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BIOQUIMICA

DETERMINACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

INTEGRANTES

BARBOSA PEREZ JUAN GABRIEL


BOLIVAR RANGEL JENIFER
ROJAS VANEGAS NATALIA
TOLOZA CASTRO TAHELIS TATIANA
USTATE MOLINA KEINER

DOCENTE
MARTIN NUEZ

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR


PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA
VALLEDUPAR / CESAR
2016

INTRODUCCION

Las protenas son uno de los principales componentes de todas nuestras clulas. Los
aminocidos (compuestos orgnicos) son los ladrillos de construccin de la protenas. Los
aminocidos se agrupan de acuerdo con su comportamiento qumico.
En esta prctica de laboratorio nos proponemos a realizar y demostrar los diferentes
mtodos para identificar protenas teniendo en cual los mtodos y su distinto
procedimiento.

OBJETIVOS

Reconocer las principales propiedades de las protenas y sus caractersticas.


Entender la estructura y funcionamiento de las clulas.
Conocer las propiedades fsicas y qumicas de los aminocidos.

FUNDAMENTO TEORICO

Los aminocidos son pptidos de peso molecular alto que se encuentran en el protoplasma
de todas las clulas animales y vegetales, pero su composicin es variable segn su origen.
Estos contienen los elementos de C, H, O Y N y a veces otros como el P (nucleoprotena)
Fe (hemoglobina) yodo (tiroglobulina).
Son de naturaleza coloidal, sin puntos de fusin caractersticos; algunas, no obstante se han
obtenido en forma cristalina. Todas son pticamente activas. Son biopolmeros de
aminocidos, de alto peso molecular. En las protenas naturales se encuentran 20
aminocidos diferentes con excepcin de la glicina, todos presentan a nivel del grupo
amino una configuracin (L). En cuanto a tamao las protenas que se clasifican en simples,
las que por hidrolisis producen nicamente aminocidos, pueden ser globulares (albumina)
fibrosas (fibrina de seda) y conjugadas.
Su forma fundamental depende de enlaces peptdicos entre cada par de cidos aminados en
su orden especifico. Las estructura secundaria y terciaria obedecen a otras fuerzas intramoleculares, en particular puente de hidrogeno. Los cambios de propiedades fsicas,
qumicas y biolgicas por ejemplo. Las alteraciones en casos de desnaturalizacin se
acompaan de modificaciones de las fuerzas de unin no covalentes que en ltima instancia
establecen la forma o la geometra de las molculas proteicas.
Dentro de las pruebas cualitativas y cuantitativas para valorar e identificar protenas
tenemos:

Reaccin de la nihidrina
Reaccin de biuret
Reaccin milln
Reaccin xantoproteica
Reaccin sakaguchi
Mtodo van slike
Folin gicolteau
Electroforesis
Cromatografa

PROTEINAS SERICAS
El plasma sanguneo contiene en solucin coloidal una gran cantidad de protenas, siendo
su concentracin aproximada de 7gr/100ml. Mediante tcnicas como la electroforesis se
han clasificado en fracciones o grupos: albumina, alfa, beta, y gamma globulina y
fibringeno. Estas fracciones estn constituidas por un conjunto de protenas caractersticas
fsicos qumicas y semejantes.

Las protenas plasmticas cumplen distintas funciones tales como: nutricin celular, soporte
y vehculo de distintas sustancias (lpidos B12, Fe, Ca) adems intervienen en la
coagulacin sangunea. Al conjunto de protenas del plasma se les denomina protenas
totales, protenas plasmticas o sricas aunque el plasma da resultado ms elevado por la
presencia de fibringeno
Una elevacin de protenas sricas puede encontrarse en caso de:
Deficiencia relativa de agua
Ciertas enfermedades crnicas
Una disminucin de protenas plasmticas puede encontrarse en:
Exceso relativo de agua
Perdida excesiva de protena
Disminucin de la sntesis proteica por deficiencia proteica grave o mala absorcin.

MATERIALES

Gradilla
Trpode
Malla
Balanza
Pipeta
Probeta
Tubos de ensayo
Agitador
Erlenmeyer
Embudo

REACTIVOS

cido clorhdrico
cido ntrico
Acido pcrico
Acido tnico
cido fosfotunstico
Alcohol etlico
Nitroprusiato de sodio
Reactivos de milln y biuret

TECNICAS, PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS

EXPERIMENTO 1: OBTENCION DE LA ALBUMINA


Se prepar una solucin acuosa de albumina de huevo, batiendo la clara de huevo por un
tiempo corto con 5 veces su volumen de agua. Filtramos la mezcla a travs de una tela y
este filtrado se us en los siguientes experimentos.

EXPERIMENTO 2: COAGULACION.
En 5 tubos de ensayos se colocaron porciones de aproximadamente 2 ml de albumina y
realizamos lo siguiente:
TUBO 1: Se calent la porcin de albumina y observamos que se torn de un color
blanco, luego procedimos a agregar 2 gotas de actico diluido y se produjo un burbujeo
y al agregarle la acetona como solvente la albumina se disolvi completamente.
TUBO 2: Se calent la porcin de albumina y se le agrego 2ml de etanol, observamos
que se form un precipitado en medio del tubo y al aadirle las 3 gotas de cetona y
flamearlo el precipitado se esparci por todo el tubo y no solo en el medio como estaba
inicialmente.
TUBO 3: Se calent la porcin de albumina y se le agrego 1ml de solucin de NaOH y
observamos que no hubo reaccin, pero el color de la solucin de albumina se aclar un
poco y al aadirle las 3 gotas de cetona notamos la formacin de un aro en la parte de
arriba del tubo la cual era de color amarillo.
TUBO 4: Se calent la porcin de albumina y se le agrego 1ml de HCl observaos que
inmediatamente la albumina se coagulo y con las gotas de cetona al llevarlo al fuego
este volvi a su estado normal y cuando se enfri quedaron porciones solidas de color
blancos lo que corresponde a la albumina
TUBO 5: Se calent la porcin de albumina y al agregarle 1 ml de HNO3 se observ la
formacin de un precipitado en casi todo el tubo de ensayo y en su interior se torn de
color amarillo y al llevarlo al fuego desapareci el precipitado y toda la mezcla tomo un
color amarillo.

EXPERIMENTO 3: REACCION DEL BIURET.


Se agreg a un tubo de ensayo 3 ml de albumina, 3ml de la solucin de NaOH al 10% 2
gotas de solucin de sulfato de cobre al 1% y se dio un cambio de color. Esta reaccin se
basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un
complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos
del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.

EXPERIMENTO 4: REACCION XANTOPROTEICA


Al agregar a un tubo de ensayo 4ml de solucin de albumina y 2 gotas de cido ntrico
concentrado se form un precipitado color naranja y se observ un reaccin bastante fuerte
debido a la acidez del cido usado.
Cuando se enfri la mezcla se torn un color amarillo fuerte y al agregarle hidrxido de
sodio se produjeron 3 colores diferentes en el tubo, blanco en la parte externa, vino tinto en
la parte central y amarillo en el fondo.

EXPERIMENTO 5: REACCION DE MILLON


En un beaker vaco se agreg agua y se procedi a hervir, luego se coloc dentro de un tubo
dentro de un tubo de ensayo con 3ml de albumina y 5 gotas del reactivo milln y calent
durante 10 min.

Observamos que las gotas hicieron que la mezcla se tornar de un color verde mientras se
terminaba el procedimiento fue tomando un color amarillo y cuando se le agreg 5 gotas de
nitrato se form un precipitado y cambio de color a blanco lechoso.
EXPERIMENTO 6: DESNATURALIZACION
cidos fuertes:
A un tubo de ensayo se le agrego 1ml de solucin de albumina al 5% y se le adicion 1 ml
de cido tricloroacetico y se observ la formacin de un precipitado denso y blanco y en la
parte inferior color cristalino
Iones metlicos pesados:
A un tubo de ensayo se le agrego 1 ml de solucin de albumina al 5% mas 5 gotas de
solucin de nitrato de plata y hubo una desnaturalizacin total dando como resultado un
color blanco lechoso.

EXPERIMENTO 7: PRECIPITACION DE ALCALOIDES


En 3 tubos de ensayo que contengan 2 o 3 ml de albumina agregar al primero una gota de
cido pcrico, se observ que no se disolvi, se aglutino luego de unos minutos se disolvi
y dio un color amarillo. Hubo un burbujeo y el color se fue aclarando al final se precipita la
mezcla.
En el segundo tubo se le agreg cido tnico y se form un precipitado al inicio pero al
pasar los minutos se disolvi completamente.
Al tercer tubo se le agrego cido fosfotugstico lo que ocasion un precipitado color crema y
luego se disuelve uniformemente.

PREGUNTAS

1. Qu es la desnaturalizacin de una protena y cul es la estructura responsable,


diga por lo menos cinco agentes desnaturalizacin de las protenas?
Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden
superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena poli peptdica
reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.
Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este
motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible ya que es la estructura

primaria la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles


superiores de estructuracin
Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se llaman agentes
desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y qumicos (detergentes,
disolventes orgnicos, pH, fuerza inica). Como en algunos casos el fenmeno de la
desnaturalizacin es reversible, es posible precipitar protenas de manera selectiva
mediante cambios en:
la polaridad del disolvente
la fuerza inica
el PH
la temperatura
2. Cules son los principales componentes de las distintas fracciones proteicas?
Albmina, es la protena ms abundante en el plasma; su contenido es de 4.5 g/dl, su
PM es de 69,000 daltons y comprende cerca de 60% de la protena plasmtica total.
De la albmina corporal extracelular, 40% est en el plasma y 60% en los espacios
extracelulares. El hgado produce alrededor de 12 g de albmina por da, lo cual
representa alrededor de 25% de la sntesis proteica heptica total. Al principio, la
albmina se sintetiza como una preproprotena (prealbmina). Su pptida seal se
desprende conforme pasa a las cisternas del RER. La sntesis de albmina se deprime
en diversas enfermedades, en particular las hepticas. El plasma de pacientes con
enfermedad heptica a menudo muestra una proporcin baja albmina/globulina. La
sntesis de albmina se reduce pronto en estados de desnutricin proteica, como
kwashiorkor. La albmina humana madura consiste en una cadena poli peptdica de
585 a.a. y contiene 17 enlaces disulfuros. La forma de la molcula completa es
elipsoidal, lo que significa que no aumenta la viscosidad del plasma tanto como la
molcula alargada del fibringeno. Debido a su PM relativamente bajo y a su elevada
concentracin, se piensa que la albmina es responsable del 75 a 80% de la presin
osmtica del plasma humano. Estudios electroforticos han mostrado que el plasma de
algunas personas carece de albmina: analbuminemia (deficiencia congnita); ellos
slo presentan un edema moderado, por lo que es probable que la cantidad de otras
protenas plasmticas aumente para compensar la falta de albmina.
Antitripsina, es el componente principal de las a 1-globulinas (PM aprox. 52,000), que
tiene la capacidad de combinarse e inactivar la tripsina. Generalmente, no existen
cantidades apreciables de tripsina circulando en la sangre, pero otras proteasas
relacionadas, como la elastasa, son liberadas de los leucocitos en respuesta a
inflamacin. La AAT es capaz de neutralizar la actividad de estas proteasas, y por lo
tanto constituye un factor intrinseco en el mecanismo homeosttico modulando la
proteolisis endgena dentro del organismo y previniendo severas respuestas
bioqumicas inapropiadas a la inflamacin. Por consiguiente, la AAP es una de las
glucoprotenas sricas que aumenta en respuesta a una inflamacin aguda, aaunque

tales incrementos carecen de especificidad clnica. La fraccin a 1 nunca desaparece


en una deficiencia de AAT (aunque s disminuye en pacientes con enfisema
pulmonar), porque otras proteinas (a -lipoproteina, a 1-glicoprotena cida) migran all
sin resolverse en bandas distintas.
Macroglobulina, la AMG es una de las protenas plasmticas ms grandes del plasma,
con un PM de 750,000 daltons. Las concentraciones sricas son similares a la de la
AAT, aunque las mujeres poseen valores ms altos que los hombres, en respuesta a los
estrgenos. La concentracin de AMG aumenta 10 o ms veces en el sndrome
nefrtico, cuando se pierden otras protenas de menor PM. La prdida de AMG en la
orina se evita por su gran tamao. El resultado neto es que la AMG alcanza niveles
sricos iguales o incluso ms grandes que la albmina (2 a 3 g/dl) en el sndrome
nefrtico. La AMG inactiva proteasas de varios tipos formando complejos con ellas en
forma covalente; con ello se altera su propia conformacin, lo cual incrementa la
accin depuradora del sistema reticuloendotelial.
Haptoglobina, corresponde a una de las principales protenas que migran en la regin
a 2.Es una glicoprotena plasmtica que se une a hemoglobina extracorpuscular en un
complejo no covalente firme (Hb-Hp). Alrededor de 10% de la Hb que se degrada
cada da es liberada a la circulacin (extracorposcular), es decir, por lisis de
eritrocitos. Estos complejos Hb-Hp son removidos de la circulacin dentro de minutos
por el sistema reticuloendotelial, donde primero se degrada la Hb en globina y hem, el
cul es posteriormente degradado en hierro y bilirrubina.
Lipoprotena (LDL) Transferrina: Es la principal b -globulina, que transporta iones
frricos desde los lugares de almacenamiento de hierro (ferritina intracelular o
mucosal) hacia la mdula sea, donde los precursores de eritrocitos y linfocitos tienen
receptores de transferrina en sus superficies. La transferrina consiste en 687 a.a. con
un PM aprox. de 80,000 Dalton. Posee 2 dominios homlogos, cada uno de los cuales
tiene un sitio de unin con alta afinidad por el hierro. La concentracin srica normal
de la transferrina oscila entre 200 a 400 mg/dl. La transferrina srica se incrementa
marcadamente en respuesta a deficiencias temporales de hierro, y retorna a valores
normales luego de la administracin del catin.
Ferritina: otra protena importante en el metabolismo del hierro. En
condiciones normales almacena al hierro de modo que pueda liberarse para
uso cuando la situacin lo requiera. En estados de exceso de hierro (por ej.
hemocromatosis), su reserva corporal aumenta de manera notable y mucho
ms ferritina se encuentra en tejidos como hgado y bazo. La ferritina
contiene alrededor de 23% de hierro y la apoferritina tiene un PM aprox. de
440,000. En condiciones normales el plasma contiene escasa ferritina, pero
puede aumentar bastante en pacientes con exceso de hierro.
3. Cules son los principales mtodos de protena totales?

Mtodo de Biuret: Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+


y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con
4 NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de
protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que
pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se
recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados (por
ejemplo en suero).

Mtodo de Bradford: Se basa en la unin de un colorante, Comassie Blue G-250


(tambin Serva Blue) a las protenas. El colorante, en solucin cida, existe en dos
formas una azul y otra naranja. Las protenas se unen a la forma azul para formar un
complejo protena-colorante con un coeficiente de extincin mayor que el colorante
libre. Este mtodo es sensible (1-15 g), simple, rpido, barato y pocas sustancias
interfieren en su determinacin. Entre las sustancias que interfieren estn los
detergentes y las soluciones bsicas.
Mtodo de BCA: El cido bicinconnico, sal sdica, es un compuesto capaz de
formar un complejo prpura intenso con iones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo
forma la base de un mtodo analtico capaz de monitorizar el ion cuproso producido
en una reaccin entre las protenas con Cu2+ en medio alcalino (reaccin de Biuret).
La estabilidad del reactivo y el cromforo proporciona un mtodo para la
cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy sensible, y que muestra una
gran tolerancia a compuestos que afectan a otros mtodos.
4.

Indique la estructura del complejo que se forma en la reaccin del biuret.

La prueba de Biuret nos permite detectar compuestos que poseen dos o ms enlaces
peptdicos. Cuando estas sustancias se tratan con soluciones de sulfato de cobre disuelto en
solucin alcalina (Reactivo de Biuret), dan un color violeta caracterstico. El color
desarrollado es debido aparentemente al
complejo de coordinacin formado entre el
teme de cobre del Reactivo de Biuret, y
cuatro tanos de nitrgeno peptdicos
presentes en las cadenas peptdicas.

La intensidad del color generado es una


medida cuantitativa del nmero de enlaces
peptdicos presentes en la molcula. Esta
prueba no es especifica exclusivamente para
detectar enlaces peptdicos, ya que cualquier compuesto que contenga dos grupos
carbonilos unidos por un tono - de nitrgeno o de carbono, da tambin un resultado

positivo, as , el compuesto conocido como biuret (H2NeO- NH-OQNH2) da una reaccin


positiva.

5. Cules son los principales mtodos de determinacin de protena srica.


Procedimientos turbidimtricos
a) cido sulfosaliclico ms sulfato sdico
b) cido tricloroactico (TCA)
Espectrofotometra ultravioleta a 210 mn despus de:
a) Cromatografa en columna.
b) Ultrafiltracin
Mtodos de Lowry utilizando el reactivo de Folin-Ciocalteau
a) Con blanco
b) Sin blanco
Procedimientos modificados del biuret con medicin a 300 nm5.
Mtodos inmunolgicos
6. cul es la funcin y estado natural del glutatin.
RTA: Los Papeles del Glutatin
La ciencia mdica ha descrito literalmente docenas de funciones que desempea el
glutatin en nuestro cuerpo. Sin embargo, los papeles principales del glutatin pueden ser
resumidos en el acrnimo siguiente:
A R D = E2
Estas letras quieren decir:
Antioxidante
Refuerzo Inmunolgico
Desintoxicante
Energa
A Su Antioxidante Maestro
Durante los ltimos treinta aos, los avances en el estudio de los antioxidantes han llegado
al punto de desarrollar una nueva rama de la medicina llamada Biologa de los Radicales

Libres, la cual se concentra en el balance entre los oxidantes y los antioxidantes. Los
cientficos han profundizado en varios cientos de procesos patolgicos diferentes en las que
los antioxidantes desempean una funcin de vital importancia. Los anaqueles de las
tiendas de alimentos naturistas y las farmacias estn llenos de una amplia gama de
productos antioxidantes. Sin embargo, a pesar de que estos antioxidantes, incluyendo la
vitamina C y la E, son generalmente naturales, stos no son naturales para su cuerpo. Si
usted ingiere estas vitaminas, stas no se encontrarn en sus clulas naturalmente. Debido a
la importancia de los antioxidantes en cientos de procesos patolgicos, uno se hace la
pregunta: Cul es el antioxidante que nuestro cuerpo produce para defenderse de estos
procesos? El glutatin es el antioxidante ms abundantemente producido en nuestro
cuerpo. De hecho, la presencia de esta pequea protena es crucial para el funcionamiento
de todos los dems antioxidantes que conocemos, haciendo que esto le otorgue el ttulo de
Antioxidante Maestro.
I Alimento para el Sistema Inmunitario
Su sistema inmunolgico est en la bsqueda constante de patgenos y antgenos externos
(agentes que daan las clulas y provocan toxicidad y enfermedad). Estos antgenos
incluyen a los virus, bacterias, parsitos, hongos e incluso clulas pre-cancergenas. Para
neutralizar estos patgenos, el cuerpo necesita reservas listas de glutatin ya que si no
cuenta con una cantidad suficiente, los invasores pueden penetrar infectando el cuerpo y/o
contribuyendo al envejecimiento, a daos acumulativos a largo plazo y hasta a un posible
cncer. No podemos evitar enfermarnos y envejecer al mismo tiempo (aunque algunos
cientficos siguen detrs del viejo sueo de evitar el envejecimiento) pero slo manteniendo
altos nuestros niveles de glutatin intercelulares vamos a mantener nuestro sistema
inmunolgico en completa alerta y completamente armado. El Dr. Gustavo Bounous,
descubridor de Immunocal, se ha enfocado en el glutatin como respaldo al sistema
inmunolgico. El factor limitante para la actividad adecuada y la multiplicacin de los
linfocitos (glbulos blancos) es el grado de disponibilidad del glutatin. La investigacin
del Dr. Bounous en la Universidad McGill ha engendrado en todo el mundo otras
numerosas investigaciones que examinan este fenmeno.
D Sistema de Desintoxicacin
El sistema de enzimas del GSH elimina miles de toxinas, incluyendo productos de
degradacin de las drogas, contaminantes, cancergenos y daos por radiacin. Es bien
sabido que las concentraciones ms altas de GSH se encuentran en el hgado, el principal
rgano desintoxicante del cuerpo. El ser humano inhala e ingiere diariamente toxinas
naturales y sintticas y no hay manera de evitarlo, especialmente en estos tiempos
modernos, con nuestras ciudades congestionadas y contaminadas y nuestros alimentos
modificados genticamente. Algunos estudios experimentales han demostrado que los bajos
niveles de glutatin generan un funcionamiento deficiente del hgado y el rin
ocasionando que grandes cantidades de toxinas circulen por el cuerpo. Una vez all, daan
continuamente clulas y rganos individuales. La lista de toxinas eliminadas incluye el
humo de cigarrillo, las emisiones de los automviles y metales pesados. Normalmente, los

mdicos emplean medicamentos para aumentar los niveles de glutatin en enfermedades


crticas como en la sobredosis de acetaminofn y en el funcionamiento inadecuado severo
del hgado.
E2 Llnese de Energa Usted Mismo
Nuestras clulas son como pequeas mquinas que funcionan las 24 horas del da. De
dnde proviene esta energa para alimentar esta actividad constante? La respuesta es
bastante complicada pero la ciencia ha identificado estructuras diminutas entre nuestras
clulas llamadas mitocondrias que dentro de la clula funcionan como bateras
minsculas. Al igual que cualquier fuente de energa, el resultado inevitable es la creacin
de productos de desecho. Literalmente, la mitocondria quema oxgeno y tiene como
consecuencia sobrecargas y daos, y se encuentran limitadas en su habilidad para continuar
funcionando a menos que se eliminen los productos de degradacin como los oxirradicales.
La sustancia principal producida por la clula para mantener el buen estado y eficiencia de
la mitocondria es el glutatin. Esto se traduce en una mayor energa y fuerza. Por estos
motivos, el aumento de los niveles de glutatin se ha convertido en el centro de atencin de
muchos estudios desde la medicina deportiva hasta la de tratamientos para el
rejuvenecimiento.
Qu Provoca la PRDIDA de Glutatin (GSH)?
Todos los das, nuestro cuerpo est expuesto a factores que hacen disminuir nuestros
niveles de glutatin: el estrs, la contaminacin, la radiacin, las infecciones, los
medicamentos, las dietas deficientes, el envejecimiento, las lesiones y la fatiga. Todo esto
contribuye a la reduccin del glutatin y esto, a su vez, lleva al envejecimiento celular,
enfermedad y muerte. La preocupacin por mantener los niveles de glutatin pronto va a
estar a la par con el mantenimiento de otros aspectos de la salud., comenta el Dr. Bounous.
Investigaciones sobre el Glutatin
Durante los ltimos veinte aos, el volumen de las investigaciones sobre el GSH ha
aumentado inmensamente. Una gran variedad de documentos tericos, importantes
experimentos de laboratorio, estudios epidemiolgicos, proyectos animales y, lo ms
importante, pruebas clnicas con humanos, han relacionado los bajos niveles del glutatin
con una variedad impresionante de enfermedades. Si no fuera por el peso y la credibilidad
de las investigaciones, los escpticos podran poner en duda la extensin de esta lista.
7. Que es cromatografa de intercambio inico, de exclusin molecular, de adsorcin
de particin, de afinidad.
RTA: La cromatografa puede definirse como una tcnica que separa una mezcla de solutos
basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser
arrastrados por una fase mvil (lquida o gaseosa) a travs de un lecho cromatogrfica que
contiene la fase estacionaria, la cual puede ser lquida o slida. Las propiedades de los
componentes de una mezcla determinan su movilidad entre s y con respecto a la fase

mvil. La base de la separacin cromatogrfica ser, por tanto, la diferencia en la migracin


de los mismos.
Clasificacin de la Cromatografa
Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrfica, segn su fase mvil se
clasifica en Cromatografa de gases que puede ser a travs de dos sistemas, gas- lquido y
gas-slido y Cromatografa lquida donde el eluente es un lquido y puede ser lquidoliquido, liquido-slido. Por el mecanismo de retencin-separacin, es decir el tipo de
equilibrio implicado en la transferencia de los solutos entre las fases se encuentra la
Cromatografa de reparto, de adsorcin y de exclusin. Segn la forma de contacto entre las
fases se denomina de columna o superficie plana. Tambin se puede clasificar teniendo en
cuenta la fase estacionaria, la dimensionalidad, escala fsica y gradientes.
Cromatografa de intercambio inico.
La Fase Estacionaria es una resina de intercambio inico que contiene grupos cargados,
teniendo la propiedad de separar especies ionizadas (Cationes o Aniones); la Fase Mvil es
generalmente una solucin amortiguadora de pH. En protenas la cromatografa de
intercambio inico se basa en las diferencias en signo y magnitud de la carga elctrica neta
de las protenas a un valor de pH determinado. La afinidad de cada protena a los grupos
cargados de la columna esta influenciada por el pH y por la concentracin de iones en
solucin (concentracin salina) que compiten con la protena en la interaccin con la
matriz. La separacin de la protena de la matriz cargada puede obtenerse gradualmente
cambiando el pH y/o la concentracin salina de la fase mvil, de tal forma que se genere un
gradiente de concentracin.

Cromatografa de Afinidad.
La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas proteicas por su afinidad o
capacidad de unin a un determinado ligando. En este caso, las protenas que se retienen en
la columna son aquellas que se unen especficamente a un ligando que previamente se ha
unido covalentemente a la matriz de la columna. Despus de que las protenas que no se
unen al ligando son lavadas o eluidas a travs de la columna, la protena de inters que ha
quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una solucin que
contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interaccin entre el ligando y la
protena.

8. como se clasifican las protenas urinarias totales


RTA: Las protenas totales de nuestro organismo son un conjunto de compuestos orgnicos
macromoleculares, de un peso molecular elevado, que estn formadas por molculas
llamadas aminocidos que se unen entre s por enaces peptdicos. La secuencia con la que

estos aminocidos se encadenan y el nmero de cadenas de aminocidos, determinan cul


es la estructura primaria de las protenas.
Las protenas son introducidas en el organismo a travs de los alimentos, donde se se
dividen enaminocidos para formar posteriormente las nuevas protenas a travs del
proceso conocido como sntesis de protenas. Las protenas realizan multitud de funciones
en nuestro organismo para su correcto funcionamiento.

Las protenas totales son el resultado de sumar los distintos componentes proteicos
presentes en el organismo tales como: Alfa1, alfa2, beta gamma globulina y albmina. Las
protenas fraccionadas, al contrario que que las protenas totales, miden la cantidad
especfica de cada protena. Ambas pruebas, protenas totales y fraccionadas, son tiles a la
hora de determinar estados anormales y enfermedades que pueden afectar a nuestro
organismo.
Enfermedades relacionadas con las protenas totales
Las protenas totales son tiles a la hora de realizar el seguimiento de los cambios en los
niveles de protenas que causan diversos estados de enfermedad. Generalmente la
comprobacin de las protenas totales se realiza junto con otras pruebas como la
electroforesis de protenas, la seroalbmina o las pruebas de la funcin heptica. La
determinacin de los niveles de protenas totales es til en la deteccin de: Hipoproteinemia
causada por deshidratacin, hemoconcentracin o aumento en la concentracion de protenas
especficas.
Hipoproteinemia por hemodilucin producida por un defecto en la realizacin de la sntesis
proteica, catabolismo proteico excesivo o perdidas excesivas (hemorragias).
La deshidratacin, las enfermedades hepticas crnicas y el mieloma mltiple son estados
que pueden producir niveles altos de protenas totales.
El descenso de los niveles de protenas totales es propio del fallo heptico terminal y de la
enfermedad renal.
Con frecuencia se calcula una proporcin de albumina/globulina a fin de obtener
informacin adicional. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
datos clnicos y de laboratorio.
Valores normales de protenas totales
El rango normal de protenas totales es de 6.0 a 8.3 gm/dl (gramos por decilitro). La
cantidad considerada como valor normal de protenas totales puede variar ligeramente entre
pruebas realizadas por distintos laboratorios.

CONCLUSION

Al finalizar los diferentes experimentos realizados en la prctica hemos adquirido


conocimiento acerca de las caterticas de las protenas y cmo reaccionan estas a ser
sometidas a distintos mtodos.
Adems se cumpli con los objetivos planteados al iniciar esta prctica ya que aprendimos
a reconocer las caractersticas y propiedades principales de este biocompuesto.

BIBLIOGRAFIA

Mara Luisa Salve, Silvia Amich, Santiago prieto, Antonio Casa, manuela de laboratorio
clnico bsico bioqumica, Ed. Mc. Graw Hill SA

David T. Plummer: introduccin a la bioqumica prctica, primera edicin: Mc Graw Hill


SA