Ingeniera en Biotecnologa

ANLISIS DE ADN
Evelyn Nez.
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Universidad de las Amricas. Carrera de Ingeniera en Biotecnologa. Biologa

Molecular. Jos Queri s/n y Av. Granados. Quito Ecuador.
RESUMEN
Los geles de agarosa o de poliacrilamida son los ms usados en la
electroforesis, la cual, por un mtodo sencillo, permite resolver determinar
aquellos fragmentos del ADN que en algn otro procedimiento no se pudo
separar. La determinacin de la ubicacin de las bandas del ADN dentro del gel
es posible mediante el uso de bajas concentraciones de colorantes para la
tincin con intercalantes fluorescentes, ya que incluso con cantidades
pequeas de doble cadena de ADN, pueden ser detectadas directamente
mediante la luz ultravioleta.
Tanto los geles de agarosa como la de poliacrilamida, son elegidos en base al
tamao del fragmento que se desee separar. El gel de poliacrilamida es ms
efectivo cuando se tiene fragmentos pequeos y su funcionamiento va en
forma vertical con campo elctrico constante, pero, por el contrario, su
preparacin no es fcil. Por otro lado, el gel de agarosa tiene mayor rango de
separacin con configuracin horizontal de campo elctrico de fuerza y
direccin constante.
Factores que influyen en la velocidad del movimiento del ADN por medio de
geles:
Fluido de la corriente en el gel (Ley de Ohm).
Tamao del ADN.
Concentracin de la agarosa (relacin tamao ADN-movilidad
electrofortica).
Conformacin del ADN. Forma I, II, III viajan a diferentes velocidades y
dependen de la fuerza de la corriente a travs del gel, la fuerza inica
del buffer y la densidad de los giros de las hlices de la forma I.
Presencia de colorantes en el gel y el buffer de electroforesis disminuye
carga negativa de la doble cadena de ADN e incrementa rigidez y
longitud.
Voltaje aplicado. Bajo voltaje permite que la velocidad de migracin sea
proporcional a su voltaje.
Tipo de agarosa. Dos son estndar y con baja temperatura de fusin y
otra con temperatura media de fusin y gelificante (dependen de la
aplicacin).

Buffer de electroforesis. Con ausencia de iones la conductividad elctrica

es mnima (migracin lenta) pero con alta fuerza inica tiene eficiente
conductividad.

Ingeniera en Biotecnologa
Las clases de agarosa con sus propiedades:
Estndar (Alta temperatura de fusin). Usado en electroforesis
convencional para la separacin de ADN con alto peso molecular.
Incrementa velocidad de migracin.
Baja temperatura de fusin y gelificante. Fcil recuperacin de ADN.
Qumicamente modificado. Mejor capacidad de tamizado equivalente a
la estndar
Electroendo osmtica. Velocidad de migracin de cidos nucleicos hacia
el electrodo positivo afectada por la ionizacin de los grupos cidos.
Buffer de electroforesis. Conformados por tres acetatos (E buffer), tres boratos
o tres fosfatos. Preparados con soluciones concentradas y almacenados a
temperatura ambiente.
ANLISIS DE FRAGMENTOS DE ADN
Despus de la separacin por electroforesis, se recuperan los fragmentos y se
desnaturalizan in situ y se transfieren a un gel con un filtro. La deteccin de las
secuencias especificas son detectadas por la hidrolizacin de las sondas
radioactivas.
Recuperacin del ADN de los geles. La purificacin es importante si se quiere
clonar los fragmentos de ADN. Los problemas por los mtodos incluyen a la
dificultad de ligue y digestin, mala recuperacin de los fragmentos y de la
cantidad de ADN.
Es por eso que otra opcin para resultados ms efectivos, se tiene el PCR, el
cual es ms rpido e incluso menos costoso.

REFERENCIAS
Green M.R. and Sambrook J. (2012). Molecular Cloning: A Laboratory Manual
(4th ed.), Three-volume set. New York. U.S.A.: Cold Spring Harbor Laboratory
Press. Pg: 81-87