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SOLUBILIDAD DE LAS PROTEINAS: EFECTO DE LA FUERZA

IONICA
La solubilidad de una protena est influenciada por los siguientes
factores: (a) su composicin en aminocidos (una protena rica en
aminocidos polares es en general ms soluble que una rica en
aminocidos hidrofbicos); (b) su estructura tridimensional (las protenas
fibrosas son en general menos solubles que las globulares); (c) el entorno
de la propia protena.
En este ltimo sentido, podemos decir que los principales factores
ambientales que influyen en la solubilidad de una protena son los
siguientes: (1) la temperatura; (2) la constante dielctrica del medio;
(3) el pH del mismo; y (4) la fuerza inica. Esta prctica se va a referir
esencialmente a esta ltima.
No se conocen a fondo las razones de la dependencia de la
solubilidad de las protenas con respecto a la fuerza inica del medio; pero
lo cierto es que, en general, las protenas requieren algo de sal para entrar
en solucin (fenmeno de salting-in) y son precipitadas por
concentraciones relativamente elevadas de sales (fenmeno de saltingout). Ahora bien, la respuesta de las diferentes protenas no es uniforme;
concentraciones salinas que hacen precipitar a unas dejan en solucin a
otras.
Esto es el fundamento de muchos procedimientos de separacin de
unas protenas de otras; en general, los pasos previos de una purificacin
de protenas se hacen mediante precipitacin diferencial con sales. En la
prctica presente, a partir de una misma mezcla de protenas vamos a ir
tratando con diferentes concentraciones de sal. Por efecto de la respuesta
diferencial de las distintas protenas unas precipitarn y otras no; y lo
pondremos en evidencia centrifugando el precipitado y determinando la
concentracin de protenas en el sobrenadante por el mtodo de Lowry.
En resumen:
1. Una cantidad fija de protenas en cada tubo.
2. Se aaden a los tubos concentraciones crecientes de sulfato amnico
a saturacin.
3. Se centrifuga para separar el precipitado.
4. Se determina la concentracin de protenas en el sobrenadante.

Este tipo de mtodos se emplea, como ya hemos dicho, para la


purificacin preliminar de muchas protenas, as como en la industria para
preparar concentrados de distintas protenas de inters (como las protenas
plasmticas, por ejemplo).

PROTOCOLO EXPERIMENTAL
1-Se entregar a cada alumno una serie de tubos con una cantidad fija de
protena en cada uno. Se procede segn el siguiente protocolo:
Tubo

10

Agua (ml)

1.9

1.8

1.6

1.4

1.2

1.0

0.8

0.4

0.4

SO4(NH4)2
Sat. (ml)

0.1

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

1.2

1.4

1.6

2-Agitar y centrifugar durante 10 minutos con la centrifuga al mximo.


3-Determinar protenas por el mtodo de Lowry en los sobrenadantes.
Terminada la centrifugacin, transferir 0.5 ml del sobrenadante de cada
tubo a 10 tubos nuevos, limpios y previamente rotulados.
Tubo

10

Sob. (ml)

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Representar grficamente la concentracin de protenas en los


sobrenadantes frente a la saturacin relativa de sulfato amnico. Comentar
los resultados.

Fraccionamiento con sulfato amnico slido

EJEMPLO

Solubilidad de carboxihemoglobina en su punto isoelctrico


dependiendo de la fuerza inica y del tipo de in. S y S representan,
las solubilidades de la protena en la disolucin de sal y en agua pura
respectivamente. La fuerza inica I se define como: I = ci Zi2 en
donde, ci es la concentracin molar de las especies inicas y Zi es su
carga inica.

Fraccionamiento con disolucin saturada de sulfato amnico


Concentracin inicial de la preparacin (tanto por ciento de saturacin)

La tabla nos da los mililitros de disolucin saturada de sulfato amnico


que se deben aadir a un litro de disolucin para producir el cambio
deseado en el porcentaje de saturacin. Los cambios en el volumen al
hacer las mezclas son despreciables. El pH de una disolucin saturada
de sulfato amnico es alrededor de 5.5; ste se puede ajustar a 7 por
adicin de unas cuantas gotas de NH4OH concentrado.

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