosoma, el cual permite la activacin de
la caspasa-9, que una vez activada realiza la misma accin sobre la
caspasa-3; comienza as la etapa degradativa donde los radicales
libres del oxgeno contribuirn de forma muy importante oxidando
todo el contenido de sta; provocando la muerte por apoptosis.

Los astrocitos siendo las princpiales y ms numerosas clulas gliales


normalmente captan glutamato y lo regresan a la neurona en forma
de glutamina (su precursor), pero cuando hay estrs oxidativo los
astrocitos liberan glutamato y xido ntrico, incrementando y
extendiendo el dao a las neuronas vecinas.
En conclusin, la alta produccin de radicales que tiene lugar en la
cadena de transporte electrnica de las clulas del sistema nervioso
debido a su elevada demanda energtica, aunada a la pobre actividad
antioxidante enzimtica y a las elevadas concentraciones de
compuestos fcilmente oxidables, convierten al estrs oxidativo en un
fenmeno que contribuye con los mecanismos que conducen a la
muerte celular y, por tanto, a la prdida neuronal observada en
diferentes enfermedades neurodegenerativas.

5. COMO DETECTAR RADICALES LIBRES


Cuando una carga elctrica se mueve genera un campo magntico.
Desde este punto de vista, cuando un electrn gira, tambin se
produce un momento magntico. Sin embargo, segn la direccin del
movimiento en relacin con un eje axial, el polo magntico creado
podr dirigirse hacia arriba o hacia abajo en relacin con su rbita;
esta propiedad de los electrones que se conoce como el spin.
Los compuestos estables, sobre todo los que poseen un peso atmico
bajo, suelen tener un nmero par de electrones organizados en
parejas en cada rbita. Esto lleva a que el campo magntico que
produce cada electrn en una rbita sea cancelado por el otro, porque
cada uno tendr una polaridad opuesta que produce neutralidad y,
con sta, estabilidad. En los radicales libres, esta neutralidad no se
logra debido a que tienen uno o ms de sus electrones no apareados,
ya sea un nmero impar de electrones en una rbita o un par de
electrones con un mismo spin en una rbita separada, lo que hace
que sean compuestos muy reactivos.

En el cuerpo humano, los radicales libres ms comunes son el


superxido y el perxido de hidrgeno que, en su mayora, suelen ser
derivados del oxgeno, debido a que se generan normalmente durante
la respiracin celular, aunque pueden provenir de cidos grasos
poliinsaturados, de compuestos de sulfihidrilo y de otros compuestos
capaces de transferir electrones.
Sin embargo, en condiciones normales estas molculas no presentan
problemas ya que el cuerpo contiene agentes antioxidantes que son
capaces de contrarrestar estos compuestos, como son, en el cerebro,
la superxido dismutasa, la catalasa y la peroxidasa de glutatin, as
como otros llamados reductores de bajo peso molecular, como el
glutatin, el ascorbato, que es la vitamina C reducida, y el
alfatocoferol, que es la vitamina E reducida

Adems de lo planteado anteriormente, el oxgeno molecular es un


aceptor dbil de electrones y la mayora de las molculas orgnicas
son dbiles donantes. Esto explica por qu este elemento no oxida el
ADN ni los cidos nucleicos en condiciones normales. El problema se
presenta cuando existe un exceso en la produccin de molculas de
la reduccin del oxgeno, las cuales entran en contacto con metales
de transicin y radicales orgnicos, lo que eventualmente lleva a la
formacin del radical hidroxilo (HO.) por medio de la reaccin de
Haber-Weiss/Fenton, molcula muy reactiva que puede llevar a dao
del ADN y la consecuente apoptosis o necrosis.
Debido a que el trauma en el sistema nervioso incluye diversos
mecanismos de lesin, es necesario comprender un poco acerca de
ellos y cmo se relacionan entre s para producir el dao secundario.
Entre estos encontramos al evento cerebrovascular, el cual es una
prdida de la funcin que resulta de la interferencia del flujo
sanguneo al sistema nervioso central. La isquemia focal produce un
ncleo de hipoperfusin grave cuando el flujo est por debajo de 15 a
18 ml/100 g por minuto; ste est rodeado de un tejido viable
(penumbra) y la muerte celular sucede en pocas horas en la isquemia
grave y en das en isquemias transitorias. (Gil , Gomez, & Gomez,
2008)
Para su deteccin los trabajos espectroscpicos necesitan
concentraciones suficientemente elevadas de las sustancias a
estudiar para permitir su deteccin. Debido a la alta reactividad de
las especies intermedias, resulta difcil su preparacin en el
laboratorio en las concentraciones adecuadas para tales fines (el
rango tpico de vida media de estas especies est comprendido
aproximadamente entre 10-3 y 10-6 segundos. Hay que buscar, para
cada especie, el mtodo ms eficiente de produccin. Generalmente,
los radicales se generan en clulas de flujo continuo, donde las
sustancias precursoras se renuevan constantemente y los productos
de la reaccin se eliminan a la velocidad conveniente. Por otra parte,
con clulas de longitud suficiente y el diseo multipaso adecuado, se
puede disponer de largos caminos pticos, de gran utilidad en
espectroscopia de absorcin, mtodos de fragmentacin ms
utilizados actualmente son la fotlisis y la descarga elctrica, aunque
tambin se han hecho estudios por pirolisis en llamas (generalmente
para estudiar transiciones electrnicas en la zona dcl visible y
ultravioleta). (LLuch, 1995)
Avances Recientes: En la ltima dcada, una serie de nuevas sondas
fluorescentes, electrn-spin Resonancia, e inmunoensayos. Estos
nuevos mtodos de vanguardia dan mejor selectividad y resolucin

subcelular para la deteccin de ROS. Cuestiones crticas: Aunque


nuevos mtodos para la Deteccin de superxido HPLC, aplicacin de
sondas fluorescentes que contienen boronato, uso de hidroxilamina
dirigida a clulas las sondas de espn y la captura de inmunospin han
estado disponibles durante varios aos, ha habido falta de la
traduccin de stos en la investigacin biomdica, limitando su uso
generalizado. (Harrison, 2012)
Se necesitan estudios para traducir estas nuevas tecnologas desde el
tubo de ensayo a aplicaciones fisiolgicas y llevan a una aplicacin
ms amplia de estos enfoques para estudiar ROS mitocondrial y
celular.
Nuevos mtodos para detectar la deteccin de O2- celular y
mitocondrial de ROS usando DHE y sonda orientada en la
mitocondria mitoSOX:
En el ao 2003, Kalyanaraman y sus colegas informaron de la
formacin de un producto especfico de superxido de la reaccin de
DHE con O2Despus de este informe original, se modific para permitir la
deteccin de O2- con DHE en las mitocondrias por adicin de un
grupo de triphenylphosphonium, que favorece su acumulacin en las
mitocondrias.
Este modificado DHE anlogo se denomina mitoSOX y tiene que ser
utilizado para la deteccin de O2- dentro de la mitocondria. MitoSOX
anlogo a DHE, reacciona con el O2- en forma 2-hidroxi-mito-etidio (2OH-Mito-E) (Fig. 3B), que puede ser detectado y cuantificado
utilizando HPLC. (Harrison, 2012)
Una advertencia para el uso de mitoSOX es que altas concentraciones
pueden
sobrecargar las mitocondrias y afectar la funcin
mitocondrial. Adems, las concentraciones de mitoSOX superior a 2
lM puede llevar a la sustancial acumulacin citoplasmtica de
mitoSOX y as puede comprometer la especificidad de deteccin
mitocondrial de O2-. Por lo tanto se sugiere que se use mitoSOX
concentraciones 2 lM o menos para evitar estas complicaciones.
Limitaciones de DHE y mitoSOX
Incluyen la inestabilidad de las sondas y sus productos, qumica
compleja y posibles interferencias con enzimas heme. Estas sondas
son sensibles y son propensos a la auto oxidacin. Necesitan dos
reacciones para detectar O2 incluyendo a radicales libres que
pueden ser potencialmente objetos de reaccin con los antioxidantes.

Histricamente, los estudios de ROS y radicales libres estaban


estrictamente confinados a los campos de la qumica y la fsica. Sin
embargo, cada vez ms claro que estas molculas fugaces juegan
papeles crticos tanto en fisiologa normal como en fisiopatologa.
Este reconocimiento ha hecho imprescindible la disponibilidad de
herramientas que permiten su deteccin y medicin en sistemas
biolgicos complejos muestras, incluyendo clulas, tejidos y,
finalmente, intactos animales. Muchos mtodos iniciales tales como la
reduccin del citocromo c y la captura de spin fueron adecuados para
la produccin del alto nivel de ROS (por ejemplo, neutrfilos
activados) ; Sin embargo, los estudios de los bajos niveles de ROS
intracelular requieren nuevos mtodos . En la ltima dcada, nuevos
mtodos para la deteccin de ROS se han desarrollado y validado,
que estn ayudando a cumplir este objetivo. Estos nuevos mtodos
incluyen el uso de boronatos, sondas de inmunoespin, y mitocondrialsondas especficas que pueden adaptarse a otros enfoques, tales
como imgenes confocales, imgenes de clulas vivas, anlisis,
citometra de flujo y mtodos de HPLC comnmente empleados en
laboratorios de investigacin. Por lo tanto, con un optimismo
sustancial con la esperanza de que estos enfoques seguirn siendo
validados y ms ampliamente utilizado. (Harrison, 2012)

BIBLIOGRAFIA:
Dorado M. Claudia, Rugerio V. Concepcin, Rivas A. Selva (2003).
Estrs oxidativo y neurodegeneracin.

Almaguer G. Dennis, Almaguer M. (2006). Estrs oxidativo y muerte


neuronal. Una visin molecular.
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