OBJETIVO GENERAL

Identificar diferentes especies de microorganismos como hongos y bacterias mediante toma de muestras en laboratorio de agua de
charco
y
evaluacin
microbiolgica
en alimentos.Realizando procedimientos de siembra, coloracin, tincin e identificacin macroscpica ymicroscpica de estos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Identificar diferentes especies de microorganismos mediante mtodos de siembra microbiana.
Realizar mtodos de tincin mediante coloracin simple y compuesta.
Clasificacin de hongos mediante la observacin microscpica.
Identificar medios de cultivo diferencial y selectivo.
Controlar el crecimiento bacteriano de Gram- positivo y Gram -negativos.
Identificar mediante el mtodo microscpico cianobacterias.
Identificar unidades formadoras de colonias.
Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio.

PRCTICA No. 2
RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE MICROBIOLOGIA
Realizar una descripcin de los materiales que utilizarn en la prctica, esto incluye equipos y materiales de vidrio. Realizar un boceto
de cada uno y una breve descripcin.
INSTRUMENTO

Portaobjetos

Cubreobjetos

USO

DESCRIPCION

Para colocar pequeas

fracciones o muestras,
en el cual son
observadas
al
microscopio. Adems
es un soporte para la
realizacin de pruebas
serolgicas
de
aglutinacin.

Fina placa de cristal sobre el

cual se disponen objetos para
su examen microscpico. Sus
dimensiones son de 75 mm x
25 mm y estn disponibles en
cajas de 50 unidades. El
objeto a observar suele
disponerse sobre este artefacto
para despus situarse en el
microscopio y ser observado.

Cubren las muestras o

preparaciones que han
sido
colocadas
previamente sobre las
lminas portaobjetos
para ser observadas en
el microscopio.

Son laminillas muy delgadas,

transparentes e incoloradas.
La forma varia de cuadradas a
rectangular;
cuando
son
cuadradas miden 22x22 mm y
cuando son rectangulares
miden 22x50 mm

IMAGEN

Caja de Petri

Pipetas
graduadas
(terminales y no
terminales)

Tubos de
ensayo(Tipos)

Se
utiliza
en
Microbiologa princip
almente
para cultivar bacterias,
mohos y otros
microorganismos.

Recipiente
redondo,
de cristal o plstico, con una
cubierta de la misma forma
que la placa, pero algo ms
grande de dimetro, para que
se pueda colocar encima y
cerrar el recipiente.
Son tubos de vidrio, rectos, de
Medir la alcuota de un longitud y grosor variable que
lquido con bastante se caracteriza por tener el
precisin.
extremo inferior ligeramente
cnico, de 1, 2, 5 y 10 ml,
tiene impreso en la parte
superior
un nmero que
equivale a su capacidad
volumtrica y a todo lo largo
una escala graduada en ml que
indica numricamente los
espacios en que se divide el
volumen total.
Son
usados
para
contener, conservar y
procesar,
muestras
biolgicas,
cultivar
microorganismos
y
realizar pruebas de
identificacin
para
diagnstico
de
laboratorio.

Son pequeos recipientes de

vidrio o plsticos, fabricados
de diferentes tamaos, con
capacidad variable.
Todos son cilndricos aunque
vara por su forma de empleo,
tiene el fondo cncavos, los
tubos ordinarios y los
empleados para cultivos, y

utilizados en laboratorios de
microbiologa son de 12x 75,
13x 125, 15x 125 y 16x150.
Matraces
(tipos)

tiles
para
la
preparacin
y
almacenamiento
de
soluciones, colorantes,
reactivos,
medios
decultivos,
preparacin
de
reactivos
depreferencia solucin
buffer etc.
Adems se usa para
preparar disoluciones
donde
requieren
exactitud.Utilizados
en laboratorios de
qumica. 5

Recipientes de forma cnica y

cuello corto, volumtricos.
Matraces Aforados o Folias:
Recipientes de forma esfrica
y base plana. Estn calibrados
a medidasexactas mediante un
foro en la parte media del
cuello del recipiente en el
quese indica la medida, tiene
grabado el nmero que indica
su capacidad volumtrica,
temperatura de trabajo 20c

Probetas
(tipos)

Utilizada para medir Recipientes graduados de

volmenes.
forma cilndrica y alargadas
de vidrio, de dimetro y
tamao
variable
en
correspondencia
son
su
capacidad volumtrica, las
ms utilizadas en el trabajo
microbiolgico
estn
comprendidas en el rango de
50 a 1,000 ml. Estn provistas

de una base de fondo plano

que posibilita que pueden ser
colocadas en posicin vertical.
La mayora tienen rtulos en
la parte superior que indica su
capacidad volumtrica, la
marca de 20c que es la
temperatura de trabajo de este
tipo de cristalera.
Se colocan estos tubos con la
abertura hacia abajo en
Tubos de Durham
Determinar
la probetas ms grandes.
produccin de gases de fabricados de vidrio sdicomicroorganismos
clcico
con borde recto
con fondo redondo
sin graduacin por cartones de
250 350 piezas.
Asas de
inoculacin
(tipos)

Transferencia
de
microorganismos de
un medio a otro es el
asa de inocular
Generalmente
son de alambre
de nichrome.
Sirve para la
siembra
por
estras
e

Este es un alambre de una

aleacin
de
platino
o
tungsteno con un terminado
circular agarrado a una base
que le sujeta y que se esteriliza
con calor proveniente de un
mechero o de un incinerador
elctrico
Asa en argolla o
anillos, no calibrada

Mecheros (tipos)

inoculaciones
en general
Sirve
para
trasladar una
sola colonia a
medios
de
identificacin,
o sub-cultivo
Calibrada para
tomar
0.001
ml, para urocultivo.
Para manipular
colonias duras
y
tomar
muestras.

Utilizado
en
laboratorios cientficos
para
calentar
o
esterilizar muestras o
reactivos qumicos.

Asa recta o en hilo.

Asa de platino en
anillo.
Asa espatulada.

Existen diferentes modelos,

como los Bunsen,Tecl y
Mecker o Fischerpero todos
estn
estructurados
bsicamente por tres partes
separables: La base, el tubo
quemador y el regulador de
aire. El quemador tiene una
base pesada en la que se
introduce el suministro de gas.
De all parte un tubo vertical
por el que el gas fluye
atravesando un pequeo
agujero en el fondo de tubo.
Algunas perforaciones en los

laterales del tubo permiten la

entrada de aire en el flujo de
gas (gracias al efecto Venturi)
proporcionando una mezcla
inflamable a la salida de los
gases en la parte superior del
tubo donde se produce la
combustin. 7
Estufas
bacteriolgicas
(tipos)

Bao
bacteriolgico

Para crecimiento e
multiplicado
dos
microorganismos.
Adems
realizar
cultivos de bacterias,
hongos,
a
una
temperatura igual a la
del cuerpo humano.

Es una cmara de temperatura

controlada para cultivo de
microorganismos.

Pruebas serolgicas y
procedimientos
de
incubacin,
aglutinacin,
inactivacin,
biomdicos,
farmacuticos y hasta
industriales. Por lo
general, se utilizan con
agua, pero tambin

Equipo que se utiliza en el

laboratorio para
realizar
pruebas adems rangos de
temperatura en los cuales
normalmente son utilizados
estn entre la temperatura
ambiente
Y los 60 C. Tambin se
pueden
seleccionar
temperaturas de 100 C,

Se utiliza para facilitar el

desarrollo
de
los
microorganismos
a
su
temperatura
ptima
de
crecimiento
(generalmente
35-37).

permiten trabajar con utilizando una tapa de

aceite.
caractersticas especiales.

Autoclave

Jarra de
anaerobiosis

Instrumento habitual en los

Esterilizar ya que el laboratorios de Microbiologa.
vapor
a
presin Es un sistema cerrado donde
proporciona
se forma vapor de agua que se
temperaturas
somete a una presin elevada,
superiores
una atmsfera, lo que hace que
A las que se obtienen el
agua
alcance
una
por ebullicin.
temperatura
de
121C
causando la desnaturalizacin
de enzimas lo que conlleva a
la
muerte
de
los
microorganismos
y
la
destruccin de las esporas.
Habitualmente, se esteriliza a
121C durante 20 minutos.

Sirve para mantener Tiene unos tubos en donde se

bacterias anaerobias
conectan a una mquina que
succiona el aire. La tapa tiene
un catalizador para facilitar el
proceso.

Centrifuga

Nefelmetro de
McFarland

Membranas de
Millipore

Para
separar con
fuerza centrfuga sus Es una mquina que pone en
componentes o fases rotacin una muestra.
generalmente
una
slida y una liquida, en
funcin
de
su
densidad.

Es un instrumento para
medir
partculas
suspendidas en un
lquido

Millipak sirve para

produccin de agua sin
partculas
y
sin
bacterias
Los
dispositivos Millipak
utilizar el inicio, de
diseo limpio apilados
disco que elimina los
riesgos
de
las

Colocada en un ngulo de 90
con respecto a una fuente
luminosa. La densidad de
partculas es entonces una
funcin de la luz reflejada por
las partculas a la fotocelda.
cuanta ms luz se refleje en
una determinada densidad de
partculas depende de las
propiedades de las partculas
como su forma, color y
reflectividad

El Millipak son filtros de

membrana de 0,22 micras
diseado como una barrera
segura y eficaz contra las
partculas y bacterias

partculas
que
producen tejidos de
apoyo intermedios que
se
encuentranen
muchas capsulas de
membrana plegad.

Cuenta colonias

Es un instrumento
utilizado para contar
colonias de bacterias o
de
otros
microorganismos que
crecen en una placa de
agar.

Los primeros contadores slo

eran superficies iluminadas
sobre las que se colocaba la
placa, con las colonias
marcadas con un rotulador en
la superficie externa de la
placa mientras el operador
realizaba el recuento manual.
Los contadores ms recientes
intentan contar las colonias
por va electrnica, mediante
la identificacin de reas
individuales de oscuridad y
luz, de acuerdo a los umbrales
definidos por el usuario,
contando los puntos en los que
se aprecia contraste, o de
modo automtico mediante
registro
electrnico
tras
presionar con cualquier tipo
de marcador.

PRACTICA 3

PRACTICA 4
NORMATIVIDAD
En la Resolucin 2115 del 2007, por medio de la cual se sealan caractersticas, instrumentos bsicos y frecuencias del sistema de
control y vigilancia para la calidad del agua para consumo humano, se establecen los parmetros microbiolgicos de las aguas para
consumo humano:

La legislacin vigente debe responder siempre a las necesidades de una poblacin, ya que debe garantizar la salud y el bienestar del
individuo, por esto, esta norma debe estar siempre en constante revisin. Las autoridades de salud de los distritos o municipios son los
que ejercen la vigilancia sobre la calidad del agua potable como parte del Plan de Atencin Bsica, PAB, en su jurisdiccin y toman las
medidas preventivas y correctivas para dar cumplimiento a la ley.
En Colombia, la situacin de la calidad del agua para consumo humano es deficiente y se relaciona principalmente con la presencia de
grmenes patgenos. Un estudio realizado por el Ministerio de Salud, en 1993, determin que en el grupo de enfermedades de salud
pblica ms importantes, el 44% estaban relacionadas con el saneamiento bsico y, de ellas, el 40% aproximadamente tenan relacin
directa con el agua potable (Arrieta, 2002).

De acuerdo a lo anterior, como acciones futuras se propone la incorporacin de laboratorios capacitados para el control de la calidad
del agua potable, haciendo redes de interlaboratorios, tal como lo proponen las metodologas de validacin de mtodos y las buenas
prcticas de laboratorio. Por otra parte se propone la conformacin de un comit de vigilancia sobre la calidad del agua potable, como
organismo permanente, y finalmente toda medida que se desee aplicar no funcionar sin la aplicacin constante de la legislacin
vigente.
A continuacin se presenta el listado de algunas normas tcnicas vigentes, encontrndose algunas de ellas en internet:
Decreto 2105 de 1983. Por medio del cual establece criterios y conceptos de calidad de aguas potables.
Decreto 1594 de 1984. Por medio del cual se establecen parmetros de aguas residuales y se establecen usos del agua.
Decreto 1575 de 2007. Por medio del cual se establece el Sistema para la Proteccin y Control de la Calidad del Agua para
consumo humano.
Resolucin 2115 de 2007. Por medio de la cual se sealan caractersticas, instrumentos bsicos y frecuencias del sistema de
control y vigilancia para la calidad del agua para consumo humano.

DIAGRAMA DE FLUJO PRACTICA 3

MTODOS DE SIEMBRA PARTE A y PARTE B

DIAGRAMA DE FLUJO PRACTICA 4

TECNICAS DE TINCIN

DIAGRAMA DE FLUJO PRACTICA 5

ALGUNAS TECNICAS APLICADAS EN MICROBIOLOGA AMBIENTAL.

BIBLIOGRAFIA

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MARIENFELD-SUPERIOR. (01 de 2016). CUBREOBJETOS ESPESOR. Recuperado el 15 de 04 de 2016, de
CUBREOBJETOS ESPESOR: http://www.marienfeld-superior.com/index.php/cover-glasses-327/articles/cubreobjetosespesor-n-1.html
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MUESTRAS DE AGUA:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/358004/MODULO_PREPARACION_Y_ANALISIS_DE_MUESTRAS_DE_AGUA.pd
f
UNAD. (s.f.). Leccin 1 - Instrumentacin bsica de laboratorio. Recuperado el 15 de 04 de 2016, de Leccin 1 Instrumentacin bsica de laboratorio:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/358004/358004/leccin_1__instrumentacin_bsica_de_laboratorio.html
Arrieta, G. (2002). Calidad del agua en Colombia. Bogot: Superintendencia de servicios pblicos:
[http://www.docstoc.com/docs/22793954/CALIDAD-DEL-AGUA-EN-COLOMBIACALIDAD-DEL-AGUA-EN].

Instituto Nacional de Salud. (2011). Manual de Instrucciones para la toma, preservacin y transporte de muestras de agua de
consumo humano para anlisis de laboratorio. Bogot D.C. 95p.