SEPARACION

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES. DEPARTAMENTO DE QUIMICA. LAB. EXTRACCION

Comparaci
on m
etodos de extracci
on
Melendez Z., Diana1,2 *
Saenz C., Cesar David1,3 **

Cod. 201218118
Cod. 201327597

Abstract
Se presentan los resultados obtenidos al someter una muestra molida, solida y seca de clavo de olor a
extraccion de 3 tipos: Extracci
on S
olidoLquido (SE, UAE, MAE ), arrastre por vapor(AV ) y Extracci
on en
fase solida (SPE ). La molienda de la muestra fue realizada con un molino electrico y ya se encontraba seca
al momento de la compra. Los porcentajes de rendimiento de extraccion calculados fueron: 15.603.69,
17.612,60, 18.76,1, para las extracciones SolidoLquido SE, UAE y MAE respectivamente; 1,1230,619
para la extracci
on por arrastre con vapor y para la extraccion en fase solida SPE no fue posible calcularlo. A
partir de lo anterior, y en base a analisis cualitativos y estadsticos, se establece que la tecnica de AV fue la
mas ineficiente y que MAE fue el mejor porcentaje de recuperacion (como se esperaba), sin embargo, y de
acuerdo al analisis ANOVA, ninguna de las extracciones Solido-Lquido difiere significativamente una de otra.
Keywords
Clavo de olor, extracci
on, s
olido-lquido, arrastre vapor, fase solida, comparacion, analosis estadstico.
1

Departamento de Qumica, Universidad de los Andes, Bogot

a, Colombia
Departamento de Fsica, Universidad de los Andes, Bogot
a, Colombia
3
Departamento de Ingeniera Qumica, Universidad de los Andes, Bogot
a, Colombia
*Email: d.melendez1068@uniandes.edu.co
**Email: cd.saenz11@uniandes.edu.co
2

A continuacion se presenta un breve resumen teorico

de algunos metodos de extraccion.

1. Introducci
on
Las plantas son la fuente del 25% de los productos
farmaceuticos que se utilizan actualmente. Ellas,
sintetizan estos compuestos org
anicos como los llamados metabolitos secundarios, que no son necesarios para el funcionamiento de las celulas de la
planta, pero son esenciales para la supervivencia de
la misma en el ecosistema. Cada especie elabora su
complemento especfico de metabolitos secundarios.
Como resultado, colectivamente el reino vegetal es
una fuente rica de compuestos organicos complejos, muchos de los cuales tienen actividades farmacologicas en los seres humanos. Debido a que estas
moleculas tienden a tener m
ultiples centros quirales,
su sntesis qumica no es economica y las plantas
siguen siendo la principal fuente de estos compuestos
[1]. Aunque, muchas veces, su extraccion resulta
muy compleja por la cantidad de factores que deben
optimizarse para su obtencion: solventes no toxicos,
cantidad del analito a recuperar, pre-tratamiento
de la muestra, matrices complejas, entre otras.

Extracci
on S
olido Lquido
En este tipo de extraccion se busca separar uno
o varios analitos solubles que se encuentran en un
s
olido inerte molido (preferiblemente) mediante la

utilizacion de un disolvente adecuado. Esta

se divide
en cinco etapas fundamentales:
1. El solvente que se encuentra en la solucion
bulk se acerca a la superficie del solido.
2. El solvente penetra en el solido mediante un
proceso de difusion.
3. El soluto cambia de fase y pasa al solvente,
por proceso de disolucion.
4. Se da la difusion del solvente con el soluto hacia el exterior del solido, a causa del gradiente
de concentracion.
5. Transferencia del soluto desde la interfase solidolquido hasta el solvente.
1

Comparaci
on m
etodos de extracci
on 2/9

En esta practica se emplearan 3 tecnicas de extraccion solido-lquido:

- Extracci
on Soxhlet SE:
La extracci
on se efect
ua repetidas veces con
una cantidad determinada de disolvente, de
manera cclica.

2. Objetivos e Hip
otesis
Se sometio a extraccion una muestra s
olida, molida y seca de Clavo de olor. Esto, con objeto de
extraer varios tipos de compuestos de acuerdo a la
naturaleza del solvente y la tecnica, planteandose
las siguientes hipotesis:

- Extracci
on Asistida por Microondas (Microwave Assisted Extraction) MAE:
Emplea radiaci
on microondas, lo que produce
un aumento de temperatura, en el solvente
(que debe ser polar). Ademas, en este proceso,
el flujo de masa y de calor van en la misma
direccion, contrario a los demas tipos de extraccion, los que el flujo de calor y el flujo de
masa van en el mismo sentido.

1. Mediante las tecnicas de extraccion SolidoLquido

se esperan obtener los analitos semi-volatiles
o no volatiles de la muestra.

- Extracci
on asistida por ultrasonido (Ultrasonic Asisted Extraction) UAE:
Emplea ondas Sonoras, lo que favorece la formaci
on de burbujas de cavitaci
on, que implosionan creando un punto transitorio caliente.

2. A traves del metodo arrastre por vapor se

esperan recolectar: el aceite esencial y los
componentes volatiles.

Arrastre con vapor (AV)

Actualmente es una de las mas empleadas para la obtencion de aceites esenciales. La extraccion funciona
gracias a que, cuando el vapor entra en contacto
con el material vegetal, hace que los compuestos
vol
atiles (que generalmente poseen un punto de ebullicion mas bajo que el agua) se vaporicen y sean
arrastrados junto con el vapor de agua hasta un
condensador. En este, como su nombre lo indica, se
condensan: el agua y los componentes vol
atiles del
aceite. En este proceso se obtiene un destilado que
contiene dos fases: una acuosa y la otra, organica
(aceite esencial de interes) que luego deben separarse
mediante extracci
on Lquido-Lquido.
Extracci
on en fase s
olida (SPE)
Posee una amplia gama de aplicaciones, ideal para
la preparacion de muestras y que esta dise
nado para
emplear muy poco y solvente. El fundamento de
esta tecnica se basa en la seleccion del cartucho
de extraccion, con un relleno especfico, para el
tipo de compuestos que se desea obtener: polares,
apolares, hidrofobicos, de interaccion i
onica entre
otros. Esta tecnica es muy empleada para fines de:
Concentrar el analito, eliminar interferencias de la
matriz y cambiar la matriz del analito de acuerdo a
los analisis posteriores.

- SE: Compuestos muy apolares, que no

se descompongan a T 80.74 o C.
- UAE: que no sean organofosforados, porque
estos se descomponen.
- MAE: Compuestos muy polares.

3. Empleando SPE: Depende de cada relleno (en

este caso se emplean los cartuchos C18 y Diol),
tambien depende de los solventes (o mezclas
de estos) empleados para los lavados y las
eluciones
Para cada una de las tecnicas, se plantea calcular
el porcentaje de rendimiento de extraccion global
(Intra-Laboratorio) y especificar, para los extractos
del presente grupo, los estudios cualitativos de pruebas organolepticas. Finalmente, se pretende analizar
comparativamente todos los resultados obtenidos.

3. Resultados y Discusi
on
3.1 Datos grupales
En la Tabla 1, Tabla 2 y Tabla 3 se exponen los
datos obtenidos por uno de los integrantes del presente grupo, para cada tipo de extraccion1 . En estas
se presenta el porcentaje de rendimiento de la extraccion, as como la informacion recolectada con las
pruebas organolepticas (visuales y olfativas) para
cada extracto, ademas se denotan observaciones adicionales, de ser necesarias.

1
Se reportan solamente los datos obtenidos por un integrante a causa de que los pertenecientes al otro fueron
similares, de acuerdo a sus propiedades organolepticas o presentaron inconsistencias en el porcentaje de rendimiento calculado.

Comparaci
on m
etodos de extracci
on 3/9

Tabla 1. Datos adquiridos del extracto obtenido mediante las extracciones Solido-Lquido: Soxhlet (SE),
Ultrasonido (UAE) y Microondas (MAE).
M
etodo
% Rendimiento
Color

Olor

Otras
ciones

observa-

SE
19.79
Entre
verde oliva
y amarillo
Eugenol.
Ligeramente
a
Hexano
Un poco
transl
ucido

UAE
16.17
Entre cafe
y verde oscuro
Fuerte a
Eugenol.
Un poco
desagradable
Turbio.
Lodoso

MAE
22.84
Verde
oliva
Acetato

Turbio

Tabla 2. Datos adquiridos del extracto obtenido mediante extracci

on con arrastre por vapor.
M
etodo
% Rendimiento
Color
Olor
Otras observaciones

Arrastre por vapor

1.14
Amarillo p
alido
Eugenol. Ligeramente desagradable
Aceitoso

Tabla 3. Datos adquiridos del extracto obtenido mediante extracci

on en Fase S
olida SPE.
M
etodo
Color Lavado
Color Eluci
on
Otras observaciones

SPE Diol
Verde
Incoloro
Ambas
fracciones fueron
transl
ucidas

SPE C18
Verde
Incoloro
Ambas
fracciones fueron
transl
ucidas

De acuerdo a las anteriores tablas y gracias a las

pruebas organolepticas se denota que el componente
principal extrado corresponde al Eugenol. Esto
pues, teoricamente y respecto a referencias bibliogr
aficas y los anexos, el Eugenol presenta un olor
caracterstico (a lo que se debe su facil identificacion)
y es uno de los componentes que se encuentra en
mayor cantidad en el clavo de olor (por ende es
uno de los que tiene mayor probabilidad de hallarse
luego de realizada una extracci
on). Por otra parte,
de acuerdo a las pruebas visuales es posible denotar
colores verdosos que probablemente se deban a la
clorofila y/o pigmentos fotosinteticos y, en el caso
de la extracci
on por ultrasonido (UAE), se identifico una coloraci
on mas oscura y un extracto mas
turbio que los demas, para lo cual se encontro en la
literatura que los colores oscuros en un extracto se
relacionan con la presencia de una gran cantidad de
componentes polares .

Lo anterior corresponde con lo esperado para este

extracto, ya que su extraccion se efectuo con el solvente mas polar empleado en la pr
actica: el Etanol
(ver Figura 3 en ANEXOS). As pues, se establece
que este extracto es el que mayor cantidad de componentes del clavo contiene, lo que implica que para
su posterior an
alisis sera necesario purificarlo, seleccionar varios tipos de compuestos (variando la
polaridad con mezclas en distintas proporciones) y/o
cambiar de matriz (mediante SPE y/o columna).
Por otra parte, y como es de esperar, la tecnica
de arrastre por vapor presenta un bajo rendimiento,
sin embargo, en este caso es muy bajo. Lo anterior puede estar relacionado con la etapa de la extraccion Lquido lquido, ya que al momento de dicha
extraccion la fase acuosa permanecio turbia a
un
al realizar la tercera extraccion con diclorometano.
Esto sugiere que la fase lquida contena peque
nas
porciones del aceite esencial que no pasaron con facilidad a la fase organica (formacion de una emulsion
o una suspension), lo que contribuye con perdida
del analito y, por ende, bajos rendimientos (esto se
podra haber mejorado con una solucion salina saturada). Otra fuente de error se asocia al tiempo que
se dejo el montaje y a que cuando se retir
o la muestra del bal
on (al final) no toda la muestra estaba
h
umeda, lo que implicara que no toda la muestra
entro en contacto con el vapor de agua proveniente
del balon generador de vapor y por tanto la masa
pesada inicialmente no corresponde con lo que se
extrajo realmente, lo que influye directamente en
el calculo del porcentaje de rendimiento. Por otra
parte, para esta metodologa se descartan errores
asociados a perdidas a traves de las uniones, ya que,
desde el momento previo a la extraccion se aseguR
raron todas las uniones del montaje con parafilm
.
Del mismo modo, cuando se analice este extracto
mediante GC-MS, se espera obtener en su mayora
eugenol, acetato de eugenilo, -caryophyllene, 3 de
los componentes principales en el aceite esencial del
clavo de olor (ver Figura 4 y Figura 5 en ANEXOS).
Finalmente, de acuerdo a la Tabla 3, es posible
establecer que se espera la mayor cantidad de compuestos en la fraccion obtenida de las eluciones, que
de aquellas obtenidas de los lavados. Lo anterior se
fundamenta en la metodologa de funcionalizacion
por etapas de cada columna:

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on m
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1. Etapa de Acondicionamiento:
En esta etapa se da la activacion del adsorbente y de los grupos funcionales. Se consigue
al pasar un volumen de solvente o mezcla de
solventes apropiado a traves de la columna.
Los discos de la columna se solvatan convenientemente. Para activar adsorbentes hidrofobicos
(metanol o acetonitrilo), mientras que para los
hifroflicos se usa hexano o diclorometano.
2. Etapa de Carga de Muestra:
Luego se aplica la muestra en la parte superior
del adsorbente. As mismo, los contaminantes
de la matriz pueden pasar la columna sin ser
retenidos, y otros componentes de la matriz
pueden retenerse mas o menos fuertemente en
la superficie del adsorbente.
3. Etapa de Lavado:
El lavado permite la eliminacion de cualquier
resto de compuestos que puedan interferir
manteniendo los analitos en el adsorbente. Se
pueden usar solventes o mezcla de solventes
de diferente tipo para mejorar la eficacia del
lavado.
4. Etapa de Secado:
Las trazas de solvente se eliminan haciendo
circular aire a traves de la columna durante 2 a
10 minutos. Esta etapa mejora el rendimiento
de extracci
on.
5. Etapa de Eluci
on:
Se hace pasar un solvente adecuado por la
columna para eliminar la interaccion analitosolvente y eluir el 100% de los compuestos
de interes. El solvente adecuado ha de tener
la maxima interaccion con el analito y una
interaccion mnima con las dem
as impurezas,
dejandolas en el lecho de adsorbente. El volumen de elucion ha de ser el menor posible
para mantener alto el factor de concentracion.
[2]
6. Etapa de Concentraci
on:
Los compuestos de interes se concentran evaporando una parte del solvente. Es necesario
secar el eluato con sulfato de sodio para eliminar posibles trazas de agua. La muestra concentrada ya est
a lista para el an
alisis.

En el caso de este laboratorio, al cartucho con

relleno C18 se le hizo pasar como primera etapa:
metanol, pues este corresponde a un solvente adecuado para permitir la activacion los absorbentes
hidrofobicos del empaque, ademas, teniendo en cuenta
que el cartucho es ideal para muestras no polares
y medianamente polares, es fundamental que se activen este tipo de absorbentes ya que los grupos
funcionales no polares del adsorbente act
uan seg
un
las fuerzas de van der Waals. Esto permite que los
componentes contaminantes de la matriz puedan
pasar por la columna sin ser retenidos, y otros componentes de la matriz pueden retenerse mas o menos
fuertemente en la superficie del absorbente [2].
Por otra parte, para el cartucho con relleno Diol,
la activacion de los adsorbentes hidroflicos se lleva a cabo primero con metanol y luego con agua
(a
un mas polar). Lo anterior es muy importante
ya que las fases normales permiten una limpieza
eficiente de moleculas con grupos polares. Estos
grupos funcionales (Diol) mejoran la extracci
on de
compuestos polares. respecto a lo anterior es vital
identificar que los compuestos aislados para esta
pr
actica fueron organicos, de igual manera la polaridad de los componentes va a determinar el tipo de
fase que se va a presentar, en el caso del C18 el cual
es afn a muestras no polares la fase que se presenta
es inversa y para el Diol se presenta la fase normal
debido a su afinidad por las muestras polares [?].
3.2 Datos Globales
En esta seccion se expondran los datos obtenidos por
todos los grupos en el laboratorio (Intra-laboratorio),
brindando mayoritariamente un analisis estadstico.
Como primera medida, al observar los datos consignados por cada uno de los grupos fue posible denotar
que, en la obtencion del porcentaje de rendimiento
de los metodos de extraccion, haban varios valores
sospechosos por estar muy alejados de los demas
datos presentados. Por lo tanto, se realizo el Test Q
(Ecuacion 1) para determinar su posible eliminacion
a un valor de mnimo el 90% de confianza.

Qcalculado =

Xsospechoso XCercanoasospechoso
Rango
(1)

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Figura 1. Correlaci
on entre los rendimiento obtenidos seg
un la tecnica y el grupo que realiza la medida.

A partir de la Ecuacion 1 fue posible encontrar que

dos de los datos considerados como sospechosos
pudieron ser descartados con un nivel de confianza del 90% y el 95% respectivamente, al ser
Qcalculado Qtabulado . A partir de lo anterior se
calcularon el promedio y la desviacion estandar
para cada una de las metodologa de extraccion
presentadas anteriormente, pero esta vez, teniendo
en cuenta todos los porcentajes de rendimiento hallados por cada grupo (Tabla 4). Con base a ello
fue tambien posible calcular una distribucion Normal que muestra el comportamiento del porcentaje
de rendimiento de cada una de las tecnicas de extraccion (Figura 2).
andar,
Tabla 4. Valores promedio y desviacion est
obtenidos tras eliminar 2 datos a traves del citerio del
Test Q, para el porcentaje de rendimiento calculado por
todos los grupos de laboratorio.

M
etodo
SE
UAE
MAE
AV

Promedio
15.60
17.1
18.7
1.12

Desviaci
on Est
andar
3.96
2.60
6.1
0.62

De la Tabla 4 y de la Figura 2 es posible apreciar

que las distribuciones para las 3 metodologas de
extracci
on s
olido - lquido se encuentran muy cerca
una de otra, mientras que la calculada para arrastre
por vapor esta muy cercana a 0. Eso implica que
en todo el grupo del laboratorio, los errores que no
permitieron alcanzar un porcentaje de rendimiento
alto son sistematicos, ya que se ve, de la normal (angosta), que los valores se encuentran muy cerca unos
de los otros, es decir, son precisos y reproducibles

Figura 2. Distribuci
on normal calculada para los

porcentajes de rendimiento obtenidos por todos los

grupos de laboratorio a excepcion de los descartados
mediante el criterio del test Q

para ese da; pero no son necesariamente exactos.

Por otra parte, respecto a las extracciones s
olido lquido se evidencia de la Figura 2 que tanto SE,
como MAE presentan desviaciones estandares muy
grandes, por lo que se puede decir que los datos
de porcentaje de recuperacion para ambos casos
estan muy dispersos y dependen del grupo que haya
llevado a cabo el an
alisis; en este caso se presentan
errores de ambos tipos y no es posible establecer
que la distribuci
on sea precisa (ni exacta, al no
tenerse un valor teorico de referencia). Del mismo
modo, puede verse, que la distribucion Normal mas
clara es la correspondiente a UAE, tecnica por la
cual se obtuvo el mas bajo coeficiente de variacion
promedio
( desviaci
etodo
on = 0, 152). UAE es el siguiente m

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on 6/9

con menor porcentaje rendimiento, esto a cauda

de que corresponde a una tecnica que no incluye,
ni un aumento en la temperatura homogeneo y
prolongado, ni presion; factores que influyen de
manera directa en los procesos de disolucion y difusion, que son claves para la extraccion Solido
Lquido. Ademas, el solvente empleado para este
caso: Etanol, presenta una viscosidad de 1.20 cP
(a 20 C) [4], que es relativamente alta respecto a la
de los demas solventes empleados en esta practica.
Dicha alta viscosidad puede influir negativamente
en el rendimiento de la extraccion pues para esta
tecnica una viscosidad baja es ideal. Sin embargo, el
porcentaje de rendimiento para esta tecnica es ideal.
Ahora bien, con motivo de confirmar numericamente
la correlacion de cada una de las tecnicas en cuanto
al porcentaje de rendimiento se realizo un an
alisis
estadstico mediante ANOVA, cuyos resultados se
exponen a contiuaci
on:
Tabla 5. Resultados ANOVA

4. Conclusiones
El proceso de extraccion Soxhlet, se reporta en la
literatura como de muy altos rendimientos, aunque
en este caso no fue el mas alto, sino el mas bajo en el
grupo de las extracciones solido-lquido (15.603.96)%,
esto puede estar relacionado a que en la literatura
se reportan tiempos mucho m
as largos de extraccion
y una cantidad mayor de solvente por gramo de
muestra.
La extraccion por arrastre de vapor es una tecnica
que permite aislar y purificar a bajas temperaturas
sustancias org
anicas liquidas inmiscibles en agua.
Su mayor aplicaci
on es la obtencion de aceites esenciales. En este caso la tecnica correspondio al
rendimiento porcentual mas bajo (1.12 0,62)%.
Lo que puede estar relacionado con que esta tecnica
se realiza a menor temperatura que una extracci
on
simple. La extraccion por arrastre de vapor siempre
se realiza a menor temperatura que la temperatura
de ebullicion del componente mas volatil; adem
as
la formaci
on de emulsiones al momento de la estraccion lquidi-lquido y el hecho de que no todo el
vapor de agua tuviera contacto con toda la muestra
molida.
Por otra parte, al llevar a cabo la estadstica global
(Intra-laboratorio) se denoto que, aunque inicialmente MAE pareca mejor, ninguna de las 3 tecnicas
de extracci
on solido-lquido difera significativamente
entre s, sin embargo a diferencia s esra significativa
con AV.

Notas y Referencias
[1]

[2]

[3]

[4]

[5]

De la anterior se confirma que no existe diferencia significativa al comparar entre los metodos
de extraccion s
olido-lquido (al 90% del nivel de
confianza y los grados demlibertad especificados),
mientras que los metodos s difieren significativamente cuando se compara cualquiera de las tres
tecnicas de extracci
on s
olido-lquido (SE, UAE y
MAE) con arrastre por vapor.

[6]

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Comparaci
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5. ANEXOS

Figura 3. Polaridad, Viscosidad y punto de ebullici

on de varios disolventes comunes. Obtenido de: [4]

Comparaci
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Figura 4. Composici
on del aceite de Clavo. Obtenido de: [5]

Comparaci
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Figura 5. Composici
on del aceite escencial de Clavo de olor. Obtenido de: [6]