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Ao de la consolidacin del Mar de Grau

UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL PER


CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERA
AMBIENTAL

TEMA: CULTIVOS BACTERIANOS

ASIGNATURA: Microbiologa
Integrantes:

Flores Cahuana, Brenda


Huarcaya Alcntara, Dayana
Huauya Jimenez, Rocio
Tinoco Gomez, Jhoselyn

Docente:
Blga: Gladys Nalvarte Palomino

Fecha de entrega: 06/10 / 2016

2016

1. INTRODUCCION:
Entendemos por cultivo bacteriano que es uno de los sistemas ms
importantes para la identificacin de microorganismos es observar
su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el cultivo.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
crecen en l.
Para la lectura se aaden colorantes que actan como indicadores
para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores
del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se
usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH
cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide
el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram-positivas).

2. OBJETIVOS
2.1 General

2.2

Cultivar las bacterias con las diferentes


condiciones ptimas de incubacin de cultivo para
observar el efecto de las condiciones de cultivo
sobre el desarrollo microbiano.
Especficos
Realizar cultivos bacterianos.
Realizar lectura de los cultivos bacterianos
obtenidos con los diferentes mtodos realizados
en laboratorio.

3. MARCO TEORICO
En biologa, bacteriologa y especficamente en microbiologa,
un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de
microorganismos tales como bacterias, hongos y parsitos, en
el que se prepara un medio ptimo para favorecer el proceso
deseado.
Un cultivo es empleado como un mtodo fundamental para el
estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades en medicina humana y veterinaria.
CARACTERISTICAS
Un microorganismo se puede sembrar en un medio lquido o
en la superficie de un medio slido de agar. Los medios de
cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares
simples hasta sustancias complejas como la sangre o el
extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie
bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos
de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde
las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras
muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera
por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por
decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta
colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio
crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
La principal diferencia entre un medio de cultivo slido y uno
lquido es que el medio de cultivo slido contiene un 1,52%
de agar-agar, mientras que el medio lquido no contiene agaragar.

INDICACIONES:
En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian
de color cuando uno de los nutrientes del medio es
fermentado y se generan catabolismos cidos. Si las bacterias
son capaces de producir fermentacin, generan gases que
pueden ser detectados cuando el cultivo se realiza en un tubo
cerrado.
Con otros medios de cultivo se puede identificar si las
bacterias producen determinadas enzimas que digieren los
nutrientes. As, algunas bacterias con enzimas hemolticas
(capaces de romper los glbulos rojos) producen hidrlisis y
cambios apreciables prosaicamente en las placas de agarsangre.
REQUERIMIENTOS:
Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar
que los resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables,
deben cumplir con los siguientes requisitos:
Disponibilidad de nutrientes.
Consistencia adecuada del medio
Presencia o ausencia del oxgeno y otros gases.
Condiciones adecuadas de humedad (mantener en
frigorfico).
Luz ambiental
PH adecuado
Temperatura
Esterilidad
4. PARTE EXPERIMENTAL:
4.1 Preparacin de la muestra: ( agua de alcantarilla)
MATERIALES Y REACTIVOS:
Papel kraft
Cajas de Petri
Pipeta
Gradilla
Asa de siembra
Estufa
Muestra de agua de alcantarilla

Autoclave
Mechero bunsen
Incubadora
Medidor de pH
1 matraz Erlenmeyer
Balanza analtica
Tubos de ensayo

PROCEDIMIENTO:
Vaciar el medio de cultivo en cajas Petri en condiciones

4.2

estriles en una campana de flujo laminar.


Dejar enfriar y esperar que se gelifique el medio.
Desinfectar el asa de siembra y coger la muestra de
agua de alcantarilla.
Incubar las placas de forma invertida a 37c por 24 h.
Temperatura ambiente durante 48h.
Observar el crecimiento en el medio de cultivo.

EFECTO DE LA TEMPERATURA:
MATERIALES Y REACTIVOS:
1
2
muestra procesada ( dilucin 10
y 10 )

placa Petri estril


pipeta 1.0 ml estril
pipeteador
plumn de tinta indeleble
agar TSA estril
mechero
bao mara
incubadora

PROCEDIMIENTO:
Identificar la placa Petri estril con plumn de tinta

indeleble (Nro. de mesa, muestra, fecha de siembra).


Pipetear 1ml de muestra en una placa Petri estril.

4.3

Agregar 15 ml de agar licuado a 44-46C en la placa


Petri.
Mezclar inmediatamente mediante movimientos de
vaivn y rotacin: de arriba hacia abajo 5 veces,
sentido horario 5 veces, sentido horizontal 5 veces
y sentido anti horario 5 veces.
Solidificado el agar, invertir placas e incubar segn se
indica: Placa 01: 29-31C durante 48 +/- 3 horas.
Placa 02: temperatura ambiente durante 48 +/- 3
horas.
Observar el crecimiento en el medio de cultivo.

Efecto del PH:


MATERIALES:
Muestra procesada
Tubos de ensayo 16 x 150 mm estril
Asa de siembra
Agua peptonada estril
Papel indicador
Solucin de NaOH 1 N
Plumn de tinta indeleble
Mechero
Incubadora

PROCEDIMIENTO:
Agregar 7 mL de agua peptonada estril a tres
tubos de ensayo 16 x 150 mm estril y numerarlos del 1
al 3
Medir el pH del tubo 1 con papel indicador y anotar,
luego adicionar 4 gotas de solucin de NaoH 1N a este
tubo, medir pH con papel indicador y anotar. Luego
descartar el tubo 1
Esterilizar asa de siembra

Tomar muestra de dilucin 10-1 con el asa de


siembra e inocular el tubo 2 (seguir las
instrucciones del docente).
Esterilizar asa de siembra
Adicionar 4 gotas de solucin de NaoH 1N al
tubo 3. Tomar muestra de dilucin 10-1 con el
asa de siembra e inocular el tubo 3 (seguir las
instrucciones del docente).
Incubar el tubo 2 y tubo 3 a 29-31C durante 48 +/- 3
horas.
Observar el crecimiento en el medio de cultivo.
4.4

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE OXIGENO :


MATERIALES Y REACTIVOS:
Tubos de ensayo 16 x 150 mm estril
Aguja de siembra
Muestra procesada
Plumn de tinta indeleble
Agar TSA estril
Mechero
Bao Mara
Incubadora

PROCEDIMIENTO:
Agregar 7 mL de agar licuado a 44-46C en tubo de
ensayo 16 x 150 mm estril y dejar solidificar en plano
inclinado
Esterilizar aguja de siembra
Tomar muestra de dilucin 10-1 con el aguja de
siembra y punzar en profundidad (seguir las
instrucciones del docente) en el medio de cultivo.
Esterilizar aguja de siembra

Incubar a 29-31C durante 48 +/- 3 horas.


Observar el crecimiento en el medio de cultivo
(cantidad y morfologa de las colonias)
5. RESULTADOS:
5.1 EFECTO DE LA TEMPERATURA:
Comparar el crecimiento microbiano de:
-1: Colonias representadas por puntos blancos y en el
fondo agar.
-2: Colonias representadas por diminutos puntos blancos
en el fondo color agar.
-1: Pequeos puntos de color del agar-agar como
sarpullido.
-2: Colonias representadas en diminutos pequeos
puntos blancos en la placa Petri.
En la temperatura 37c creci ms.
5.2 EFECTO DE LA CONCENTRACION DE OXIGENO:
-1:
Inferior: son organismos aerofios
Superior: poca poblacin de bacterias de color amarillo
con puntos marrones.
-2:
Inferior: Superior: Hay ms colonizacin de bacterias de color
amarillo con puntos marrones.
5.3

EFECTO PH:
PH 6: Agua Peptonada
Es color amarillo tipo agua
PH 9: Agua Peptonada e Hidrxido de Sodio
Turbidez y ms colonizacin

6. CONCLUSIONES:
Se lleg a la conclusin de que en la lectura la
temperatura 37c, fue donde creci mas poblacin.
Al realizar una siembra de microorganismos, debemos
tener en cuenta que tcnica se va a utilizar, debido a
que estas varan respecto a las caractersticas del
microorganismo a tratar.

7. ANEXOS: