REPLICACIN DE ADN

La replicacin del ADN produce una copia de s mismo por

medio de enzimas que adems de ser muy exactas poseen un
sistema de reparacin de errores. El mecanismo de replicacin es
esencialmente el mismo en todas las clulas. Es un proceso
semiconservativo porque cada uno de los dos ADN hijos tiene una
cadena del ADN anterior.
El proceso de replicacin de ADN es el mecanismo que
permite al ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia idntica). De
esta manera de una molcula de ADN nica, se obtienen dos o ms
"clones" de la primera. Esta duplicacin del material gentico se
produce de acuerdo con un mecanismo semiconservativo, lo que
indica que las dos cadenas complementarias del ADN original, al
separarse, sirven de molde cada una para la sntesis de una nueva
cadena complementaria de la cadena molde, de forma que cada
nueva doble hlice contiene una de las cadenas del ADN original.
Gracias a la complementariedad entre las bases que forman la
secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante
propiedad de reproducirse idnticamente, lo que permite que la
informacin gentica se transmita de una clula madre a las clulas
hijas y es la base de la herencia del material gentico.
La molcula de ADN se abre como una cremallera por ruptura
de los puentes de hidrgeno entre las bases complementarias
liberndose dos hebras y la ADN polimerasa sintetiza la mitad
complementaria aadiendo nucletidos que se encuentran dispersos
en el ncleo. De esta forma, cada nueva molcula es idntica a la
molcula de ADN inicial.
La replicacin empieza en puntos determinados: los orgenes de
replicacin. Las protenas iniciadoras reconocen

secuencias de

nucletidos especficas en esos puntos y facilitan la fijacin de otras

protenas que permitirn la separacin de las dos hebras de ADN

formndose una horquilla de replicacin. Un gran nmero de enzimas
y protenas intervienen en el mecanismo molecular de la replicacin,
formando el llamado complejo de replicacin o replisoma. Estas
protenas y enzimas son homlogas en eucariotas y arqueas, pero
difieren en bacterias.

CARACTERSTICAS GENERALES
En cada una de las molculas hijas se conserva una de las
cadenas originales, y por eso se dice que la replicacin del ADN es
semiconservadora. Hasta que finalmente se pudo demostrar que la
replicacin es semiconservadora, se consideraron tres posibles
modelos para el mecanismo de la replicacin:

Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las

molculas hijas se conserva una de las cadenas originales.

Conservadora. Se sintetiza una molcula totalmente nueva,

copia de la original.

Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de

fragmentos de la cadena antigua y fragmentos de la nueva.

EL ORIGEN DE REPLICACIN
Los orgenes de replicacin son los puntos fijos a partir de los
cuales se lleva cabo la replicacin, que avanza de forma secuencial
formando estructuras con forma de horquilla. Por otro lado, la
replicacin se lleva a cabo bidireccionalmente, es decir, a partir de
cada origen se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos.
La cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir de un nico
origen de replicacin se denomina replicn o unidad funcional de
replicacin. El genoma bacteriano es un replicn nico circular. En

organismos eucariticos, la replicacin del ADN se inicia en

mltiples orgenes a la vez (hay uno cada 20 kb aproximadamente),
es decir, hay varios replicones.

La cadena que se sintetiza en el mismo sentido que avanza la

horquilla de replicacin se denomina hebra y se sintetiza de forma
continua por la ADN polimerasa, mientras que la que se sintetiza en
sentido contrario al avance se denomina hebra rezagada o retrasada,
cuya sntesis se realiza de forma discontinua teniendo que esperar a
que la horquilla de replicacin avance para disponer de una cierta
longitud de ADN molde

En cada horquilla de replicacin, la ADN polimerasa y otras

enzimas

sintetizan

dos

nuevas

cadenas

de

ADN

que

son

complementarias respecto a las 2 cadenas originales. Durante este

proceso, la ADN polimerasa reconoce una base nucleotdica no

apareada de la cadena original y la combina con un nucletido libre
que tiene la base complementaria correcta. Luego, la ADN polimerasa
cataliza la formacin de nuevos enlaces covalentes que ligan el
fosfato del nucletido libre entrante con el azcar del nucletido
previamente agregado en la cadena hija en crecimiento. De esta
forma, la ADN polimerasa sintetiza el esqueleto de azcar-fosfato de
la cadena hija.

PROCESO GENERAL

Esquema de la Replicacin del ADN

La helicasa rompe los puentes de hidrgeno de la doble hlice

permitiendo el avance de la horquilla de replicacin.

La topoisomerasa impide que el ADN se enrede debido al

superenrollamiento producido por la separacin de la doble
hlice.

Las protenas SSB se unen la hebra discontnua de ADN,

impidiendo que sta se una consigo misma.

La ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria de

forma continua en la hebra adelantada y de forma discontnua
en la hebra rezagada.

La ARN primasa sintetiza el cebador de ARN necesario para la

sntesis de la cadena complementaria a la cadena rezagada.

La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

EN LAS CLULAS PROCARIOTAS

hay

lugar

de

origen

de

replicacin que se muestra en la horquilla de replicacin (replication

fork) y que seala el avance de la copia. La horquilla (fork) indica que
se est haciendo la separacin y la replicacin a la vez. El avance es
bidireccional, lo que acorta el tiempo. En el sitio en que empieza la
replicacin se organizan las protenas en un complejo llamado
replisma. La replicacin del ADN en procariotas sucede a una
velocidad de 500 nucletidos por segundo.

EN LAS CLULAS EUCARIOTAS

El proceso es esencialmente el mismo pero el
ADN es mucho ms grande y lineal. Hay varios orgenes de
replicacin y es bidireccional. El avance es ms lento que en
procariotas ya que hay ms protenas asociadas al ADN que hay que

soltar. La replicacin del ADN, que ocurre una sola vez en cada
generacin celular necesita de muchos "ladrillos", enzimas y una gran
cantidad de energa en forma de ATP (recuerde que luego de la fase S
del ciclo celular , las clulas pasan a una fase G a fin de, entre otras
cosas, recuperar energa para la siguiente fase de la divisin celular).
La replicacin del ADN en el ser humano se realiza a una velocidad de
50 nucletidos por segundo. Los nucletidos tienen que ser armados
y estar disponibles en el ncleo conjuntamente con la energa para
unirlos.

MECANISMOS DE REPARACIN DEL ADN

Los daos en el ADN pueden ser reparados para mantener la
integridad de la informacin gentica, la importancia biolgica de la
reparacin del ADN es evidente al encontrar mltiples mecanismos de
reparacin. Estos sistemas incluyen enzimas que simplemente
revierten la modificacin qumica, as como complejos enzimticos
ms complicados que dependen de la redundancia de la informacin
en la molcula de ADN duplex para reparar a la molcula.

5
3
3
5
endonucleasa UvrABC

P
5

3
3
5

P
5
3
3
5
PolI, ADN ligasa
5
3
3
5
Figura: representacin del sistema NER de reparacin del ADN

PRINCIPALES MECANISMOS DE REPARACIN DEL DNA

Existen dos grupos de genes, los que sealizan el dao en el
DNA y los que reparan el dao. Las mutaciones en estos genes dan
lugar a sndromes hereditarios como el cncer de colon hereditario sin
poliposis o la Ataxia telangiectasia. Las respuestas celulares al dao
en el DNA se pueden resumir en la siguiente tabla:

RESPUES
TA
Reversin del
dao

MECANISMO

Fotorreactivacin
enzimtica.

Reparacin

de

alquilaciones.

Escisin

del

Ligamiento de roturas

de las hlices.
Reparacin

dao

escisin

de

por
bases

(BER).

Reparacin

por

escisin

de

nucletidos (NER).

Tolerancia del

Reparacin

apareamiento.
Bypass replicativo del

dao

del

falso

dao con la formacin

de

un

hueco

posterior
recombinacin.

Sntesis translesiva de
DNA.

Fotorreactivacin enzimtica
La exposicin a la luz UV da lugar a la formacin de dmeros de timina
(T) en el DNA. Para reparar este dao existen enzimas como la
fotoliasa, posee dos sitios activos (antena y centro cataltico). Su
mecanismo de accin se basa en la transferencia de un electrn al
dmero de T. Existen tres grupos de fotoliasas: clase I, II y fotoliasas 64 (reconocen dmeros de pirimidina 6-4).
Reparacin de alquilaciones
Las bacterias poseen un mecanismo a travs del cual se vuelven
resistentes a agentes alquilantes. Esta adaptacin es posible gracias
a la protena Ada, es una metiltransferasa. En condiciones normales,

existen niveles basales de protenas implicadas en reparacin del

DNA (ada, alkA, alkB y aidB). En presencia de agentes alquilantes en
baja concentracin, se produce metilacin pero a bajo nivel. La
protena Ada metilada acta como factor de transcripcin, activando
la expresin de los genes anteriores.
Reparacin por escisin de bases (BER)
Las bases alteradas son reconocidas de forma especfica por
glicosilasas y eliminadas, generando un sitio AP. El hueco se rellena
mediante una DNA polimerasa que toma como molde la hebra sana.
Este sistema surge no solo por la exposicin a agentes externos,
tambin por la propia actividad de la clula.

Reparacin por escisin de nucletidos (NER)

La zona daada es reconocida por UvrA y B, despus A y B se separan
y

entra

UvrC

que

forma

con

un

complejo

con

actividad

endonucleasa. Esta enzima corta el dmero de T y el hueco es

rellenado por una DNA polimerasa. Tambin existe el sistema TC-NER
(sistema de reparacin de nucletidos acoplado a transcripcin). La
alteracin de estos mecanismos da lugar a enfermedades como:
Xeroderma pigmentosum, Tricotiodistrofia o Sndrome de Cockayne.

Reparacin del falso apareamiento

Se da un falso apareamiento que es reparado por el siguiente
mecanismo: MUTS y L se unen a la regin daada. Posteriormente
MUTH corta la hlice daada, reconocida por metilaciones especficas
introducidas por la protena dam. En Eucariotas existen homlogos a
los genes que codifican para estas protenas; excepto para MUTH.
Adems el proceso es mucho ms complejo.
Tolerancia al dao

Existe una polimerasa especial que puede llevar a cabo la sntesis

translesiva, puede polimerizar sin necesidad de molde. Depende de
los genes: LexA, umuDC, RecA y uvrA. En condiciones normales LexA
inhibe la expresin de estos genes. Cuando hay dao en el DNA la
protena RecA se activa y bloquea la accin de LexA. Adems RecA
acta sobre umuD, dando lugar a umuD que forma, junto con umuC,
la polimerasa translesiva. Este mtodo impide que la clula muera,
pero introduce un elevado nmero de mutaciones.

Protena PARP
La exposicin de las clulas eucariticas a agentes mutgenos da
lugar a roturas en el DNA. Entonces se produce una reaccin de
estrs y se activa la protena PARP (Poli (ADP-ribosa) polimerasa). Esta
protena se une a las roturas de las hebras y se sintetizan polmeros
de vida corta. Se caracteriza por ser transitoria, preceder a la
reparacin del DNA y a la induccin de p53. En levaduras no hay
PARP. Los polmeros son degradaos por la protena glucohidrolasa.