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OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
Disear una estrategia de produccin de enterobactina a partir de pseudomona
fluorescens para su aplicacin como inhibidor de la corrosin y as ofrecer una
solucin a ese fenmeno presentado en las tuberas utilizadas en la industria
petrolera.
OBJETIVOS ESPECIFICOS.
Reconocer a los microorganismos como una alternativa para la
produccin
de inhibidores de la corrosin.
Proponer un proceso para la produccin de del inhibidor de manera
eficiente y que este a su vez sea efectivo.
Conocer ms a afondo los mecanismos de sntesis de productos a partir
de
Microorganismos
JUSTIFICACION
METODOLOGA
El grupo de Biocorrosin del IMP est constituido por especialistas en diversas
reas: materiales y corrosin, electroqumica y materiales, microbiologa,
biologa molecular, qumica, ingeniera qumica y administracin de proyectos.
Un estudio para el control de la calidad del agua congnita de inyeccin incluye
varios alcances, entre stos se encuentran: el anlisis del comportamiento
microbiolgico y fisico-qumico del agua de inyeccin, la determinacin de la
velocidad de corrosin del agua congnita de inyeccin, el anlisis del
comportamiento de la velocidad de corrosin y generacin de la mejor
alternativa para su implementacin en el sistema de inyeccin, el control de la
calidad de productos qumicos (pruebas en laboratorio y campo), alternativas
para la instalacin de bioprobetas y seguimiento del fenmeno de biocorrosin,
caracterizacin morfolgica y anlisis de la biopelcula que se desarrolla en el
sistema de inyeccin, anlisis microbiolgicos rutinarios y generacin de
metodologas novedosas.
En este trabajo se presentarn las actividades relacionadas con los alcances
de ndole microbiolgica.
Una vez que se ha identificado el problema y se ha elaborado el diagnstico de
las condiciones operativas del sistema y de la calidad del agua de inyeccin, se
establecen puntos de muestreo de agua de inyeccin y se analiza su
comportamiento microbiolgico y fisico-qumico. Las muestras son
transportadas al laboratorio y se llevan a cabo aislamientos microbianos para
obtener diferentes grupos metablicos: fermentadores, reductores de Fe y Mn y
uno de los ms importantes dentro del ambiente de las instalaciones petroleras,
el de las bacterias reductoras de sulfato (BSR). De las cepas aisladas se lleva
a cabo la caracterizacin morfolgica bsica a nivel de colonia y a nivel celular.
Se realizan extracciones de DNA metagenmico de las muestras y de las
cepas aisladas previamente. El DNA molde obtenido se emplea para las
reacciones de PCR (reaccin en cadena de la polimerasa), cuyo producto de
reaccin son los amplificados del gen 16S DNAr, estos son clonados y
posteriormente secuenciados para su anlisis. Las secuencias nucleotdicas
obtenidas y analizadas permiten elaborar una aproximacin en la identificacin
microbiana de cada cepa aislada o de lo que se haya obtenido directamente de
la muestra, que pudiera representar la parte no cultivable de los
microorganismos del agua de inyeccin.
Las herramientas de biologa molecular han permitido ampliar el conocimiento
de las comunidades microbianas, por lo que como parte de los alcances del
proyecto se encuentra el diseo de secuencias especficas de DNA para
evidenciar cierto tipo de genes metablicos de bacterias que inducen corrosin,
especialmente de BSR. En este contexto, se han obtenido buenos resultados
del diseo de secuencias nucleotdicas cortas para amplificar genes dsrAB que
codifican para la enzima sulfito reductasa desasimilatoria (DSR) que cataliza la
Identificacin de la BC.
Aspecto superficial de la aleacin.
Una de las formas de identificar la BC es la inspeccin microscpica de la
muestra (Cragnolino, 1983).Varios tipos de cambios en la superficie del metal
puede ser atribuidos a la presencia de microorganismos: depsito
caractersticos, blandos y/o mucilaginosos (Dester et al., 1991) tubrculos o
excrecencias del matal (Cragnolino, 1983; Kearns y Little, 1994) que contiene
microorganismos vivos y perforaciones en las superficie de aleacin de acero
inoxidable (Ballesteros et al., 1995; Ballesteros-Almanza et al., 2000) acero ala
carbn aleaciones de cobre (Cragnolino, 1983), en general distribuidos
irregularmente, pequeos orificios con cavidades formadas por debajo de la
superficie (Daumas et al., 1988). Estas estructuras son frecuentes en el acero
inoxidable por la actividad de bacterias del genero Gallionella (Belkin et al,
1986; Belkin et al, 1986). Estras brillantes, visibles despus de la remocin de
depsitos (Rossmoore y Rossmoore. 1993). El aspecto de los depsitos
pueden indicar cuales son los microorganismos participantes: fibroso; hongos
filamentosos (Hillet al., 1987) negro: bacterias reductoras de sulfato
(Daumas et al., 1988) naranja o castao: bacterias oxidantes de hierro
como Gallionella spp,(King, 1995), mientras que las bacterias oxidantes de
azufre con el genero Thiobacillus spp, grupo conocido que produce cambios en
el material de color amarrillo, debido a la liberacin de cido sulfurillo que
causan la oxidacin (corrosin del metal), o bien el color marrn del material
capsular (mucopolisacridos), producidos por los microorganismos para
adherirse y atrapar nutrientes, lo cual le da un aspecto viscoso, de las bacteria
formadores de limo. Sin embargo esto es lo principio el anlisis microbiolgico,
es fundamental para confirmar que la causa tiene origen biolgico. Todo lo
anterior esta resumido de manera sencilla en el cuadro 2, lo cual permite
realizar un diagnostico rpido de la BC (Childers et al., 1992).
Dinmica de la biocorrosin.
Es preciso identificar y enumerar los microorganismos causantes de la
corrosin. As como: bacterias aerbicas totales, bacterias anaerbicas,
hongos, que son indicadoras de la gravedad del problema (Sanders y Hamilton,
1986). Los microorganismos suspendidos en la fase planctnica causan el
deterioro de la superficie metlica, por la produccin de metabolito corrosivos o
indirectamente por el consumo de los inhibidores de la corrosin (Duquette,
1986; Gaylarde). La corrosin generalizada es una forma frecuente de
corrosin de los metales atacados por los microorganismos adheridos a la
superficie de la BP causan corrosin localizada en general mas severa (Videla,
1989).
Se observa puntiforme, estras o reas brillantez en el metal, acuerdo con la
localizacin y el tipo de depsito. La deteccin de los microorganismos se
realiza mediante muestreos, de los depsitos de frase acuosa como se ha
sealado en los cuadros 2 y 3 (Blumentals et al., 1990; Kearns y Lettle, 1994).
Por ello existen laboratorios especializados en anlisis de muestras, para
detectar la BC en base en diferentes aspectos biolgicos del deterioro de
materiales, se han desarrollado recientemente mtodos como los empleados
en biologa molecular (Belkin et al., 1986; Fiala y Stetter, 1986) a los mtodos
elctricos (Dester et al., 1991) y aquellos que se usan como indicacin de la BC
su actividad metablica: consumo de oxigeno, y produccin de CO2,
cinticamente enzimtico. El anlisis de los depsitos pueden indicar el tipo de
microorganismo de actividad: compuestos de azufre reducido (Sanders y
Hamilton, 1986). Azufre oxidado, bacterias quimiolitotroficas del azufre
(Alexander, 1995; Childers et al., 1992). xidos de hierro por bacterias
quimiolitotroficas de este elemento (Brock y Gustafson, 1976). Las tcnicas
empleadas son mtodos de rutina en qumica analtica y varan desde el
microanlisis a la espectrometra de masa. El anlisis microbiolgico consta de
dos partes (Kearns y Little, 1994): i) determinacin de microorganismos totales
como la principal herramienta son los mtodos pticos o inmunolgicos. ii)
deteccin, enumeracin e investigacin de microorganismos especifico como
se presentan en los cuadros 2 y 4. Por ello de manera convencional se han
sealado bsicamente tres mtodos de deteccin de la BC: i) enumeracin
directa total: de clula viables, activas y latentes incluyen las muertas ii) clulas
visibles (que se reproducen) en este caso se utiliza el crecimiento de las
clulas en medios de cultivos generales y/o selectivos y iii) la actividad celular
(que no necesariamente es su cultivo artificial).
Test
Plaqueo
"Dip slides"
NMP
QuimiLuminiscencia
ELISA
InmunoFluorescencia
Hidrogenasa
Parmetro
Facilidad
Rapidez
Aparato completo
Personal entrenado
Sensibilidad
Biofilms in situ
-finos
-densos
Costo
Nombre comercial
Sanicheck MR
RapidcheckMR
HydrogenaseMR
BTI-SRBMR
Diluyentes
Agua destilada
Soluciones fisiolgicas de cloruro de sodio
Soluciones templo de pH adecuada
Agua de mar artificial
Medio nutritivo
Aditivos
Agente Redox (por ej. Ascorbato, para el aislamiento de bacterias
anaerbicas).
Agentes tensioactivo (por ej. Tween 20, para remover celular de muestras
particuladas).
Mtodos de dispersin
Agitacin manual
Agitacin elctrica (agitador tipo Vortex)
Homogenizador elctrico para muestras slidas.
Ultrasonido de baja frecuencia
Limpieza
CONCLUSIN
El control de la corrosin microbiolgica en instalaciones de sistemas de
inyeccin de agua para la recuperacin mejorada de petrleo en PEMEX-PEP,
se lleva a cabo a travs de la asistencia tcnica de personal especializado del
IMP mediante equipo de vanguardia y metodologas adecuadas a las
necesidades de cada instalacin petrolera. El grupo de Biocorrosin ha
propuesto alternativas novedosas para el seguimiento y control de la corrosin
microbiolgica, dentro de stas se encuentran las que aplican conocimientos
de biologa molecular. La deteccin molecular incorporada a las metodologas
microbiolgicas tradicionales, ofrece una buena opcin para que la asistencia
tcnica requerida por PEMEX sea de alto contenido tecnolgico, con ello se
pretende elevar la eficiencia de los programas de inyeccin de biocidas e
inhibidores y mejorar la estrategia de seleccin de estos productos qumicos.
La colonizacin microbiana de metales y aleaciones de uso industria a travs
de la formacin e biopeliculas (compuestas por clulas ssiles, MPS y agua)
modifican drsticamente de la respuestas de los materiales a la BC. Estos
cambios se deben a modificaciones de sitio localizados del tipo y concentracin
de iones, pH y niveles de oxigeno, as como la introduccin de barreras al
transporte de especies qumicas desde y hacia la interfase metal/solucin. Se
BIBLIOGRAFIA