Prctica 1:

El Microscopio ptico.
Observacin
Microscpica de los
Organismos

Tipos de microscopios
Microscopio ptico

Microscopio electrnico

Campo luminoso

de Transmisin (TEM)

Campo oscuro

de Barrido (SEM)

Contraste de fases
Interferencia
Fluorescencia
Polarizacin

Microscopio de ca mpo luminoso

! El campo de observacin se encuentra iluminado; los
microorganismos aparecen ms oscuros que el fondo
debido a que absorben luz.
! Partes del microscopio ptico.
! Amplificacin: La amplificacin de un microscopio es el
producto de nmero de aumentos del objetivo por los del
ocular. Aumentos tiles: x1000 a x2000
! Poder de resolucin: capacidad de una lente para
mostrar dos objetos muy cercanos como distintos,
discretos y separados.
! Apertura Numrica (AN): expresin matemtica que
describe la forma en que la luz es concentrada por el
condensador y captada por el objetivo. AN = n x sen

n = ndice de refraccin del medio entre las lentes y la muestra

(1.0 para el aire; 1.56 para el aceite de inmersin).
= ngulo formado por el eje ptico y los rayos de luz ms
externos que son captados por el objetivo

Microscopio de ca mpo luminoso

! Lmite de resolucin (d): distancia ms pequea por
la cual dos objetos pueden estar separados y ser
todava distinguibles como dos objetos separados.
" d, depende de la AN y de la longitud de onda de la luz
empleada:
d = / (AN obj + AN cond) = / (2AN)
" Formas de reducir el lmite de resolucin:
#Disminuyendo la longitud de onda.
#Aumentando la Apertura Numrica.

" El lmite de resolucin mximo que se consigue en

los microscopios de campo luminoso se sita en
0.22-0.25 m.

Microscopio de ca mpo luminoso

! rea de campo: dimetro de la parte de la preparacin
que se est viendo al microscopio.
! Profundidad de campo: espesor de la preparacin
enfocada en cualquier momento (mayor a pequeos
aumentos).
! Distancia focal: es la relacin existente entre la
longitud del tubo del microscopio empleado y la
amplificacin usada en un momento dado.

Longitud del tubo

DF =
Amplificacion
! Distancia de trabajo: espacio existente entre el punto
ms bajo del objetivo y el objeto enfocado.
! Caractersticas de los objetivos. Resumen.

Observacin de muestras
al microscopio ptico

Epidermis de cebolla
Hoja de musgo
Pulpa de tomate

Microscopa de cam po luminoso

Profase

Anafase
Metafase

Telofase
Micrografa de un squash de
meristemo apical radical de
cebolla teido con orcena
mostrando distintas fases de la
mitosis.

Oculares
Portaobjetos cruzado acoplable
Brazo
Tubo binocular
Revolver
Objetivos
Platina portaobjetos
Condensador
Mandos movimiento de la platina
Diafrag ma iris
Filtro
Iluminacin por proyeccin
Base o pie
Mandos de ajuste fino y grueso

Fotografa del cabezal binocular de un microscopio.

Vista lateral del revolver con los objetivos enroscados

Vista inferior del revolver, pieza donde se

enroscan los objetivos de un microscopio.

Fotografa de la platina. Se observan la

platina mvil, los tornillos de
movimiento de la platina mvil, y los
tornillos macro y micromtrico.
Objetivos
Platina mvil

Condensador

Platina

Fuente luminosa

Tornillos macro y
micromtrico

Tornillos de movimiento de la platina mvil

Platina mvil

Platina

Condensador
Fuente luminosa

Tornillos de movimiento de la platina mvil

Fotografa lateral de la platina. Se

observan la platina mvil, los tornillos
de movimiento de la platina mvil, y
los tornillos macro y micromtrico.

Tornillos macro y
micromtrico

Platina
Condensador

Diafragma iris

Fuente luminosa

Detalle del condensador y la

fuente luminosa.

Tornillos de movimiento de la platina mvil

Amplificacin en un sistema de dos lentes

Imagen
virtual
Imagen real
formada por
el objetivo
Ocular (invertida)

Ojo

Condensador

Objetivo

Muestra

Refraccin de la luz a travs del

aire y del aceite de inmersin-1

Eje ptico

Rayos de luz
refractados
Lente objetivo
Portaobjetos
Aceite

Condensador

Aire

Refraccin de la luz a travs del

aire y del aceite de inmersin-2

Rayos de luz refractados

Eje ptico
Lente objetivo
Cubreobjetos
sobre la muestra
Portaobjetos
Condensador

Aire

Aceite

La apertura numrica
Eje ptico

Objetivo del
microscopio

Lente frontal del objetivo

Lente frontal del objetivo

= ngulo que forman

el rayo de luz ms
externo captado por
el objetivo y el eje
ptico del mismo.

Porta de vidrio

Fuente de luz

Determinacin de la apertura numrica

AN = n x sen

= 58
= 40

Ejemplos:
Objetivo seco:
AN = 1.00 x sen 40
AN = 0.64 (<1)
Objetivo de inmersin:
AN = 1.52 x sen 58
AN = 1.29 (>1)

n = 1.52

Aire, n = 1
Porta de vidrio
Aire, n = 1

Aceite, n = 1.52
n = 1.52
Aire, n = 1

Poder de
resolucin

El ojo humano puede separar puntos

distantes 0.25 mm
0.25 mm

El microscopio ptico puede separar

puntos de 0.25 m de separacn
0.25 m

El microscopio electrnico puede separar puntos de una distancia inferior a 5

unidades Angstrom.
5A

Profundidad de campo
P.c.
10x

1 m
P.c.

7 m

1.3 m

40x

1 m

P.c.
0.5 m

100x

1 m

rea de campo
Aspecto del rea de campo de una muestra. Observar
como a medida que la amplificacin aumenta, el objeto
tambin lo hace, pero el rea del campo disminuye.

x4

x10

x40

3.5 mm

1,5 mm

0.35 mm

Los objetivos

Aumentos: x 5, x10, x20, x45, x100

Apertura Numrica: 0.12, 0.17, 0.54,
0.65, 1.3
Longitud del tubo: 160 mm
Grosor del cubreobjetos: 0.18 mm

Caractersticas tpicas
de los objetivos
Seco de pocos
aumentos
(10 x)

Objetivos
Seco de muchos
aumentos
(40 x)

De inmersin
(100 x)

Amplificacin
(con un ocular de 10 x)
Distancia focal

100 aumentos
16 mm

400 aumentos
4 mm

1000 aumentos
1.8 mm

Distancia de trabajo

4 - 8 mm

0.2 - 0.6 mm

0.11 - 0.16 mm

Apertura Numrica

0.25

0.85

1.25

Lmite de resolucin

1.10 m

0.32 m

0.22 m

Profundidad de campo

7.0 m

1.3 m

0.5 m

rea de campo

1.5 mm

0.35 mm

0.17 mm

Portaobjetos

Imagen 1

Gota de agua

Imagen 2

Epidermis

Imagen 3

Imagen 4

Epidermis

Imagen 5

Cubreobjetos

Imagen 6

Presionar el cubreobjetos

Observacin al
microscopio (x40)

Clulas epidrmicas
de cebolla (Allium sp)

Ncleos

Pared celular

Imagen 7

Colorantes

Imagen 8

Verter una gota de colorante en

el borde del cubreobjetos

Imagen 9

Con ayuda de una tira de papel de filtro hacer pasar

el colorante a travs de la muestra por capilaridad

Imagen 10

Musgo

Gota de agua

Imagen 11

Coger una hojita con las pinzas

Gota de agua

Imagen 12

Colocar la hojita encima de la gota

Imagen 13

Colocar un cubreobjetos y aadir ms

agua si es necesario

Imagen 14

Pulpa del tomate

Gota de agua

Imagen 15

Pulpa de tomate

Imagen 16

Poner un cubre y presionar ligeramente

Imagen 18

Aadir una gota de colorante

Adsorber con una tira de papel