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Briones Byron

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Prctica de laboratorio N 13

Tema: Factores que afectan a la reaccin enzimtica.


Objetivo: Medir la cantidad de oxigeno liberado del agua oxigenada por reaccin
de la catalasa del hgado de pollo.
Variables:

Variables independientes:
Concentracin del agua oxigenada de 10V y 20V, el tiempo
Variable dependiente:
Volumen de O2 liberado en un tiempo fijo.
Variables controladas:
Volumen de agua oxigenada en ml, masa del hgado en gr, temperatura
ambiente

Marco terico:
Las enzimas
Conocemos como enzimas a las
molculas proteicas que controlan las
reacciones bioqumicas. Establecen procesos en movimiento y los aceleran. Por
eso se denominan biocatalizadores. Durante la transformacin del material
biolgico, las enzimas no se consumen y, como consecuencia de ello, al final de la
reaccin la enzima se mantiene en su forma original.
Estructuralmente todas las enzimas estn compuestas de aminocidos. Todos los
componentes proteicos de nuestro organismo se originan a partir de los mismos
20 aminocidos y la secuencia especfica de aminocidos determina la estructura
espacial de la enzima.
La secuencia de numerosas enzimas y protenas constituye la informacin
gentica en el ADN. Vistas con el microscopio, las enzimas parecen actuar de una
forma desorganizada pero la aparente alteracin tiene un mtodo: los enlaces
entre las cadenas de aminocidos de la enzima (puentes peptdicos) determinan
cmo una cadena de aminocidos se curva y qu aspecto adopta finalmente la
enzima. Las enzimas contienen componentes que no son aminocidos,
denominados cofactores. Un ejemplo de cofactor es una vitamina. Sin dicha
vitamina, algunas enzimas no son capaces de funcionar correctamente. Cuando
esto sucede, se habla de un trastorno metablico.

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Caractersticas de las enzimas


Las caractersticas de las enzimas, entre las ms importantes:

Las enzimas suelen ser muy especficas y catalizan, cuando mucho, unas
cuantos tipos de reacciones qumicas. Casi siempre, una enzima cataliza un
solo tipo de reaccin, en la que intervienen molculas especficas, pero que no
afecta a otras molculas similares.
En muchos casos, la actividad enzimtica est regulada (es decir, se
intensifica o se suprime) por retroalimentacin negativa que controla con
rapidez a la que las enzimas sintetizan o descomponen molculas biolgicas.
La Catalasa y Perxido de Hidrgeno

La catalasa es un enzima perteneciente a la categora de las oxidorreductasas que


cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H2O2) en oxgeno y agua.
Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.

El perxido de hidrgeno es un residuo del metabolismo celular de muchos


organismos vivos y tiene entre otras una funcin protectora contra
microorganismos patgenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad
debe transformarse rpidamente en compuestos menos peligrosos. Esta funcin la
efecta esta enzima que cataliza su descomposicin en agua y oxgeno.
El perxido
de
hidrgeno (H2O2),
tambin
conocido
como agua
oxigenada, dioxogen o dioxidano, es un compuesto qumico con caractersticas de
un lquido altamente polar, fuertemente enlazado con el hidrgeno tal como el
agua, que por lo general se presenta como un lquido ligeramente ms viscoso
que sta. Es conocido por ser un poderoso oxidante.
A temperatura ambiente es un lquido incoloro con sabor amargo. Pequeas
cantidades de perxido de hidrgeno gaseoso se encuentran naturalmente en el
aire. El perxido de hidrgeno es inestable y se descompone lentamente en
oxgeno y agua con liberacin de calor. Su velocidad de descomposicin puede
aumentar mucho en presencia de catalizadores. Aunque no es inflamable, es un
agente oxidante potente que puede causar combustin espontnea cuando entra
en contacto con materia orgnica o algunos metales, como el cobre, la plata o el
bronce.

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Factores que afectan a la Actividad Enzimtica

Efecto del pH. La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su
actividad es mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye
bruscamente. Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza
proteica, al igual que otras protenas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el
pH vara ms all de unos lmites estrechos. De ah la conocida importancia
biolgica de los sistemas tampn. En la mayor parte de los casos el pH ptimo
est prximo a la neutralidad, en consonancia con el pH intracelular, pero existen
enzimas con pH ptimo muy diverso segn sea el pH del medio en el que
habitualmente actan (los enzimas proteolticos del jugo gstrico tienen pHs
ptimos prximos a 2 ya que este es el pH de dicho jugo). Por ltimo existen
algunos enzimas a los que el pH no afecta en absoluto.
Efecto de la temperatura: Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones
qumicas, la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se incrementa
con la temperatura. La variacin de la actividad enzimtica con la temperatura es
diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera de energa de
activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que
Concentracin del sustrato: En toda reaccin catalizada por un enzima, si se
mantiene constante la concentracin del sustrato, la velocidad de la reaccin
aumenta exponencialmente al incrementarse la concentracin del sustrato, ya que
al existir ms molculas de sustrato es ms probable el encuentro con el enzima y
la formacin del complejo e-s. Este aumento de velocidad es rpido para
concentraciones bajas de sustrato y, a medida que este aumenta, se va haciendo
ms lento hasta que la concentracin del sustrato alcanza un cierto valor, a partir
del cual, aunque aumente la concentracin del mismo, no aumenta la velocidad de
la reaccin. Esto es debido a que el enzima est saturada por el sustrato; es decir,
todas las molculas del enzima estn unidas al sustrato formando el complejo e-s.
Cuando ocurre esto, se dice que la reaccin ha alcanzado la velocidad mxima.
Inhibidores: Existen una serie de sustancias, llamadas inhibidores, que inhiben o
anulan la accin de los enzimas sin ser transformados por ellos. Su estudio resulta
de gran utilidad a la hora de comprender los mecanismos de catlisis, la
especificidad de los enzimas y otros aspectos de la actividad enzimtica. La
inhibicin enzimtica puede ser irreversible o reversible, esta ltima comprende a
su vez tres tipos: inhibicin competitiva, a competitiva y no competitiva.

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Materiales:

Una gradilla
Pares de guantes
Un bistur
Una tabla de picar
Un marcador
Un tapn de caucho
Agua oxigenada (de 10vol. Y de 20vol.)
Un recipiente de vidrio
Una pipeta
Un soporte universal
Doble nuez
Una manguera pequea
Un matraz
Una probeta
Un ampolla de decantacin
Una balanza triple tabln
Un baln de decantacin
6 tubos de ensayo
3 vasos de precipitacin
Un cronometro
6 hgados de pollo (8.30g - 8.50g)
6 pedazos de papel platino
1 cronmetro

Procedimiento:
1. Con la ayuda del bistur cortar el hgado de pollo en trozos y pesarlos en
la balanza.
2. Anotar el peso que puede variar entre 8,30g y 8,50g por cada pedazo.
3. Medir la cantidad de H2O2 (20 ml) en una probeta y depositarla en la
ampolla de decantacin.
4. Poner un trozo de hgado de pollo en el baln de decantacin y taparlo
e introducir la ampolla de decantacin.
5. Conectar el tubo de desprendimiento con la manguera, la misma que
llegara a la cuba de hidrodinmica con agua (de la llave).
6. Llenar el tubo de ensayo con agua de la llave taparlo con el dedo pulgar
e invertirlo dentro de la cuba.
7. Dejar caer el H2O2 sobre el hgado de pollo.

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8. Recoger las burbujas de O2 con el tubo de ensayo invertido y lleno de


agua. El O2 desplazara el agua. Cada 5 segundos sealar con el
marcador la cantidad de O2 obtenido, hasta llenar el tubo de ensayo.
9. Se retira el tubo de ensayo y se llena de agua el tubo, hasta las marcas
que se haban hecho con el marcador, por cada marca se toma la
cantidad en ml. Y se anotar.
10. Se repetir el procedimiento tres veces con H 2O2 de 10 volmenes y tres
veces con 20 volmenes.
Obtencin de datos brutos:
Tabla N1: Volumen de O2 /ml obtenido por la reaccin de la enzima catalasa
con el (H2O2) de 10 v. en un tiempo de 0-85seg.

Incertid
umbres: error al marcar el tubo de ensayo debido a su inclinacin al momento de atrapar las burbujas.
Datos cualitativos:
- La reaccin del (H2O2) con el hgado de pollo liber una reaccin exotrmica, pues se calent
moderadamente el baln de destilacin.
-El hgado de pollo cambi de color a un color blanquecino en las tres tomas.
-El tubo de ensayo se llen de oxgeno antes de los 85 segundos. E incluso despus de este
tiempo segua produciendo oxgeno.

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Tabla N 2
Volumen de O2 /ml obtenido por la reaccin de la enzima catalasa con el
H2O2 de 20 vol. en un tiempo de 0-85seg.

Incertidumbres: error al marcar el tubo de ensayo debido a su inclinacin al momento de atrapar las
burbujas.
Datos cualitativos:
- La reaccin del (H2O2) con el hgado de pollo liber una reaccin exotrmica, pues se calent el
baln de destilacin.
-El hgado de pollo cambi de color a un color blanquecino en las tres tomas.
-El tubo de ensayo se llen de oxgeno antes de los 85 segundos. E incluso despus de este
tiempo segua produciendo oxgeno.

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Procesamiento de Datos:
Tabla N3: Frecuencia acumulada del volumen de O2 /ml obtenido por la
reaccin de la enzima catalasa con el (H2O2) de 10 v. en un tiempo de 085seg.

Tabla N4: Frecuencia acumulada del volumen de O 2 /ml obtenido por la


reaccin de la enzima catalasa con el (H2O2) de 20 v. en un tiempo de 085seg.

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Tabla N5: Media del volumen de O2 liberado por la reaccin entre la enzima
catalasa (el hgado de pollo) y agua oxigenada de 10V y 20V

Presentacin de datos:

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Grafica N 1: Presentacin del promedio del volumen de O2 /ml obtenido por la


reaccin de la enzima catalasa con el H2O2 de 10 vol. y 20vol. En un tiempo de 0-85s.
10
9
8
7
6
5

Con H2O2 de 10V

Con H2O2 de 20V

3
2
1
0
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 80 85