CONGELACION DE OVOCITOS

a. Material biolgico
Se recolectaran ovarios de vacas sacrificados. Los ovarios recolectados sern
transportados al laboratorio en solucin salina al 0.9%, conteniendo antibitico
(Gentamicina100ug/l ;) a temperatura 38 .5C.
b. Aspiracin de ovocitos

La aspiracin se realizara con una jeringa de 10 ml con una aguja hipodrmica

calibre 18 y el lquido folicular se depositara en tubos falcon a bao maria 37
C(Kathryn y John, 1999).

Se dejara sedimentar por 5 minutos y se deposit el sedimento en una placa

petri con medio de manipulacion (PBS) para realizer la busqueda de los
ovocitos en estereoscopio a 1.5 x

c.

Seleccin y clasificacin de ovocitos

Luego se efectuara la bsqueda y clasificacin de los ovocitos aquellos de ptima

calidad A y B seran lavados en gotas de medio de manipulacin (PBS+SF 2%)
dos veces para luego ser congelados.

d. Congelacion de ovocitos
Se realizara de acuerdo al siguiente protocolo.

Se expondr

durante 10 a 30 minutos
Luego los ovocitos sern envasados en pajuelas de 0.25 ml.
Seguidamente se colocaran en el equipo de congelacin

CONTROL CL 5500
El seeding se inducir a los dos minutos.
Luego se congelaran a una tasa de 0.5 C/min hasta los -32 C.
Finalmente, se sumergiran en nitrgeno lquido.

los ovocitos

a una solucin de etilenglicol +Sucrosa

FREEZE

e. Descongelacin de ovocitos
La descongelacin se realizara exponiendo las pajuelas a la intemperie por
5 segundos para luego sumergirlas en bao maria a 30 o 35 C durante

20-30 segundos.
Luego se colocaran en un plato petri que contenga gotas de medio de

manipulacin (lavado dos veces)

Se colocaran en placas de 5 posillos para su tincin con azul de tripan al

0.05% por dos minutos.

Finalmente se realizara un lavado en gotas de medio de manipulacin y
evaluara la viabilidad y morfolgia al microscopio 40 x.