PRACTICA NO.

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COLORACIN DE GRAM
MORFOLOGIA BACTERIANA
1. OBJETIVOS
1.1 Mediante la tcnica de la coloracin de Gram, los alumnos estarn en la capacidad de
clasificar las bacterias, conocer los fundamentos y la importancia que tiene esta
coloracin en el laboratorio de bacteriologa.
1.2 Los alumnos realizaran con presicin el estudio microscpico de los microorganismos,
clasificandolo segn su afinidad al Gram y teniendo en cuenta su morofologa y
agrupacin.
2. PRE LABORATORIO
La coloracin de Gram es una prueba critica, para el diagnstico presuntivo y rpido de
agentes infecciosos, tambin sirva para valorar la calidad de la muestra clnica.
FUNDAMENTO DE LA COLORACIN
Segn la reaccin de Gram las bacterias se dividen en Gram positivas, se tien de color
violeta y Gram negativas, se tien de color rojo. La divisin de las bacterias en Gram
Positivas y en Gram Negativas est dada por las diferencias fsicas y qumicas en la
composicin de la pared celular.
La pared celular de las bacterias Gram positivas, est compuesta en un 50 60% por
peptidoglicano y en un 40 50% por cidos teicoicos y polisacridos. El peptidoglicano
(llamado tambin mureina, capa de glicopptido o mucopptido) est compuesto de Nacetilglucosamina y N-acetil murmico. En las bacterias Gram positivas el cristal violeta se
fija en la pared celular y con adicin del lugol (mordiente), se produce el complejo cristal y
violeta-yodo el cual es resistente a la decoloracin. La pared celular de las Gram negativas
est compuesta por una delgada capa de peptidoglicano que constituye el 5-10% del peso
de la pared celular, recubriendoesta capa se encuentra una membrana externa compleja,
constituida por: fosfolpidos, (20-30%), lipopolisacridos (30%) y protenas (40-50%). El
decolorante en las bacterias Gram Positivas acta como un solvente de los lpidos
presentes, los poros de la pared se aumentan de tamao y el complejo cristal violeta-yodo
se libera, tomando la bacteria el colorante secunadario o de contraste (safranina).
2.1 CUESTIONARIO
2.1.1. Que diferencia encuentra entre la pared celular de las bacterias Gram Positivas y
Gram negativas?
2.1.2. Que parametros influyen en las bacterias para que reaccionen a la coloracin de
Gram?
2.1.3. Como reaccionan los Mycoplasmas a esta coloracin?
3.
3.1

LABORATORIO
MATERIALES Y REACTIVOS
Lminas limpias y desengrasadas
Gradilla
Aplicadores estriles
Bajalenguas estriles
Guantes
Frascos con decol y frasco bocn

Soportes para coloracin

Batera de Gram

3.2 PROCEDIMIENTO
3.2.1 Durante la prctica la docente dar las indicaciones para que los alumnos tomen
correctamente la muestra.
3.2.2 Realizar frotis directo. Dejarlo secar a temperatura ambiente, fijarlo con metanol.
Colocar la lmina sobre el soporte y realizar la tcnica de coloracin de Gram.
3.2.3 Tcnica de coloracon
Cubrir el frotis con cristal violeta y dejarlo actuar por un minuto
Lavar con abundante agua y escurrir.
Agregar lugol y dejar actuar por un minuto
Lavar con abundante agua y escurrir
Agregar Alcohol etlico o alcohol acetona por 20 segundos o hasta que decolore la
lmina completamente.
Lavar con abundante agua y escurrir.
Cubrir el frotis con Fushina de Gram por un minuto
Lavar con abundante agua y escurrir.
Limpiar el exceso de colorante por debajo de la lmina, dejar secar a temperatura ambiente.
Enfocar en objetivo de 100x, observar la lmina y dibujar lo observado
4. ANALISIS DE RESULTADOS
5.
5.1
5.2
5.3

AUTOEVALUACIN
Describa las debilidades y fortalezas que encontr en la prctica
Que aporto usted para el desarrollo de la prctica
De acuerdo a su inters, conocimietos y responsabilidad, califiquese en una escala de 1
a 5.

6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
7. POST LABORATORIO
7.1. Dibuje y clasifique las bacterias segn la morfologa, de ejemplos de cada una de ellas
7.2 Como se pueden agrupar las bacterias?
7.3. Qu debe tener en cuenta al realizar el estudio microscpico de una bacteria?
7.4 Cmo se realiza el control de calidad a la bateria o coloracin de Gram
8. INFORME
9. BIBLIOGRAFIA