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Produccin de enzimas para uso biotecnolgico

La Biocatlisis ha surgido como un rea de gran riqueza dentro de la


biotecnologa, y ha permitido la aplicacin de las enzimas en un amplio numero
de industrias dedicadas a la fabricacin de frmacos y otros compuestos
qumicos, asi como alimentos o biocombustibles. Durante siglos el hombre ha
utilizado los microorganismos en su beneficio sin saber que las
transformaciones obtenidas se deban a la funcin de determinadas enzimas
presentes en los organismos utilizados. As, antes de que se conocern las
bases de la bioqumica de los procesos biocatalizados, la capacidad cataltica
de las enzimas presentes en los microorganismos como la levadura
Saccharomyces cerevisiae o las bacterias lcticas se han utilizado desde hace
siglos en las produccin de alimentos como el vino, la cerveza, el queso, el
vinagre o el pan.
En la actualidad son numerosos los procesos biotecnolgicos que se llevan a
cabo mediante la utilizacin de clulas o de sus enzimas aisladas, siendo un
campo con grandes perspectivas de futuro. El trmino Biocatlisis se refiere a
la utilizacin de clulas o sus enzimas aisladas para catalizar reacciones o
transformaciones que conducen a la obtencin de compuestos de inters, que
satisfacen numerosas necesidades humanas. La utilizacin de stas ha
demostrado su eficacia en la sntesis de frmacos, herbicidas, insecticidas y
otros productos qumicos, en la produccin de biocombustibles alternativos al
petrleo, o en la industria textil, entre otros. Ello se debe a que presentan una
alternativa eficiente y ecolgica a la qumica sinttica tradicional, ya que los
procesos que catalizan transcurren a travs de reacciones en medios ms
respetuosos con el medio ambiente y bajo condiciones de pH y temperatura
suaves con mayores rendimientos que son procesos regio y estereoselectivos y
con menor coste econmico.
En general, el escalado industrial de cualquier proceso biocatalizado requiere
de unas etapas previas que incluyen: la seleccin de la enzima ms adecuada,
su produccin aislamiento y purificacin, su caracterizacin para determinar las
condiciones idneas para la catlisis enzimtica y su inmovilizacin con el fin
de reducir los costes. Estas etapas se agrupan bajo el trmino Ciclo
Biocataltico.
http://www.foodnewslatam.com/articulos/biotecnolog%C3%ADa/59ingredientes/2815-la-producci%C3%B3n-de-enzimas-en-el-uso-de-labiotecnolog%C3%ADa-blanca.html

1.1.

Estabilizacin de enzimas

http://farmacia.ugr.es/ars/pdf/125.pdf En esta pgina est lo de inmovilizacin pero se


habla es despus de inmovilizacin as que la dejo pa que veas qu te sirve.
1.2.

Inmovilizacin de enzimas

La inmovilizacin de enzimas permite una mejora significativa de su estabilidad, lo que


hace posible su empleo en la produccin industrial de productos qumicos, farmaceticos,
alimentos; en el tratamiento de residuos; en el diagnstico y tratamiento de enfermedades, y
otras muchas aplicaciones. En esta revisin se analizan los diferentes mtodos de
inmovilizacin de enzimas, y el efecto sobre las propiedades catalticas y la estabilidad de
los biocatalizadores obtenidos.
El proceso de inmovilizacin se lleva a cabo mediante la suspensin de la enzima en una
solucin del monmero. Seguidamente se inicia la polimerizacin por un cambio de
temperatura o mediante la adicin de un reactivo qumico. El atrapamiento puede ser en
geles o en fibras, que suelen ser ms resistentes que los geles. En el primer caso, la enzima
queda atrapada en el interior de un gel, mientras que en el segundo caso la enzima se
encuentra ocluida dentro de las microcavidades de una fibra sinttica. El atrapamiento, de
gran sencillez desde el punto de vista experimental, requiere poca cantidad de enzima para
obtener derivados activos. Como ventaja adicional, la enzima no sufre ninguna alteracin
en su estructura. De todas formas, el atrapamiento requiere un control riguroso de las
condiciones de polimerizacin, as como la comprobacin de que la naturaleza qumica del
proceso no altera los grupos reactivos de la protena.
Las enzimas presentan una serie de ventajas frente a los catalizadores inorgnicos
tradicionales: (1) una elevada especificidad, estereoselectividad y regioespecificidad; y (2)
una gran actividad a temperatura ambiente y presin atmosfrica. A pesar de estas claras
ventajas, el empleo de estos biocatalizadores no se ha generalizado en la industria, debido
principalmente a: (1) su limitada estabilidad ya que son protenas que se pueden
desnaturalizar, y perder totalmente su actividad; y (2) la dificultad que entraa su
separacin de los sustratos y productos en el medio de reaccin, lo que impide su
reutilizacin. La inmovilizacin de enzimas ha logrado superar estos inconvenientes, y ha
permitido que muchos procesos industriales biocatalizados sean rentables econmicamente
en la actualidad. En general, los mtodos de inmovilizacin se suelen clasificar en dos
grandes categoras: la retencin fsica y la unin qumica. El atrapamiento de enzimas y la
inclusin en membranas son los principales mtodos de inmovilizacin por retencin fsica,
mientras que la unin de enzimas a soportes y el reticulado son los mtodos por unin
qumica ms destacados. En resumen, el atrapamiento consiste en la retencin fsica de la
enzima en las cavidades interiores de una matriz slida porosa, que puede ser un polmero
sinttico (v.g. geles de poliacrilamida, resinas de poliuretano, etc.) o natural (alginato,
quitosano, agarosa, etc.). La microencapsulacin es un mtodo de retencin fsica en el que
las enzimas estn rodeadas de membranas semipermeables, permitiendo exclusivamente el
paso de molculas de sustrato y producto, pero no de enzima. Dentro de los mtodos por
unin qumica, la unin de enzimas a soportes es el ms utilizado y del que se dispone de
mayor informacin. Se pueden utilizar una gran variedad de materiales (inorgnicos y

orgnicos) como soportes de inmovilizacin, los cuales difieren en tamao, densidad,


porosidad y forma, aunque generalmente se comercializan en forma de cilindro, hojas,
fibras, y ms corrientemente en forma de esferas. El soporte elegido debe tener resistencia
mecnica adecuada a las condiciones de operacin, y ser fcilmente separable del medio
lquido para que pueda ser reutilizado. Las enzimas se pueden unir a estos soportes
mediante unin no covalente o unin covalente. Por un lado, la unin no covalente de una
enzima a un determinado soporte se puede establecer mediante: (1) interacciones
especficas (inicas, hidrofbicas, quelacin), y (2) interacciones no especficas. Por otro
lado, la unin covalente a soportes sucede tras el ataque nucleoflico de determinados
aminocidos expuestos hacia el exterior de la superficie de la enzima (principalmente
lisina, a travs de su grupo -amino) sobre grupos qumicos reactivos de un soporte
previamente funcionalizado (por ejemplo, soportes comerciales epoxidados como
Eupergit, Sepabeads, Relizyme, etc.). Finalmente, el entrecruzamiento (tambin
denominado reticulado) es una tcnica de inmovilizacin donde la enzima es el propio
soporte. Para ello, se emplean reactivos bifuncionales que originan uniones
intermoleculares entre las molculas de enzima. El agente reticulante ms empleado es el
glutaraldehdo, el cual reacciona con las lisinas situadas en la superficie de distintas
molculas de enzima, originando enlaces covalentes (bases de Schiff) intermoleculares
irreversibles. Aunque se han desarrollado y aplicado muchas tcnicas de inmovilizacin a
numerosas enzimas, se reconoce que no existe un mtodo universal vlido. No obstante,
gracias a toda la informacin disponible, se podra seleccionar la tcnica ms adecuada para
inmovilizar una enzima destinada a una aplicacin industrial concreta.

http://arbor.revistas.csic.es/index.php/arbor/article/viewArticle/1958/2290#S2

1.3.

Ingeniera del medio de reaccin

SELECTIVIDAD ENZIMATICA
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/5983/mod_resource/c
ontent/0/INMOVILIZACION_DE_ENZIMAS.pdf