Desarrollo y optimizacin de mtodos

La vitamina C contiene hidroxilos, que lo convierten en un compuesto cido.

Interacciona dbilmente con la fase estacionaria apolar de la columna de
HPLC, apenas se adsorbe a la columna, y se eluye fcilmente por la fase
mvil.
En este estudio se investigaron varios sistemas de cromatografa para
resolver este problema: Se seleccion metanol para la fase orgnica, la fase
acuosa, que implicaba soluciones tampn NH 4AC-HAC, se mezcl con
metanol. independientemente de la proporcin de mezcla y el pH de la fase
acuosa, ninguno de ellos puede separar bien la vitamina C. Con la adicin
del reactivo de pares de iones, hidrxido de tetrabutilamonio, las
condiciones cromatogrficas mejoraron notablemente. Debido a la presencia
de la estructura en forma de enol, la vitamina C se considera como un cido.
Por lo tanto, en condiciones de fase mvil neutra y bsica, la vitamina C se
combinar con OH- basada en la atraccin entre las cargas positivas y
negativas, cambiando la vitamina C al conjugado de OH. Posteriormente, en
la fase mvil, el OH - conjugado de vitamina C se une al grupo positivo de
hidrxido de tetrabutilamonio y se convierte en una molcula neutra. En
comparacin con la forma inica de la vitamina C en condiciones cidas, el
complejo neutral aument la capacidad de retencin de la vitamina C en la
columna C18. Debido a que el complejo neutro tiene una polaridad ms
dbil que la vitamina C ionizada, los compuestos con una polaridad ms alta
a la columna pueden retenerse o adsorberse eficazmente
La concentracin de hidrxido de tetrabutilamonio en la fase acuosa
desempe un papel importante en este sistema cromatogrfico, porque la
formacin del complejo neutro depende de la cantidad de hidrxido de
tetrabutilamonio. Una serie de
concentraciones de hidrxido de
tetrabutilamonio se evaluaron y vieron que a medida que aumentaba la
concentracin de hidrxido de tetrabutilamonio, el tiempo de retencin
aumentaba en la misma proporcin de mezcla de la fase mvil. Teniendo en
cuenta el tiempo analtico, la concentracin de hidrxido de
tetrabutilamonio en la fase acuosa se fij en 0,005 mol / L.