Capítulo 3 Espectroscopía de Absorción Molecular

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
Asignatura: ANALISIS INSTRUMENTAL

Carreras: Lic. en Bromatologa- Bromatologa
CAPITULO III
INTRODUCCIN A LA
ESPECTROSCOPA Y
ESPECTROSCOPA
MOLECULAR: UV-Vis-IR
1|

INTRODUCCIN A LA ESPECTROSCOPA
Los mtodos de anlisis que se basan en la medicin de la luz y otras formas de radiacin
electromagntica son los que ms se utilizan en la qumica analtica. La espectroscopa es una
ciencia que estudia las interacciones que suceden entre la radiacin y la materia. Los mtodos
espectroscpicos de anlisis miden la cantidad de radiacin producida o absorbida por las especies
atmicas o moleculares que se analizan. Estos mtodos tambin se clasifican de acuerdo con la
regin del espectro electromagntico que se utiliza para hacer la medicin. La espectroscopa ha
jugado un papel fundamental en el desarrollo de la teora atmica moderna. Por otra parte, tambin
han aportado las herramientas ms utilizadas para elucidar las estructuras moleculares, as como
para identificar y obtener la composicin cuantitativa y cualitativa de sustancias orgnicas e
inorgnicas.
NATURALEZA DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA
La radiacin electromagntica tambin denominada energa radiante, es una clase de energa que
se transmite por el espacio a enormes velocidades. Adopta muchas formas, siendo las ms
fcilmente reconocibles la luz y el calor radiante. Otras manifestaciones menos evidentes son la
radiacin gamma, de rayos X, ultravioleta, de microondas y de radiofrecuencias.
La luz y otras formas de energa radiante parecen tener naturaleza dual. La radiacin
electromagntica puede considerarse como una onda que viaja a la velocidad de la luz. Este modelo
ondulatorio es necesario para explicar la difraccin, la refraccin y otros efectos pticos. Sin embargo,
algunas propiedades de la citada radiacin se explican mejor si se considera que se encuentra
constituida por partculas discretas o paquetes ondulatorios de energa, conocidas como fotones,
que tambin viajan a la velocidad de la luz. Este modelo corpuscular ayuda a comprender que tanto la
emisin como la absorcin de energa radiante se llevan a cabo mediante fotones. Este doble punto
de vista de la radiacin como partcula y como onda no es mutuamente excluyente, sino
complementario.
Propiedades de onda: parmetros de inters.
La radiacin electromagntica puede representarse como oscilaciones sinusoidales
perpendiculares de campos magnticos y elctricos, tal como se muestra en la figura 1. El
campo elctrico se representa como un vector cuya longitud es proporcional a la fuerza del
campo. La abscisa de este grfico puede ser el tiempo cuando la radiacin pasa por un punto
fijo del espacio, o bien, la distancia a un tiempo determinado. Obsrvese que la direccin en la
que oscila el campo es perpendicular a la direccin en que se propaga la radiacin.
Fig. 1. Representacin de un haz de radiacin monocromtica polarizada en el plano (a) Campos elctrico
y magntico perpendiculares entre s y respecto a la direccin de propagacin (b) Representacin
bidimensional del vector elctrico (Libro: Anlisis instrumental, Skoog)
En la Figura 1b, se muestra la amplitud (A) de una onda sinusoidal como la longitud del vector
elctrico en el mximo de la onda. El tiempo, en segundos, necesario para el paso de sucesivos
mximos o mnimos por un punto fijo del espacio se denomina el perodo (p) de la radiacin. La
frecuencia ( ) es el nmero de oscilaciones del campo por segundo y es igual a 1/p. La unidad
de frecuencia es el hertz (Hz) y equivale a un ciclo por segundo (1 Hz = s -1).
Otro parmetro de inters es la longitud de onda (), que es la distancia lineal entre dos puntos
equivalentes de ondas sucesivas (por ejemplo, sucesivos mximos o mnimos).
Captulo III Introduccin a la Espectroscopia y Espectroscopia UV- Vis- IR
2|

Para medir la longitud de onda se emplean comnmente las siguientes unidades:

m = micrmetro = 10-6 metros = 10-4 centmetros
nm = nanmetro = 10-9 metros = 10-7 centmetros
0
-10
-8
A = angstrom = 10 metros = 10 centmetros
La multiplicacin de la frecuencia en ciclos por segundo por la longitud de onda en metros por
ciclo da la velocidad de propagacin (i ) en metros por segundo:
i i
(ciclo/s . m/ciclo= m/s)
(1)
En cierto sentido, la frecuencia es ms fundamental que la longitud de onda. La frecuencia

permanece constante cualquiera sea el medio en el que se propaga o transmite la radiacin. Por
el contrario, la velocidad de la radiacin depende de la composicin del medio que atraviesa.
Por tanto, se puede ver a partir de la ecuacin 1 que la longitud de onda depende tambin del
medio. El subndice i de la ecuacin 1 enfatiza estas dependencias.
En el vaco, la velocidad de la radiacin es independiente de la longitud de onda y alcanza su
valor mximo. Esta velocidad, representada por el smbolo c, se ha determinado que vale 2,997
x 108 m/s. La ecuacin 1 puede escribirse con tres cifras significativas como:
c = = 3,00 x 108 m/s
= 3,00 x 1010 cm/s
(2)
El nmero de onda , es otra forma de describir la radiacin electromagntica. Se define como

el inverso de la longitud de onda en cm (1/), la unidad para es cm-1. El nmero de onda se
usa mucho en espectroscopa infrarroja. Es una unidad til porque, al revs que la longitud de
onda, es directamente proporcional a la frecuencia y a la energa de la radiacin. As pues se
puede escribir:
donde la constante de proporcionalidad k depende del medio y es igual a la

inversa de la velocidad (ecuacin 1).
La potencia (P) de la radiacin es la energa en watts (W) del haz que llega a un rea dada por
segundo, mientras que la intensidad ( I ) es la potencia por unidad de ngulo slido. Aunque
rigurosamente no es correcto, potencia e intensidad se usan a menudo como sinnimos.
Propiedades de partcula: los fotones
En muchos tipos de interaccin de la radiacin electromagntica con la materia, es ms
adecuado considerar a la luz como paquetes de fotones o cuantos. La energa de un fotn
puede relacionarse con su longitud de onda, frecuencia y nmero de onda mediante la
ecuacin:
(3)
hc
E h
hc
h es la constante de Planck (6.63 x10
-34
J.s)
Obsrvese que, a diferencia de la longitud de onda , el nmero de onda y la frecuencia son

directamente proporcionales a la energa del fotn.
INTERACCIONES DE LA RADIACIN Y LA MATERIA
Las interacciones que son especialmente importantes en la espectroscopa son las que dan lugar a
transiciones entre diferentes niveles de energa de las especies qumicas. Otros tipos de
interacciones, como la reflexin, refraccin, la difraccin, etc., estn ms relacionadas con las
propiedades gruesas de la materia que con los niveles de energa de molculas especficas o
tomos. Aunque estas interacciones tambin son importantes en la espectroscopa, aqu slo se
analizarn las interacciones que originan transiciones en los niveles de energa. Los tipos de
interaccin dependen estrechamente de la energa de la radiacin que se utiliza y de la forma en que
sta se detecta.
El espectro electromagntico es el conjunto de todas las radiaciones electromagnticas conocidas,
dispuestas segn su longitud de onda. Incluye desde los rayos gama, de longitud de onda corta (ms
energticos), hasta las ondas de radio, de longitud de onda ms larga.
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Aumento de
longitud de
onda
Fig. 2. Diagrama de las regiones del espectro electromagntico con longitudes de onda y frecuencias de la radiacin
electromagntica. (Libro: Anlisis intrumental. Rubinson)
Obsrvese que una mnima parte del espectro corresponde a la luz la cual es la radiacin
electromagntica en la regin espectral visible para el ojo humano normal. El intervalo de longitud de
onda de la luz es aproximadamente de 380 a 780 nm.
La radiacin ultravioleta abarca el intervalo espectral desde 180 hasta 380 nm. Para anlisis se
emplea generalmente entre 200 a 380 nm. La radiacin infrarroja abarca el intervalo espectral de
0.78 a 300 m aproximadamente, pero el que se emplea ms comnmente en anlisis es de 2.5 a 25
m.
La Tabla 1 recoge los intervalos de longitud de onda y de frecuencia de las regiones del espectro que
interesan con fines analticos, as como los nombres de los diversos mtodos espectroscpicos
asociados con cada uno. La ltima columna de la tabla indica los tipos de transiciones cunticas
nucleares, atmicas o moleculares debidas a las interacciones de la radiacin con una muestra y que
constituyen el fundamento de las distintas tcnicas espectroscpicas. Obsrvese que la radiacin de
baja energa utilizada en la resonancia magntica nuclear (RMN) ocasiona cambios mnimos, como
los cambios de orientacin en el espn; por su parte la radiacin de alta energa que utiliza la
espectroscopa de rayos gamma puede inducir efectos ms drsticos, como son los cambios en la
configuracin nuclear. En nuestro curso, estudiaremos las transiciones debidas a la radiacin en la
zona UV, visible e infrarrojo. Las primeras producen cambios en la distribucin electrnica y la ltima
genera rotaciones y vibraciones en las molculas.
INTERACCIN
MTODO
Orientaciones de espn
RMN
ESR
Rotaciones
moleculares
Microondas
Vibraciones
moleculares
IR
Capa de valencia
(transiciones
electrnicas)
UV / V
Capa interna
(transiciones
electrnicas)
Rayos X
Transiciones
nucleares
Rayos
Fig. 3. Tipo de espectroscopia y las interacciones atmicas y moleculares en las cuales estn basadas.
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Tabla 1. Modelos espectroscpicos generales basados en la radiacin electromagntica.

TIPO DE
ESPECTROSCOPIA
Emisin de rayos gamma
Absorcin, emisin,
fluorescencia y difraccin
de rayos X
Absorcin ultravioleta de
vaco
Absorcin, emisin y
fluorescencia ultravioleta
visible
Absorcin y dispersin
Raman infrarroja
Absorcin de microondas
Resonancia de espn
electrnico
Resonancia magntica
nuclear
INTERVALO HABITUAL
DE LONGITUD DE
ONDA
INTERVALO HABITUAL
DE NMERO DE ONDA,
-1
cm
TIPO DE TRANSICION
CUNTICA
-------
Nuclear
Electrones internos
0,005 - 1,4
0,1 - 100
-------
10 -180
nm
1x10 a 5 x10
180 -780
nm
5 x 10 a 1,3 x 10
0,78 300 m
0,75 -3,75 mm
3
0,6 -10
1,3 x 10 a 3,3x10
13
cm
m
1,7 x10
-2
Electrones de enlace
4
Electrones de enlace
Rotacin /vibracin de
molculas
a 27
Rotacin de molculas
0,33
Espn de los electrones

en un campo magntico
a 1 x10
Espn de los ncleos en

un campo magntico
En la espectroscopa se utilizan estas interacciones entre la luz y la materia a fin de obtener

informacin sobre el analito presente en una muestra. Esta ltima puede estimularse ya sea
aplicando energa en forma de calor, de electricidad, de luz, de partculas o sometindola a alguna
reaccin qumica. Antes de aplicar cualquiera de estos estmulos, el analito est predominantemente
en su nivel ms bajo de energa o estado fundamental o estado basal. El estmulo induce una
transicin de algunas especies del analito a un estado de energa superior o estado excitado. Como
resultado de esto se producen, entre otros, fenmenos de absorcin o emisin energtica. Por lo
tanto, para obtener informacin sobre el analito, se mide la radiacin electromagntica emitida
cuando ste regresa a su estado basal (espectroscopa de emisin), o puede medirse la cantidad
de radiacin electromagntica absorbida como consecuencia de la excitacin (espectroscopa de
absorcin). A continuacin analizaremos con ms detalle estos fenmenos.
a) Proceso de absorcin: cuando una partcula, que se encuentra en estado de reposo o
estado fundamental, interacciona con un haz de luz, absorbe energa, y pasa a lo que se
denomina estado excitado. En la partcula se producen cambios que dependen de las
caractersticas de la propia partcula (tipo de enlaces, etc.) y de la energa (segn la longitud
de onda) de la luz que interacciona. La partcula en estado excitado tiende a regresar
espontneamente a su estado fundamental, desprendiendo la energa absorbida en forma de
calor. Este fenmeno puede representarse de la siguiente manera:
A + h . A* A + calor
A = absorbente en estado fundamental

A* = absorbente en estado excitado
h . = E = energa del fotn absorbido
h = constante de Planck
= frecuencia de la radiacin
Los tomos, molculas o iones slo tienen un nmero limitado de niveles de energa discretos
y, por tanto, para que se produzca la absorcin de la radiacin, la energa de los fotones
excitadores debe coincidir exactamente con la diferencia de energas entre el estado
fundamental y uno de los estados excitados de las especies absorbentes.
La medida de la cantidad de luz absorbida por una solucin de una especie absorbente, es el
fundamento en que se basan las tcnicas de Espectrofotometra de absorcin.
Con este fin, se representa la absorbancia en funcin de la longitud de onda o de la
frecuencia. Cada especie absorbente (cromgeno) tiene lo que se llama un espectro de
absorcin caracterstico. Este espectro representa la relacin entre la longitud de onda
incidente y la absorbancia que presenta una solucin de la especie, en condiciones definidas
de trabajo. Al grfico que resulta de representar en un eje de coordenadas Absorbancia
(ordenadas) frente a longitud de onda (abscisas), es a lo que llamamos espectro de
absorcin (figura 4).
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Fig. 4. Espectro de absorcin
Los espectros de absorcin son de utilidad tanto para seleccionar la longitud de onda ms
adecuada para una medida cuantitativa (longitud de onda a la que la absorcin es mxima),
como para fines de identificacin cualitativa.
En la qumica analtica instrumental, el trmino espectro posee diversas variantes. Un
espectro de emisin se obtiene por separacin de las longitudes de onda individuales de la
energa emitida por una fuente de luz. Un espectro de absorcin es el conjunto de lneas o,
ms frecuentemente, bandas cuyas longitudes de onda son absorbidas por el medio al pasar
por ste la luz compuesta.
Los cambios en una molculas ocasionados por absorcin de luz pueden ser electrnicos
(cambio en la energa de los electrones distribuidos alrededor de los tomos de la molcula),
vibracionales (cambios en la separacin promedio de los ncleos de uno o ms tomos) y
rotacionales (rotacin de un dipolo qumico). Se necesita una radiacin de energa ms alta
para que se efecten transiciones electrnicas (cambios) que la necesaria para que se
efecten transiciones rotacionales o vibracionales.
Absorcin Atmica: el paso de radiacin policromtica ultravioleta o visible a travs

de un medio constituido por partculas monoatmicas, como mercurio o sodio
gaseosos, produce la absorcin de slo unas pocas frecuencias bien definidas. La
relativa simplicidad de tales espectros se debe al pequeo nmero de posibles estados
energticos de las partculas absorbentes. La excitacin slo puede producirse
mediante un proceso electrnico en el que uno o varios de los electrones del tomo se
promocionan a un nivel de energa ms alto.
Las longitudes de onda ultravioleta y visible tienen energa suficiente para originar
transiciones slo de los electrones ms externos o electrones de enlace.
Absorcin Molecular: los espectros de absorcin de las molculas poliatmicas, y en

particular en estado condensado, son bastante ms complejos que los espectros
atmicos, porque el nmero de estados de energa de las molculas es, en general,
enorme si se compara con el nmero de tomos aislados. La energa E asociada a las
bandas de una molcula viene dada por tres componentes:
E = Eelectrnica + E vibracional + E rotacional

En sntesis, lo ms importante es que la muestra absorba parte de la radiacin
incidente para que se promueva la transicin del analito hacia un estado excitado. En
la espectroscopa de absorcin, se mide la cantidad de luz absorbida en funcin de
la longitud de onda utilizada, lo cual puede dar informacin cualitativa y cuantitativa de
la muestra.
b) Proceso de emisin: algunos compuestos tienen la propiedad, tras ser excitados, de retornar
a su estado fundamental, produciendo una emisin de energa electromagntica. La luz
emitida se puede medir, y ello constituye el principio de algunas tcnicas, como la Fotometra
de llama, o la Fluorescencia. Este fenmeno puede representarse de la siguiente manera:
A + h . 1 A* A + h . 2
A = absorbente en estado fundamental

A* = absorbente en estado excitado
h . 1 = E1 = energa de excitacin
h . 2 = E2 = energa de emisin
La energa radiante emitida cuando el analito regresa a su estado basal, puede dar
informacin sobre la naturaleza del mismo y de su concentracin.
La radiacin electromagntica se origina cuando partculas excitadas (iones, tomos o
molculas) se relajan a niveles de energa basal cediendo su exceso de energa en forma de
6|

fotones. La excitacin puede producirse por diversos medios, tales como el bombardeo con
electrones u otras partculas elementales, la exposicin a chispas de corriente alterna de
potencial elevado, el tratamiento trmico en un arco o una llama, o la absorcin de radiacin
electromagntica.
Las partculas elementales radiantes (tomos o iones atmicos) que estn muy separadas
entre s, como en el estado gaseoso, se comportan como cuerpos independientes y, a
menudo, producen radiacin que contiene slo unas pocas longitudes de onda especficas.
Por tanto el espectro resultante es discontinuo y se denomina un espectro de lneas. Por otro
lado, un espectro continuo es aqul en el que todas las longitudes de onda estn presentes
dentro de un intervalo apreciable, o uno en el que las longitudes de onda estn tan prximas
entre s que la resolucin no es factible por medios ordinarios.
Tanto los espectros continuos como los de lneas tienen importancia en qumica analtica
instrumental. Los primeros se emplean con frecuencia como fuentes en mtodos basados en
la interaccin de la radiacin con la materia, como la espectrofotometra. Por otra parte, los
espectros de lneas son importantes porque permiten la identificacin y determinacin de las
especies emisoras.
Esta seccin se enfocar en la espectroscopa de absorcin en la regin UV/Visible del espectro, ya
que este tipo de anlisis es el que ms se utiliza en reas tan diversas como qumica, biologa,
ingeniera, agricultura y anlisis de alimentos.
LA LEY DE LAMBERT Y BEER O LEY DE LA ABSORCIN
Cada especie molecular tiene la capacidad de absorber su propia frecuencia caracterstica de la
radiacin electromagntica. Este proceso transfiere energa a la molcula y provoca una disminucin
en la intensidad de la radiacin electromagntica incidente. En la Figura 5 se representa un haz de
radiacin paralela, antes y despus de haber atravesado una capa de b cm de grosor de una solucin
de una especie absorbente de concentracin c. La flecha ms grande en el rayo incidente significa
que la energa radiante es mayor que la transmitida por la solucin.
b
b
P0
P
Solucin absorbente de
concentracin c
Fig. 5. Atenuacin de un haz de radiacin por una solucin absorbente.
Como puede verse, debido a las interacciones que suceden entre los fotones y las partculas
absorbentes, la absorcin de la radiacin atena, es decir disminuye la energa, del rayo incidente
desde P0 hasta P de acuerdo, con la ley de la absorcin. Cuanto mayor sea la trayectoria del rayo
en la solucin de analito de una concentracin dada, habr ms especies que absorban la radiacin y
la atenuacin ser mayor.
La transmitancia T de la solucin es la fraccin de radiacin incidente transmitida por la solucin, tal
como se muestra en la ecuacin 4. A menudo, se expresa la transmitancia como un porcentaje.
P
P0
(4)
%T
P
.100
P0
(5)
La absorbancia A de una solucin es una medida que relaciona en forma logartmica la radiacin
incidente y la que emite la muestra. Est relacionada con la transmitancia en forma logartmica
(ecuacin 5) y viene definida por la ecuacin:
(6)
P
P
A logT log
P0
log 0
P
Obsrvese que el aumento en la absorbancia de una solucin se acompaa de una disminucin en la

transmitancia y que, a diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solucin aumenta cuanto
mayor es la atenuacin del haz.
La ley de la absorcin, tambin conocida como ley de Lambert y Beer, o simplemente ley de Beer,
da informacin cuantitativa de cmo es que la atenuacin de la radiacin depende de la
concentracin de las molculas que la absorben y de la distancia que recorre el rayo en el medio
absorbente. Volviendo al anlisis de la figura 5, la ley de absorcin establece la relacin entre el
grado de absorbancia de una solucin y otras dos variables: la concentracin del absorbente y la
longitud del trayecto que el haz de luz recorre a travs de la solucin. Experimentalmente se muestra
que la absorbancia es directamente proporcional a:
7|

Una constante que es una propiedad caracterstica de la sustancia por s misma as como de
la longitud de onda medida. Se denomina absortividad especfica (a) si la concentracin se
expresa en gramos/litro y absortividad molar () si la concentracin se expresa en moles /
litro. Es deseable que su valor sea elevado en el anlisis cuantitativo porque se logra una
mayor sensibilidad analtica.
La longitud de paso ptico (b) a travs del cual la luz viaja hacia la muestra. A menudo se
expresa en cm.
La concentracin de la sustancia que absorbe la luz. Puede expresarse en gramos/ litro (c) o
moles / litro (C).
Estos tres parmetros definen la expresin matemtica de la ley de Lambert - Beer:

A= abc
A=bC
(6)
De esto podemos deducir el enunciado de la ley de absorcin:

La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin de la
sustancia y a la longitud del paso de luz.
La ley de Beer se puede utilizar en distintas maneras. Pueden calcularse las absortividades molares
de las especies si se conocen sus concentraciones. Tambin se puede emplear el valor de la
absorbancia medida para conocer la concentracin si es que se conocen la absortividad y la longitud
de la trayectoria de la radiacin. Sin embargo, la absortividad es una funcin de diversas variables,
tales como el disolvente, la composicin de la solucin, la temperatura y la longitud de onda. Por esta
razn es aconsejable no depender nunca de los valores dados en la literatura para hacer un anlisis
cuantitativo. Para conocer la absortividad en las condiciones de anlisis, se construye una curva de
calibracin.
La ley de absorcin tambin se aplica a soluciones que contengan ms de una clase de especies
absorbentes. Suponiendo que no haya interaccin entre las distintas especies, la absorbancia total
para un sistema multicomponente se expresa como la suma de las absorbancias parciales en la que
los subndices 1, 2, ., n se refieren a los componentes absorbentes.
Atotal = A1 + A2 + . . . . + An
Atotal = 1bc1 + 2bc2 + . . . + nbcn
Limitaciones propias de la ley de Beer

Pocas excepciones pueden encontrarse a la idea generalizada de que existe una relacin lineal
entre la absorbancia y la longitud de la trayectoria. Por el contrario, cuando b es constante se
suelen encontrar desviaciones a la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentracin. Algunas de esas desviaciones son fundamentales y representan limitaciones
reales a la ley. Otras ocurren como consecuencia de la manera en que se realizan las medidas
de absorbancia, o como resultado de los cambios qumicos asociados a las variaciones de
concentracin, estas dos ltimas se conocen a veces, respectivamente como desviaciones
instrumentales y desviaciones qumicas.
Limitaciones reales: la ley de Beer slo describe bien el comportamiento de la

absorcin en soluciones diluidas, en este sentido, es una ley lmite. A concentraciones
elevadas (mayores a 0,01 M), la distancia promedio entre las especies responsables de
la absorcin disminuye hasta el punto en que cada una afecta a la distribucin de carga
de sus vecinas. Esta interaccin, a su vez, puede alterar la capacidad de que las
especies absorban a una determinada longitud de onda de radiacin. Dado que el grado
de interaccin depende de la concentracin, el hecho de que ocurra este fenmeno
causa ciertas desviaciones de la relacin lineal entre la absorbancia y la concentracin.
Aunque el efecto de las interacciones moleculares no suele ser significativo a
concentraciones por debajo de 0,01 M, se encuentran algunas excepciones entre ciertos
iones o molculas orgnicas de gran tamao.
Desviaciones qumicas Se producen desviaciones de la ley de Beer cuando un

analito se disocia, asocia o reacciona con un disolvente, para dar lugar a un producto
que presenta un espectro de absorcin diferente que el del analito. Los indicadores
cido/base constituyen un ejemplo frecuente de este comportamiento.
8|

Desviaciones instrumentales El cumplimiento estricto de la ley de Beer slo se

observa con una radiacin verdaderamente monocromtica. Esta observacin
constituye tambin otra manifestacin del carcter lmite de esta ley. Por desgracia, rara
vez se puede usar de forma prctica una radiacin que se limite a una sola longitud de
onda, ya que los dispositivos que aslan partes de la seal de salida de una fuente
continua, originan en torno al valor deseado una banda ms o menos simtrica de
longitudes de onda. Esto causa que la curva de absorbancia concentracin se desve
hacia el eje de las concentraciones. Otra de las desviaciones instrumentales se debe a la
presencia de radiacin parsita. La radiacin que sale de un monocromador suele estar
contaminada con pequeas cantidades de radiacin dispersada o parsita, la cual llega
a la rendija de salida debido a la dispersin y a las reflexiones en las diversas superficies
interiores. A menudo, la radiacin parsita difiere bastante en longitud de onda respecto
a la radiacin principal y, adems, puede no haber atravesado la muestra.
ESPECTROSCOPA UV V IR
Los primeros instrumentos espectroscpicos se desarrollaron para utilizarse en la regin
visible y por tanto se denominaron instrumentos pticos. Hoy en da, este trmino se ha ampliado con
el fin de incluir tambin a los instrumentos diseados para las regiones ultravioleta e infrarroja.
Aunque la terminologa no es estrictamente correcta, sirve para subrayar los numerosos aspectos
comunes a los instrumentos usados en esas tres importantes regiones espectrales.
El objetivo de este captulo es describir aquellos componentes de los instrumentos
pticos que son comunes a todas las diversas tcnicas pticas espectroscpicas que se
tratan.
Los instrumentos para estudios espectroscpicos de regiones ms energticas que la
ultravioleta y menos que la infrarroja poseen caractersticas que difieren sustancialmente de las de los
instrumentos pticos.
1- COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS PTICOS:
Los mtodos pticos se basan en seis fenmenos- denominados: (1) absorcin, (2)
fluorescencia, (3) fosforescencia, (4) dispersin (5) emisin y (6) quimioluminiscencia. Para medir
dichos fenmenos la mayora de los componentes de los instrumentos son muy parecidos, aunque
difieren algo en su configuracin. Adems, las propiedades necesarias de dichos componentes son
las mismas prescindiendo de su aplicacin a la regin ultravioleta, visible o infrarroja del espectro.
Los instrumentos espectroscpicos caractersticos incluyen cinco componentes: (1) una fuente
estable de energa radiante, (2) un recipiente transparente para contener la muestra, (3) un
dispositivo para realizar la medida que asle una regin restringida del espectro, (4) un detector de
radiacin, que convierte la energa radiante en una seal utilizable (en general elctrica) y (5) un
sistema de tratamiento y lectura de la seal, el cual visualiza la seal transducida en una escala
medidora, en un tubo de rayos catdicos, en un medidor digital o en un registrador grfico.
(a)
(b)
Fuente de lmpara
o de slido
incandescente
(1)
Cubeta de
la muestra
(2)
Selector de
longitudes de
onda
(3)
Detector
fotoelctrico
(4)
Sistema de
tratamiento y
lectura de seales
(5)
Cubeta de
la muestra
(2)
Selector de
longitudes de
onda
(3)
Detector
fotoelctrico
(4)
Sistema de
tratamiento y
lectura de seales
(5)
Detector
fotoelctrico
(4)
Sistema de
tratamiento y
lectura de seales
(5)
Fuente de lmpara
o de slido
incandescente
(1)
(c)
Fuente y cubeta con

la muestra
(1 y 2 )
Selector de
longitudes de
onda
(3)
9|

La figura ilustra las tres formas de configuracin de estos componentes para realizar los seis
tipos de mediciones espectroscpicas mencionadas antes. Como puede verse en la figura los
componentes (3),(4) y (5) se colocan de igual manera para cada tipo de medida.
Las dos primeras configuraciones instrumentales, que se usan para la medida de absorcin,
fluorescencia, fosforescencia y dispersin necesitan una fuente externa de energa radiante. Para la
absorcin, el haz procedente de la fuente pasa directamente de la muestra al selector de longitud de
onda (en algunos instrumentos, la posicin de la muestra y el selector se invierte). La ltima de las
tres corresponde a espectroscopa de emisin aqu la fuente es la propia muestra, retenida en un
recipiente para emitir radiacin fluorescente, fosforescente o dispersada que se mide a un ngulo
dado (por lo general 90 grados) respecto de la fuente.
Fuentes de radiacin
Para utilizarse en espectroscopa una fuente debe generar un haz de radiacin con potencia
suficiente para que se detecte y mida con facilidad. Adems su potencia de salida debe ser
estable durante perodos de tiempo razonables.
Tpicamente, la potencia radiante de una fuente vara de manera exponencial con el potencial de la
fuente de alimentacin elctrica.
Para proporcionar la estabilidad necesaria, a menudo, se utiliza una fuente reguladora de potencia.
El problema de la estabilidad de la fuente se soluciona con diseos de doble haz en los que la
relacin de la seal de la muestra respecto a la de la fuente en ausencia de muestra sirve como
parmetro analtico. En dichos diseos, las intensidades de los dos haces se miden simultnea o
casi simultneamente de manera que el efecto de las fluctuaciones de la seal de salida de la
fuente se anula en gran parte.
Las fuentes espectroscpicas ms ampliamente utilizadas son de dos tipos: continuas y de lneas.
a - Fuentes continuas:
Las fuentes continuas se usan mucho en espectroscopia de absorcin y de fluorescencia . La
fuente ms comn para la regin ultravioleta es la lmpara de deuterio. Cuando se precisa
una fuente particularmente intensa, se utilizan lmparas de arco llenas de un gas, argn,
xenn o mercurio a alta presin. Para la regin visible del espectro, la lmpara de filamento
de tungsteno se usa casi universalmente. Las fuentes de infrarrojo ms comunes son slidos
inertes calentados a 1500-2000 K, una temperatura a la que la mxima salida radiante se
produce entre 1,5-1,9 m.
Fuentes de radiacin para la regin Ultravioleta:
- Lmparas de deuterio e hidrogeno: La excitacin elctrica de deuterio o hidrgeno a
baja presin produce un autntico espectro continuo en la regin
ultravioleta. El mecanismo por el cual se produce un espectro continuo,
supone la formacin inicial de una especie molecular excitada para dar
dos especies atmicas ms un fotn ultravioleta.
Tanto la lmpara de deuterio como la de hidrgeno dan lugar a un
especto continuo utilizable en la regin de 160 a 375 nm. Puesto que
el vidrio absorbe fuertemente a longitudes de onda menores de unos
350 nm, las lmparas de deuterio e hidrogeno deben utilizar ventanas
de cuarzo..
- Lmpara de filamento de tungsteno: Es la ms comn de radiacin visible y del
infrarrojo cercano. La distribucin de energa de esta lmpara se
aproxima a la de un cuerpo negro y por tanto depende de la temperatura,
es til para la regin de longitud de onda entre 350 y 2500 nm. El lmite
inferior lo impone la cubierta de vidrio que aloja al filamento. Necesita
mantener un control de voltaje para estabilizarla, utilizando
transformadores de voltaje constante.
Las lmparas de tungsteno/ halgeno contienen una pequea cantidad
de yodo dentro de la cubierta de cuarzo que aloja al filamento de tungsteno. Dada la
elevada temperatura de la lmpara (3500 K) hay que utilizar cuarzo. La vida media es
ms del doble de la de una lmpara ordinaria. Estas lmparas son bastantes mas
eficientes y extienden su intervalo de salida hasta bien entrada la regin ultravioleta. Por
estas razones, son las que se emplean en muchos instrumentos espectroscpicos
modernos.
Fuentes de radiacin para la regin Infrarrojo
Consisten en un slido inerte que se calienta elctricamente a una temperatura comprendida
entre 1500 y 2200 K. Como resultado se obtiene una radiacin continua.
10 |

- Emisores de Nernst: Constituido por oxido de tierras raras, tiene forma cilndrica con un
dimetro de 1 a 2 mm y una longitud de unos 20 mm. Los extremos del cilindro estn
unidos a unos conductores de platino que permiten el paso de la electricidad alcanzando
temperaturas de 1200 y 2200K.
- Fuente globar: Es una varilla de carburo de silicio que por lo general tiene unos 50 mm
de longitud y 5 mm de dimetro. Se calienta tambin elctricamente (1300 a 1500 K).
- Fuente de filamento incandescente: Una fuente de intensidad algo menor, con vida til
ms prolongada en comparacin con un Globar o un emisor de Nernst, es un espiral muy
apretado de alambre de nicromo, que se calienta por el paso de una corriente elctrica.
Alambres de rodio, introducidos en el interior de cilindros de cermica.
- El arco de mercurio: Para el infrarrojo lejano ( 50 m) ninguna de las fuentes antes
descriptas, proporcionan suficiente energa para una deteccin adecuada. En este caso se
utiliza un arco de mercurio de alta presin. Es un tubo de cuarzo que contiene vapor de
mercurio a una presin mayor que una atmsfera.
- Lmpara de filamento de tungsteno: Esta es una fuente adecuada para la regin del
infrarrojo cercano 4000 a 12800 cm-1.
b - Fuentes de lneas:
Las fuentes que emiten unas pocas lneas discretas se usan ampliamente en espectroscopia
de absorcin atmica, en espectroscopia de fluorescencia atmica y molecular y en
espectroscopia Raman (la refractometra y la polarimetra tambin emplean fuentes de lneas)
Las familiares lmparas de vapor de mercurio y de sodio, utilizadas en distintos instrumentos
espectroscpicos, proporcionan unas pocas lneas agudas en las regiones ultravioleta y
visible.
Las lmparas de ctodo hueco y de descarga sin electrodos son las fuentes de lneas ms
importantes para los mtodos de absorcin atmica y de fluorescencia.
Con el fin de realizar mediciones de la absorcin molecular, se necesita una fuente continua
cuya potencia no vare bruscamente en un intervalo considerable de longitudes de onda.
Selectores de longitud de onda
Para
la
mayora
de
anlisis
espectroscpicos se necesita una radiacin
constituida por un grupo limitado y continuo
de
longitudes
de
onda
estrechas
denominado banda. Un ancho de banda
estrecho tiende a aumentar la sensibilidad
de las medidas de absorbancia, puede
hacer ms selectivos tanto los mtodos de
absorcin como los de emisin y con
Figura: Anchuras de banda efectiva para dos tipos de filtros
frecuencia es una exigencia con miras a
obtener una relacin lineal entre la seal ptica y la concentracin.
La seal de salida de un selector de longitud de onda correspondera, idealmente a una radiacin de
una nica longitud de onda o frecuencia.
No existe ningn selector de longitud de onda que se aproxime al caso ideal, en su lugar lo que se
obtiene es una distribucin de longitudes de onda como en la figura.
En este caso, se representa el tanto por ciento de radiacin incidente de una determinada longitud de
onda, transmitida por el selector, en funcin de la longitud de onda. El ancho de banda efectivo,
definido en la figura es una medida inversa de la calidad de dispositivo, siendo la resolucin mejor
cuanto ms estrecho es el ancho de banda.
Existen dos clases de selectores de longitud de onda, los filtros y los monocromadores.
Filtros (sistemas aislamiento de )
Dos tipos de filtros se emplean para la seleccin de la longitud de onda, los de absorcin (se limitan
a la regin visible del espectro) y los de interferencia (operan en las regiones ultravioleta, visible e
infrarroja).
- Filtros de absorcin: En general son mas baratos que los filtros de interferencia, se utilizan para la
seleccin de bandas en la regin visible. Estos filtros funcionan absorbiendo ciertas zonas del
espectro. El tipo mas usual es un vidrio coloreado o una suspensin de un colorante en gelatina que
se coloca entre dos placas de vidrio. El primero tiene la ventaja de una mayor estabilidad trmica.
Los filtros de absorcin tienen anchos de banda entre 30 y 250 nm. Los filtros de corte tienen
transmitancia de casi 100% en una zona del espectro visible, pero luego disminuyen, con rapidez,
hasta un valor de transmitancia igual a cero en el resto. Una banda espectral estrecha puede aislarse
si se acopla un filtro de corte con un segundo filtro.
11 |

De la figura resulta evidente que las caractersticas de funcionamiento de los filtros de absorcin son
bastantes inferiores a las de los filtros de interferencia . No solo son sus bandas mayores sino que,
para anchos de banda estrechos, la fraccin de luz transmitida tambin es menor.
- Filtros de interferencia: stos se basan en las interferencias pticas para as proporcionar bandas
de radiacin bastante estrechas
Un filtro de interferencia consiste en un dielctrico transparente (con
frecuencia fluoruro de calcio o de magnesio) que ocupa el espacio entre dos pelculas metlicas
semitransparentes. Esta disposicin se coloca entre dos placas de vidrio y otros materiales
transparentes
El grosor de la capa dielctrica se controla con cuidado y
determina la longitud de onda de la radiacin transmitida.
Cuando un haz perpendicular de radiacin colimada incide
en esta disposicin, una fraccin atraviesa la primera capa
metlica, mientras que la restante se refleja. La parte que
ha pasado, sufre una particin similar cuando incide en la
segunda pelcula metlica. Si la parte reflejada de la
segunda interaccin es de longitud de onda adecuada, se
refleja en parte desde la cara interior de la primera capa
en fase con la luz incidente de la misma longitud de onda.
El resultado es que se refuerza esta determinada longitud
de onda, mientras que la mayora de las otras, fuera de
fase, sufren una interferencia destructiva.
La relacin entre el grosor de la capa dialctica t y la
longitud de onda transmitida puede encontrarse con la
ayuda de la figura parte (b).
Monocromadores:
En muchos mtodos espectroscpicos, es preciso o deseable poder variar, de forma continua
y en un amplio intervalo, la longitud de onda de la radiacin. Este proceso se denomina barrido de un
espectro. Los monocromadores se disean para realizar barridos espectrales. Los monocromadores
para las radiaciones ultravioleta, visible e infrarroja son similares en cuanto a construccin mecnica
ya que todos ellos utilizan rendijas, lentes, espejos, ventanas y redes o prismas. Para garantizar el
barrido, los materiales con los que se fabrican estos componentes, dependen de la regin de
longitudes de onda a la que se pretende trabajar.
- Componentes de los monocromadores:
La figura muestra los elementos pticos de todos los monocromadores:
12 |

(1)
(2)
(3)
(4)
una rendija de entrada que proporciona una imagen ptica rectangular

una lente o espejo colimador que produce un haz paralelo de radiacin
un prisma o red que dispersa la radiacin en sus longitudes de onda individuales
un elemento focalizador que forma de nuevo la imagen de la rendija y la enfoca en una
superficie plana denominada plano focal
(5) una rendija de salida en el plano focal, que aisla la banda espectral deseada.
Adems la mayora de los monocromadores tienen ventanas de entrada y salida, cuyo diseo
protege a los componentes de polvo y los humos corrosivos del laboratorio.
Como se muestra en la figura en los monocromadores hay dos clases de elementos dispersantes:
redes de reflexin y prismas. Como ilustracin se muestra un haz constituido por solo dos longitudes
de ondas 1 y 2(1 2)
La radiacin que entra en los monocromadores a travs de una estrecha abertura rectangular
o rendija, se colima y entonces incide en la superficie del elemento dispersante con un ngulo dado.
Para un monocromador de red, la dispersin angular de las longitudes de onda origina la difraccin
que se produce en la superficie de deflexin, para un prisma, la refraccin en las dos caras da lugar
a una dispersin angular de la radiacin tal como se muestra. En ambos casos, la radiacin
dispersada se enfoca en el plano focal AB en el que aparece en forma de dos imgenes
rectangulares de la rendija de entrada (una para 1 y la otra para 2). Por rotacin del elemento
dispersante, se puede enfocar una u otra banda en la rendija de salida.
Antiguamente, la mayora de los monocromadores eran instrumentos de prisma. Sin embargo
actualmente casi todos los monocromadores comerciales se basan en redes de reflexin porque son
ms baratas, proporcionan mejor separacin de longitudes de onda para un mismo tamao de
elemento dispersante y dispersan linealmente la radiacin.
Caractersticas de funcionamiento de los monocromadores: La calidad de un monocromador
depende de la pureza de su radiacin de salida, de su capacidad para resolver longitudes de onda
adyacentes de su poder de captacin de luz y de su anchura espectral.
Recipientes para muestras : cubetas celdas
Todos los estudios espectroscpicos, con excepcin de la
espectroscopia de emisin precisan recipientes que contengan
la muestra. Al igual que los elementos pticos de los
monocromadores, las celdas o cubetas que contienen las
muestras deben fabricarse de un material que permita el paso
de la radiacin de la regin espectral de inters. As para
trabajar en la regin ultravioleta (por debajo de los 350 nm) se
necesita cuarzo o slice fundida, ambas sustancias son
trasparentes en la regin visible y tambin en la infrarroja
hasta unos 3m. Los vidrios de silicato pueden emplearse en la
regin de 350 a 2000 nm. Los recipientes de plstico, tambin
se utilizan en la regin visible. La sustancia mas comnmente empleada para las ventanas de las
celdas para la regin infrarroja es el cloruro de sodio cristalino, tambin pueden usarse con este fin
los dems materiales transparentes al infrarrojo.
13 |

Debido a la tendencia de los disolventes a absorber, las cubetas para el infrarrojo suelen ser mucho
mas estrechas (0,1 a 1 mm) que las empleadas en las regiones ultravioleta y visible. Las
concentraciones de muestra de 0,1 a 10%. Con frecuencia, las celdas son desmontables, con
espaciadores de tefln permitiendo variar la longitud del camino ptico.
Las ventanas de cloruro de sodio son las ms utilizadas, se pulen con un polvo amortiguador
volviendo a su condicin original.
Las mejores cubetas tienen ventanas que son perfectamente perpendiculares a la direccin
del haz para minimizar las prdidas por reflexin. Para los trabajos en las regiones ultravioleta y
visible, la longitud mas comn de la cubeta es 1 cm, estas son contrastadas y calibradas. Tambin
pueden tener caminos pticos desde 0,1 hasta 10 cm. Especial cuidado hay que tener en repetir la
posicin de la cubetas respecto al haz, de otro modo, las variaciones del camino ptimo y las
prdidas por reflexin en las superficies curvas cuando las cubetas son cilndricas pueden causar
errores significativos.
La calidad de los datos de absorbancia depende de manera crtica de la forma en que se usen
y mantengan las cubetas contrastadas. Las huellas dactilares, la grasa u otras manchas en las
paredes, alteran de forma notable las caractersticas de transmisin de una cubeta.
Por lo tanto es obligada una limpieza a fondo, antes y despus de usarlas, las superficie de las
ventanas no debe tocarse durante su manipulacin. Las celdas contrastadas no deberan secarse
nunca calentndolas en una estufa o con una llama. Para su limpieza se recomienda, con papel
para lentes empapado con metanol de grado espectromtrico, el metanol se evapora dejando las
superficies de las cubetas libre de impurezas.
Tcnicas para la manipulacin de la muestra
Vimos que en espectroscopia ultravioleta y visible los espectros se obtienen a partir de soluciones
diluidas del analito. En espectroscopia de infrarrojo, podemos analizar muestras lquidas, slidas y
gaseosas.
Lquidos puros
Cuando la cantidad de muestra es pequea o
cuando no se dispone del disolvente
apropiado, es habitual obtener los espectros
del lquido puro. En este caso solo una
pelcula muy delgada tiene un camino ptico
suficientemente corto como para producir
espectros satisfactorios. Una gota del lquido
puro se comprime entre dos placas de sal de
roca para obtener una placa con un grosor de
0,01 mm o menos. Las dos placas se
mantienen unidas por capilaridad y se colocan
entonces en la trayectoria del haz.
Slidos
Figura: Prensa de preparacin de pastillas de

KBr
Los espectros de slidos que no pueden disolverse

en un disolvente transparente al infrarrojo, se
obtienen con frecuencia dispersando el analito en
una matriz liquida o slida y analizando la mezcla
resultante.
Estas tcnicas requieren que el tamao de
partcula del slido suspendido sea menor que la
longitud de onda del haz infrarrojo.
Se tritura de 2 a 5 mg de una muestra finamente
pulverizada (tamao de partcula 2m) en
presencia de unas gotas de un aceite pesado de un
hidrocarburo (Nujol).
Otra tcnica consiste en partir de un miligramo o
menos de muestra finamente triturada que se
mezcla ntimamente con unos 100mg de polvo de
bromuro de potasio desecado.
La mezcla se puede efectuar con un mortero y mejor aun en un pequeo molino de bolas. La mezcla
se comprime luego en un troquel especial a una presin de 700 a 1000 Kg/cm 2 obteniendo un disco
transparente, mejores resultados si el disco se forma al vaco eliminando el aire ocluido. Luego el
disco se coloca en el haz del instrumento para su anlisis espectroscpico.
14 |

Gases:
El espectro de un lquido de bajo punto de ebullicin o de un gas se puede obtener permitiendo a la
muestra que se expanda en una cubeta en la que se ha hecho el vaco.
Existe una variedad de cubetas para este objeto, con longitudes de camino ptico que varan desde
unos pocos centmetros a varios metros.
Detectores de radiacin
Estos dispositivos son transductores que convierten la energa radiante en una seal elctrica.
El detector ideal debera tener, un amplio intervalo de longitudes de onda, una elevada sensibilidad,
una elevada relacin seal/ruido y una respuesta constante. Adems debera poseer un tiempo de
respuesta rpido y una mnima seal de salida en ausencia de iluminacin. Por ultimo, la seal
elctrica producida por el transductor debera ser directamente proporcional a la potencia radiante P.
Esto es: S = k P
S= respuesta elctrica en trminos de corriente , voltaje o resistencia

K= sensibilidad de calibracin.
Existen dos tipos de transductores de radiacin uno responde a los fotones y el otro al calor.
- Detectores de fotones: (tambin llamados detectores fotoelctricos o cunticos) tienen una
superficie activa capaz de absorber radiacin. Existen diferentes tipos:
Fotoclulas o clulas fotovoltaicas semiconductoras, o clulas con capa de barrera.
Consisten en una lmina de cobre sobre la que se ha depositado una capa de material
semiconductor, como selenio xido cuproso. Esta capa est cubierta por una capa de
metal transparente que sirve como electrodo colector. Al iluminarse a travs del electrodo
transparente, se produce un flujo de electrones que puede ser medido con un ampermetro.
Estos detectores son resistentes, relativamente econmicos, y sensibles desde el UV hasta
los 1000 nm. No se requiere ningn aporte externo de energa, y la corriente producida es
directamente proporcional a la energa de llega.
Las fotoclulas muestran el llamado efecto de fatiga, consistente en que presentan una
subida
inicial de corriente que luego decrece gradualmente hasta el equilibrio. Por ello, conviene
esperar unos 30-60 segundos entre lecturas.
Fototubos multiplicadores. Es un tubo que contiene en su interior un ctodo consistente en

una placa de metal que emite electrones de forma proporcional a la energa que incide
sobre ella.
Contiene adems un nodo, que recoge los electrones, y de 9 a 14 dnodos o nieveles de
energa.
Los electrones producidos en el primer choque contra el ctodo pasan a chocar contra una
superficie secundaria, donde cada electrn produce entre 4 y 6 electrones adicionales que
van a otro nivel (snodos), y as sucesivamente, multiplicndose de este modo el efecto del
primer choque de la luz contra el ctodo, hasta que los electrones llegan al nodo, y la seal
se amplifica en cientos o miles de veces.
Los fototubos tienen un rpido tiempo de respuesta, no muestran efectos de fatiga tan altos
como otros detectores, y son muy sensibles.
- Detectores de calor:
Los detectores de fotones analizados anteriormente no pueden ser utilizados para medir la
radiacin infrarroja, ya que los fotones de esta regin carecen de la energa suficiente para
causar la fotoemisin de electrones. Por lo tanto, debern emplearse detectores trmicos.
Desafortunadamente, sus caractersticas de funcionamiento son definitivamente inferiores a las
de los anteriores.
- Detectores trmicos Un detector trmico consiste en un a fina superficie ennegrecida
que absorbe la radiacin infrarroja y como consecuencia, aumenta la temperatura.
Este aumento se transforma en una seal elctrica que posteriormente se amplifica y
se mide. Los cambios de temperatura son pequeos.
-
Termopares: Un par de uniones que se forman soldando los extremos de dos piezas
de un metal como el bismuto y otro metal distinto como el antimonio. Entre las dos
uniones se genera un potencial que varia en funcin de su diferencia de temperatura.
La unin se ennegrece (para mejorar su capacidad de absorber calor) y se sella en
una cmara de vaco con una ventana transparente a la radiacin infrarroja.
Detectores piroelctricos: Se construyen con laminas cristalinas de materiales

piroelctricos, son aislantes (materiales dielctricos) con unas especiales propiedades
trmicas y elctricas. Al colocar el cristal piro elctrico entre las placas de dos
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electrodos (uno de los cuales es transparente a la radiacin infrarroja) se produce una

capacitancia que depende de la temperatura, al incidir la radiacin infrarroja cambia la
temperatura y se altera la distribucin de carga a travs del cristal lo que se puede
detectar como una corriente en un circuito elctrico externo conectado a las dos caras
del condensador.
Procesadores de seales y dispositivos de lectura
Es un dispositivo electrnico que amplifica la seal electrnica del detector; adems puede alterar la
seal de corriente continua a alterna (o a la inversa), cambiarla de fase y filtrarla. Asimismo puede
ser necesario que realice operaciones matemticas con las seales tales como diferenciar, integrar o
convertir en logaritmo.
Los instrumentos modernos incorporan distintos tipos de dispositivos de lectura. Por ejemplo
medidores digitales, escalas de los potencimetros, registradores y tubos de rayos catdicos.
2- TIPOS GENERALES DE INTRUMENTOS PARA MEDICIONES DE ABSORCIN MOLECULAR
a)
b)
Figura: Instrumentos para mediciones de absorcin ultravioleta/visible/ Infrarrojo cercano.

a) De un slo haz; b) de doble haz .
En la figura se muestra unos diagramas de bloques que indican los sistemas pticos de dos tipos de
instrumentos para medidas de absorcin ultravioleta/visible/infrarrojo cercano.
Instrumento de un solo haz, correspondiente a la parte (a) es el tipo ms sencillo:
El selector de la longitud de onda es un filtro o un monocromador.
La determinacin de la transmitancia supone tres etapas sucesivas separadas en el tiempo:
1) ajuste del 0% de T colocando un obturador en posicin,
2) ajuste del 100% de T con el disolvente en la trayectoria de la luz y
3) medicin del % de T con la muestra colocada.
El instrumento requiere que la fuente y el sistema electrnico presenten un comportamiento
constante durante el tiempo necesario para completar las tres etapas.
Instrumento de doble haz, en la parte (b) de la figura. El espejo sectorizado rotatorio dirige la
radiacin procedente del filtro o monocromador, alternativamente, a la cubeta de referencia y a la
cubeta de muestra.
El instrumento de doble haz suele ser de tipo nulo, en los cuales el haz que atraviesa la referencia
se atena mecnicamente hasta que su intensidad justo se iguala con la del haz de la muestra.
Un instrumento de doble haz proporciona una seal libre, de las derivadas de la fuente y del
detector, sin necesidad de unos componentes y una fuente altamente estable y cara.
En los instrumentos de un solo haz y de doble haz, la muestra se suele colocar entre el selector
de longitud de onda y el detector. Esta disposicin es necesaria en los instrumentos
ultravioleta/visible, para poder minimizar la fotodescomposicin de las especies que resultan de la
exposicin a toda la potencia de la fuente.
Fuente : lmpara
(1)
Selector de
longitudes
de onda (2)
Cubeta de
muestra (3)
Detector
fotoelctrico
(4)
Sistema de
tratamiento y
lectura de seales
(5)
Fotmetros: son sencillos y bastante econmicos para realizar anlisis de absorcin. Los fotmetros
de filtro son ms convenientes, robustos y fciles de mantener y usar que los espectrofotmetros ms
sofisticados. Tienen elevado rendimiento energtico y buena seal/ruido con componentes y
detectores bastante sencillos y econmicos Los anlisis cuantitativos se realizan con mucha
exactitud.
16 |

Espectrofotmetros: Hay numerosos espectrofotmetros comerciales, algunos diseados solo para

la regin visible, otros se aplican en las regiones ultravioleta y visible. Unos pocos pueden realizar
medidas desde el ultravioleta hasta el infrarrojo cercano (185 a 3000 nm).
- Instrumentos de un solo haz para la regin ultravioleta / visible: Existen distintos instrumentos
de un solo haz sin registrador, que se pueden usar para mediciones tanto en el ultravioleta como en
el visible. Para estos instrumentos la longitud de onda varia desde 190 - 210 nm a 800 -1000 nm.
Todos ellos provistos de lmparas intercambiables de tungsteno e hidrgeno. La mayora emplea
tubos fotomultiplicadores como detectores y redes para la dispersin. Algunos con dispositivos de
lectura digital.
En la figura se muestra un espectrofotmetro sencillo y barato, el Spectronic 20. Apareciendo

en el mercado en los aos 50, an se utiliza principalmente con fines de enseanza, por su bajo
costo econmico y sus adecuadas caractersticas de funcionamiento.
El Spectronic 20 emplea una fuente de luz de filamento de tungsteno, la cual funciona
mediante una fuente de alimentacin estabilizada que proporciona una radiacin de intensidad
constante.
Despus de la difraccin, en una sencilla red de reflexin, la radiacin pasa a travs de la
cubeta de muestra o de referencia hacia el fototubo. La seal elctrica del detector amplificada,
acciona un medidor con una escala de 14 cm, calibrada en transmitancia y absorbancia.
El instrumento esta dotado de un obturador consistente en una placa que se coloca de forma
automtica entre el haz y el detector, siempre que la cubeta se retira del porta cubetas, entonces se
realiza el ajuste del 0% de T. El dispositivo de control de la luz mostrado en la figura parte (b),
consiste en una ranura en forma de V que puede moverse hacia dentro y hacia fuera del haz, para as
colocar el medidor al 100% de T.
El intervalo del Spectornic 20 va de 340 a 625 nm, un fototubo auxiliar amplia este intervalo
hasta 950 nm.
- Instrumentos de doble haz: En la figura se muestra algunos detalles de la estructura de un
espectrofotmetro de ultravioleta/visible manual de doble haz y bastante barato. La radiacin se
dispersa con una red cncava, que a su vez enfoca el haz en un espejo rotatorio sectorizado. El
instrumento tiene un intervalo de longitudes de onda de 195 a 850 nm. Dichos instrumentos son muy
adecuados para trabajos cuantitativos donde no se necesita obtener un espectro completo.
Figura : Espectrofotmetro manual de doble haz para la regin Ultravioleta/ visible, modelo Hitachi 100-60
Los espectrofotmetros de infrarrojo que se encuentran en el comercio son por lo general

instrumentos de doble haz con registrador, que utilizan redes de reflexin para la dispersin de la
radiacin.
En general, los diseos pticos de los instrumentos dispersivos no difieren demasiado de los
espectrofotmetros ultravioleta/visible de doble haz, excepto que en los instrumentos de infrarrojo el
compartimiento de la muestra y de referencia siempre se colocan entre la fuente y el monocromador.
Esta disposicin es posible debido a que la radiacin infrarroja, a diferencia de la radiacin
ultravioleta/visible no es suficientemente energtica para provocar la descomposicin qumica de la
muestra. No obstante, colocar la muestra y la referencia delante del monocromador tiene la ventaja
de que la mayor parte de la radiacin dispersada, que se genera dentro del compartimiento de
cubetas, se elimina por el monocromador y as no alcanza el detector.
17 |
FUENTE
MUESTRA

MONOCROMADOR
DETECTOR
Esquema de un espectrofotmetro de doble haz
3- APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPIA MOLECULAR DE ABSORCION UV/ V E

INFRARROJO
Las medidas de absorcin basadas en la radiacin ultravioleta o visible encuentran extensa
aplicacin en la determinacin cualitativa y cuantitativa de especies moleculares. Mientras que en el
infrarrojo su aplicacin principal es cualitativa.
La radiacin ultravioleta abarca el intervalo espectral desde 10 hasta 380 nm, para anlisis se emplea
generalmente los intervalos entre 200 a 380 nm
Para la regin visible la regin espectral va entre los intervalos 350 a 800 nm.
La regin infrarroja del espectro incluye la radiacin con nmeros de onda comprendidos entre los
12800 y los 10 cm-1 lo que corresponde a longitudes de onda de 0,78 a 1000 m1.
Tanto desde el punto de vista de las aplicaciones como de los instrumentos, es conveniente
subdividir el espectro infrarrojo en tres regiones denominadas infrarrojo cercano, medio y lejano.
Regin
Intervalo de longitud de onda Intervalo de nmeros Intervalo
de
-1
() m
de onda () cm
frecuencias () Hz
Cercano
0,78 a 2,5
12800 a 4000
3.8x1014 a 1,2 x 1014
Medio
2,5 a 50
4000 a 200
1,2 x 1014 a 6,0x1012
Lejano
50 a 1000
200 a 10
6,0x1012 a 3,0 x1011
La ms utilizada
2,5 a 15
4000 a 670
1,2 x 1014 a 2,0x1013
En tabla se indican aproximadamente los limites de cada una de ellas, la mayora de las
aplicaciones estn comprendidas en el infrarrojo medio los 4000 y los 400 cm -1 (de 2,5 a 25 m).
a) Especies absorbentes:
La absorcin de radiacin ultravioleta o visible por una especie atmica o molecular M se puede
considerar que es un proceso en dos etapas, la primera de las cuales implica una excitacin
electrnica como muestra la ecuacin
M + hv
M
El producto de la reaccin entre M y el fotn hv es una especie electrnicamente excitada que
se presenta por M. El tiempo de vida de la especie excitada es breve (10-8 a 10-9 s) su
existencia acaba por alguno de los diversos procesos de relajacin. El tipo ms comn de
relajacin implica la conversin de la energa de excitacin en calor, esto es
M
M + calor
La relajacin puede tener lugar tambin por descomposicin de M dando nuevas especies,
un proceso de este tipo se llama reaccin fotoqumica.
La absorcin de radiacin ultravioleta o visible proviene de la excitacin de los electrones
enlazantes y como consecuencia, las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden
correlacionarse con los tipos de enlaces que existen en las especies en estudio. La
espectroscopia de absorcin molecular es por tanto valiosa para la identificacin de los grupos
funcionales de una molcula. Sin embargo, son ms importantes las aplicaciones de
espectroscopa de absorcin ultravioleta y visible para la determinacin cuantitativa de
compuestos que contienen grupos absorbentes.
Se distingue tres tipos de transiciones electrnicas y clasifica las especies absorbentes en
base a ellas. Las tres transiciones consideradas implican (1) electrones , y n, (2) electrones d
y f y (3) electrones de transferencia de carga.
Los electrones que contribuyen a la absorcin por una molcula orgnica son: (1) aquellos que
participan directamente en la formacin del enlace entre tomos y que estn adems asociados a
ms de un tomo y (2) los electrones no enlazantes o externos que no participan y que estn
localizados alrededor de tomos como el oxgeno, los halgenos, el azufre y el nitrgeno.
18 |

Cambios bipolares durante las vibraciones y las rotaciones:

Por lo general, la radiacin infrarroja no es suficientemente energtica como para producir las
transiciones electrnicas que se dan cuando se trata de las radicaciones ultravioleta y visible.
La absorcin de radiacin infrarroja se limita en gran parte a especies moleculares para
las cuales existen pequeas diferencias de energa entre los distintos estados vibracionales y
rotacionales.
Para absorber radiacin infrarroja, una molcula debe experimentar un cambio neto en el
momento bipolar como consecuencia de su movimiento de vibracin o de rotacin. Si la frecuencia de
la radiacin iguala exactamente a la frecuencia de vibracin natural de la molcula ocurre una
trasferencia neta de energa que da lugar a un cambio en la amplitud de la vibracin molecular, como
consecuencia se absorbe la radiacin.
Cuando se trata de especies homonucleares como el O2,
N2, o Cl2 el momento bipolar no se altera durante la vibracin o la rotacin y en consecuencia este
tipo de compuestos no absorben en el infrarrojo.
Transiciones rotacionales:
La energa necesaria para provocar un cambio a nivel rotacional es muy pequea y
corresponde a radiaciones de 100 cm-1 o menores. Como los niveles rotacionales estan cuantizados,
la absorcin por los gases en esta regin del infrarrojo cercano se caracteriza por lneas discretas
bien definidas. Sin embargo en lquidos o slidos los choques e interacciones intramoleculares
causan el ensanchamiento de las lneas resultando un espectro continuo.
Tipos de vibraciones moleculares:
Las posiciones relativas de los tomos en una molcula no estn exactamente fijas, sino que
fluctan continuamente como consecuencia de multitud de diferentes tipos de vibracin.
Pueden distinguirse dos tipos bsicos de vibraciones: tensin y flexin. Una vibracin de
tensin supone un cambio continuo en la distancia interatmica a lo largo del eje del enlace entre dos
tomos. Las vibraciones de flexin se caracterizan por un cambio en el ngulo entre dos enlaces y
son de cuatro tipos: tijereteo, balanceo, aleteo y torsin. Los cuales se representan en la siguiente
figura.
Figura 10: Tipos de vibraciones moleculares . Nota: + Indica un movimiento del plano de la pgina
hacia el lector. - Indica un movimiento del plano de la pgina alejndose del lector
- Especies absorbentes que contienen electrones , y n
Las molculas e iones orgnicos, al igual que gran nmero de aniones inorgnicos, se
incluyen dentro de las especies absorbentes que contienen electrones , y n.
Todos los compuestos orgnicos son capaces de absorber radiacin electromagntica, ya que
todos tienen electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles superiores de energa.
Las energas de excitacin asociadas a los electrones que forman los enlaces ms sencillos son
suficientemente elevadas para que la absorcin por ellos este restringida a las regin llamada del
ultravioleta de vaco ( 185 nm) donde los componentes de la atmsfera tambin absorben
fuertemente.
La absorcin de radiacin ultravioleta y visible de longitud de onda larga se restringe a un
nmero limitado de grupos funcionales (llamados cromforos) que contienen electrones de
valencia con energas de excitacin relativamente bajas.
Los espectros electrnicos de molculas orgnicas que contienen cromforos son
normalmente complejos, ya que la superposicin de transiciones vibracionales sobre las
transiciones electrnicas da lugar a una combinacin compleja de lneas solapadas, el resultado es
una banda ancha de absorcin que a menudo parece continua.
-
Cromforos orgnicos
En la tabla se da una lista de los cromforos orgnicos comunes y la localizacin aproximada
de sus mximos de absorcin. Estos datos pueden servir tan solo como gua aproximada para la
identificacin de los grupos funcionales, debido a que las posiciones de los mximos se ven
tambin afectadas por el disolvente y por los detalles estructurales de la molcula que contiene los
cromforos.
19 |

Tabla: Caractersticas de absorcin de algunos cromforos comunes
b) Aplicacin de las medidas de absorcin al anlisis cualitativo

La espectrofotometra ultravioleta y visible tiene una aplicacin algo limitada para el anlisis
cualitativo, ya que el nmero de mximos y mnimos de absorcin es relativamente pequeo.
- Disolventes:
Las consideraciones que se tienen que hacer al elegir un disolvente no son solo respecto a
su transparencia, sino tambin respecto a sus posibles efectos sobre el sistema absorbente.
Normalmente, los disolventes polares tales como el agua, alcoholes, esteres, y cetonas
tienden a eliminar la estructura fina del espectro como resultado de los efectos vibracionales
y de hecho espectros que se aproximen a los de fase gas se observan mas fcilmente en
disolventes no polares como los hidrocarburos.
Adems, las posiciones de los mximos de absorcin estn afectadas por la naturaleza del
disolvente.
Es imprescindible utilizar el mismo disolvente cuando se comparan espectros de absorcin
para propsitos de identificacin. El agua y los alcoholes se utilizan rara vez como
disolventes en espectroscopa IR, no solo porque absorben intensamente sino porque
tambin atacan a los haluros de metal alcalino, que son los materiales mas comunes que se
utilizan en las ventanas de las cubetas.
Algunos disolventes utilizados son: Disulfuro de carbono. Tetracloruro de carbono.
Tetracloroetileno, Cloroformo. Dioxano. Ciclohexano. Benceno
En la tabla se muestra una lista de algunos disolventes comunes y la longitud de onda
aproximada por debajo de la cual no pueden usarse debido a la absorcin. Este mnimo
depende mucho de la pureza del disolvente. Entre los disolventes comunes para
espectrofotometra ultravioleta se incluyen el agua, el etanol del 95%, el ciclohexano y el 1,4dioxano. Para la regin del visible, cualquier disolvente incoloro es til.
Disolventes para las regiones del ultravioleta y el
visible
Disolvente
Mnimo * aproximado de transparencia

(nm)
Agua
190
Etanol
210
n- Hexano
195
Ciclohexano
210
Benceno
280
Dietilter
210
Acetona
330
1,4-Dioxano
220
* para cubetas de 1 cm
Ejemplos de Aplicacion de Espectroscopia Ultra Violeta - Visible

1- Compuestos aromticos poli nucleares de carcter cancergeno, en alimentos, bebidas, cigarrillos.
2- Productos naturales con esteroides y clorofila.
3- Sustancias colorantes.
4- Vitaminas (vit. A).
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5- Distintas estructuras aromticas quinnicas que absorben a distintas longitudes de onda.

6- Investigacin de fotosntesis y tejidos vivos.
7- Determinacin de impurezas en muestras orgnicas, tales como residuos de plantas industriales.
8- En agricultura: determinacin de pesticidas en plantas, ros y animales, que comen y beben
sustancias
contaminadas.
9- En medicina: anlisis de enzimas, vitaminas, hormonas, esteroides, alcaloides, barbitricos
(diagnstico
de enfermedades).
10-En farmacia: determinacin de pureza de productos manufacturados.
11-Determinacin de Nitritos, Nitratos, ( en agua, carnes).
12- Determinacin de oligoelementos en plantas.
13- Determinar la conformacin de protenas globulares.
14- Determinacin enzimtica de glucosa en vinos.
15- Deteccin de grupos funcionales: A pesar de que no permite una identificacin inequvoca de un
compuesto orgnico, el espectro de absorcin en las regiones del ultravioleta y visible es muy til
para detectar presencia de ciertos grupos funcionales que actan como cromforos. Por ejemplo para
grupos carbonilos, anillos aromticos, aminas aromticas o una estructura fenlica
Aplicaciones cualitativas de absorcin en el infrarrojo medio
La identificacin de un compuesto orgnico a partir de este tipo de espectros es un proceso en
dos etapas. La primera implica la determinacin de los grupos funcionales que parecen ms
probables que estn presentes, examinando la regin de frecuencias de grupo que abarca radiacin
comprendida desde los 3600 a los 1200 cm-1.
La segunda etapa consiste en una comparacin detallada del espectro desconocido con los
espectros de compuestos puros que contienen los grupos funcionales encontrados en la primera
etapa. En este caso la regin de huella digital de 1200 a 600 cm-1 es muy til, la coincidencia de los
picos en esta regin entre los espectros de dos compuestos constituye casi una evidencia de su
identidad.
Aplicaciones en infrarrojo
Identificacin y determinacin de sustancias orgnicas:
Identifican grupos funcionales.
Impurezas de materias primas - en industria control de calidad laboratorio de investigacin
- determinacin de parafinas, compuestos aromticos, olefinas, acetileno, alcoholes, aldehdos,
cetonas, cidos carboxlicos, fenoles, steres, teres, aminas, compuestos de azufre o haluros .
- determinar compuestos responsables de olor y sabor en alimentos.
- distinguir un polmero de otro.
- distinguir disolvente usado en pinturas.
- ceras de suelos - muebles.
Limitaciones del infrarrojo:
- no usar para determinar pesos moleculares
- no determina posiciones relativas de los distintos grupos funcionales.
- no diferencia compuestos puros de mezclas con un solo espectro. Ej: mezcla de parafinas y
alcoholes da igual que alcohol de peso molecular ms elevado.
Valioso:
-Caracterizar sustancias puras.
-Caracterizar mezclas de compuestos.
Representacin grafica de los espectros:
La grfica muestra una reproduccin del registro de un espectrofotmetro de infrarrojo. La
ordenada corresponde a una escala lineal de transmitancia y la abscisa mide linealmente los
nmeros de onda en unidades en cm-1. La abscisa cambia de escala a partir de 2000 cm-1.
La regin de la huella digital entre 1200 y 700 cm-1 (8 a 14m). En esta regin del espectro
pequeas diferencias en la estructura y la constitucin de las molculas originan cambios importantes
en la distribucin de los picos de absorcin.
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c) Anlisis cuantitativo mediante medidas de absorcin

La espectroscopia de absorcin es una de las herramientas mas tiles y ampliamente utilizada por
el qumico en el anlisis cuantitativo. Las caractersticas importantes de los mtodos
espectrofotometricos y fotomtricos incluyen (1) amplia aplicabilidad tanto a sistemas orgnicos
como inorgnicos, (2) altas sensibilidades, (3) moderada a alta selectividad, (4) buena precisin y (5)
fcil y adecuada adquisicin de datos.
Las primeras etapas de un anlisis fotomtrico o espectrofotomtrico implican el
establecimiento de las condiciones de trabajo y la preparacin de una curva de calibrado que
relacione la concentracin con la absorbancia.
- Seleccin de la longitud de onda
Las medidas espectrofotomtricas de la absorbancia se hacen normalmente a una longitud de
onda correspondiente a un pico de absorcin, ya que el cambio en la absorbancia por unidad de
concentracin es mayor en este punto y se alcanza, por tanto, la sensibilidad mxima. Adems, la
curva de absorcin es a menudo plana en esta regin; bajo estas circunstancias, se puede esperar
una buena absorbancia de la ley de Beer. Finalmente, las medidas son menos sensibles a las
fluctuaciones que provienen de la falta de precisin en la seleccin de la longitud de onda del
instrumento.
- Variables que influyen en la absorbancia
Las variables que influyen en el espectro de absorcin de una sustancia incluyen la naturaleza
del disolvente, el pH de la disolucin, la temperatura, las concentraciones elevadas de electrolito y la
presencia de sustancias interferentes. Los efectos de estas variables se deben conocer y las
condiciones para el anlisis deben elegirse de manera que la absorbancia no est prcticamente
afectada por variaciones pequeas e incontroladas en sus magnitudes.
- Determinacin de la relacin entre la absorbancia y la concentracin
Despus de decidir las condiciones del anlisis, es necesario preparar la curva de calibrado a
partir de series de soluciones estndares. Estos estndares deben aproximarse a la composicin
global de las muestras y deben cubrir un intervalo de concentracin razonable de analito. Raramente,
o nunca, se puede asumir la absorbancia de la ley de Beer y utilizar un nico estndar para
determinar la absortividad molar. Los resultados de un anlisis no deben basarse nunca en los
valores de la bibliografa para las absortividades molares.
Adems de su uso en anlisis cualitativo, las medidas en el infrarrojo tambin estn
encontrando un uso cada vez mayor en el anlisis cuantitativo, haciendo posible la cuantificacin de
una sustancia en una mezcla compleja, no siendo necesario la separacin previa.
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GUA TERICA
INTRODUCCIN A LA ESPECTROSCOPIA
ESPECTROSCOPIA MOLECULAR: UV-Vis-IR
1) Defina los siguientes conceptos:
Espectroscopa:
Radiacin electromagntica:
Longitud de onda:
Frecuencia:
Potencia de la radiacin:
Proceso de absorcin de energa:
2) Definir transmitancia y absorbancia. Qu relacin existe entre estos trminos?
3) Enunciar la ley de Lambert Beer. Escribir la expresin matemtica correspondiente.
4) Indique los factores que ocasionan las desviaciones de la ley de Beer.
5) Esquematice un espectrofotmetro de simple y de doble haz. Seale sus partes.
6) Explique cmo se tratan las muestras slidas lquidas gaseosas en espectroscopia Infrarrojo. Mencione
los solventes que pueden utilizarse en cada zona.
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6) Complete el siguiente cuadro:

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN
UV
Vis
IR
FUENTES DE
EMISIN
REGIN DE
EMISIN
SELECTOR DE
LONGITUD DE
ONDA
CUBETAS
DETECTORES
APLICACIONES
ESPECTROS
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TRABAJO PRCTICO N 2
ESPECTROSCOPIA
MOLECULAR
Uno de los mtodos fisicoqumicos ms empleados en anlisis es el de la medida de absorcin o

emisin de radiacin electromagntica. La espectroscopa es una ciencia que estudia las
interacciones que suceden entre la radiacin y la materia. Generalmente, el anlisis es muy rpido,
una vez que se ha establecido el mtodo, a no ser que se requiera tratamiento previo para eliminar
interferencia. El mtodo es, por tanto, muy cmodo para medidas repetidas de un mismo analito,
como sucede en la rutina del anlisis de control. Adems, es aplicable a la determinacin exacta de
cantidades de analitos mucho menores que con los mtodos gravimtricos o volumtricos; por esta
razn es de mucha utilidad para el anlisis de trazas. Con frecuencia es un mtodo no destructivo de
la muestra. Los mtodos espectromtricos tienen tal importancia, que son los ms utilizados en casi
todos los laboratorios industriales, de anlisis de alimentos y agronmicos.
Las tcnicas espectrales empleadas se basan en el conocimiento de la naturaleza de la radiacin
electromagntica y sus propiedades, as como de los fenmenos que se producen al interaccionar luz
y materia.
Las tcnicas espectrales ms habituales son:
a) Espectroscopa Molecular:
Absorcin en Ultravioleta (UV), Visible (V) e Infrarrojo (IR)
b) Espectroscopia Atmica:
Absorcin
Emisin (Fotometra de llama)
Naturaleza de la radiacin electromagntica
La radiacin electromagntica tambin denominada energa radiante, es una clase de energa que
se transmite por el espacio a enormes velocidades. La luz y otras formas de energa radiante parecen
tener naturaleza dual. La radiacin electromagntica puede considerarse como una onda que viaja a
la velocidad de la luz.
Parmetros ondulatorios:
Longitud de onda (): es la distancia lineal entre dos puntos equivalentes de ondas
sucesivas por ejemplo, sucesivos mximos o mnimos. Esta distancia se expresa, segn el
Sistema Internacional de Unidades (SI), en nanmetros (nm, 10-9 m) Se pueden encontrar
0
otras unidades, ya obsoletas, que seran angstroms ( A ) y milimicras (m) La relacin entre
estas medidas es:
0
1 nm = 1 m = 10 A = 10-9 m
Frecuencia (): Es el nmero de oscilaciones en el campo o ciclos por segundo. Es inversa
a la longitud de onda.
Siendo: c = velocidad de la luz
Nmero de onda , es el inverso de la longitud de onda en cm (1/). Por lo tanto, la

unidad para es cm-1. El nmero de onda se usa mucho en espectroscopa infrarroja. Es
una unidad til porque, al revs que la longitud de onda, es directamente proporcional a la
frecuencia y a la energa de la radiacin. As pues se puede escribir:
donde la constante de proporcionalidad k depende del medio y es igual

a la inversa de la velocidad.
Potencia (P) de la radiacin es la energa en watts (W) del haz que llega a un rea dada
por segundo, mientras que la intensidad ( I ) es la potencia por unidad de ngulo slido.
Aunque rigurosamente no es correcto, potencia e intensidad se usan a menudo como
sinnimos.
Carcter energtico: algunas propiedades de la radiacin electromagntica se explican mejor
si se considera que se encuentra constituida por partculas discretas o paquetes ondulatorios
de energa, conocidas como fotones, que tambin viajan a la velocidad de la luz. Este modelo
corpuscular ayuda a comprender que tanto la emisin como la absorcin de energa radiante
se llevan a cabo mediante fotones. La energa de un fotn depende de su frecuencia y de su
longitud de onda:
E h
hc
hc
Siendo: h = constante de Planck (6,62 . 10-27 erg/seg)

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Como se puede observar en la relacin anterior, la relacin entre la longitud de onda y la energa
de una radiacin electromagntica es inversa, de manera que cuanto mayor es la longitud de
onda de un haz de luz, menor es su energa.
El espectro electromagntico es el conjunto de todas las radiaciones electromagnticas
conocidas, dispuestas segn su longitud de onda. Se divide en regiones que abarcan intervalos
de longitudes de onda ms estrechos, desde los rayos gamma, de longitud de onda corta, hasta
las ondas de radio, de longitud de onda larga.
El ojo humano responde a radiacin electromagntica entre los 380-780 nm aproximadamente
(V), pero actualmente disponemos de instrumentos que suplen nuestra limitacin, y permiten la
medida de radiaciones de longitudes de onda mayores (IR) y menores (UV). La sensacin de
color es la respuesta a una serie de estmulos combinados fsicos, qumicos y biolgicos de
ciertas partes de la retina del ojo para la radiacin electromagntica a determinadas longitudes
de onda. La colorimetra se emplea para designar la medida de la fraccin de luz blanca de una
lmpara incadescente que pasa a travs de un medio lquido o en disolucin.
La luz solar, o la luz emitida por un filamento de tungsteno, es una mezcla de radiaciones de
distinta longitud de onda que al ojo humano se reconoce como blanca. En la regin visible, la
luz se descompone en colores y sus colores complementarios. Si hacemos incidir un haz de luz
blanca sobre una solucin que absorbe luz a una longitud de onda determinada, sta transmitir
todas las dems longitudes de onda, apareciendo a la vista del color complementario al que
corresponde a la longitud de onda absorbida.
En consecuencia, una luz que se observa de un color determinado al ojo humano, deber ser
iluminada para las mediciones fotomtricas con un haz de luz de longitud de onda del color que
absorbe, es decir, el complementario. Ejemplo: una solucin de color rojo se irradia con luz de
aproximadamente 500 nm (azul verde).
Tabla 1. Descomposicin del espectro visible en colores y sus complementarios
Color complementario
Longitud de onda
Color absorbido
340-430
430-475
475-495
495-505
505-555
555-575
575-600
600-620
620-700
Violeta
Azul
Verde-azul
Azul-verde
Verde
Verde-amarillo
Amarillo
Naranja
Rojo
Amarillo-verdoso
Amarillo
Naranja
Rojo
Prpura
Violeta
Azul
Azul-verde
Verde-azul
Fenmenos de interaccin entre luz y materia

En la espectroscopa se utilizan estas interacciones entre la luz y la materia a fin de obtener
informacin sobre el analito presente en una muestra. Esta ltima puede estimularse ya sea
aplicando energa en forma de calor, de electricidad, de luz, de partculas o sometindola a alguna
reaccin qumica. Antes de aplicar cualquiera de estos estmulos, el analito est predominantemente
en su nivel ms bajo de energa o estado fundamental o estado basal. El estmulo induce una
transicin de algunas especies del analito a un estado de energa superior o estado excitado. Como
resultado de esto se producen, entre otros, fenmenos de absorcin o emisin energtica. A
continuacin analizaremos con ms detalle estos fenmenos.
c) Proceso de absorcin: cuando una partcula, que se encuentra en estado de reposo o
estado fundamental, interacciona con un haz de luz, absorbe energa, y pasa a lo que se
denomina estado excitado. La partcula en estado excitado tiende a regresar
espontneamente a su estado fundamental, desprendiendo la energa absorbida en forma de
calor. Este fenmeno puede representarse de la siguiente manera:
A = absorbente en estado
fundamental
A + h . A* A + calor
A*
= absorbente en estado
excitado
h . = E = energa del fotn
Cada especie absorbente (cromgeno) tiene lo absorbido
que se llama un espectro de absorcin
caracterstico. Al grfico que resulta de representar
un eje de
Absorbancia
h =en
constante
de coordenadas
Planck
(ordenadas) frente a longitud de onda (abscisas),
es a lo de
quela llamamos
= frecuencia
radiacin espectro de
absorcin. Se necesita una radiacin de energa ms alta para que se efecten transiciones
electrnicas (cambios) que la necesaria para que se efecten transiciones rotacionales o
vibracionales.
26 |

d) Proceso de emisin: algunos compuestos tienen la propiedad, tras ser excitados, de retornar
a su estado fundamental, produciendo una emisin de energa electromagntica. La luz
emitida se puede medir, y ello constituye el principio de algunas tcnicas, como la Fotometra
de llama, o la Fluorescencia. Este fenmeno puede representarse de la siguiente manera:
A = absorbente en estado
fundamental
A* =
A + h . 1 A* A + h . 2
absorbente en estado excitado
h . 1 = E1 = energa de excitacin
La energa radiante emitida cuando el analito hregresa
estado
basal, puede dar
. 2 = E2a = su
energa
de emisin
informacin sobre la naturaleza del mismo y de su concentracin.
Ley de absorcin
En la Figura 1 se representa un haz de radiacin paralela, antes y despus de haber atravesado una
capa de b cm de grosor de una solucin de una especie absorbente de concentracin c. La flecha
ms grande en el rayo incidente significa que la energa radiante es mayor que la transmitida por la
solucin.
b
P0
P
Solucin absorbente de
concentracin c
Fig. 1 Atenuacin de un haz de radiacin por una solucin absorbente.
Como puede verse, debido a las interacciones que suceden entre los fotones y las partculas
absorbentes, la absorcin de la radiacin atena, es decir disminuye la energa, del rayo incidente
desde P0 hasta P.
Transmitancia, T: es la fraccin de radiacin incidente transmitida por la solucin. A
menudo, se expresa la transmitancia como un porcentaje.
P
P0
%T
P
.100
P0
Absorbancia, A: es una medida que relaciona en forma logartmica la radiacin incidente

y la que emite la muestra. Esto es:
A logT log
P
P
log 0
P0
P
La relacin logartmica entre A y %T se traduce en dos escalas:

%T va de 0 a 100
A
va de 2 a 0
En la prctica se emplea, en lugar del valor de Transmitancia, el de Absorbancia (A), ya que la
relacin entre la concentracin de una solucin y su Transmitancia es inversa y logartmica, mientras
que la relacin entre la Absorbancia y concentracin es directamente proporcional.
En los aparatos que se usan hoy en da, las lecturas de %T son transformadas en Absorbancias y
presentadas as al operador, pero conviene no olvidar que la absorbancia no es en s misma una
cantidad medible, sino que se obtiene por clculo matemtico a partir de los datos de Transmitancia
que mide el sistema fotomtrico.
Si representamos grficamente en un eje de coordenadas la relacin entre la Absorbancia y
concentracin, obtenemos una lnea recta, y la proporcin es directa. La grfica resultante de
representar %T frente a concentracin es una curva, y la proporcin es inversa. Si empleamos papel
semilogartmico, la grfica de %T frente a concentracin se convierte en una recta.
Figura 2. Representacin grfica de absorbancia y porcentaje de transmitancia frente a concentracin: a)

%Tescala lineal, b) %T escala logartmica y c) A en escala lineal
27 |

Como hemos dicho, al aumentar la concentracin del compuesto absorbente en solucin, ms luz es
absorbida y menos transmitida, lo que se observa en las grficas de la figura 5.
La relacin entre las cantidades de absorbente en una solucin y el grado en que esta solucin
absorbe la luz, se encuentra regida por las Leyes de absorcin.
La ley de la absorcin, tambin conocida como ley de Lambert y Beer, o simplemente ley de Beer
establece la relacin entre el grado de Absorbancia de una solucin y otras dos variables: la
concentracin del absorbente y la longitud del trayecto que el haz de luz recorre a travs de la
solucin. Segn esta ley, la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la
concentracin y a la longitud del paso de luz:
A = a. b. c
A = . b. C
Siendo:
A = absorbancia (no tiene unidades es adimensional).

a , = coeficiente de absorcin o absortividad especfica (a) o absortividad molar (). Es
una constante, relacionada con la naturaleza qumica del soluto, y para un compuesto
dado cuando se fijan condiciones de longitud de onda ( = 1/mol.cm; a = 1/g.cm).
b = paso ptico o longitud del paso de luz en centmetros.
c, C = concentracin de absorbente (c = g/L ; C = mol/L)
En la prctica: cuanto mayor sea en una sustancia (cromforo) para condiciones de trabajo
determinadas, mayor ser la absorbancia de ese compuesto en esas condiciones de trabajo y, por
tanto, mayor ser la sensibilidad del mtodo que lo emplea.
La Ley de Beer constituye la base del anlisis cuantitativo de las determinaciones
espectrofotomtricas, basndonos en la relacin lineal entre Absorbancia y concentracin, podemos
conocer la concentracin de una solucin problema.
Desviaciones de la ley de Beer
Son desviaciones producidas en la linearidad de la relacin entre concentracin y

absorbancia. La recta se curva antes de su lmite de linearidad. Pueden causarlas diversos
factores:
Se miden concentraciones muy elevadas de cromgeno. Por lo cual se trabaja a
concentraciones menores a 0,01M.
La radiacin incidente no es monocromtica, lo cual es muy frecuente en la prctica.
La luz es transmitida por otros mecanismos (luz errtica, o luz monocromtica que llega al
detector). Esta radiacin se denomina parsita.
Si hay interferentes (otros cromgenos absorben tambin a esa longitud de onda).
Medicin de la transmitancia y de la absorbancia

La transmitancia y la absorbancia, no pueden medirse directamente en el laboratorio, porque la
solucin de analito debe colocarse en alguna clase de recipiente transparente, o cubeta. Como indica
la Figura 3, se produce reflexin en las dos interfases aire/pared as como en las dos interfases
pared/solucin. Adems, la atenuacin del haz puede producirse por dispersin debida a molculas
grandes, y a veces por absorcin en las paredes del recipiente. Para evitar interacciones por parte del
solvente o de la cubeta, y considerar as slo la absorcin del compuesto de inters, hay que hacer
una primera medida con una solucin de referencia o blanco, que contiene todos los posibles
compuestos que participan en la lectura, menos el compuesto a medir.
Todas las medidas que se hagan con posterioridad sern referidas a esta medida inicial y se deben
hacer en la misma cubeta que se utiliz para la medida del blanco.
Por lo tanto, para los anlisis, se hacen dos medidas de la cantidad de luz absorbida. En la primera
se mide la cantidad de luz (a la longitud de onda elegida) que llega al transductor, cuando se coloca
un blanco. Se denomina intensidad del blanco P0 es cuando la concentracin del material analizado
es cero. Llamamos P a la intensidad que se mide con las muestras o con el estndar. La comparacin
que siempre se hace implica la relacin P/P0 o con ambas intensidades medidas en las mismas
condiciones del instrumento.
La absorbancia experimental que se aproxima mucho a la verdadera absorbancia, se puede obtener
de esta forma con la ecuacin:
A = log Pdisolvente / P solucin log P0 / P
28 |

Haz
incidente
P
0
Fig 3. Prdidas por reflexin y dispersin
Como muestra la Figura 4, los fotmetros y espectrofotmetros manuales suelen ir provistos de una
pantalla que tiene una escala lineal que va de 0 a 100% de T. Para que la lectura directa del
instrumento se haga en tanto por ciento de transmitancia, se realizan dos ajustes iniciales,
denominados ajuste de corriente oscura o del 0% de T, y ajuste del 100% de T.
El ajuste del 0% de T se realiza bloqueando la llegada de radiacin al detector por medio de un
obturador mecnico. En ausencia de radiacin muchos detectores presentan una pequea corriente
oscura; por tanto, el ajuste del 0% de T supone la aplicacin de una seal opuesta de tal magnitud,
que d una lectura cero en la escala.
Fig.4. Escala de un fotmetro barato.
El ajuste del 100 % de T se realiza con el obturador abierto y con el disolvente o blanco de reactivos
en la trayectoria de la luz. Este ajuste se lleva a cabo de tal forma que d exactamente una lectura en
la escala del 100 % de T. En efecto, esta etapa sirve para ajustar a 100 el valor de P0.
Por lo tanto, cuando la cubeta del disolvente se reemplaza por una conteniendo la muestra, la escala
indica la forma directa el tanto por ciento de transmitancia. Obviamente, tal como se muestra es la
Fig. 4, en el dispositivo de la lectura se puede marcar tambin una escala de absorbancia que va de 0
a 2. Tal escala no ser lineal a menos que la seal de salida se transforme en una funcin
logartmica. Los instrumentos modernos traen escalas lineales de absorbancia y algunos tienen una
computadora que calcula la absorbancia a partir de las mediciones.
Mtodos de medicin de luz transmitida.
El operador visual no puede recordar matices o intensidades, as que debe comparar la luz transmitida
por dos soluciones, una junto a la otra, con los tubos de Nessler; los cuales pueden ser observados por
la parte superior.
Mtodo de la Serie Estndar.
1. Se llenan varios tubos de Nessler hasta la marca, con soluciones que contienen diversas
cantidades conocidas del componente que se busca.
2. Se prepara el problema y se hace una comparacin de su color con los colores de las
soluciones conocidas, observando todos los tubos verticalmente con la misma fuente de luz.
3. Cuando el color de una solucin problema es igual al de uno de los estndares, se considera
que su concentracin es la misma que la de ese estndar.
4. Cuando se encuentra que el color cae entre los colores de dos soluciones estndar, se puede
preparar una nueva serie de estndares cuyo color se acerque ms al del problema, o bien se
puede estimar la concentracin del problema.
Colormetro de Duboscq.
Pone en forma paralela la luz transmitida por dos soluciones, de manera que ambas puedan ser
observadas por un solo ojo. De esta manera, se puede observar que cualquier diferencia en
matiz o intensidad produce una lnea de separacin entre las dos mitades de un crculo.
El colormetro proporciona un procedimiento cmodo de comparar colores y de medir con
exactitud la profundidad de ambas soluciones, la conocida y el problema. Se supone que dos
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soluciones cuyo haz de luz transmitida tiene el mismo color, contienen cantidades iguales del
componente buscado. En estas condiciones se tiene:
Cs
Cu
Ds
Du
es la concentracin de la solucin estndar,

es la concentracin de la solucin problema,
es la profundidad de la solucin estndar, y
es la profundidad de la solucin problema.
Cu Du = Cs Ds
Cu = Cs Ds / Du
Espectrofotometra.
La espectrofotometra difiere de la colorimetra en que la absorbancia de una solucin o sustancia

se determina con nicamente una longitud de onda de luz transmitida y medida. En la prctica
ms que una sola longitud de onda se utiliza una luz con una intervalo definido de longitudes de
onda. Con un espectrofotmetro, los pasos bsicos de un anlisis son siempre los mismos.
Pequeas variaciones en cada uno y, a veces, la operatoria de instrumentos diferentes, pueden
alterar ligeramente los detalles del procedimiento.
Curva de calibracin:
1. Prepar una serie de soluciones del analito a partir de una droga de calidad garantizada. La
concentracin debe ser tal que el valor de la absorbancia a la longitud de onda en la cual la
absortividad es mxima, caiga entre 0,3 y 0,7 unidades de A.
2. Utilizando la solucin preparada en 1, efectuar el trazado de la curva espectral o espectro de
absorcin para lo cual se realiza una serie de medidas de absorbancia a distintas longitudes
de onda y concentracin constante.
Fig. 5. Espectro de absorcin
3. Trabajando sobre la curva espectral seleccionar la longitud de onda de trabajo que

corresponda a un mximo de la curva y en zona de meseta, si fuera posible. Como se observa
en la figura 5, este valor correspondera, en este caso, a 500 nm.
4. Preparar una serie de soluciones patrones de concentraciones crecientes y perfectamente
conocidas, del analito a determinar, cuyas absorbancias estn comprendidas entre 0,1 y 0,7
unidades.
5. Se realizan las lecturas de absorbancia o % de transmitancia de los patrones a la longitud de
onda seleccionada ( constante). Graficar Absorbancia vs. Concentracin. Esta grfica
denominada curva de calibracin o grfica de linealidad, permitir verificar el cumplimiento
de la ley de Beer y calcular el valor de absortividad.
Lectura de la muestra problema

1. Preparar un blanco testigo, colocando en la cubeta un solvente (generalmente agua
destilada).
2. Colocar la cubeta en el equipo.
3. Ajustar el equipo de manera de leer 100 % de transmitancia o cero de absorbancia.
4. Retirar la cubeta y colocar otra que contenga la muestra problema.
5. Leer el porcentaje de transmitancia o absorbancia.
Determinacin de la concentracin de la muestra problema

Segn la lectura realizada, llevar al grfico correspondiente (curva de calibracin) y determinar la
concentracin de la muestra.
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INSTRUMENTACIN
Todos los fotmetros y espectrofotmetros constan esencialmente de:
- fuente estable de energa radiante: Esta por lo general es una lmpara de luz a la cual llega una
corriente cuidadosamente controlada.
- un monocromador. Esta parte del instrumento puede ser cualquiera de las siguientes:
a) Un filtro o juego de filtros que elimine todas las longitudes de onda de luz, excepto las de
una angosta banda.
b) Un dispositivo de abertura y prisma para que por aqulla pase hacia el prisma una cierta
cantidad de luz y que de ste salga la luz como, una angosta banda de los cuales puede
ser seleccionada por una segunda abertura (muy estrecha).
c ) Una rejilla de difraccin con aberturas, la cual funciona como el dispositivo del
prisma.rendija de entrada y salida
- selector de longitud de onda
- cubeta destinada a contener la muestra
- detector de energa radiante
- presentacin de datos
Tipos de aparatos
En base al sistema selector de longitud de onda, los aparatos se clasifican en dos tipos:
- Fotmetros: emplean filtros, obteniendo luz monocromtica a longitudes de onda discretas.
- Espectrofotmetros: emplean monocromadores, del tipo de prismas o redes de difraccin,
obteniendo luz monocromtica en un intervalo contnuo de longitudes de onda.
Segn la disposicin de los componentes fotomtricos, se pueden clasificar en espectrofotmetros de
haz simple o de doble haz.
Constan esquemticamente de los componentes antes mencionados: la luz emitida pasa a travs de
un monocromador que seleccionar la longitud de onda deseada; unas rendijas de entrada y salida
consiguen que el haz de luz sea estrecho, y evitan la luz difusa; la luz pasa a travs de la cubeta,
donde se produce el proceso de absorcin; la luz no absorbida es transmitida al detector, que
convierte la energa radiante en energa elctrica, que es registrada en un lector.
Al trabajar con estos aparatos, es necesario un ajuste inicial a 0 por 100 de transmitancia, que se
consigue sustituyendo la cubeta por un sistema que no deje pasar la luz hasta el detector. A
continuacin se hace un blanco, colocando una cubeta con todos los componentes de la solucin de
trabajo exceptuando el cromgeno y haciendo un ajuste a 100 por 100 de transmitancia. Se hacen
lecturas de estndares (soluciones de concentracin conocida) y a continuacin las de las soluciones
problemas por comparacin con los estndares.
Espectrofmetro de doble haz
Se clasifican como tales en el espacio y en el tiempo.
a) Espectrofotmetros de doble haz en el espacio: Todos los componentes estn duplicados
menos la lmpara. Dos haces de luz pasan al mismo tiempo a travs de los diferentes componentes
separados en el espacio. Esta disposicin compensa las variaciones de intensidad de la fuente de
energa radiante y tambin las variaciones de absorbancia a medida que se vara la longitud de onda
de lectura en una operacin de barrido (Figura 19.7).
b) Espectrofotmetros de doble haz en el tiempo: Normalmente utilizan los mismos componentes

que un instrumento de haz simple. Dos haces de luz pasan a travs de los mismos componentes,
pero no en el tiempo. Emplean un chopper, consistente en un interruptor rotativo del haz luminoso
(es una rueda giratoria con secciones plateadas y rendijas alternas) colocado a continuacin de la
rendija de salida. Un sistema de espejos dirige la porcin de luz reflejada por el chopper a travs de
una cubeta de referencia y de ah al detector comn. El detector ve alternativamente el haz de luz
procedente de la muestra y el de referencia. Esta disposicin compensa la variacin de la fuente de
energa radiante, as como las variaciones de sensibilidad del detector (Figura 19.7).
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Componentes
Fuente de energa radiante
La misin de la fuente de energa es proporcionar energa radiante en forma de luz visible o no
visible.
Existen distintas lmparas que emiten en distintas zonas del espectro visible y UV.
Lmparas de filamento de tungsteno: Se utilizan habitualmente como fuentes de radiacin
para longitudes de onda del espectro visible y UV prximo; son fuente de un espectro
continuo de energa radiante entre 360 y 950 nm.
Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: Son de mayor duracin, producen ms
luz a longitudes de onda cortas, y emiten energa radiante de mayor intensidad que las de
filamento de tungsteno. Se emplean frecuentemente las de yoduro de tungsteno.
Lmparas de hidrgeno y deuterio: Producen un espectro continuo en la regin UV (220 a
360 nm). Se emplean para medidas en este regin del espectro, siendo ms usada la de
deuterio, de mayor intensidad que la de hidrgeno.
Lmparas de vapores de mercurio: Emiten un espectro discontinuo o espectro de lneas
(313, 365, 405, 436 y 546 nm). Son muy tiles para propsitos de calibracin de longitudes
de onda, pero no son utilizadas en muchos espectrofotmetros. Se emplean en
espectrofotmetros para cromatografa HPLC.
Fuentes de radiacin para la regin Infrarrojo
Consisten en un slido inerte que se calienta elctricamente a una temperatura comprendida
entre 1500 y 2200 K. Como resultado se obtiene una radiacin continua.
Emisores de Nernst: Constituido por oxido de tierras raras, tiene forma cilndrica con un
dimetro de 1 a 2 mm y una longitud de unos 20 mm. Los extremos del cilindro estn unidos a
unos conductores de platino que permiten el paso de la electricidad alcanzando temperaturas de
1200 y 2200K.
Fuente globar: Es una varilla de carburo de silicio que por lo general tiene unos 50 mm de
longitud y 5 mm de dimetro. Se calienta tambin elctricamente (1300 a 1500 K).
Fuente de filamento incandescente: Una fuente de intensidad algo menor, con vida til ms
prolongada en comparacin con un Globar o un emisor de Nernst, es un espiral muy apretado
de alambre de nicromo, que se calienta por el paso de una corriente elctrica. Alambres de rodio,
introducidos en el interior de cilindros de cermica.
El arco de mercurio: Para el infrarrojo lejano ( 50 m) ninguna de las fuentes antes descriptas,
proporcionan suficiente energa para una deteccin adecuada. En este caso se utiliza un arco
de mercurio de alta presin. Es un tubo de cuarzo que contiene vapor de mercurio a una presin
mayor que una atmsfera.
Lmpara de filamento de tungsteno: Esta es una fuente adecuada para la regin del infrarrojo
cercano 4000 a 12800 cm-1.
Consideracin prctica: Es importante tener en cuenta que la cantidad de luz emitida por una
lmpara
no es constante en un intervalo continuo de longitudes de onda, presentando mximos
y mnimos, propiedad que vara en los diferentes tipos de lmparas, e incluso con los diferentes
fabricante; esto nos llevar a buscar siempre el tipo de lmpara que resulte ms adecuado en la
prctica para los anlisis que queremos realizar.
Conviene tener tambin en cuenta que las lmparas sufren con las subidas y bajadas bruscas de
tensin, que se traducen en cambios en las lecturas de absorbancias, y que la lmpara tiene una
vida limitada, hacindose necesaria su vigilancia para el buen funcionamiento del instrumento.
Rendijas
La funcin de las rendijas de entrada es reducir al mximo la luz difusa y evitar que la luz dispersa
entre en el sistema de seleccin de longitud de onda.
Las rendijas de salida tienen como funcin impedir que la luz difusa atraviese la cubeta, lo que
generara desviaciones a la Ley de Beer.
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Selector de longitud de onda

Su finalidad es seleccionar la longitud de onda o intervalos de longitud de onda deseados para el
anlisis. Se clasifican en filtros y monocromadores.
Filtros
Es un mecanismo sencillo compuesto por un material que transmite selectivamente una
longitud de onda y absorbe todas las dems. Existen dos tipos:
Filtros de vidrio y filtros Wratten. Basados en la transmisin selectiva de la luz. Los filtros
Wratten consisten en una capa de gelatina coloreada entre dos lminas de vidrio
transparente. Los filtros de vidrio estn compuestos por una o ms capas de vidrios
coloreados. Ambos tipos transmiten ms energa radiante en una parte del espectro que en
otras. Son preferibles los filtros de vidrio por ser ms duraderos, y menos susceptibles de
dao por el calor y la luz solar.
Filtros de interferencia. Basados en el principio de interferencia. Cuando la luz choca con
una fina pelcula, una parte es reflejada en la superficie frontal de la pelcula mientras que
la que penetra en ella es reflejada por la cara inferior. Este ltimo rayo de luz ha viajado
ms que el primero, y la diferencia de recorrido viene dada por el espesor de la pelcula. Si
ambos rayos reflejados (en la cara frontal y en la cara interior de la pelcula) estn en fase,
su intensidad queda duplicada, mientras que si estn fuera de fase se anulan entre s. De
esta forma, cuando la luz blanca incide sobre una pelcula de este tipo, algunas de sus
longitudes de onda quedan aumentadas, mientras que otras se anulan. Los filtros de
interferencia separan intervalos ms estrechos de longitud de onda que los de vidrio.
Monocromadores
Los monocromadores son capaces de dar bandas espectrales mucho ms estrechas que
los filtros, y tienen la ventaja adicional de poderse ajustar fcilmente dentro de una amplia
zona del espectro.
El elemento dispersante de la luz puede ser un prisma o un red de difraccin.
Prismas. Son fragmentos con forma de cua, de vidrio, cuarzo, cloruro sdico o cualquier
otro material que permita la transmisin de la luz. Debido a la variacin del ndice de
refraccin en funcin de la longitud de onda, la luz que penetra en el prisma se dispersa en
mayor o menor medida segn la longitud de onda de la luz. La dispersin de la luz no es
lineal, es decir, se hace cada vez menor a medida que se acortan las longitudes de onda.
Cuando se pretende trabajar en la zona visible del espectro y en la UV prxima, se pueden
utilizar primas de vidrio, pero para trabajar en el UV lejano, han de ser de cuarzo.
Redes de difraccin. Consisten en un gran nmero de lneas (hendiduras) paralelas,
situadas a distancias iguales entre s, trazadas sobre un vidrio o una superficie metlica.
Cuando incide la luz blanca sobre ella, cada hendidura se comporta como un pequeo
prisma: la luz se refleja o atraviesa la red de manera que la luz blanca se descompone en
varios colores.
Parmetros de los sistemas de seleccin de longitud de onda
Con excepcin de los mecanismos pticos lser, la luz obtenida con cualquier sistema selector de
longitud de onda no es verdaderamente monocromtica, sino que comprende un intervalo de
longitudes de onda.
Es un sistema selector de longitudes de onda con una anchura igual para las rendijas de entrada y
salida; la luz que emerja de la rendija de salida se representa por un tringulo issceles y se definen
varios parmetros (Figura 19.9):
Ancho de banda. Es el intervalo de longitudes de onda que pasan a travs de la rendija de salida de
un mecanismo selector de longitudes de onda.
Longitud de onda nominal de una haz de luz. Es la longitud de onda en la que se halla el mximo de
intensidad de luz. Se emplea para definir los filtros.
Ancho de banda nominal. Corresponde a aquellas longitudes de onda centradas sobre la longitud de
onda mxima, que transmite el 75 por 100 del total de luz presente en el haz emergente. Describe el
grado de monocromaticidad de un monocromador.
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El grado de monocromaticidad de un monocromador puede variar. En los monocromadores, la rendija

de entrada enfoca la luz sobre el prisma o red de difraccin, sobre el cual ser dispersada. La rendija
de salida determina el ancho de banda de la luz que ser seleccionada del espectro de dispersin.
Aumentando el ancho de la rendija de salida, el ancho de banda de la luz emergente se hace ms
amplio, con lo cual aumenta la intensidad de la energa, pero disminuye la pureza espectral.
En los monocromadores de red de difraccin, la rendija de salida puede ser fija, lo que resulta en un
paso de banda constante. Por el contrario, en los monocromadores de prisma, la rendija de salida es
variable.
Cubetas
Es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin espectrofotomtrica.
Formas. Pueden ser redondas, cuadradas, o rectangulares, y de tamao menor o mayor.
Habitualmente tienen 1 cm de paso de luz. Se obtienen mejores resultados trabajando con
las cubetas de lados paralelos, a ser posible fundidas en lugar de cementadas. Las de
forma redonda se deben marcar e introducir en el aparato siempre en la misma posicin.
Materiales.
La mayora estn fabricadas en vidrio, lo cual permite trabajar
satisfactoriamente entre longitudes de onda que van de 320 a 950 nm. Tambin existen
cubetas de plstico. Para medidas por debajo de 320 nm Ultravioleta Visible es necesario
emplear cubetas de cuarzo, que tambin se podran emplear para mediciones a longitudes
de onda superiores, pero su costo lo desaconseja.
La sustancia mas comnmente empleada para las ventanas de las celdas para la regin
infrarroja es el cloruro de sodio cristalino, tambin pueden usarse con este fin los dems
materiales transparentes al infrarrojo.
Sistemas de deteccin
Existen dos tipos de detectores empleados tanto en las regiones del visible como del UV: clulas
fotovoltaicas y fototubos. La eleccin de uno u otro sistema depende fundamentalmente de la
energa radiante de que se disponga. Si se han empleado como selectores filtros o
monocromadores de baja dispersin, stos proporcionarn un haz de luz de suficiente energa
como para emplear clulas fotovoltaicas. Si se emplean monocromadores de elevado poder
resolutivo, hay que recurrir a fotomultiplicadores para la deteccin.
1) Clulas fotovoltaicas, en las que la energa radiante genera una corriente en la
interfase entre una capa semiconductora y un metal.
2) Fototubos, en los que la radiacin causa la emisin de electrones a partir de una
superficie slida fotosensible.
3) Tubos fotomultiplicadores, que contienen una superficie fotoemisora as como varias
superficies adicionales, las cuales emiten una cascada de electrones cuando son
alcanzadas por los electrones procedentes del rea fotosensible.
4) Detectores de fotoconductividad, en los que la absorcin de la radiacin por un
Semiconducto produce electrones y agujeros , dando lugar, as a un aumento de
conductividad.
5) Fotodiodos de silicio, el los que los fotones aumentan la conductancia.
Detectores de calor utilizados para medir la radiacin infrarroja.
1) Detectores trmicos.
2) Termopares
3) Detectores piroelctricos
Sistemas de presentacin de datos
La energa elctrica del detector se refleja en sistemas de lectura y presentacin de datos. Estos
pueden ser sistemas de lectura directa, que suelen ir aplicados a aparatos con detectores del tipo
fotoclulas, o bien pueden introducir amplificadores de seal, como ocurre en los aparatos con
fototubos.
Hoy en da todos los aparatos incorporan ya la lectura digital, la cual, unida tambin a la
introduccin de microprocesadores, permite clculos directos de concentracin con arreglo a
factores de calibracin prefijados, y lectura contra estndares, o curvas de calibracin en memoria.
A esta presentacin digital de resultados se une tambin la posibilidad de conexin de
registradores, de gran utilidad en el estudio de reacciones cinticas, y en la realizacin de barridos
a travs de intervalos de longitudes de onda del espectro.
Tcnicas para la manipulacin de la muestra
En espectroscopia ultravioleta y visible los espectros se obtienen a partir de soluciones diluidas del
analito. En espectroscopia de infrarrojo, podemos analizar muestras lquidas, slidas y gaseosas.
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Lquidos puros
Cuando la cantidad de muestra es pequea o cuando no se dispone del disolvente apropiado, es
habitual obtener los espectros del lquido puro. En este caso solo una pelcula muy delgada tiene un
camino ptico suficientemente corto como para producir espectros satisfactorios. Una gota del lquido
puro se comprime entre dos placas de sal de roca para obtener una placa con un grosor de 0,01 mm
o menos. Las dos placas se mantienen unidas por capilaridad y se colocan entonces en la trayectoria
del haz.
Slidos
Estas tcnicas requieren que el tamao de partcula del slido suspendido sea menor que la longitud
de onda del haz infrarrojo. Se tritura de 2 a 5 mg de una muestra finamente pulverizada (tamao de
partcula 2m) en presencia de unas gotas de un aceite pesado de un hidrocarburo (Nujol).
Otra tcnica consiste en partir de un miligramo o menos de muestra finamente triturada que se
mezcla ntimamente con unos 100mg de polvo de bromuro de potasio desecado. La mezcla se puede
efectuar con un mortero y mejor aun en un pequeo molino de bolas. La mezcla se comprime luego
en un troquel especial a una presin de 700 a 1000 Kg/cm2 obteniendo un disco transparente,
mejores resultados si el disco se forma al vaco eliminando el aire ocluido. Luego el disco se coloca
en el haz del instrumento para su anlisis espectroscpico.
Gases:
El espectro de un lquido de bajo punto de ebullicin o de un gas se puede obtener permitiendo a la
muestra que se expanda en una cubeta en la que se ha hecho el vaco. Existen una variedad de
cubetas para este objeto, con longitudes de camino ptico que varan desde unos pocos centmetros
a varios metros.
EXPERIENCIAS A REALIZAR
OBJETIVOS:
Adquirir destreza en el empleo del Mtodo de la Serie Estndar y en el uso del Espectrofotmetro.
Estimar las cantidades de distintos componentes por medio de la medicin del grado de absorcin
por sustancias coloreadas.
Trazar curvas de calibracin y aplicarlas en la bsqueda de concentraciones incgnitas.
Determinacin de Color en Vinos Tintos
Tcnica aprobada por el INV (Instituto Nacional de Vitivinicultura), en base a ella se determina
el ndice de color en vinos tintos, factor fundamental al momento de fijar precio en vinos de traslado.
Metodologa:
Preparacin de la muestra:
Para la determinacin del ndice de color, los vinos debern estar completamente limpios,
considerndose como tales, aquellos que transmiten uniformemente la luz de una lmpara y permiten
observar ntidamente el filamento.
Instrumental:
La observacin se har con un espectrofotmetro UV-Visible empleando cubetas de un
milimetro (1 mm).
Procedimiento:
Realizar la lectura de absorbancia a cuatrocientos veinte nanometros (420 nm) y quinientos
veinte nanometros (520 nm).
Clculos:
Intensidad, por la suma de las absorbencias a 420 nm y 520 nm (I = A 420 nm + A 520 nm)
Tonalidad: por la relacin entre las absorbencias a 420 nm y 520 nm (T = A 420 nm / A 520
nm).
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ndice de color: estar dado por el valor de la relacin entre la intensidad y la tonalidad
multiplicado por 1000:
IC = (I/T) x 1000
Interpretacin:
Segn lo resuelto por el INV, a partir de la liberacin de los productos de la Elaboracin 2009,
los vinos tintos nacionales que se liberen al mercado interno, solo se los podr identificar como tales
en sus marbetes, cuando tengan un ndice de color igual o superior a quinientos (500), con una
tolerancia en su circulacin de hasta un diez por ciento (10%) en menos. Resolucin (INV) C. 9/08.
Del 30/5/2008. B.O.: 6/6/2008
Determinacin de color en cerveza Mtodo de referencia estndar.
A fines del siglo XIX (1883) cuando Joseph Williams, hijo de John Locke Lovibond, destacado
cervecero de Greenwich, Inglaterra, se decidi a encontrar una manera de asegurar una alta calidad
para sus cervezas. En 1883 desarroll el primer colormetro prctico del mundo que consista en una
serie de filminas coloreadas y graduadas que al ser comparadas con el color de la cerveza
determinaban
un
valor
aproximado.
Nace as la escala de colores medida en grados Lovibond (L) que se uso por mucho tiempo
hasta que fue reemplazada por sistemas mas modernos. Hoy da, casi no se usa en cerveceras, pero
el trmino grados Lovibond es empleado a menudo por los fabricantes de maltas para describir el
color que sus granos aportan al mosto.
La variacin natural en la percepcin de los colores de una persona a otra, puso en evidencia
las limitaciones del sistema Lovibond y a mediados del siglo XX fue reemplazado por el uso del
espectrofotmetro de luz y la American Society of Brewing Chemists (ASBC) establece como
estndar el sistema de color Standard Reference Method (SRM). En Europa se haba desarrollado
otro sistema, el llamado European Brewing Convention (EBC) que era usado originariamente como
forma de comparacin visual, pero la tecnologa hizo que 25 aos despus adoptara el uso del
espectrofotmetro de manera similar al SRM.
Standard Reference Method (SRM )

Es el sistema adoptado en 1958 por la American Society of Brewing Chemists (ASBC) para medir el
color
de
una
cerveza.
En un laboratorio el SRM es determinado midiendo la reduccin de intensidad que sufre un haz de luz
monocromtica de longitud de onda de 430nm (azul), al atravesar pulgada de cerveza. Podemos
definir al SRM como la absorbancia (logaritmo de la perdida de luz) multiplicada por 10. Mtodos y
tecnologas modernas emplean 1cm de cerveza y multiplican la absorbancia por 12.7 aplicando la ley
de LambertBouguer-Beer.
SRM = 12.7 x A430
A430 es la absorbancia a 430 nm en 1 cm
Cuando el valor SRM de la cerveza es mayor a 30 las mediciones en cubetas de 1 cm son
aproximadas. En esos casos hay que diluir la muestra a medir con agua desionizada y multiplicar el
valor obtenido por el factor de dilucin (D) que ser igual a 2 si la dilucin es 1:1.
SRM = 12.7 x D x A430
Los valores medidos en SRM y los grados Lovibond son aproximadamente iguales y en la
prctica se pueden usar alternativamente para evaluar la intensidad del color de una cerveza.
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European Brewing Convention (EBC)

En un principio se usaban, en Europa, diferentes sistemas para la medicin del color de maltas y
cervezas. Cuando los mtodos de comparacin visual quedaron obsoletos, tanto el British Institute of
Brewing (IOB) como la European Brewing Convention (EBC) se decidieron por el uso de
espectmetro al igual que la American Society of Brewing Chemists (ASBC). Ambas instituciones
tenan mtodos diferentes basados en la medicin de la absorbancia pero, en este caso, de un haz
de luz de 530 nm de longitud de onda (Verde). Al no existir una relacin lineal con el sistema SRM por
lo general se usaban las siguientes frmulas para la conversin:
EBC = 2.65 SRM 1.2
SRM = 0.377 EBC + 0.45
En 1991 el sistema del British Institute of Brewing (IOB) queda formalmente retirado aunque
se sigue usando ocasionalmente dentro del Reino Unido. A partir de ese ao el mtodo de la
European Brewing Convention (EBC) pasa a ser el estndar y se modifica adoptando, para sus
mediciones,
la
longitud
de
onda
de
430
nm
y
una
cubeta
de
1
cm.
De esta manera el sistema EBC se vuelve muy similar al SRM diferencindose slo en la unidad de
color que, en el EBC, es 25 veces la absorbancia a 430nm (A430) en vez de las 12.7 veces del SRM.
EBC = 25 x A430
Con esta modificacin, la conversin entre ambos sistemas se simplific quedando las
frmulas siguientes:
EBC = SRM x 1.97
SRM = EBC / 1.97
Preparacin de la muestra:
Tener en cuenta, como para todo mtodo espectrofotomtrico que las muestras debe ser
totalmente lmpidas, en caso de trabajar con cervezas no filtradas o artesanales con toma de espuma
en botella, se debe centrifugar previamente.
La presencia de burbujas es otro limitante por lo que deben descarbonatarse por trasvasados
sucesivos hasta eliminacin total de las mismas.
Instrumental:
Espectrofotmetro visible. Cubetas de vidrio o plstico.
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Procedimiento:
Realizar la lectura de absorbancia a 420 nm, tener en cuenta la longitud de paso de la cubeta
utilizada.
Clculos:
SRM = 12.7 x A430 (si A430 es tomada con cubetas de 1 cm )
SRM = 10 x A430 (si A430 es tomada con cubetas de pulgada)
Conversin de Unidades:
EBC = SRM x 1.97
Interpretacin:
El Captulo VIII del CAA (Cdigo alimentario Argentino) legisla sobre bebidas Alcohlicas, en
el art 1080, define cerveza y la clasifica segn color entre otros parmetros. Define cerveza clara,
blanca, rubia o Cerveza , como aquella cuyo color es inferior a 20 unidades E.B.C. (European
Brewery Convention) y Cerveza oscura o Cerveza negra a la cerveza cuyo color es igual o superior a
20 unidades E.B.C..
DETERMINACIN DE HIERRO
Por Espectrofotometra con ortofenantrolina.

Fundamento:
La ortofenantrolina forma con el hierro ferroso un complejo de coloracin anaranjado-rojizo en medio
medianamente cido (pH entre 1,5 y4)
La determinacin se realiza previo ajuste del pH y reduccin del Fe+3 a Fe+2.

Reactivos:
Solucin de ClH 1:20
Solucin patrn de Fe de 500 ppm :
Disolver 0,351 de sal de Mohr (Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O en agua destilada, agregar 2 ml de ClH
1:20 y llevar a 100 con agua destilada.
Solucin de Fe 20 ppm:
Tomar 4 ml de la solucin anterior (Fe=500 ppm), agregar 2ml de ClH 1:20 y llevar a 100 ml
con agua destilada.
Solucin reductora de Hidroxilamina
Solucin alcohlica de ortofenantrolina al 1%
Disolver 1 gr de ortofenantrolina en 100 ml de alcohol de 96
Tcnica:
-
Preparar una curva patrn de Fe con soluciones de 0,1,2,3 y 4 ppm empleando : 0 - 2,5- 5 -7,5 y
10 ml de solucin patrn de Fe de 20 ppm en matraces aforados de 50 ml a los que se agrega
0,1 g de hidroxilamina y 1 ml de solucin de ortofenantrolina, enrasado finalmente a volumen.
Realizar en un matraz volumtrico de 50 ml una solucin patrn intermedio para que entre en
escala (realizar las diluciones correspondientes)
Medir absorbancia de la serie de diluciones patrn para trazar la curva de calibracin usando 490
nm de longitud de onda.
Medir la absorbancia de la muestra y referir el dato obtenido a ppm de hierro, mediante los valores
de la curva patrn.
Resultados:
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Bibliografa recomendada:
Tcnicas Enolgicas oficiales del INV. Consulta mayo 2014.
https://www.google.com.ar/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&ved=0CEMQFjAD&
url=http%3A%2F%2Flugardelvino.com%2Fcategory%2F7-vinos.html%3Fdownload%3D24&ei=iTqHUCD8m3sATJwIHIBA&usg=AFQjCNEvr8dt0WAYIJwqWlIXxwTE5sxLOA&sig2=XnYWqrIQPU_uDlJTQ
DQvog
Cdigo Alimentario Argentino
https://www.google.com.ar/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=0CCsQFjAA&url=http
%3A%2F%2Fwww.anmat.gov.ar%2F&ei=CkCHU9ZAuXfsATR7oCoDg&usg=AFQjCNGads8uq5W97kP5dzIaXEu1w5G4Jg&sig2=F5rK__UMTkx7A5W_
FjeCHQ
Resolucin (INV) C. 9/08. Del 30/5/2008. B.O.: 6/6/2008.
https://www.google.com.ar/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja&uact=8&ved=0CC
sQFjAA&url=http%3A%2F%2Fwww.inv.gov.ar%2F&ei=4keHU_a8JpSysASbvIC4Bg&usg=AFQjCNEX
HAaw-pLQnUpe-yhqV_nO4lz8mQ&sig2=Hmc0bnQvN91Emme6ysIfnw
39 |

EJERCITACIN
ESPECTROSCOPA MOLECULAR
Equivalencias:
-6
L = 10 g
-6
g = 10 g
Ley de Beer
Referencias
A= abc
a =Absortividad especfica.
-9
nL = 10 L
-9
ng = 10 g
b = espesor de celda en cm.

c = concentracin en gr por litro.
A = b C
= Absortividad molar.
b = El espesor en centmetros.
C = concentracin en moles por litro.
Absorbancia:
Transmitancia: T
A =log ( 1/T ) => A = log 100 % T

T =P / Po
Referencias:
P: potencia radiante transmitido.
=> T % =P / Po x 100
P0 : potencia radiante incidente .
Mtodo de adicin esndar
Ax = Absorbancia de la muestra
AT = Absorbancia Total
Cx = concentracin de la muestra.
Cs = concentracin del estndar.
Vs = volmen del estndar.
Vx = volmen de la muestra.
Cx = Cs Ax .
Vs
(AT - Ax ) Vx
EJERCICIOS A RESOLVER
1-
Calcular:
a) Qu porcentaje de la luz incidente a una longitud de onda dada se trasmite por un medio que, a esa
longitud de onda, tiene absorbancia de 1,033?
R= 9,26
b) Cul es la absorbancia de una solucin que absorbe 3/5 de la luz incidente? R= 0,398
2-
La transmitancia de una muestra es 35%, Cul es su absorbancia?
3-
Una muestra exhibe una absorbancia de 0,70 por 100 mL de un soluto absorbente de la luz. Cul es la
transmitancia en valor absoluto y en porcentaje?
R= 0,199 y 19,9%
4-
Una solucin que contiene 5 mg de una sustancia absorbente en 250 mL arroja un valor de 50% T cuando se
mide en una celda de 3 cm de paso ptico. Cul ser el % T de una solucin que contenga 1 mg de la
sustancia en exactamente 1 Litro, medida en una celda de 10 cm?
R= 89%
5-
Con referencia a la siguiente figura, supngase que dos cubetas contienen soluciones de distintas
absorbancias:
a) Calcular la absorbancia en la cubeta 1 y en la cubeta 2.
R= 0,3979 y 0,3979
b) Calcular la absorbancia total.
R= 0,7958
c) Calcular la transmitancia en la cubeta 1 y en la 2.
R= 0,4 y 0,4
d) Calcular la transmitancia total.
R= 0,16
P0
40%
140
P1
P0
56
40%
R= 0,456
P2
P1
22,4
40 |

6-
Calcular el rango de concentracin molar que puede usarse para trabajar con cromato de potasio que a 370
3
nm de longitud de onda tiene un coeficiente de absortividad molar =4,79 x 10 y ser usado entre 20 a 80%
de T.
4
-5
R= 1,45 x 10- M a 2,023 x 10 M
7-
Una solucin que contiene 15 g de soluto (mM= 243,8) absorbente de luz en 200 mL, exhibe 32% de T en una
celda de 3 cm de paso ptico. Calcular:
a) la absorbancia de la solucin
R= 0,494
-3
b) La absortividad
R=2,19 x 10
c) La absortividad molar del soluto.
R= 0,531
8-
Se desea determinar hierro mediante espectroscopa de absorcin para lo cual se necesita preparar una
escala patrn de hierro con soluciones de 0, 2, 4, 6, y 8 ppm para realizar la calibracin. En el laboratorio se
cuenta con una solucin patrn de hierro de 40 ppm y matraces de 50 mL para preparar las soluciones que se
necesitan. Calcular cuntos mL de la solucin patrn deben utilizarse para hacer cada dilucin.
R= No adiciona b) 2,5 mL c) 5 mL d) 7,5 mL e) 10 mL
9- Se toman de la disolucin original 3 (tres) alcuotas de 10 mL. A la primera alcuota no se le aade nada, a la
segunda se aade 15 L y a la tercera 30 L de la solucin de Cloruro de cobre estndar de 200 ppm.
Lo enunciado se resume en la siguiente tabla:
Alcuota de 10 mL
1
2
3
Volumen de 200 ppm Respuesta Instrumento

Cu+2 aadido (L)
0
0,47
15
0,72
30
0,97
Concentracin final de
Cu+2 ( ppm)
a) Expresar las concentraciones finales de cobre aadido en ppm en la alcuota 2 y 3.

b) Realizar la grfica correspondiente sabiendo la respuesta del instrumento.
c) Obtener el contenido de cobre aplicando el mtodo de adicin estndar.
R = a) 0,3 y 0,6 ppm b) 0,5 ppm c) 0,56 ppm
10- Una alcuota de 25 mL de agua de pozo se trat con un exceso de KSCN y se diluy hasta 100
mL. Calcular los g/ mL de Fe (II) en la muestra, sabiendo que la solucin diluida tiene una
absorbancia de 0,720 a 750 nm, que se midi en una cubeta de 2 cm. La absortividad molar
3
es de 8 x 10 .
R = 12,56 ppm Fe
41 |

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(ciclo/s . m/ciclo= m/s)

En cierto sentido, la frecuencia es ms fundamental que la longitud de onda. La frecuencia

El nmero de onda , es otra forma de describir la radiacin electromagntica. Se define como

donde la constante de proporcionalidad k depende del medio y es igual a la

h es la constante de Planck (6.63 x10

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E = Eelectrnica + E vibracional + E rotacional

A = absorbente en estado fundamental

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Obsrvese que el aumento en la absorbancia de una solucin se acompaa de una disminucin en la

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De esto podemos deducir el enunciado de la ley de absorcin:

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