Procedimiento Experimental

Mtodo de Cultivo y Aislamiento de Bacterias

Aislamiento de Bacterias Aerbicas en Placa Petri
a) Aislamiento por el Mtodo del Estriado

Con la mano derecha, cargar el asa en aro, previamente al rojo, con

inoculo de cultivo mixto que sostiene la mano izquierda; destapar el
cultivo con el dedo meique y margen cubital de la mano derecha. Se
debe flamear el tubo antes y despus de extrada la muestra.

Tomar con la izquierda la placa Petri con agar, descansando la base

sobre los dedos medio, anular y meique; el ndice acta de bisagra
y con el pulgar, levantar la tapa lo suficiente para el paso del asa
cargada. Esta operacin se realiza a la altura del mechero
encendido.

Descargar el inoculo en un punto marginal de la superficie del medio

y con el asa misma, describir las estras hasta el margen opuesto de
la placa, cuidando de no romper el medio (ESTRIADO SIMPLE).

Dejar caer suavemente la tapa con el control de los dedos pulgar e

ndice.

Rotular datos sobre el dorso de la placa Petri sembrada as: nmero

de grupo, tipo de siembre y fecha.

Incubar a 37C por 24 horas. Colocar las placas en la estufa en

posicin invertida.

b) Aislamiento por Diseminacin

Tomar el inoculo del cultivo mixto con la pipeta Pasteur y depositar

una gota sobre el medio de la placa Petri N2, que descansa en
posicin normal sobre la mesa.

Devolver el sobrante al tubo de cultivo.

Destapar con la izquierda la placa Petri, lo necesario para introducir

la esptula de Drigalsky y diseminar la gota por la superficie del
medio, no pasando dos veces por el mismo plano.

Desechar la esptula en el frasco bactericida.

Rotular: nmero de grupo, tipo de siembra y fecha.

Incubar igual a los mtodos anteriores.

c) Aislamiento por Difusin

Prepara tres diluciones a 10-1, 10-2 y 10-3.

Depositar el inoculo de las dos ltimas diluciones.

Adicionar el agar fundido en cada placa Petri.

Nota: Siempre se trabaja a 10 cm del mechero.

Procedimiento Experimental
Morfologa de Colonias

Observa y comparar el desarrollo microbiano en las placas. Recordar

que las placas Petri fueron inoculadas con diferentes muestras usando
un mtodo distinto de aislamiento.

En el Estriado Simple, ver desarrollo difuso indiferenciado sobre los

primeros trazos; numerosas colonias aisladas bien definidas, sobre los
ltimos trazos de siembra.

Observar 5 colonias diferentes, si el aislamiento fue bien llevado. Cada

una, corresponde a una especie bacteriana distinta.

Con el plumn marcador limitar mediante un crculo o cuadrado sobre el

dorso de la placa, la colonia elegida y enumerarla.

Describir caracteres
comparativo.

En las muestras problemas, ver colonias distintas o algunas idnticas,

En muestras con escasos grmenes, las colonias crecern compartidas
en la mayor parte de la superficie del medio.

Describir algunas de las muestras problema; las que se encuentren bien

distanciadas unas de otras, siguiendo los pasos anteriores.

Se coge la muestra analizada y se tie con cristal violeta en un

portaobjetos se deja reposar por 1 min y luego se enjuaga con agua.

Luego se aade el lugol por 1 min se deja reposar y luego se enjuaga.

Se enjuaga la muestra con acetona.

Se agrega la fucsina a la muestra por 1 min y luego se enjuaga.

Se lleva al microscopio y se analiza la prueba extrada del cultivo.

morfolgicos

consultados

con

el

Cuadro

Bacilos