INTRODUCCION

EL microscopio es un instrumento ptico que aumenta la imagen de los

objetos. En los ltimos tres siglos ha permitido ampliar el campo de las
investigaciones biolgicas y se ha convertido en el instrumento bsico para
abrir nuevas fronteras en la biologa. La lupa puede considerarse como el
microscopio ms simple y fue usada inicialmente por algunos investigadores
para

adquirir

los

primeros

conocimientos

del

mundo

microscpico.

Posteriormente se perfeccion y en la actualidad existen varios tipos de

microscopios, algunos de ellos altamente especializados para una gran
variedad de usos. Entre los diferentes tipos podemos citar: microscopio simple,
compuesto y electrnico.
El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la
estructura, forma y tamao de diferente tipo de muestras.
Esta prctica de laboratorio se realiz con el fin de aprender a utilizar el
microscopio (ptico) reconociendo todas sus partes y la funcin que cada una
de estas tiene, y a la vez, Verificar algunas caractersticas del microscopio tales
como el poder de aumento y poder de resolucin, observar las distintas
sustancias presentes en las muestras, tratando de observar sus caractersticas
(formas, colores, etc.)
El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la
luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico
ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas
lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general, se utilizan
microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se
consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar
un objeto por encima de las 2.000 veces.

OBJETIVOS

El objetivo de esta prctica es aprender a utilizar el microscopio,

conocer todas las partes del microscopio as como sus funciones, y

aprender a ver objetos en l.

Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus
respectivas funciones.
Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las
ciencias biolgicas.

MARCO TERICO
Un microscopio es un dispositivo encargado de hacer visibles objetos muy
pequeos. El microscopio compuesto consta de dos lentes (o sistemas de
lentes) llamados objetivo y ocular. El objetivo es un sistema de focal pequea
que forma una imagen real e invertida del objeto (situado cerca de su foco)
prxima al foco del ocular. ste se encarga de formar una imagen virtual de la
anterior ampliada y situada en un punto en el que el ojo tenga fcil
acomodacin (a25cm o ms). Dada la reducida dimensin del objeto, se hace
imperioso el recolectar la mayor cantidad de luz del mismo, utilizando sistemas
de concentracin de la energa luminosa sobre el objeto y diseando sistemas
que aprovechen al mximo la luz procedente del objeto. Gracias al microscopio
se han descubierto bacterias y microorganismos, que a simple vista no se
hubieran detectado.
HISTORIA DEL MICROSCOPIO.
El nombre microscopio deriva del griego: mikrs=pequeo, skopo=observar.
Este trmino designa, en sentido amplio, a todo instrumento utilizado para
amplificar la imagen de objetos que, por su tamao, no son observables a
simple vista. En la prctica, se refiere a un aparato formado por un sistema de,
al menos, dos lentes: un objetivo y un ocular, con el mismo fin.
El descubrimiento del microscopio compuesto tuvo un precedente atribuido a
Galileo (1564-1642). El verdadero impulsor de la Microscopa fue, sin duda, el
holands Anton Van Leeuwenhoek, (1632-1723). Construy microscopios
simples, con lentes muy convexas que l mismo pula y con los cuales realiz
observaciones m uy diversas: estudi la composicin de la sangre, fue el
primero en observar y dibujar los protozoos, descubri las bacterias, etc. Sus
trabajos fueron publicados por la Real Sociedad de Londres (1683).
Hoy da, hay unanimidad en considerar a los holandeses Hans y Zacarias
Janssen, padre e hijo, como constructores del primer microscopio compuesto
en 1590. Desde entonces y hasta nuestros das, el microscopio compuesto no
ha cesado de perfeccionarse, incorporndole mejoras, revolver porta objetivos,
visin

binocular,

iluminacin

halgena

de

gran

rendimiento,

filtros

polarizadores, equipo de contraste de fase, microscopio de contraste

interferencial, microscopio de luz ultravioleta, etc.
Pese a todo, el microscopio ptico presenta una serie de limitaciones que le
impone la naturaleza de la propia LUZ. Por encima de los 1500-2000
aumentos, las aberraciones que origina la luz impiden hacer observaciones con
nitidez.
Es por ello que los investigadores tuvieron la idea de utilizar haces de
electrones en lugar de rayos luminosos y potentes electroimanes, en lugar de
lentes. Con ello naci el microscopio electrnico.

PARTES DE UN MICROSCOPIO COMPUESTO UN

MICROSCOPIO COMPUESTO
Es un microscopio ptico que tiene ms de un lente. Los microscopios
compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o
cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar
o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El
microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:
El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van
instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque.
El sistema ptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera
que producen el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas.
El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan,
transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin.

LA PARTE MECNICA DEL MICROSCOPIO

La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el
asa, la platina, el carro, el tornillo micromtrico y el tornillo micromtrico. Estos
elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin; adems, permiten los
desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.

El pie: Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo

general forma de Y o bien es rectangular.
La columna o brazo: Llamada tambin asa, es una pieza en forma de C, unida
a la base por su parte inferior mediante una charnela, permitiendo la inclinacin
del tubo para mejorar la captacin de luz cuando se utilizan los espejos.
Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al
pie.
El tubo: Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se
colocan los oculares y en extremo inferior el revlver de objetivos. El tubo se
encuentra unido a la parte superior de la columna mediante un sistema de
cremalleras, las cuales permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos.
El tornillo micromtrico: Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo
del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera.
Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.
El tornillo micromtrico: Mediante el movimiento casi imperceptible que
produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la
preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm.,
que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los
objetos.
La platina: Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u
objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje ptico del tubo, que
permite el paso delos rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser
fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria; es
decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos
circulares.
Las pinzas: Son dos piezas metlicas que sirven para sujetar la preparacin.
Se encuentran en la platina.
Carro mvil: Es un dispositivo que consta de dos tornillos y est colocado
sobre la platina, que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal
de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda.

El revlver: Es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan

los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se
colocan en posicin de trabajo, lo que se nota por el ruido de un pin que lo
fija.
Sistema ptico: El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar
las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Est formado
por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la muestra que
el ocular luego ampla.
El ocular: Se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se
debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin
aumentar la imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables
y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares
especiales de potencias mayores a 20X y otros que poseen una escala
micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el tamao del objeto
observado.

LOS OBJETIVOS
Representan el componente ptico ms importante del microscopio. Su
principal funcin consiste en colectar la luz proveniente del espcimen y
proyectar una imagen ntida, real, invertida y aumentada hacia el cuerpo del
microscopio.
Constituyen un sistema ptico formado por una o varias lentes, las cuales
deben estar centradas y los ejes pticos de cada una deben coincidir
exactamente para formar el eje ptico del sistema. Sus lentes estn hechas a
partir de cristales (espatos, fluorita, entre otros) con un alto grado de calidad y
funcionamiento; su precio depende del poder de aumento, resolucin y de la
correccin de las aberraciones. Muchos fabricantes elaboran objetivos que
pueden ser intercambiados y empleados en microscopios de otras marcas
comerciales.
Clasificacin: Tomando en cuenta el grado de correccin de las aberraciones
hay dos categoras de objetivos para el microscopio, los objetivos acromticos

y los objetivos apocromticos. En cada categora se distinguen an dos grupos,

los objetivos secos y los objetivos de inmersin (64, 65, 66):

Objetivos acromticos: Presentan correccin cromtica para la luz

azul y roja. Correccin de esfericidad para el verde. Dan mejores
resultados con filtro de luz de color verde y son ideales para
microfotografa blanco y negro. Se asume que un objetivo es acromtico

cuando no posee ninguna denominacin.

Objetivos semi-apocromticos: Elaborados a partir de cristales de
fluorita. Corrigen para el azul, el rojo y en cierto grado para el verde. La
correccin de esfericidad es para dos colores, el verde y el azul. Dan
buenos resultados con luz blanca y estn mejor diseados para la

microfotografa en colores.
Objetivos apocromticos: Poseen el ms alto nivel de correccin de
aberraciones y por ello, son ms costosos. Presentan correccin
cromtica para cuatro colores (azul oscuro, azul, rojo y verde);
correccin de esfericidad para dos o tres colores. Son los mejores
objetivos para microfotografa y video a color. Debido a su alto grado de
correccin, estos objetivos poseen mayores aperturas numricas que
los acromticos y las fluoritas. Esto puede ser un inconveniente puesto
que el campo de observacin se presenta un poco curvo.

Los tres tipos de objetivos proyectan imgenes con cierta distorsin que se
manifiesta como curvaturas y al ser corregidos para este defecto se denominan
plan-acromticos, plan-fluoritas o plan-apocromticos.
Objetivos secos y objetivos de inmersin:
Estos objetivos difieren entre s por la naturaleza del medio interpuesto entre el
cubre-objeto de la lmina histolgica y la lente frontal del objetivo. En los
objetivos secos el medio interpuesto es el aire cuyo ndice de refraccin (n=1)
es muy diferente del ndice del vidrio porta y cubre-objeto (n=1,5). Por el
contrario, en los objetivos denominados de inmersin el medio que separa al
cubre-objeto de la lente frontal del objetivo es un lquido cuyo ndice de
refraccin es lo ms prximo al del vidrio.

La ventaja de los objetivos de inmersin consiste en la disminucin o

eliminacin de la refraccin de los rayos luminosos entre el aire y el objetivo, en
consecuencia la luminosidad de la imagen est aumentada, mientras que en
los objetivos secos, est disminuida. El empleo de la inmersin aumenta el
ngulo de apertura del objetivo y permite mayor resolucin gracias a la captura
de una mayor cantidad de rayos luminosos refractados (11, 64) (ver fig. 3-5) y
solo puede utilizarse con objetivos de mayor aumento.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO O COMPUESTO

1.

Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la

platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso

anterior, ya debera estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.

3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o
colocar el de 10aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.

4. Para realizar el enfoque:

4.1. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el
tornillo micromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del
ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin
pudindose daar alguno de ellos o ambos.
4.2. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente
el objetivo dela preparacin con el macro mtrico y, cuando se observe algo
ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele
ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si
al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a
enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso

a. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por

ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si

se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin

si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.

b. Empleo del objetivo de inmersin:

Bajar totalmente la platina.
Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz
que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el
aceite.
Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio
camino entre ste y el de x40.
Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo
de inmersin.
Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota
ascendiera y sea rosara a la lente.
Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo
entre el objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor
que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no
se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se
manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que
bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3.
Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y
se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este
momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe
retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin.
Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel
especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est
perfectamente limpio.

5. Sistema de iluminacin: Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz

natural o artificial de tal manera que ilumine la preparacin u objeto que se va a
observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende los siguientes
elementos:

6. Fuente de iluminacin: Se trata generalmente de una lmpara

incandescente de tungsteno sobre voltejada. Por delante de ella se sita un
condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo,
que permite controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda
iluminada, para evitar que exceda el campo de observacin produciendo luces
parsitas.

7. El espejo:
Necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio
y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios
modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de
movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de
preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para iluminacin natural (luz
solar). Los modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que
cumple la misma funcin que el espejo.

8. Condensador:
Est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos
luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el
mismo ngulo que el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de
la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara
superior plana en contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de
gran abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin,
que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la
preparacin. La abertura numrica mxima del condensador debe ser al menos
igual que la del objetivo empleado, o no se lograr aprovechar todo su poder
separador. El condensador puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de
cremallera mediante un tornillo, bajndose para su uso con objetivos de poca
potencia.

9. Diafragma:
El condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para
ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para

aumentar el contraste, lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se

quiere aprovechar la resolucin del sistema ptico.

MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO

El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que
pudieran daarlo. Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o
gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa plstica o campana de vidrio.
Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos,
ste se puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa,
aceite de cedro, parafina, etc. Que hayan cado sobre las citadas partes. La
limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe
emplear se papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material
de laboratorio. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y
condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y
cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas. Para una buena limpieza de las
lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con ter y luego pasarlo por la
superficie cuantas veces sea necesario. Para guardarlo se acostumbra colocar
el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el tope; el
condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar que tropiece con
alguno de los objetivos. Gurdese en lugares secos, para evitar que la
humedad favorezca la formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias
qumicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del
microscopio.

PRECAUCIONES
Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento
en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la
platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su
funda.
Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo
cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si
no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro
de un armario para protegerlo del polvo.
Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el
microscopio.
Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite
que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con
papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el
papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha
llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una
mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo
de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden
daar las lentes y su sujecin.
No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).
El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la
mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra.

No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni

hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.
Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre
ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla
con un pao humedecido en xilol.
Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la
sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y
revisin general de los mismos.

CONCLUSIONES
Las limitaciones para el estudio de las clulas y tejidos han sido superadas a lo
largo del tiempo gracias al desarrollo tecnolgico que ha permitido la
construccin de instrumentos de laboratorio, tales como el microscopio, el cual
permite la observacin y obtencin de imgenes aumentadas de esos
especmenes diminutos, que a simple vista resultan invisibles.
El microscopio ha sido y ser el instrumento de mayor utilidad en el estudio de
las clulas y tejidos.
Para resaltar los detalles de los especmenes, adems de las coloraciones se
han creado microscopios especiales para tal fin, permitiendo adems la
observacin de clulas vivas, con las ventajas que esto trae consigo. El poder
de aumento de los microscopios se ha perfeccionado al conocer los
mecanismos involucrados en la formacin de las imgenes, modificando en los
instrumentos algunos elementos tales como el tipo de iluminacin, el sistema
ptico o el mtodo para obtener las imgenes, logrando incrementar la
resolucin de los instrumentos. Actualmente pueden verse desde elementos
ultra estructurales cuyas dimensiones estn en el orden de las micras, hasta
elementos atmicos de dimensiones nanomtricas.
Se ha demostrado que la capacidad de aumento de un microscopio depende
de la longitud de onda del tipo de radiacin que se emplee, establecindose la
relacin de manera inversamente proporcional, es decir, a menor longitud de
onda, mayor poder de resolucin. Disminuir la longitud de onda permite ver

objetos cada vez ms pequeos de manera individualizada, lo que a su vez

aumenta la calidad de los detalles de lo que se observa.
Los microscopios son instrumentos que permiten tanto la observacin del
aspecto y forma de las clulas y tejidos como la cuantificacin de variables
observadas, tales como dimensiones, dimetros, longitudes, cantidades, entre
otras. Adems de su uso en la biologa, tienen un sinfn de aplicaciones en
medicina forense, mineraloga, ciencia de los materiales, entre otras.

RECOMENDACIONES
Aunque los objetivos de 40x y 100x, en los microscopios modernos, suelen ser
retrctiles, es decir, retroceden parcialmente al tocar la preparacin para no
daarla, corremos el riesgo de rayar y ensuciar el objetivo, es preferible evitar
el contacto entre ste y el preparado, salvo en el caso de objetivo inmersin.
Con cada objetivo deberemos ajustar la abertura del diafragma y, a veces, la
posicin del condensador, hasta obtener una visin satisfactoria. En teora, el
condensador debe estar siempre en su posicin ms alta.
Los microscopios modernos, suelen venir equipados con oculares de punto
focal alto, es decir, si nos acercamos demasiado a l, la visin ser defectuosa.
Debemos, por tanto, buscar la altura adecuada.
En los microscopios de formato antiguo, sin inclinacin en el cabezal, se
pueden inclinar estativo y platina, para mayor comodidad. Esto no se podr
hacer si estamos utilizando inmersin o preparaciones con lquido entre porta y
cubre.
En los microscopios binoculares, debemos tener en cuenta que la distancia
entre los ojos vara de una persona a otra. Habr que ajustar la separacin
entre los oculares.

ANEXOS

Partes del microscopio

Sistema mecanico
Tubo