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PRACTICA N6

MEDIOS DE CULTIVOS
I.

INTRODUCCION.
En la naturaleza los microorganismos existen en poblaciones mixtas de diferentes
tipos. Sin embargo, para el logro de los conocimientos en Microbiologa es
necesario el estudio de especies aisladas, es decir, creciendo en ambientes libre de
la presencia de otras formas de vida. Los microorganismos, al igual que otros
seres vivos requieren nutrientes adecuados y condiciones favorables para su
crecimiento, aun as, las exigencias en nutrientes pueden ser muy variadas entre
los diferentes microorganismos.
Un medio de cultivo es un material nutritivo elaborado para el crecimiento de
microorganismo en el laboratorio.
Un medio de cultivo es el alimento para las bacterias, nutrientes y ecologa
artificial para la vida de los microorganismos.
Antes de iniciar el cultivo de un microorganismo, debe tenerse bien identificado el
objetivo de trabajo, para que los materiales, el medio adecuado y la tcnica de

II.

III.

IV.

cultivo puedan ser establecidas.


OBJETIVO.
Preparar y esterilizar medios de cultivo de diferentes caractersticas
para el cultivo de microorganismos.
MATERIALES

PROCEDIMIENTO
IV.1.
Preparacin de medios de cultivo.

De acuerdo al tipo de microorganismo que se quiera cultivar los medios


pueden clasificarse como.
Comunes: Permiten el crecimiento indiscriminado de todo tipo de
microorganismos.
Ejemplo: Agar nutritivo, Caldo nutritivo, Agar gelatina, etc.
Especiales: Pueden considerarse medios enriquecidos o mejorados selectivos
y diferenciales.
Medios mejorados o enriquecidos: Son aquellos a los que se les agrega
determinadas sustancias nutritivas (sangre, yema de huevo, suero, etc.) y con eso
estimulan las exigencias nutritivas de ciertos microorganismos. Ejemplo: Agar
sangre.
Medios Selectivos: Se caracterizan porque se incluyen sustancias que favorecen el
crecimiento de determinadas especies y sustancias que inhiben el crecimiento de
otras no deseadas. Ejemplo: Agar salmonella Shigella.
Medios diferenciales o bioqumicos: Estos medios permiten diferenciar distintos
tipos de bacterias. Ejemplo: Citrato, TSI, LIA, Urea, SIM.
a) Agar gelatina (peptona, 0.1%extracto de levadura, 0.3% gelatina, 0,4;
agar, 1.5%).
b) Caldo nutritivo (extracto de carne, 0.3% y peptona, 0.5%).
4.2 Reparto de un medio cultivo en placas Petri.
4.3 Mtodos de siembra en placas Petri.
a) Siembra por difusin
Este tipo de siembra sirve para el contaje de colonias, que desarrollaran en
diversos lugares del medio de cultivo, el medio que se usa es el agar
nutritivo.
Muller Hinton o similar.
Procedimiento
1. Abrir el empaquetado de las placas Petri estriles, colocar sobre la
mesa cerca al mechero encendido.
2. Colocar 1ml de la muestra liquida a sembrar.
3. Dejar la pipeta en la bandeja con antisptico.
4. Con la mano derecha verter el medio de cultivo dentro de la placa
Petri unos 15 ml o hasta cubrir el interior del piso de la placa con
una capa de 3mm.

5. Flamear la boca del Erlenmeyer, tapar, amarrar y guardar.


6. Rotar las placas en crculos sobre la mesa para mezclar bien el medio
de cultivo con la muestra.
7. Dejar enfriar, secar, voltear las placas, rotular y dejar en la estufa a
37C por 24 horas.
b) Siembra por diseminacin.
El objetivo de estas siembras es que le desarrollo de las colonias sea
formado una monocapa superficial.
Procedimiento
1. Tener las placas Petri con el medio de cultivo repartido y controlado.
2. Con una pipeta colocar 0.5ml de cultivo de bacterias, dentro de la
placa Petri, sobre el medio de cultivo.
3. Dejar en buen lugar la pipeta para descartar.
4. Con una esptula de Drigalski o rastrillo de bugueta de vidrio limpio
y estril extender la muestra por toda la superficie del medio
5. Retirar la esptula y dejar en la bandeja con antisptico.
6. Colocar sobre esta siembra los elementos en estudio, discos cada 2cm
de distancia, usndose una pinza y dejar bien pegado al medio; si se
trata de estudiar bacterifagos, colocar en un punto una pequea
gota del fago.
7. Cerrar la placa, rotular al reverso y dejar en la estufa a 37C por 24
horas.
c) Siembra por agotamiento en estra.
El objetivo en este tipo de siembras es aislar colonias de bacterias y
observar el desarrollo bacteriano.

4.4 Busque el significado de los siguientes trminos:

Medios de cultivo:

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos


es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es

el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.


Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son:
Temperatura.

Grado de humedad.
Presin de oxgeno adecuado.
Grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares


en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la

que se aadirn otros ingredientes.


El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de
medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo

y se solidifica al enfriarse a 40 grados.


La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que
bastantes bacterias provocan su licuacin.

COLONIA:

Una colonia es una agrupacin de bacterias formada a partir de la reproduccin


de una Unidad Formadora de Colonia (UFC) sobre un medio slido; aunque

vara de tamao generalmente es visible a simple vista.


Una UFC puede ser un solo microorganismo o bien un grupo de
microorganismos de una misma especie como en el caso de bacterias que tienen

tendencia a permanecer unidas como los estafilococos o los estreptococos.


Las colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos
color caractersticos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se
encuentren, es constante bajo condiciones controladas y depende de la especie
bacteriana que la forme.

SIEMBRA:

En Microbiologa se entiende como siembra el proceso mediante el cual se


deposita una pequea cantidad de microorganismos (inculo) en un medio de

cultivo estril.
El inculo puede

proceder de una muestra o de un cultivo previo. (Al

crecimiento de microorganismos obtenido, se le denomina cultivo).