Esterilizacin

1) Cul es la finalidad de la esterilizacin?

La finalidad de la esterilizacin es destruir toda clase de m.o. de los
materiales que se van a emplear.
En la prctica microbiolgica es necesario tener todo el material
experimental exento de m.o vivos, de forma tal que al sembrar un m.o.
determinado en un cierto medio de cultivo, las manifestaciones de vida
que se evidencien podamos asignarlas con seguridad a dicho m.o. y no a
una mezcla con otros.
2) En qu casos se usa cada tipo de esterilizacin?
Tipos de esterilizacin y sus usos:
Mtodos de esterilizacin:

Fsicos:
A) Calor:
a) Calor Seco
Directo (Combustin

Flameado):

Se

utiliza

para

esterilizar agujas, ansas, etc. Se las coloca en la zona

caliente de la llama del mechero hasta rojo vivo.
Indirecto (Aire Caliente: Estufa): Se utiliza para esterilizar
instrumental, cajas de Petri, tubos de ensayo, pipetas, o
en general materiales de vidrio, todos los cuales son
envueltos previamente con papel, protegindolos de una
posterior contaminacin.
b) Calor Hmedo
Ebullicin: Consiste en hacer que sobre el material a
esterilizar acte agua hirviente. Este mtodo ofrece
seguridad relativa, pues algunas bacterias esporuladas
resisten a la accin del agua hirviente.
Vapor fluente (autoclave sin presin): Es una tcnica
corrientemente usada

para

esterilizar medios

de

cultivo que no pueden someterse a una temperatura

mayor de 100C sin perder alguna propiedad.
Vapor saturado a Presin (autoclave): Este mtodo es
el ideal para la esterilizacin de soluciones acuosas
cuyas propiedades no son afectadas por someterse a

una temperatura mayor 100C. Tambin se utiliza para

esterilizar instrumentos, como ser cajas Petri, tubos de
ensayo, pipetas, etc.
Calor discontinuo o tindalizacin: Esta tcnica se
emplea cuando se desea esterilizar sustancias que se
descomponen o alteran a cierta temperatura, como en
el

caso

naturaleza

de

ciertos

azcares

compuestos

proteica,

ejemplos:

sueros

de

de

leche,

solucin de sacarosa, etc.

B) Filtracin:
Este mtodo se utiliza para aquellas soluciones que se descomponen o
inactivan al someterse a las temperaturas del autoclave. Consiste en
esterilizar en frio pasndolas a travs de filtros de poros pequeos que
impiden el paso de todas las bacterias y microorganismos de mayor
tamao.
3) Para qu se hace la correccin de sobrepresin en el autoclave? Qu
temperatura alcanza? Cul es el objeto de su empleo?
Comnmente el autoclave funciona a una presin absoluta de 2 atm la
que corresponde a una temperatura de ebullicin del agua de 120C.
La presin absoluta dentro del autoclave est dada por la suma de
presin atmosfrica y la sobrepresin (o presin manomtrica) aplicada,
es decir la que el operador elige para trabajar.
La presin atmosfrica de un lugar depende de su altura sobre el nivel
del mar.
La correccin de sobrepresin en el autoclave se hace para que la
presin absoluta dentro del autoclave sea de 2 atm.
La temperatura que alcanza es de 120C.
Nota: No entiendo la ltima pregunta.

4) Explique brevemente los pasos que sigue para esterilizar con un

autoclave desde que enciende hasta que apaga el equipo.
Los pasos para usar una autoclave son los siguientes:

o
o

o
o

o
o
o

Colocar agua en el interior de la caldera hasta casi la altura de la

bandeja o rejilla.
Encender el autoclave, para esto se procede a abrir la vlvula de gas y a
acercar un fsforo en el quemador ubicado en la parte inferior del
autoclave.
Colocar todos los materiales a esterilizar, previamente empaquetados en
papel de diario, dentro de canasto de metal y en latas metlicas. Estos
canastos se los coloc dentro del autoclave.
Observar que la espita se encuentre abierta y se procede a posicionar la
tapa. Luego acomodar los tornillos de a pares opuestos y ajustarlos
manualmente, de una forma ni muy fuerte ni muy suave.
Dejar salir aire por la espita hasta que se establezca una corriente de
vapor continua. Previamente se verificar que la manguera (por donde se
espera que salga el vapor de forma continua) no contenga agua.
Cerrar manualmente la espita.
Observar que el manmetro llegue a la presin deseada y controlar el
tiempo de esterilizacin (en este caso fue 15 minutos). Durante este
tiempo se procedi a regular la fuente de calor para que se mantenga
dicha presin.
Transcurrido este tiempo interrumpir la fuente de calor y dejar enfriar
hasta que alcance el cero de presin manomtrica.
Aflojar los bulones gradualmente para evitar que salten los tapones
Sacar los objetos.

5) Explique brevemente los pasos que sigue para esterilizar con estufa
desde que enciende hasta que apaga el equipo.
Los pasos para usar una estufa de esterilizacin son los siguientes:
o Encender la estufa
o Elegir la temperatura deseada (180C)
o Esperar que la temperatura alcance y se mantenga en los 180C
(demora entre 90 a 120 minutos)
o Introducir los materiales a esterilizar, previamente empaquetados
en papel de diario para evitar una posterior contaminacin).
o Cronometrar 30 minutos.
o Apagar la estufa
o Esperar que enfre, para recin retirar los materiales esterilizados.
6) En qu casos se necesita realizar una correccin de la sobrepresin que
se aplica en autoclave? Indique la o las ecuaciones que utilizar
especificando el nombre de las variables y de dnde obtendr los datos
para realizar su correccin.

La correccin de sobrepresin se realiza para que la presin absoluta

dentro del autoclave sea igual a 2 atm, la que corresponde a una
temperatura de ebullicin del agua de 120C. Esta presin absoluta es la
suma de la presin atmosfrica del lugar de trabajo y la sobrepresin (o
presin manomtrica aplicada).
La temperatura de ebullicin de un lquido depende de la presin
absoluta a la que est sometido, por ejemplo si se desea alcanzar los
120C la presin absoluta con la que se va a trabajar dentro del
autoclave es de 2atm.
Si se desea trabajar a una temperatura distinta entonces se hace un
cambio en la sobrepresin.
Ecuaciones:
T eb=f ( Pabsoluta )
120 C=f (2 atm)

Pabsoluta=P atm + Pmanomtrica

La presin atmosfrica de un lugar depende de su altura sobre el nivel

del mar.
Ejemplo: En San Salvador de Jujuy, aproximadamente a 1250m s.n.m, la
presin atmosfrica promedio es de 0,85 atm.
2 atm=0,85 atm+ P manomtrica
Pmanomtrica =1,15 atm
La sobrepresin o presin manomtrica a aplicar ser de 1,15 atm.
7) Qu entiende por esterilizacin y cmo controla la misma sea correcta
en el autoclave?
La esterilizacin es un proceso a travs del que se logra la destruccin total de
los microorganismos viables presentes en un determinado material.

Existe el control de esterilizacin para el autoclave, el cual consiste en colocar

dentro del autoclave tubos cerrados con una sustancia finamente pulverizada,
cuyo punto de fusin sea aproximadamente igual a la temperatura que se
desea alcanzar en el autoclave.
Si la temperatura de trabajo es de 120C se puede usar el cido benzoico que
tiene un punto de fusin de 121C.

8) Por qu razn se debe corregir la sobrepresin a aplicar en el

autoclave? Cmo lo hace?
Idem 6)
9) Para qu sirve y en qu condiciones de trabajo es til el cido benzoico
que coloc a esterilizar en el autoclave?
El cido benzoico sirve para hacer un control de la esterilizacin del
autoclave. ste control consiste en colocar dentro del autoclave un tubo
cerrado con una sustancia finamente pulverizada cuyo punto de fusin
sea aproximadamente igual a la temperatura que se desea alcanzar en
el autoclave.
Si la temperatura de trabajo es de 120C se puede usar el cido
benzoico que tiene un punto de fusin de 121 C.
10)

Cmo condicion los materiales en la estufa?

No entiendo a qu se refiere.
Si es que se refiere a cmo preparar los materiales a esterilizar sera:
Preparacin de los materiales a esterilizar

Pipetas:

Se limpiaron las pipetas con alcohol y se taparon con algodn el extremo

superior de la pipeta. Se procedi a cortar tiras de papel de diario de
aproximadamente 5 cm de ancho por el largo total de la hoja. Se enroll el
papel sobre la pipeta hasta cubrirla completamente, acto seguido se realiz un
nudo con pioln en ambos extremos de la pipeta. Por ltimo se realiz una
anotacin con lapicera sobre el paquete, sealando el volumen de la pipeta y
su orientacin, es decir indicando en que parte se encuentra la punta de la
pipeta, esto se realiz dibujando una flecha sobre el paquete que seala la
punta.

Erlenmeyer:

Se limpiaron los Erlenmeyers con alcohol y algodn. Se los tap con tapones de
algodn que se realizaron en ese momento. Se procedi a empaquetarlos con
papel de diario y se lo at con pioln.

Tubos de ensayo:

Se limpi la superficie de los tubos de ensayo con alcohol y algodn. Se tap

cada tubo de ensayo con un tapn de algodn realizado en ese momento. Se
los agrup de a 5 6 y se los empaquet con papel de diario, como en el caso
anterior. Finalmente se realiz un nudo con pioln.

Cajas de Petri:

Se limpiaron las cajas de Petri con alcohol y algodn. Se las agrup de a dos y
se las empaquet con papel de diario. Luego se realiz un nudo con pioln.