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Cuestionario 5:

3. Para que, como se interpreta y de que esta compuesto los medios de Hugh y Leifson?
Medios de Hugh y Leifson: Es un medio de cultivo utilizado en las pruebas bioqumicas de
identificacin bacteriana en base al metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram
negativas. El medio fue desarrollado por Hugh y Leifson para evidenciar la importancia del
significado taxonmico del metabolismo oxidativo-fermentativo de los hidratos de carbono por las
bacterias Gram negativas.
Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio conteniendo el mismo hidrato de carbono, y
uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o parafina antes de la incubacin, se puede diferenciar
correctamente el metabolismo oxidativo o fermentativo as como la no utilizacin de un hidrato de carbono
por la bacteria en estudio.
En el medio de cultivo, el agregado del hidrato de carbono en concentracin al 1%, permite que los
microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aerbicas metabolicen la
triptena presente con la consecuente produccin de reaccin alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez
producida por un microrganismo oxidativo.

Composicin:
Frmula (en gramos por litro)

Interpretacin
resultados: El

Triptena

2.0

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato dipotsico

0.3

de los

de carbono, ya
fermentacin u
produce acidez Agar
con el
viraje del color
amarillo.
Las reacciones Azul de bromotimol
siguientes:

2.5

0.03

Reaccin

Tubos con
reaccin

Tubo Abierto

Tubo cerrado

Oxidacin

Abierto

Color Amarillo
(A)

Color Verde (-)

Fermentacin

Cerrado

Color Amarillo
(AG)

Color Amarillo (A)

uso del hidrato


sea por
oxidacin,
en el medio,
consecuente
verde al
tpicas son las

Sin oxidacin o
fermentacin

Ninguna

Color Azul o
Verde (-)

Color Verde (-)

(A): Acido
(AG): Acido con gas
(-): No se producen cambios

4. Cules son los criterios en el almacenamiento de medios de cultivo?


Requisitos de los medios de cultivo provisto por los fabricantes:
En el momento de la entrega de medio de cultivo debe proveer informacin acerca de las especificaciones de
calidad, como mnimo debe incluir lo siguiente:
-

Nombre del medio y lista de componentes, incluido cualquier suplemento.


Fecha de vencimiento del medio.
Condiciones de almacenamiento.
Control de esterilidad.
Control del crecimiento de los microorganismos de inters (target) y de los microorganismos no
deseados (no target) y criterios de aceptabilidad.
Controles fsicos y criterios de aceptabilidad aplicados.
Fecha de emisin de las especificaciones

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que seale
el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25), con poca humedad y protegidos
de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor.
Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos, cuando los envases de estos medios de cultivo
deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaucin de cerrarlos tan pronto como sea
posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad.
La absorcin de agua produce cambios de pH, formacin de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual
indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios qumicos o estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a temperatura ambiente
por un periodo mximo de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15C. Sin embargo,
almacenados bajo refrigeracin entre 2 y 8C se prolonga la vida til de los mismos, (nunca por debajo de
0C porque se destruye la estructura del gel).
Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratacin y cuando
se usa tapn de algodn, se debe colocar por encima una envoltura de papel (Kraft).
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo preparado debe pasar por un
riguroso proceso de control de calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoqumicas (apariencia,
pH, etc.) y microbiolgicas (esterilidad y promocin de crecimiento) verificando que cumplan con los
requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso.
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Preparaci
%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf
http://www.britanialab.com/productos/580_hoja_tecnica_es.pdf

Lab n6
Objetivo:
Identificar y aprender los mtodos para cultivar microorganismos y la importancia de estos para su
almacenamiento e identificacin.
Cuestionario:
1. Porque el crecimiento de algunos microorganismos originan la formacin de un velo o pelcula?
El crecimiento tipo pelcula es la acumulacin de los microorganismos que se estn cultivando en la
superficie del medio de cultivo. Los microorganismos se acumulan para tener respiracin tipo aerobia.
Al ser el oxgeno poco soluble en agua, este no penetra en su totalidad por lo cual se concentra en la
superficie del medio donde se agrupan los microorganismos, formando la pelcula.
2. Elabore un flujograma con la elaboracin de medios de cultivo
: http://solutions.3mchile.cl/3MContentRetrievalAPI/BlobServlet?
lmd=1429803592000&locale=es_CL&assetType=MMM_Image&assetId=1361859738883&blobAttribute=I
mageFi

FLUJOGRAMA DE LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS:


Recepcin del medio de cultivo

Almacenamiento del medio, pero este debe


estar cerrado

Almacenamiento del medio de manera abierta

Formulacin

Preparado del agua

Pesado y rehidratacin

Disolucin y dispersin

Dispensacin

Esterilizacin por calor hmedo

Evaluacin
de la vidapor
tilfiltracin
de los medios de
Esterilizacin
cultivo

Almacenado de los medios que estn listos


Almacenamiento de los medios de cultivo en
placas Petri

Derretimiento del medio de cultivo

Salida del aire del medio de cultivo

Adicin de suplementos

Preparacin del medio en placas Petri

Preparacin del medio del cultivo para la


inoculacin
IncubacinDisposicin
del medio solido
del medio
en placa Petri