26.11.

2016

HIV1ARN(cantitativ)|Synevo

Synevohttps://www.synevo.ro

HIV1ARN(cantitativ)
PostedBySynevoOnaugust19,2009@4:34pmInTestedebiologiemoleculara,Teste
molecularepentrudiagnosticulinfectiilor|NoComments

Informatiigenerale
Virusulimunodeficienteiumane(HIV),agentuletiologicalsindromuluiimunodeficienteiumane
dobandite(SIDA),facepartedinfamiliaRetroviridae,subfamiliaLentivirinae.
ExistadouatipurideHIV,fiecarecumaimultesubtipuri,diferentiatepezonegeografice:
HIV1
maivirulent
responsabildeepidemiaglobalaactuala
severitateainfectieivariazadelaopersoanalaalta
includegrupulMcu10subtipuri,delaAlaJ,grupulO(secundar,outlier)sigrupulN
(nonM,nonO).
HIV2
descoperitinitialinvestulAfricii,esteprezentlaoraactualasiinuneletaridinEuropasi
sudestul
Asiei
tipviralmaiatenuat
genomulsauestemaiinruditcugenomulSIV(virusulimunodeficienteisimiene)decatin
cazulHIV1
estedivizatin5grupuri,delaAlaE.
HIVesteunvirusARNmonocatenarcupolaritatepozitiva,cuoanvelopapecaresuntprezente
numeroasecopiialeglicoproteineidesuprafatagp120careseleagadereceptorulCD4situatpe
limfociteleThelper,macrofage,celulefolicularedendritice.Genomulcontinedouafilamentede
ARNviralmonocatenarpecaresuntdispuseurmatoarele3categoriidegene:
genestructurale
gag(genomeassociatedgene)carecodificaproteineleceformeazamiezulsau
nucleulvirusului:p17(proteinamatricei)
p24(proteinacapsidala)
https://www.synevo.ro/hiv1arncantitativ/print/

1/6

26.11.2016

HIV1ARN(cantitativ)|Synevo

p7(proteinanucleocapsidei)
pol(polymerase)carecodifica:p11(proteaza)
p66(reverstranscriptaza)
p32(integraza)
env(envelope)carecodificaproteineleceformeazaanvelopavirionului:
gp160glicoproteinaprecursorcareprinscindaredanasterela:
gp120(desuprafata)
gp41(transmembranara)
genereglatoare:rev,nef,tat.
genedematurarecaresuntesentialepentrupatogenicitateinvivo:vif,vpu,vpr/vpx15.
PatrundereaHIVinorganismsefacelanivelul:
mucoaselorurogenitale,rectalesauorale,princontactheterosauhomosexual
perinatal,delamamalafat
parenteral,prinsolutiidecontinuitatealetegumentelorsimucoaselor,injectii,tatuaje,
transfuziisitransplantdeorganedeladonatoriinfectati15.
Modelulcomunesteinfectiaprinmucoase,tinteleinitialefiindceluleleLangerhansdinlamina
propriasubiacentaacestora.Suntinfectatemaialesmacrofageleincursdediferentierecu
susceptibilitatecrescutalareplicaresilimfociteleTactivate.InfectialimfocitelorTCD4+
favorizeazaprogresiaspreganglioniiteritorialisitesuturilemaiprofunde.
OetapacaracteristicapentruciclulreplicativalretrovirusuriloresteconversiaARNuluiviralin
ADNproviralbicatenarprinreverstranscrierecatalizatadereverstranscriptazaADNulproviral
estetranslocatinnucleulceluleigazda,transformatinADNcircularsiinseratingenomulacesteia
cuajutorulintegrazei.Dupacearelocintegrarea,replicareasisintezadenoiparticulevirale
suntdependentedeprezentaunorfactoricelularisiviralinecesariactivariipromotorilorvirali.
Factoriiexternicumarficoinfectiacualtiagentipatogeni,productiadecitokineinflamatoriisi
activareacelularapotenteazareplicareavirala.Mecanismelemolecularecareregleazaproductia
viralaincludcaicelulareincaresuntimplicatifactori,cumarfifamiliafactoruluinuclearB
(NFB)(factoridetranscriptie),caregenereazaocascadadeevenimentececonducinfinalla
expresiagenomuluiviral.
Diseminareavirusuluidelasitusuldeintraresefacepecalesanguina,fiesubformadevirioni
liberi,fieasociatculimfociteleCD4+saumonocitele5.
AproximativjumatatedintrepacientiiinfectatiacutcuHIVprezintaunsindrompasager
asemanatormononucleozeiinfectioaseinfazaacutaniveluriledeHIVARNsuntcrescuteintimp
https://www.synevo.ro/hiv1arncantitativ/print/

2/6

26.11.2016

HIV1ARN(cantitativ)|Synevo

ceanticorpiispecificipotfiincanedetectabili.Dinacestmotiv,detectareaprinreactiade
polimerizareinlant(PCR)aacizilornucleiciHIV1sadoveditafimaisensibiladecattestele
ELISAdegeneratiaa3ainperioadadefereastraimunologica(inprimele34saptamanidela
contactulinfectant).Folosireatestelordegeneratiaa4acarecombinadetectiaanticorpilorHIV
cuceaaantigenuluip24conducelaosensibilitateclinicamaimareinfazaprecocede
seroconversietotusidetectareaHIV1ARNesteposibilacu6zilemaidevremeincomparatiecu
ceaaantigenuluip24.Intariledezvoltatebanciledesangeutilizeazaderutinatehnici
molecularepentrudepistareadonatorilorcuinfectieHIVinstadiuinitial78.
Fazaacutaesteurmatadeoperioadadeinfectieasimptomaticainmedie,intervaluldetimp
necesarpentrureducereamarcataanumaruluidelimfociteCD4+sidezvoltareasindromului
imunodeficienteidobandite(SIDA)estede1011ani510%dintrepacientitrecinaceastafaza
multmairapid,indecursde3ani,intimpce510%mentinunnumarconstantdeceluleCD4+
siramanasimptomaticioperioadadetimpindefinita.EtapaSIDAestemarcatadeevolutiaunor
infectiicuriscvital,deneoplasmeoportunistesaudemanifestaridirectealecitopatogenicitatii
HIV 8.
DiagnosticulserologicalinfectieiHIVinperioadaprenatalaestecomplicatdepersistenta
prelungitaaanticorpilormaterni(aproximativ18lunidelanastere).Dinacestmotiv,metodade
electiepentrudepistareainfectieineonatalesunttestelemoleculare.Acesteaserecomandaafi
efectuatedupa23saptamanidelanastere,lavarstade12lunisila46luni,pentrutoticopiii
nascutidinmameHIVpozitive37.
Suntdescrisedouatipuridetestecaredetecteazaincarcaturavirala:
untestcaredetecteazaincarcaturaviralacelulara,respectivADNproviralincelulele
mononuclearedinsangeleperifericprintehnicaPCR
untestcaredetecteazaincarcaturadeARNplasmaticprintehnicaRTPCRcarefoloseste
reverstranscriptaza.
Ambeletehnicioptimizateevalueazacantitativnumaruldecopiigenomice7.
TestuldedetectieaADNuluiproviralesteutilizatpentrudiagnosticulinfectieilacopiiinascuti
dinmameHIVpozitive,depistareaprecoceainfectieiinperioadaincaretesteleserologice,
antigenulp24siHIVARNsuntnegative,precumsiincazulobtineriiunuirezultatechivocla
testulWesternblot 6.TestuldedetectieaARNuluiplasmaticpoatefiutilizatdeasemeneain
diagnosticulinfectieiperinatale(areaceeasisensibilitatecatestulADNproviral)3,insaprincipala
sautilitateestemonitorizareaevolutieiboliisiaterapieiantiretrovirale6.
Monitorizareaviremieiestenecesarapentruaevaluaraspunsullatratamentsidurabilitatea
supresieivirusologice.Tintaterapieiantiretrovirale,atatlapacientinaivicatsilaceicu
tratamenteanterioare,estesupresiaHIVARNpanalanivelenedetectabile.Viremiatrebuie
determinatainainteainitieriiterapiei,dupa28saptamanisiapoilaintervalede48saptamani
panainmomentulincareHIVARNdevinenedetectabil.La4saptamanidelainceperea
tratamentuluitrebuiesaseobtinaoscadereaviremieicucelputin1log10,iardupa1624
https://www.synevo.ro/hiv1arncantitativ/print/

3/6

26.11.2016

HIV1ARN(cantitativ)|Synevo

saptamaniestenecesarsaseajungalavalorinedetectabile.Viremiiletranzitorii,acelecresteride
ordinula501000copii/mL,produselapacienticuvalorianterioaresuprimate,suntocazional
intalnitedarnuparsafieasociatecuunesecalraspunsuluivirusologicsinunecesitamodificarea
tratamentului.Unesecrealalraspunsuluivirusologicestedefinitprinpersistentauneiviremii
detectabilelaunpacientcareaprezentatanteriorosuprimareaviremieisauprinincapacitatea
deaobtineoviremienedetectabiladupa2448saptamanidetratament.Desipotexistacauze
multiplepentruacestesecvirusologictrebuiesuspectatainprimulrandorezistentala
tratamentulantiretroviral.
Inclinicileundemonitorizareaviremieinuestedisponibila,folosireanumaiacriteriilorclinicesi
eventualanumarariicelulelorCD4pozitivepoateaveadreptconsecintalipsaidentificariiunei
rezistentelaantiviralesicontinuareaunuitratamentnumaipartialeficient 2.
RecomandaripentrudeterminareaHIV1ARN
diagnosticulinfectieilanounascutidinmameseropozitive(catevastudiiaudemonstrato
sensibilitatede2540%atestuluiinprimelesaptamanideviata,carecrestela90100%
panalavarstade23luni)3
monitorizareaevolutieibolii(inprezentasauinabsentaterapieiantiretrovirale)
evaluareaeficacitatiidiferitelortratamenteantivirale:inainteainitieriiterapiei(valori
bazale),monitorizareindirectapentrudetectareauneiposibilerezistenteantiretrovirale,lipsa
complianteilatratament 6.
Avantajeletestului
sensibilitatesispecificitatecomparabilecuizolareavirusului
utilizareaunorcantitatimicideprobedetestat
testulesterapidsiseobservaunparalelismcertintreincarcaturaviralaplasmaticasau
celulara,depletiadeceluleTCD4siprogresiabolii,elementecetrebuieluateinconsiderare
laaplicareatratamentului7.
Pregatirepacientnuestenecesara4.
Specimenrecoltatsangevenos4.
RecipientderecoltarevacutainercecontineEDTAcaanticoagulant 4
Prelucrarenecesaraduparecoltareseseparaplasmaprincentrifugare4.
Volumdeprobaminim2mLplasma4.
Stabilitateprobaprobeledeplasmasuntstabile1lunala20C4.
MetodaRealtimePCR(TaqMan):reactiedepolimerizareinlantcudetectieintimpreala
produsuluiPCRacumulat,prinmasurareafluorescenteiemise(testcantitativ).4
https://www.synevo.ro/hiv1arncantitativ/print/

4/6

26.11.2016

HIV1ARN(cantitativ)|Synevo

ValoridereferintaHIV1ARN:nedetectabil4.
Limitadedetectie40copii/mL4.
Interpretarearezultatelor
UnrezultatnedetectabilindicafaptulcatestulnuadetectatHIV1ARNinprobaanalizata.Un
rezultatavandcomentariulHIV1ARNdetectabil,dar<20copii/mLindicafaptulcaafost
detectatHIV1ARNinproba,darnivelulsauseaflasublimitainferioaradedetectieametodei
acestrezultatsepoatedatorauneiviremiifoartemici,uneiinfectiiHIV1instadiuprecoce(<3
saptamanidelacontactulinfectant)sauauneifalsepozitivitati(datorateuneiimpreciziia
testuluiinabsentainfectiei)6.
IncazulcopiilornascutidinmameHIVpozitiverezultatelevorfiinterpretateastfel:
obtinereaadouavalorinegativepentruHIV1ARNlavarstademinimum1lunasirespectiv
la4luni(saumaimult)infirmainfectia
obtinereaadouavaloripozitivepentruHIV1ARNlavarstademinimum1lunasirespectiv
la4luni(saumaimult)confirmainfectia3.
Limitesiinterferente
Nuserecomandastabilireaunordeciziiterapeuticepebazauneisingurevaloriaviremiei.
Rezultateleviremieitrebuieinterpretateintotdeaunaincontextulclinicsicorelatecunumarul
celulelorCD4pozitive6.
VariatiilediurnealeHIVARNsuntmaimarilacopiicomparativcuadultiidinacestmotivnumai
cresteridepeste5ori(0.7log10)potfisemnificativelacopiii<2ani,fatadecresteriledepeste
3ori(0.5log10)consideratecafiindrelevantelacopiiimarisiadulti3.
IntroducereatratamentuluiantiretroviralimediatdupanasterepoatesuprimaniveleleARNului
siinterferacudiagnosticulinfectiei7.
TestulesteoptimizatdoarpentrucuantificareaviremieiininfectiaHIV1determinatadegrupul
M,subtipurileAHsinuprezintaacurateteindetectareainfectieicauzatadeHIV1grupurileNsi
O,precumsiainfectieiHIV2.
Unrezultatnegativnuindicainmodnecesarabsentareplicariivirale46.

Bibliografie
1.ARUPLaboratories.TestDirectory:HumanImmunodeficiencyVirus1RNAQuantitativeRealTime
PCR.www.aruplab.com2015.RefType:InternetCommunication.
2.AtheM.N.Tsibris.MartinS.Hirsch.AntiretroviralTherapyforHumanImmunodeficiencyVirus
Infection.InMandell,Douglas,andBennettsPrinciplesandPracticeofInfectiousDiseases,7th
https://www.synevo.ro/hiv1arncantitativ/print/

5/6

26.11.2016

HIV1ARN(cantitativ)|Synevo

edition,ChurchillLivingstone,Elsevier,2010,18471848.
3.GeoffreyA.Weinberg,GeorgeK.Siberry.PediatricHumanImmunodeficiencyVirus.InMandell,
Douglas,andBennettsPrinciplesandPracticeofInfectiousDiseases,7thedition,Churchill
Livingstone,Elsevier,2010,18181819.
4.LaboratorSynevo.Referintelespecificetehnologieidelucruutilizate2015.RefType:Catalog.
5.MarvinS.Reitz,JR.RobertC.Gallo.HumanImmunodeficiencyViruses.InMandell,Douglas,and
BennettsPrinciplesandPracticeofInfectiousDiseases,7thedition,ChurchillLivingstone,Elsevier,
2010,23232333.
6.MayoClinic.MayoMedicalLaboratories.TestCatalog:HIVType1ProviralDNAQualitative
DetectionbyPCR,Blood.HIVType1RNAQuantification,Plasma.www.mayomedicallaboratories.com.
RefType:InternetCommunication.
7.RobinDewar,DeborahGoldstein,FrankMaldarelli.DiagnosisofHumanImmnuodeficiencyVirus
Infection.InMandell,Douglas,andBennettsPrinciplesandPracticeofInfectiousDiseases,7th
edition,ChurchillLivingstone,Elsevier,2010,16631681.
8.TimothyR.Sterling,RichardE.Chaisson.GeneralClinicalManifestationsofHuman
ImmunodeficiencyVirusinfection.InMandell,Douglas,andBennettsPrinciplesandPracticeof
InfectiousDiseases,7thedition,ChurchillLivingstone,Elsevier,2010,17051721.

ArticleprintedfromSynevo:https://www.synevo.ro
URLtoarticle:https://www.synevo.ro/hiv1arncantitativ/
Copyright2009Synevo.Toatedrepturilerezervate.

https://www.synevo.ro/hiv1arncantitativ/print/

6/6