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1. INTRODUCCIN................................................................................................1
2. OBJETIVOS........................................................................................................2
2.1
OBJETIVO GENERAL..................................................................................3
2.2
OBJETIVOS ESPECIFICOS........................................................................3
3. TINCIN DE GRAM............................................................................................3
3.1
ESTRUCTURAS INTERNAS.................................................................................5
3.1.1
PARED CELULAR.................................................................................5
3.1.2
MORFOTIPOS.......................................................................................7
3.1.3
SIGUIENTE ESQUEMA......................................................................................7
3.2
MTODOS....................................................................................................9
3.2.1
EXTENSIN..........................................................................................9
3.2.2
COLORACIN.....................................................................................10
3.2.3
OBSERVACIN...................................................................................11
4. RESULTADOS..................................................................................................12
5. DISCUSIN DE RESULTADOS.......................................................................13
6. CONCLUSIONES.............................................................................................15
7. BIBLIOGRAFA.................................................................................................16
8. FOTOGRAFAS.................................................................................................17
1. INTRODUCCIN
La tincin de Gram es de gran importancia en microbiologa porque permite
diferencia de dos grandes grupos de bateras (Gram + y Gram -), segn su
comportamiento ante esta tincin. El fundamento radica en la diferente estructura
de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa
de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram - tienen una capa
de peptidoglicano ms fina y una capa lipopolisacardica externa.
Los reactivos empleados en la tincin de Gram son el Cristal Violeta (colorante
bsico), Lugol (modiente), Alcohol-Cetona (decolorante) y Safranina (colorante de
contraste).
Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de
algn otro modo y se tien con cristal violeta luego se lava con agua, se le agrega
lugol y se lava con alcohol-acetona con el fin de eliminar el colorante no fijado.
Posteriormente, se cubre con un colorante de contaste, safranina, para teir de
rojo las clulas que no hayan retenido el cristal violeta. Todo este proceso tiene
una duracin inferior a 10 minutos.
En fin, la tincin de Gram es una prueba til y de fcil realizacin que permite
diferenciar las dos principales clases de bacterias con el objeto de instaurar un
tratamiento.
2. OBJETIVOS
2.1
OBJETIVO GENERAL
2.2
OBJETIVOS ESPECIFICOS
3. TINCIN DE GRAM
3
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin
de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la
fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas
son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
3.1
en
empalizada.
Soluciones
aplicadas por
GRAM +
GRAM -
su orden
CRISTAL
VIOLETA
violeta.
violeta.
deshidratan
celulares.
ALCOHOLACETONA
color violeta.
poros.
Se
las
paredes
contraen
Disminuye
la
porosidad.
El
teidas
de
color clula.
violeta.
SAFRANINA
de color rosado.
Fuente Michael J. Pelcazr., Roger D. Reid, E.C.S. Chan Cuarta edicin Pag. 58
3.2
MTODOS
3.2.1 EXTENSIN
En un portaobjeto bien limpio (con alcohol, papel de filtro y flameado) se coloca
una gota de agua destilada a la que con el asa de siembra, previamente
esterilizada a la llama, se lleva una pequea cantidad de suspensin de bacterias
o, en su caso, de una colonia.
3.2.2 COLORACIN
3.2.2.1
3.2.2.2
3.2.2.3
3.2.2.4
3.2.2.5
3.2.2.6
3.2.2.7
3.2.2.8
Se medi flame
3.2.2.9
Se agrega safranina
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3.2.3 OBSERVACIN
Debe utilizarse el
objetivo de inmersin.
Despus de utilizar el
objetivo de inmersin debe
limpiarse con xilol
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4. RESULTADOS
BACTERI
A
Escherichia
Coli
Bacillus
Subtilis
Estafilococo
OBSERVACIN
MORFOTIP
CLASIFICACI
Cocos
Gram Negativo
Bacilo
Gram Positivo
Cocos
Gram Positivo
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5. DISCUSIN DE RESULTADOS
El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles
de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms simple de aumentar el
contraste es la utilizacin de colorantes.
Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsico cuando son tratadas
con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipdico de la
pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la
prdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan
13
14
6. CONCLUSIONES
6.1 Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea,
difieren mucho qumicamente esta diferencia qumica es los que permite
distinguir las bacterias por tincin, pues generalmente, el colorante
reacciona con la clula bacteriana, pero no reacciona con su medio
exterior.
6.2 La tincin de Gram es una herramienta muy til en el laboratorio de
microbiologa as como en los anlisis clnicos y diagnostico medico siendo
ineludible conocer su fundamento y procedimiento, para poder tener una
correcta interpretacin de los datos que nos otorga la diferenciacin de
Gram positiva y negativa concluyendo que debido a la estructura de sus
paredes celulares tendrn o no propiedades patolgicas diferentes.
6.3 Las bacterias analizadas presentan las siguientes formas: Escherichia Coli
posee una forma circular por lo que se concluye que es un coco, Bacillus
Subtilis posee una forma alargada parecida a un bastn por lo que se
concluye que es un bacilo y Estafilococo posee una forma redonda o
circular por lo que se concluye es un coco.
6.4 La clasificacin de cada bacteria es: Estafilococo es Gram-positiva,
Bacillus Subtilis es Gram-positiva y Escherichia Coli es Gram-negativa.
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7. BIBLIOGRAFA
7.1 Jawetz E, etal. (2008): Microbiologa Mdica de Jawetz, Melnick y
Alderberg. Editorial Manual Moderno, 19 Edicin. Mxico. 702-703
pginas.
7.2 Camacho, A.; etal. (2009): Tcnicas para el anlisis microbiolgico de
alimentos. 2 Edicin. Facultad de Qumica, UNAM, Mxico.
7.3 TORTORA, GERARD; FUNKE, BERDELL; CASE, CHRISTINE (2007):
Introduccin
la
Microbiologa.
Edicin,
Editorial
Mdica
8. FOTOGRAFAS
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