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EVALUACIN DE FACTORES FSICOS SOBRE EL CRECIMIENTO DE LOS

MICROORGANISMOS
Maira A. Acosta, Pedro M. Olmos, Oscar F. Hernndez, Luis F. Montes, Jill L. Martnez.
Universidad de Sucre, Facultad de Educacin y Ciencias, Departamento de Biologa,
Laboratorio de Microbiologa
RESUMEN: Los microorganismos se encuentran expuestos a innumerables factores que
pueden favorecer o afectar su crecimiento, se requiere del conocimiento de estos para
poder evaluar las condiciones en las que un microorganismo puede crecer y
desarrollarse adecuadamente, en este laboratorio se expuso un tipo de bacterias
cultivada con anterioridad, a distintos factores fsicos, para evaluar de manera clara
el crecimiento de esta bacteria, se someti a distintas temperaturas, pH y
concentraciones de sales y glucosa, dando como resultado un crecimiento en la
mayora de las muestras, exceptuando a la que tena una temperatura bastante
elevada (100C), esto nos quiere decir que la bacteria no resiste temperaturas
elevadas, as como tampoco a pH muy bsicos ni cidos, en cuanto a las
concentraciones osmticas present crecimiento abundante en todas las muestras a
distintas concentraciones de glucosa y poco crecimiento escaso en altas
concentraciones de sales.
Pa l a b ra s
C l a v e:
T e mpe r a t u r a ,
pH ,
M i c r o o r g a n i s mo s . c o l o n i a s , ma n i pu l a c i n .
IN T R O D U C C I N
Los
microorganismos
realizan
actividades que se ven muy afectadas
por condiciones fsicas y qumicas del
medio.
Conocer
estos
efectos
ambientales
permite
explicar
la
distribucin de estos microorganismos
en la naturaleza y hace posible
disear mtodos para controlar o
potenciar
las
actividades
[1]
microbianas . Para poder obtener un
crecimiento
ptimo
de
los
microorganismos, no slo se requiere
de requerimientos nutricionales, sino
de factores como fsicos y qumicos.
Un agente fsico es una condicin
fsica o propiedad fsica que causa un
cambio, por ejemplo la humedad, la
temperatura, la presin osmtica, el
pH, las radiaciones y los filtros
bacteriolgicos. El crecimiento de los
microorganismos se modifica o se
limita al cambiar estos factores
ambientales fsicos en el medio[2].
Debido a su pequeo tamao y a su

Fa c t o r e s

fs ic o s ,

C re c i mi e n t o ,

estilo de vida individual, las clulas


procariticas
sufren
los
cambios
ambientales de un modo mucho ms
directo e inmediato que las clulas de
los
organismos
pluricelulares.
Actualmente, las nicas formas de
vida
existentes
en
determinados
ambientes
extremos
son
exclusivamente
procariticas.
Desafiando
a
nuestras
ideas
preconcebidas de lo que es la vida
normal,
encontramos
extraordinarios
seres
vivos
unicelulares viviendo a pH muy
cidos o muy alcalino, medrando en
salmueras
y
salinas,
o
reproducindose a temperaturas de
100C y a grandes presiones[3].

O B J ET I V O S
1. Conocimiento del efecto de factores
fsicos como la temperatura, pH,
concentracin de azcar y de sal
sobre el crecimiento de diversos

microorganismos.
M A T ER I A L ES Y M T O D O S
Cultivos en caldo nutritivo (CN) de
bacterias.
Gradillas y elementos de trabajo
asptico con microorganismos.
Baos de agua a temperatura de
ebullicin (Autoclave)
Incubadora a 37C y nevera.

C A M B I O EN L A P R ES I N O S M T I C A
Se tomaron 6 tubos de ensayos con
caldo nutritivo ajustados a las
siguientes concentraciones de glucosa
y sal y un tubo control (solo con
caldo nutritivo)
NaCl: 1%-10%-20%
Glucosa: 1%-10%-20%
Se sembr en cada uno de los tubos
la cepa bacteriana suministrada en el
laboratorio.

Una vez sembrado cada tubo con la


cepa, se incub a 37C durante 24hrs.

C A M B I O EN L A T EM P ER A T U R A
Se tomaron 3 tubos de ensayo con
caldo nutritivo y se sembr en cada
uno de los tubos la cepa bacteriana
suministrada en el laboratorio.
Se incub por separado cada tubo,
37c (incubadora), 4C (nevera) y
100C (Autoclave) por 30 min.

Luego se sembr en casa tubo la cepa


bacteriana
suministrada
en
el
laboratorio, el tubo con temperatura
de 4C se dej en la nevera por
24hrs, con los tubos a 37C y 100C
se realiz siembra por agotamiento en
una caja de Petri, y luego fue
incubada junto con los tubos a 37C
por 24hrs.

C A M B I O EN EL p H
Se tomaron 3 tubos de ensayo con
caldo nutritivo, ajustados a los
siguientes pH (1, 7 y 14), para el pH
cido se agregaron 5 gotas de HCl y
para el bsico 5 gotas de NaOH.

Se sembr en cada tubo la cepa


bacteriana
suministrada
en
el
laboratorio.
Se incub a 37C por 24hrs.

R ES U L T A D O S Y D I S C U S I N
TEMPERATURA

IMAGEN 1: Resultados obtenidos


luego de la incubacin por 24hrs, con
las muestras a distintas temperaturas

(100C, 4C y 100C) respectivamente.


Estimando el crecimiento
muestra se tiene:

de

esta

100C- Sin crecimiento (-)


4C: Crecimiento escaso (+)
37C: Crecimiento abundante (+++).

IMAGEN 2: Resultados de la ciembra


a partir de las muestras a 37C
(Izquierda) y 100C (Derecha), en
donde se observa un crecimiento
abundante en el lado de la muestra
que se encontraba a 37C.
CAMBIOS EN LA PRESIN
OSMTICA

IMAGEN 3: Resultados obtenidos


luego de la incubacin por 24hrs con
distintas concentraciones de Glucosa

1%, 10% y 20% respectivamente.


Estimando el crecimiento
muestra se tiene:

de

C A M B I O EN EL p H
esta

1%- Crecimiento abundante (+++)


10%- Crecimiento abundante (+++)
20%- Crecimiento abundante (+++)

IMAGEN 5: Resultados obtenidos


luego de la incubacin por 24hrs de
muestras con distintos pH, 1, 7 y 14
respectivamente.
Estimando el crecimiento
muestra se tiene:
IMAGEN 4: Resultados obtenidos
luego de la incubacin por 24hrs de
muestras con distintas concentraciones
de
NaCl
20%,
10%
y
1%
respectivamente.
Estimando el crecimiento
muestra se tiene:

de

1%- Crecimiento abundante (+++)


10%- Crecimiento escaso (+)
20%- Sin crecimiento (-)

esta

de

esta

1- Sin crecimiento (-)


7- Crecimiento abundante (+++)
14- Sin crecimiento (-).
El medio ambiente influye de manera
directa sobre el crecimiento de los
organismos, as en un ambiente pobre
en nutrientes o con condiciones
extremas van a afectar el desarrollo
ptimo de estos. Los factores ms
importantes de los cuales dependen
los microorganismos para crecer son:
Temperatura, pH, disponibilidad del
agua, presin osmtica y oxgeno.
Uno de los factores que representa
ms importancia a la hora del
desarrollo
ptimo
de
los
microorganismos es la temperatura.
Cada microorganismo es capaz de
crecer solamente dentro de un rango
especfico
de
temperaturas,
as
muchas bacterias pueden desarrollarse

en
ambientes
con
temperaturas
extremas, mientras que otras solo lo
hacen en un estrecho rango[4] en la
imagen 1 y 2 se pudo observar que la
bacteria
cultivada
solo
resista
temperaturas
medias
(37C),
en
temperaturas extremas (4c y 100C)
no pudo crecer correctamente; para
cada microorganismo existe una
temperatura mnima por debajo de la
cual no existe crecimiento, una
temperatura ptima en la cual el
crecimiento es lo ms rpido posible
y una temperatura mxima en la cual
no existe crecimiento. La temperatura
ptima siempre estar ms cerca de
la mxima que de la mnima. Se
denominan temperaturas cardinales,
caractersticas
de
cada
microorganismo y pueden variar
ligeramente
de
acuerdo
a
la
composicin del medio de cultivo. Las
temperaturas cardinales para un
microorganismo
difieren
enormemente;
algunos
poseen
temperaturas tan bajas como 5-10C y
otros hasta 100C[5].
Es posible distinguir cuatro grupos
microbianos en relacin con su
temperatura ptima: psicrfilos, con
temperaturas ptimas bajas (15C),
mesfilos con temperaturas ptimas
medianas (30c) y termofilos con
temperaturas ptimas ms altas (55C)
y los hipertermofilos o termofilos
extremos, con temperaturas muy
altas[6].
Otro factor importante que influye en
el crecimiento de los microorganismos
en la acidez y alcalinidad, en donde
es neutro cuando el pH es 7. El pH
es una funcin logartmica, un
cambio en una unidad de pH
representa 10 veces el cambio en la
concentracin de hidrogeniones. Cada

organismo tiene un pH dentro de cual


es
posible
su
crecimiento
y
normalmente posee un pH ptimo
bien definido. La mayora de los
ambientes naturales tienen un pH de
5.9, slo pocos crecen a pH menores
de 2 y mayores de 10, como se pudo
observar en la imagen 5, en donde
no hubo crecimiento en un pH cido
1 y un pH muy bsico como fue 14.
Los organismos capaces de crecer a
pH menores de 2 son acidfilos, los
hongos tienden a soportar la acidez
ms
que
las
bacterias.
Los
microorganismos que posean un pH
mayor
de
10
se
denominan
alcalficos,
se
encuentran
generalmente en suelos altamente
carbonatados,
tienen
importancia
industrial ya que poseen proteasas
alcalinas,
son
empleadas
como
suplemento
para
detergentes.
Independientemente
del
pH
extracelular el pH intracelular debe
permanecer cercano a la neutralidad,
con el objetivo de impedir la
destruccin de las macromolculas. En
acidfilos o alcalfilos extremos el pH
debe variar en 1.0 y 1.5 unidades
respecto a la neutralidad, pero para
los neutrofilos (pH 6.0-8.0), el pH del
citoplasma en neutro o casi neutro[7].
Cada grupo bacteriano responde al
estrs de diferentes formas, pero
siempre
actuando
sobre
la
composicin de los cidos grasos de
membrana. En un ambiente hostil
como lo sera un medio muy salino,
las bacterias deben adaptarse o
perecer, as se produce en ellas una
serie de transformaciones. Como es el
caso de las bacterias lcticas, se
modifica una enzima en una situacin
de estrs por una alta concentracin
de sal, produciendo un cambio en la
proteasa, una enzima asociada con la

envoltura de esta bacteria. El cambio


le permite alcanzar una mayor
velocidad de reaccin para procesar
las protenas del medio que le sirven
a la bacteria para enfrentar la
situacin
y
seguir
viviendo[8],
contrario a esto existen diversos tipos
de bacterias que no se pueden
adaptar a un ambiente cambiante y
por consiguiente mueren, muchas
bacterias solo crecen en condiciones
ptimas y cambiar las concentraciones
en el ambiente es mortal, en la
imagen 4 se puede observar que el
crecimiento microbiano no soport
concentraciones
altas
de
NaCl,
creciendo as de manera abundante
en concentraciones de sales del 1%,
mientras que en concentraciones altas
no hubo crecimiento, en cuanto a las
concentraciones
de
azucares
no
presentaron muchas diferencias en
cuanto al crecimiento, lo que nos
indica
que
las
diferentes
concentraciones
de
azucares
no
tuvieron un efecto directo en el
desarrollo de la bacteria estudiada en
el laboratorio.
C O N C L U S I N
Como en cualquier laboratorio de
microbiologa es fundamental el uso
de tcnicas antispticas a la hora de
manejar las muestras, ya que eso
conllevar a unos mejores resultados.
En la practica de laboratorio se
utilizaron diferentes factores fsicos
que afectaron y propiciaron el
crecimiento microbiano.
La temperatura, pH y concentraciones
osmticas
cumplen
un
papel
fundamental en el desarrollo ptimo
de los microorganismos, conociendo
que existen tipos que crecen en
condiciones extremas, en este caso la

bacteria cultivada mostraba afinacin


por temperaturas medias (37C), pH
bsicos
(7),
concentraciones
de
azucares variadas y concentraciones
bajas de sales.
C U ES T I O N A R I O
1) En el caso que se de la inhibicin
de la bacteria, cual es el efecto
directo de la glucosa y el cloruro de
sodio ? Si esto no llega a observarse
cual es su explicacin ?
2) Defina los siguientes trminos:
psicrofilos,
mesofilos,
termofilos,
halofilos, xerofilos y osmofilos
3) Que efecto tiene el PH de sobre el
crecimiento bacteriano ?
4) Mencionen otros agentes fsicos
que pueden tener algn efecto
negativo
sobre
el
crecimiento
bacteriano ?
1) El cloruro de sodio como muchas
otras sales tiene un efecto negativo
sobre el crecimiento microbiano a
altas concentraciones, esto puede
deberse a influencia de las molculas
de cloruro de sodio en fase acuosa
sobre la presin osmtica de las
clulas bacterianas lo que las puede
llevar a deshidratacin o turgencia.
Por otro lado la glucosa en la
principal fuente de carbono de
muchas
bacterias
y
son
parte
importante del metabolismos de
muchas especies de bacterias, a
concentraciones bajas este permite el
crecimiento de bacterias pero a altas
concentraciones puede pasar algo
parecido al efecto de las sales sobre
la presin osmtica, ya que ambos
son solutos, el que no se de un efecto
inhibidor
en
las
colonias

probablemente se deba a que estos


solutos estn en baja concentracin o
que la bacteria tiene una resistencia a
las altas concentraciones de estos
solutos al utilizarlos o guardarlos y
as regular la presin osmotica[9].
2) Psicrofilos: Los psicrofilos son
aquellos
organismos
capaces
de
sobrevivir a bajas temperaturas, pero
no sobreviven a temperaturas mucho
mas altas[10].
Mesofilos:
Son
organismos
microscopicos los cuales la tempera
optima de crecimiento un poco mas
altas que los Psicrofilos llegando a
estar entre los 15-25c.
Termofilos:
Los
termofilos
son
aquellos que pueden soportar altas
temperaturas llegando a los 50 c, por
lo
general
estos
organismos
pertenecen a las archaea.
Halfilos:
Los
halfilos
son
organismos capaces de sobrevivir a
altas concentraciones de sales por
medio de mecanismos fisiolgicos que
permiten
evitar
la
presin
[11]
osmtica .
Xerofilos:
Son
aquellos
microorganismos capaces de sobrevivir
en aquellos ecosistemas con poca
cantidad de agua[12].
Osmofilos: Los osmofilos son los
microorganismos capaces de sobrevivir
a altas concentraciones de solutos, los
cuales pueden evitar los efectos
negativos de la presin osmotica[13].
3) El PH es un parmetro crtico en
el crecimiento de microorganismos ya
que los microorganismo tienen un
rango de pH en el que puede vivir

adecuadamente, fuera de este rango


mueren debido a la destaturalizacin
de protenas y enzimas indispensables
para la vida. Pero esta no es la nica
importancia de mantener un PH
estable otra es El pH intracelular es
ligeramente superior al del medio que
rodea las clulas ya que, en muchos
casos es indispensable para la
obtencin de energa metablica ya
que esto depende de la existencia de
una diferencia en la concentracin de
protones a ambos lados de la
membrana citoplsmica, claro esta
que los rangos de pH tolerables por
diferentes tipos de microorganismos
son, distintos. Hay microorganismos
acidfilos que pueden vivir a pH=1.0
y otros alcalfilos que toleran
pH=10.0 .
4) RADIACION IONIZANTE: para
muchos microorganismso la radiacin
ionizante es altamente letal, puede
ajustarse su dosis para producir
efectos pasteurizantes o esterilizantes
y su poder de penetracin es
uniforme. Esto se debe a la
destruccin de molculas vitales de
los microorganismos, y se consigue
sin produccin de calor por lo que
puede servir para el control de micro
organismo en la industria, pero sus
daos en su mayora son a nivel
ADN[14].
La sensibilidad a la radiacin de los
microorganismos difiere segn las
especies e incluso segn las cepas,
aunque las diferencias de resistencia
entre cepas de una mismas especie
son generalmente lo suficientemente
pequeas para no tenerlas en cuenta
a efectos prcticos. Las bacterias
Gram-negativas son generalmente ms
sensibles a la irradiacin que las
Gram-positivas y las esporas an ms

resistentes. En general, la resistencia


a la radiacin de los hongos es del
mismo orden que la de las formas
vegetativas bacterianas[14].
REFERENCIAS
[1] KONEMAN, Elmer W. et al.
Diagnstico Microbiolgico. Buenos
Aires: Mdica Panamericana, 1983.
533 p.
[2] BURGES, Alan; RAW, Frank.
Biologa
del
suelo.
Barcelona:
Ediciones Omega S.A.,1983. 596 p.
[3] GOYAL, Sneh; DHULL, S.K. and
KAPOOR,
K.K.
Chemical
and
biological changes during composting
of diferent organic wastes and
assesment of compost maturity. In:
Bioresource Technology. Vol. 96, No.
14 (sep. 2005); p. 1584-91.

de Biotecnologa de Microbiologa
Industrial. Editorial Acribia S.A.
Zaragoza. Espaa.
[8] KOOPER, O. (1982). Prdidas de
sacarosa. Seminario de tecnologa
moderna de la caa de azcar.
Memorias 2:55-68.
[9] D, jorge. Revista ingenierias.
Volumen 10. No 2. 2010. pp 17-24.
[10] W.F. Harrigan (1998).Laboratory
Methods in Food Microbiology. Gulf
Professional
Publishing.
p. 121. ISBN 0123260434. Consultado
el 5 de septiembre de 2016.
[11]
Lagunas
saladas
de
Los
Monegro,
artculo
del
21
de
noviembre de 2006 en el sitio web
Barracuda (Espaa).

[4] ATLAS, R., BARTHA, R. 2002.


Ecologa microbiana y Microbiologa
Ambiental. Segunda Edicin. Pearson
Educacin, S.A. Madrid. Espaa. Pp.
307-309.

[12]
http://www.unavarra.es/genmic/curso
%20microbiologia%20general/001introduccion%20micro%20alimentos%2
02.htm tomado el 12 de oct del 2016
a las 16:22

[5] BUTT,
T.;
JACKSON,
C.;
MAGAN, N. 2001. Fungy as a
Biocontrol Agents. CABI Publishing.
Pp 239-287.

[13]
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/arch
ivero/U4a_CrecimientoMicrobiano_198
36.pdf tomado el 12 oct a las 16: 32

[6] CARO, L. 2003. Efecto de la


composicin del medio de cultivo en
la virulencia de Nomuraea rileyi sobre
el gusano cogollero del maz
Spodoptera frugiperda (Lepidoptera:
Noctuidae).
Bogot.
Trabajo
de
grado
(Microbiologa Industrial).
Pontificia
Universidad
Javeriana.
Facultad de Ciencias. Carrera de
Microbiologa Industrial. 164p.

[14]http://www.unavarra.es/genmic/mi
croclinica/tema02.pdf tomado el 12 de
oct a las 16: 45

[7] CRUEGER,

W.

1993.

Manual