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INTRODUCCIN

El trmino recuperacin es un trmino colectivo, til para todas las etapas que se
requieren a fin de recuperar los productos tiles de cualquier tipo de proceso
industrial.
En los primeros tiempos de la Microbiologa Industrial las tcnicas utilizadas en la
recuperacin de productos (extraccin, destilacin, dilisis, cristalizacin,
precipitacin, desecacin) se tomaron ms o menos directamente de la ingeniera
qumica sin ms que un intento aproximado para adaptarlas a los materiales
biolgicos.

El propio microorganismo puede ser el producto final deseado, sin embargo, en la


mayor parte de los procesos a gran escala el producto deseado es un metabolito
que est presente intra o extracelularmente.
metabolitos intracelulares incluyen a los cidos nucleicos, las vitaminas,
enzimas y ciertos antibiticos como la griseofulvina.
metabolitos extracelulares incluyen a los aminocidos, el cido ctrico, alcohol,
algunos enzimas (amilasas y proteasas) y la mayor parte de los antibiticos
(penicilina, estreptomicina).

FLOCULACIN Y FLOTACIN
En la floculacin se producen grandes agregados, que sedimentan mucho ms
rpido, entonces la velocidad de sedimentacin de una partcula aumenta con su
dimetro.
Aplicacin: para clulas aisladas en el rango de tamao de 1 a 10 m que
sedimentan muy lentamente. Por lo cual se aade un agente floculante, sal
inorgnica, polielectrolitos orgnicos.
La floculacin depende tanto del agente floculante empleado como de otros
factores como la naturaleza de las clulas, de los constituyentes inicos as como
su concentracin.
La floculacin puede ocurrir reversiblemente si las cargas sobre la superficie de la
clula pueden neutralizarse por iones de carga opuesta, e irreversiblemente si se
forman, entre las clulas, puentes de molculas polimricas cargadas.
Se utiliza la flotacin si no se forma un flculo suficientemente denso, y es el
proceso reverso a la floculacin.
La flotacin se consigue introduciendo gas en el lquido. Las pequeas burbujas de
gas adsorben y atrapan a las clulas y suben a la capa de espuma en la parte
superior del recipiente donde pueden ser recogidas y sacadas del biorreactor.

FILTRACIN
Lo ms frecuente es que la primera etapa en el proceso de recuperacin se lleve a
cabo por algn tipo de proceso de filtracin.
Los dos principales tipos de filtros son los denominados filtros en profundidad y
filtros en superficie.
Un filtro en profundidad se construye a partir de una matriz filamentosa, como
lana de vidrio o papel de filtro, llevndose a cabo el proceso de filtracin debido a
que las partculas que han de ser removidas quedan atrapadas dentro de la matriz.
Las partculas que van a ser filtradas son frecuentemente ms pequeas que los
poros del filtro, pero a pesar de ello son separadas a medida que pasan a travs de
los intersticios retorcidos del filtro.
Los hongos filamentosos se filtran frecuentemente a travs de filtros profundos.
Por su parte, los cultivos bacterianos deben ser filtrados en superficie. En
cualquier caso, la velocidad de filtracin, es decir el volumen de filtrado que puede
ser recogido en un tiempo determinado, est influenciada por numerosos factores,
como el tamao de los microorganismos, su morfologa, la viscosidad del fluido,
temperatura, etc.

Uno de los inconvenientes de la filtracin en superficie es la colmatacin. Debido a


que este proceso de filtracin depende estrictamente del tamao de los poros y del
tamao de las partculas, a medida que el material celular se amontona sobre el
filtro se forma una capa que reduce la velocidad de filtracin.
Dependiendo del tamao de las partculas que sean filtradas se reconocen tres
tipos principales de procesos de filtracin:

Osmosis reversa, para partculas de 0,0001 a 0,001 m


Ultrafiltracin, para partculas de 0,001 a 0,1 m
Microfiltracin,
para
partculas
de
0,1

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CENTRIFUGACIN
Las bacterias son normalmente demasiado pequeas como para ser separadas con
filtros sencillos. Su separacin por centrifugacin tambin es difcil debido a las
pequeas diferencias en densidad entre las partculas y la suspensin.
La centrifugacin no slo se utiliza para separar partculas slidas de la fase
lquida sino tambin para la separacin de fluido/fluido.
La separacin eficiente de las clulas por centrifugacin se ve favorecida por un
tamao grande de las partculas, una gran diferencia entre la densidad de las
partculas y el lquido, una baja viscosidad del lquido, un radio elevado del rotor
de la centrfuga y una alta velocidad angular. Tanto el tamao de las partculas, su
densidad as como la viscosidad del lquido normalmente no se pueden controlar.

MTODOS QUMICOS
Los mtodos qumicos utilizados para desintegrar clulas microbianas incluyen
tratamiento con lcalis o cidos, solventes orgnicos y detergentes.La lisis
bacteriana mediante el uso de lcalis puede llevarse a cabo a gran escala y con bajo
coste siempre y cuando el producto sea estable a pH: 10,5-12,5.
El tratamiento con solventes orgnicos es un tratamiento sencillo y barato que se
utiliza en el aislamiento de enzimas en levaduras. No obstante, se corre el riesgo de
que el tratamiento desnaturalice las protenas por lo que se debe chequear con
antelacin.

Los detergentes permeabilizan las clulas bacterianas al solubilizar las membranas


celulares. Como consecuencia de esta actividad se originan agujeros por los que
salen al exterior las protenas y otras molculas. desgraciadamente los detergentes
son caros, desnaturalizan la mayora de las protenas y a menudo aparecen como
contaminantes en el proceso subsecuente de purificacin.
Para la extraccin de clulas de levadura se utiliza la plasmlisis que se consigue
mediante la adicin de una concentracin alta de cloruro sdico.

MTODOS BIOLGICOS
Se utiliza la lisis enzimtica. Los tratamientos enzimticos son muy especficos y
las condiciones para la lisis son suaves. En la actualidad, los costes limitan el uso de
los enzimas como agentes lticos celulares en la industria. Una variante que se
utiliza en levaduras es la autolisis en la cual los enzimas autolticos endgenos de
las levaduras llevan a cabo la destruccin de su propia pared celular. La adicin de
cloruro sdico, acetato de etilo o cloroformo y la incubacin durante 24h a 45C
aumenta la velocidad del proceso autoltico.

MTODOS FSICOS
La desintegracin por ultrasonidos se utiliza ampliamente en el laboratorio, pero
debido a su alto coste no es adecuada para procesos a escala industrial.
Otro mtodo fsico incluye repetidos ciclos de congelacin y descongelacin pero
en este caso muchas de las clulas permanecen intactas. Industrialmente los
mtodos fsicos ms empleados de desintegracin celular suponen la accin
mecnica.
Los molinos de bolas llevan a cabo la ruptura de las clulas mediante la accin de
bolas de vidrio. Las clulas y las bolas de vidrio se mezclan juntas y se someten a
una alta velocidad de mezclado en una vasija de reaccin. La ruptura se produce
cuando una bola de vidrio fuerza una clula contra las paredes de la vasija.

CROMATOGRAFA
Algunas de las etapas ms caras en la recuperacin del producto implican el uso de
mtodos cromatogrficos. Tales mtodos son de especial valor para la purificacin
de materiales biolgicos sensibles y encuentran un amplio uso en la preparacin
de materiales farmacuticos, reactivos de diagnstico y reactivos para
investigacin.
Los distintos mtodos cromatogrficos que existen segn su mecanismo de
separacin son: filtracin en gel, cromatografa de adsorcin, cromatografa
de intercambio inico, cromatografa de afinidad y electroenfoque .

EXTRACCIN
La extraccin, cuando se aplica a los bioproductos, tiene tanto la funcin
de separacin como la de concentracin.
El caldo acuoso de fermentacin que contiene el producto deseado se mezcla con
un solvente inmiscible en el que se disuelva preferentemente y del que pueda ser
ms fcil y especficamente recuperado. Una vez se ha concentrado el producto
deseado en la fase solvente puede ser adicionalmente purificado.
La extraccin con solventes ha sido utilizada ampliamente en la industria de
antibiticos, como la penicilina, utilizando solventes como el acetato de amilo o
de butilo. Para la separacin de enzimas en estado activo no pueden ser
utilizados los solventes orgnicos pero s pueden ser utilizados sistemas acuosos
en fase mltiple preparados en una solucin de sales con polmeros hidroflicos.
En ambas fases el agua es el componente principal, pero ambas fases no son
miscibles por lo que los enzimas pueden separarse fcilmente sin prdida de
actividad.

CRISTALIZACIN Y PRECIPITACIN
La cristalizacin a baja temperatura es una forma muy suave de purificacin. La
cristalizacin se utiliza principalmente para la purificacin de compuestos de
bajo peso molecular, como los antibiticos.
Por ejemplo, la Penicilina G es generalmente extrada del caldo de fermentacin
con acetato de butilo y cristalizada por adicin de acetato potsico en solucin
etanlica.

DESECACIN
El secado del material biolgico es en muchos casos el mtodo final por el que los
productos son llevados a una forma estable adecuada para su manejo y
almacenamiento.
La sensibilidad al calor de la mayor parte de los productos biolgicos significa que
los nicos mtodos que pueden ser utilizados son los que conducen a la
eliminacin de agua con elevacin mnima de la temperatura. En algunos casos, la
termoestabilidad de los productos, como enzimas o preparaciones farmacuticas,
es mejorada por la adicin de azcares u otros estabilizantes inertes.
La liofilizacin es el mtodo de desecacin ms suave debido a que el agua es
sublimada a partir de una masa congelada. Muchos productos farmacuticos son
liofilizados como vacunas, fracciones de plasma, hormonas y preparaciones de
enzimas, as como ingredientes muy lbiles y caros para diagnosis. Tambin se
utiliza la liofilizacin cuando el producto final es un cultivo microbiano vivo
(cultivos para inoculacin en las industrias lcteas).