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TECNICAS HISTOLOGICAS

Es el conjunto de operaciones a las que se somete un material organizado para ser posible su estudio
por medio del microscopio, posibilitando la observacin de las estructuras no visibles al ojo
humano.
Colorantes segn su comportamiento qumico:
1. Colorantes cidos o aminicos: Son para teir el citoplasma, estas estructuras que se tien se
llaman acidfilas y poseen cargas negativas. Se utilizan como colorantes de contraste. Los
colorantes acidos tien las estructuras bsicas. Colorantes ms comunes:
Eosina: Colorea de color rojo o rosado.
Giemsa: Colorea de color azul palido (clulas sanguneas)
Tricromico de Masson: Colorea de color rojo. (fibras musculares)
Hematoxilina Frrica: Colorea de color negro (mitocondrias)
2. Colorantes bsicos o catinicos: Son para teir el ncleo, estas estructuras que se tien se
llaman basfilas y poseen carga positiva. Se utilizan en la bacteriologa. Los colorantes bsicos
tien las estructuras acidas. Colorantes ms comunes:

Hematoxilina: Colorea de color azul violceo


Giemsa: Color azul oscuro o violeta (medula osea)
Tricromico de Mason: Colorea de color negro (tejido conectivo)
Hematoxolina Ferrica: Colorea de color rosa (ADN y ARN)

3. Colorantes Neutros: No poseen cargas y tienen la capacidad de teir tanto las partes bsicas
como las partes acidas de los tejidos.
4. Colorantes Indiferentes: Son colorantes insolubles en agua y solubles en alcohol, donde no
predomina la carga positiva ni la carga negativa pero tampoco tienen un carcter neutro. Son los
colorantes de los lpidos. Colorantes ms comunes:

Sudan III:
Sudan IV:
Sudan Negro:

Colorantes segn su naturaleza:


Naturales: Pueden ser de origen animal y vegetal. Colorantes ms comunes: Azul de ndigo y
carmn.
Artificiales: Pueden ser pigmentos biliares y colorantes de la anilina.
EFECTOS
Ortocromacia: El tejido toma la coloracin que se le est aplicando.
Metacromacia: El tejido toma coloracin diferente a la que se le aplica.

TECNICAS HISTOQUIMICAS:
Son tcnicas utilizadas para determinar la presencia y localizacin de elementos qumicos en el
tejido mediante ciertos colorantes afines.
A-cidos nucleicos: Azul de Metileno o de Toluidina y la hematoxilina. La reaccin de Feulgen,
que es especfica para ADN.
B-Hidratos de carbono: se utiliza la Reaccin del PAS (cido peryodico y reactivo de Schiff) y
para polisacridos cidos el mtodo del Azul de Alcian (Alcian Blue).
C-Lpidos: Colorantes del tipo Sudan III, el Escarlata R o Sudan IV, el Sudan negro B (Sudan black
B).
COLORACION DE PAS
La reaccin de PAS o de cido Perydico de Schiff es una tcnica histoqumica utilizada para teir
carbohidratos complejos de color rojo oscuro o magenta. Es ampliamente utilizado para identificar
membranas, basales, mucopolisacridos, bordes en cepillo como los presentes en los tbulos renales
y en el intestino delgado, as como carbohidratos complejos como el glucgeno.
Coloracin de Nissl
Preparacin de neuronas del tronco enceflico efectuada con coloracin de Nissl. Utiliza un
colorante bsico para teir el RER presente en las neuronas, el cul aparece en forma de grumos y
se conoce como sustancia de Nissl.
Coloracin con reaccin inmunohistoqumica
Preparacin para observar neuronas hipotalmicas mediante tcnicas utilizando reacciones
inmunohistoqumicas.

Preparacin de tejidos muertos


1.-Fijacin: Para conservar el protoplasma. Al M.O: Formol-Alcohol-Acetona. Al M.E: Acido
crmico-Glutaldehido.
Se lava para quitar el exceso de fijador.
2.-Deshidratacin: Pasa por concentraciones crecientes de alcohol etlico.
3.-Aclaramiento: Se utiliza Xilol para eliminar el agente deshidratante.
4.-Inclusin: Con parafina o con celoidina o endurecimiento: Criostato por congelacinMicrotomo por inclusin.

PASOS DE LA TECNICA
1- Obtencin del material:
Pueden provenir de:

biopsias quirrgicas
material obtenido de necropsias
utilizando animales de laboratorio
estudios experimentales en animales
material de cultivos de tejidos
frotis o extendidos

2- Fijacin:
Es el proceso Fsico (Histoqumico) que logra una situacin estable de los constituyentes tisulares,
interrumpiendo las reacciones enzimticas de autlisis.
Cualidades de un buen fijador:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Actuar con rapidez y detener los procesos autolticos.


Buen poder de penetracin.
Conservar lo ms fielmente la estructura del tejido.
No interferir y facilitar los procesos posteriores.
Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.
Insolubilizar los componentes de los tejidos.
No producir estructuras artificiales.

Mecanismo de accin de los fijadores:


1. Por coagulacin de las protenas, sin combinarse con ellas: alcohol, formol, cido Pcrico,
etc.
2. Formando combinaciones qumicas con las sustancias orgnicas: cido crmico, bicromato
de potasio, de amoniaco, etc.
3. Por reduccin, al contacto con las sustancias orgnicas formando un precipitado fino: cido
smico, bicloruro de mercurio.
4. Por oxidacin: bicromato de potasio.
3- Inclusin
Es impregnar la pieza con una sustancia que le confiere dureza y permite obtener cortes uniformes y
delgados.
En la tcnica corriente, se utiliza la parafina; que es insoluble en agua, est condicionada por la
extraccin de toda el agua del material a incluir. Los pasos de la inclusin son los siguientes:

Deshidratacin y Aclaramiento: Alcoholes crecientes.


Impregnacin en parafina: Es la inclusin propiamente dicha.

Confeccin del taco: Es la inclusin definitiva del trozo de tejido. Se utiliza un molde
metlico especial denominado barras de Leuckart, donde se vierte parafina liquida (60C).

4- Obtencin del corte:


Para obtener cortes finos se utilizan aparatos denominados micrtomos, hay varios tipos.