Protocolo Verificacion Impurezas

LABORATORIOS ZERBONI, S. A.
Anhuac 147 Col. El Mirador Ex-hacienda de Coapa, C.P. 04950, Mxico, D.F. Apdo. Postal 22-201
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
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INVESTIGACIN Y DESARROLLO FARMACUTICO
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PROTOCOLO DE VERIFICACIN DE
MTODOS FARMACOPEICOS.
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MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

EN LA DETERMINACIN DE IMPUREZAS EN SULFASALAZINA, TABLETAS CON CAPA ENTRICA.
Protocolo de Verificacin de Mtodos Farmacopeicos:
MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE

CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR
EN LA DETERMINACIN DE IMPUREZAS EN
SULFASALAZINA, TABLETAS CON CAPA ENTRICA.
Tabla de Contenido
Pg
1.0 Objetivo
2.0 Alcance.
3. 0 Consideraciones preliminares.
4.0
Responsabilidades.
5.0
Metodologa Analtica.
6.0
Metodologa de evaluacin de desempeo analtico.
7.0
Criterios de aceptacin.
15
8.0
Referencias.
16
9.0 Anexos.
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1.
OBJETIVO.
Demostrar mediante un estudio de Verificacin analtica que el mtodo de Cromatografa de lquidos de alta resolucin (CLAR)
empleado en la cuantificacin de cido saliclico y Sulfapiridina en la determinacin de Impurezas del producto farmacutico
Sulfasalazina, tabletas con capa entrica (Nombre comercial por definir), cumple con los requisitos para su aplicacin analtica
definindose como un mtodo estable, capaz y robusto.
2.
ALCANCE.
El presente documento comprende la evaluacin de los parmetros de desempeo aplicables al mtodo analtico empleado en la
cuantificacin de cido saliclico y Sulfapiridina por Cromatografa de lquidos de alta resolucin (CLAR) aplicado en la
determinacin de Impurezas, el cual ser empleado como mtodo indicativo de estabilidad en cuanto a identificacin y
cuantificacin de stos compuestos de degradacin en la evaluacin del medicamento Sulfasalazina, tabletas con capa entrica
durante su estudio de estabilidad, tanto a condiciones aceleradas como a largo plazo.
3. CONSIDERACIONES PRELIMINARES.
La Norma Oficial Mexicana NOM-073-SSA1-2005, Estabilidad de frmacos y medicamentos establece que para frmacos y
medicamentos debe vigilarse que los productos de degradacin que se observen durante los estudios de estabilidad no rebasen los
lmites establecidos en la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos y sus suplementos, o cuando la informacin no aparezca
en dichas referencias, recurrir a otras farmacopeas cuyos procedimientos de anlisis se realicen conforme a organismos
especializados u otra bibliografa reconocida internacionalmente.
Por referencia bibliogrfica (ver referencia no. 5) conocemos que la Sulfasalazina se degrada principalmente en dos compuestos,
cido saliclico y Sulfapiridina, los cuales pueden ser cuantificados por Cromatografa de lquidos de alta resolucin (CLAR)
segn la tcnica analtica compendiada en la European Pharmacopoeia 7.0 (2011) Sulfasalazine 01/2008:0863, la cual se toma
como sustento analtico en el presente protocolo de verificacin ya que dicha informacin no se encuentra compendiada en la
FEUM vigente (10 edicin, 2011) u otra farmacopea internacional reconocida.
Por disposicin oficial, la Legislacin farmacutica en nuestro pas solicita contar con la verificacin de mtodos analticos
compendiados, por lo cual, el presente documento establece la base para el cumplimiento de dicho requerimiento al indicar la
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manera en que se evaluar el mtodo analtico de CLAR empleado en la cuantificacin de los principales compuestos de
degradacin, cido acetilsaliclico y Sulfapiridina, del medicamento Sulfasalazina en Tabletas con capa entrica.
4.
RESPONSABILIDADES.
A continuacin se describen las responsabilidades que le competen al personal que forman parte del Departamento de
Investigacin y Desarrollo de Laboratorios Zerboni S.A. que estar involucrado en la verificacin analtica del mtodo propuesto
en el presente documento.
4.1 Qumico Instrumentista:
Realizar cada una de las actividades de la verificacin del mtodo analtico de inters conforme lo estipula el
presente documento.
Reportar los resultados obtenidos tanto en las hojas de registro de resultados del presente protocolo de verificacin
as como en el informe correspondiente.
4.2 Jefe de Instrumentacin Analtica:
Contar con la documentacin que demuestre que el instrumental y equipo empleados en la verificacin analtica del
mtodo de inters tienen y siguen un programa de calibracin y mantenimiento as como con sus respectivos
reportes de calibracin y mantenimiento vigentes.
Verificar y firmar de conformidad el resultado de cada uno de los parmetros de desempeo del mtodo analtico
de inters una vez realizados segn los criterios establecidos en el presente protocolo de verificacin. En caso de
presentarse desviaciones al mismo, levantar el reporte correspondiente indicando tanto la(s) causa(s) de la
desviacin como las acciones correctivas y preventivas llevadas a cabo.
4.3 Jefe de Desarrollo Galnico:
Contar con la documentacin oficial vigente respecto a la fabricacin del medicamento Sulfasalazina, Tabletas
con capa entrica, denominado en el presente protocolo de verificacin como Medicamento de prueba.
Proporcionar en estatus de aprobado los insumos necesarios para la elaboracin de un placebo de excipientes para
la evaluacin de los parmetros de desempeo en la verificacin del mtodo analtico de inters.
Verificar y firmar de conformidad que la fabricacin del placebo de excipientes para la evaluacin de parmetros
de desempeo del mtodo analtico de inters se realiz segn los criterios establecidos tanto en la orden de
fabricacin y procedimiento normalizado de operacin as como en los criterios establecidos en el presente
documento. En caso de presentarse desviaciones al mismo, levantar el reporte correspondiente indicando tanto la(s)
causa(s) de la desviacin como las acciones correctivas y preventivas efectuadas.
4.4 Gerente del Departamento de Investigacin y Desarrollo:
Dar seguimiento a cada etapa de la evaluacin de los parmetros de desempeo analtico as como a las
desviaciones y acciones correctivas que pudiesen presentarse durante el transcurso de la ejecucin del mismo.
Convocar y dirigir una reunin con el personal involucrado en la verificacin del mtodo analtico de inters para
analizar los resultados obtenidos y generar el reporte de verificacin de mtodo farmacopeico correspondiente.
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Verificar y firmar de conformidad el reporte de verificacin del mtodo farmacopeico, dando el visto bueno de que
el mtodo analtico de inters cumple con los lineamientos y criterios de aceptacin establecidos en el presente
documento.
5. METODOLOGA ANALTICA.
5.1 Estndar de referencia.
Estndares de referencia.
Nombre.
ER cido saliclico.
ER Sulfapiridina.
Grado.
USP
USP
Consideraciones: Estndares de referencia que cuenten con ficha tcnica que incluya como mnimo con los siguientes
datos: Denominacin comn internacional (DCI), denominacin genrica y grado de pureza expresada en %BH y %BS;
as mismo, se debe de contar con su respectiva hoja de seguridad, informacin tcnica proporcionada por el fabricante
y/o proveedor, certificado de aprobacin del fabricante conforme a la USP vigente (34. edicin, 2011) y un registro
de descargo por anlisis realizado. La cantidad requerida debe ser la suficiente para realizar la evaluacin de
parmetros de verificacin del mtodo analtico de inters, deben ser almacenados segn indicaciones del fabricante y/o
proveedor durante todo el tiempo que dure dicha actividad as como preservar una cantidad razonable del mismo como
muestra de retencin. (Ver Anexo No. 1)
5.2 Instrumentacin analtica.
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin (HPLC) 2610/996 Photodiode array detector, Waters.
Balanza analtica, Ohaus AS60.
Sonicador Branson 8510.
Purificador de agua Simplicity 3L, Millipore.
Microbalanza analtica, Sartorius ME 5-OCE.
Consideraciones: Todo el equipo e instrumentacin analtico debe contar con un programa de calibracin, calificacin
y mantenimiento vigente como con sus respectivos reportes as como realizar el descargo de informacin en la Hoja de
registro correspondiente (Ver Anexo No. 1)
5.3 Reactivos qumicos.
Fosfato monobsico de sodio anhidro GR.

Acetato de sodio anhidro GR.
Hidrxido de amonio GR.
cido actico glacial GR.
Metanol grado HPLC.
Agua destilada y Agua grado HPLC.
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Consideraciones:
Todos los reactivos qumicos deben contar con hoja de seguridad, informacin tcnica
proporcionada por el fabricante y/o proveedor as como certificado de aprobacin del fabricante. La cantidad de
reactivo qumico requerido debe ser la suficiente para realizar las pruebas de desempeo establecidas, ser almacenados
segn indicaciones del fabricante y/o proveedor durante todo el tiempo que dure la validacin as como realizar el
descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente (Ver Anexo No. 1)
5.4 Mtodo farmacopeico a verificar.

5.4.1
Especificacin.
MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE IMPUREZAS:

CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA.
Para cada impureza (cido saliclico y Sulfapiridina), no mas de 0.5 veces el rea de cada seal con
respecto al rea correspondiente obtenidas con la solucin de referencia b (0.5 %)
5.4.1.1 Solucin de amonio. Transferir cuantitativamente 0.75 mL de hidrxido de amonio concentrado a un

matraz volumtrico de 100 mL que contenga 50.0 mL de agua destilada; mezclar, enfriar hasta alcanzar la
temperatura ambiente, llevar a volumen final con agua destilada y mezclar. Concentracin aproximada
de la solucin, 0.7 % NH3.
5.4.1.2
Solucin de referencia b. Pesar el equivalente a 2.50 mg de ER cido saliclico y 2.50 mg de ER

Sulfapiridina y trasferir a un matraz volumtrico de 10 mL; adicionar 8.0 mL de solucin de amonio y
sonicar dentro de un bao de agua que se encuentre a temperatura ambiente durante 15 minutos. Llevar a
volumen final con la misma solucin y mezclar. Transferir cuantitativamente una alcuota de 1.0 mL de
sta solucin a un matraz volumtrico de 25 mL, llevar a volumen final con solucin de amonio y mezclar.
Concentracin final de la solucin, 10.00 g/ mL de cido saliclico y Sulfapiridina, respectivamente.
5.4.1.3
Solucin muestra. Pesar no menos de 20 Tabletas con capa entrica de Sulfasalazina, calcular su peso
promedio, triturar en un mortero seco hasta obtener un polvo fino y pesar una cantidad de polvo
equivalente a 25.0 mg de Sulfasalazina. Transferir la muestra a un matraz volumtrico de 25 mL,
adicionar 20.0 mL de solucin de amonio y sonicar dentro de un bao de agua que se encuentre a
temperatura ambiente durante 20 minutos. Llevar a volumen final con la misma solucin y agitar. Filtrar
una porcin de esta solucin a travs de un filtro de PVDF de 0.45 m y colectar el filtrado en un vial para
cromatografa.
5.4.1.4
Sistema cromatogrfico. Cromatgrafo de lquido de alta resolucin (CLAR) acoplado a un detector

UV/Visible ajustado a una longitud de onda de 300.0 nm; columna C18 de 4.6 x 250.0 mm (5.0 m);
velocidad de flujo, 1.0 mL/ minuto. Tiempo de corrida, 10 minutos.
5.4.1.5
Fase mvil A. Pesar el equivalente a 1.13 g de Fosfato monobsico de sodio y 2.5 g de acetato de sodio y
transferir a un matraz volumtrico de 1000 mL; adicionar 900.0 mL de agua grado HPLC y sonicar dentro
de un bao de agua que se encuentre a temperatura ambiente hasta disolver completamente las sales.
Ajustar el pH de la solucin a un valor de 4.8 0.05 con la adicin de cido actico glacial, llevar a
volumen final con agua grado HPLC y mezclar.
5.4.1.6
Fase mvil B. Preparar una mezcla de Fase mvil A y Metanol grado HPLC en proporcin (10:40 v/v).
5.4.1.7
Fase mvil. Preparar y desgasificar una mezcla de fase mvil A y fase mvil B en proporcin (70:30 v/v)
5.4.1.8
Adecuabilidad del sistema. Inyectar al equipo cromatogrfico la Solucin de referencia b segn se

especifica en el procedimiento y registrar los cromatogramas obtenidos. Los tiempos de retencin para
cido saliclico y Sulfapiridina son aproximadamente 6.00 y 7.00 minutos, respectivamente, mientras que
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la resolucin entre ambas seales no debe ser menor a 2.0 y la desviacin estndar relativa para tres
inyecciones repetidas de solucin de referencia b no es mayor al 2.0 % para cada seal de inters.
5.4.1.9
Procedimiento. Inyectar al equipo cromatogrfico volmenes iguales de 20.0 L tanto de la solucin de

referencia b como de cada una de las soluciones muestra, registrar los cromatogramas obtenidos y
determinar su correspondiente rea bajo la curva, descartando toda seal con 0.05 veces el rea de la seal
principal obtenida con la solucin de referencia b (0.05 %).
5.4.1.10 Clculos.
Determinar el porcentaje de cido saliclico y Sulfapiridina presentes en cada muestra

analizada de acuerdo a la siguiente expresin:
% Compuesto de inters = (ABCMTA)(0.5 %) / (ABCSTD)(0.5)
Donde ABCMTA, rea bajo la curva de la seal del compuesto de inters (cido saliclico, Sulfapiridina)
en la solucin muestra; ABCSTD, rea bajo la curva de la seal del compuesto de inters (cido saliclico,
Sulfapiridina) en la solucin de referencia b; 0.5%, limite establecido por especificacin; 0.5, no ms de
0.5 veces el rea bajo la curva de la seal del compuesto de inters.
6. METODOLOGA DE EVALUACIN DE DESEMPEO DEL MTODO ANALTICO.

6.1
Consideraciones iniciales.
El mtodo analtico de cuantificacin de cido saliclico y Sulfapiridina por CLAR ser aplicado en la determinacin
de Impurezas, por lo que se considera la concentracin de 5.0 g/ mL como lmite para cada uno de los compuestos de
inters, esto tomando en cuenta el criterio de aceptacin de dicha determinacin que establece para cada impureza
(cido saliclico y Sulfapiridina), no mas de 0.5 veces el rea de cada seal con respecto al rea correspondiente
obtenidas con la solucin de referencia b, lo cual es equivalente a 0.5 veces la concentracin de la solucin de
referencia b empleada, 10.0 g/ mL de cido saliclico y Sulfapiridina, respectivamente.
As mismo, la verificacin del mtodo analtico se realizar mediante la tcnica de estndar adicionado, por lo que se
requerir de producto terminado aprobada de medicamento Sulfasalazina, Tabletas con capa entrica.
6.2 Soluciones reactivo.

6.2.1 Preparar cada una de las siguientes soluciones segn se indica en el mtodo analtico a verificar en los apartados
5.4.1.1 Solucin de Amonio, 5.4.1.5 fase mvil A, 5.4.1.6 fase mvil B y 5.4.1.7 Fase mvil, respectivamente.
6.2.2 Solucin Stock de sustancias de referencia. Pesar el equivalente a 5.00 mg de Sulfapiridina y 5.00 mg de
cido saliclico, sustancias de referencia, y transferir cuantitativamente a un matraz volumtrico de 200 mL.
Adicionar 180.0 mL de solucin de amonio y sonicar dentro de un bao de agua que se encuentre a temperatura
ambiente durante 15 minutos. Llevar a volumen final con la misma solucin y mezclar. Concentracin final de
la solucin, 25.0 g/ mL de cido saliclico y Sulfapiridina, respectivamente.
Esta solucin Stock ser
empleada en la preparacin de soluciones muestra de estndar adicionado.
6.3
Consideraciones analticas.
Todos los parmetros de evaluacin de desempeo analtico deben ser realizados despus de cumplir con las
condiciones de adecuabilidad cromatogrfica requerida por da de anlisis, por lo cual se debe de seguir la siguiente
metodologa y ajustar, de ser necesario, las condiciones de operacin as como cumplir con cada uno de los parmetros
de adecuacin del sistema establecidos.
6.3.1 Acondicionar el Cromatgrafo de lquidos segn se indica en el mtodo analtico a verificar en el apartado
5.4.1.4 Sistema cromatogrfico descrito en este documento.
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6.3.2 Preparar la solucin de referencia b segn se indica en el apartado 5.4.1.2 Solucin de referencia b descrito en
este documento.
6.3.3 Inyectar al equipo cromatogrfico la Solucin de referencia b segn se indica en el apartado 5.4.1.8
Adecuabilidad del sistema descrito en este documento.
6.3.4 Verificar el cumplimiento de cada uno de los parmetros de adecuacin del sistema establecidos en la tabla No. 1
realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Adecuabilidad del
sistema (Ver Anexo no. 2).
ADECUABILIDAD DEL SISTEMA CROMATOGRFICO.

Verificacin de parmetro.
Compuesto.
Criterio de aceptacin.
Tiempo de retencin.
cido saliclico.
Sulfapiridina.
6.0 minutos aprox.

7.0 minutos aprox.
Resolucin.
Sulfapiridina cido saliclico.
No menor a 2.0
Desviacin estndar relativa.
cido saliclico, Sulfapiridina,

3 inyecciones repetidas.
No mayor al 2.0 %
Tabla No. 1 Adecuabilidad del sistema requerido en la cuantificacin de cido saliclico y Sulfapiridina por CLAR.
6.4 Parmetros de Evaluacin de Desempeo.
Los parmetros a evaluar se sustentan por lo referido en el apndice III Validacin de mtodos analticos,
Recomendaciones para su presentacin ante la FEUM (FEUM, 2011) as como por lo establecido en la Gua de
Validacin de mtodos analticos editada por el Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos (2002).
Aunado a la finalidad de contar con evidencia documental que los resultados obtenidos a partir de la cuantificacin de
impurezas (cido saliclico y Sulfapiridina) por CLAR son confiables y acorde a especificaciones con el personal,
equipo y reactivos disponibles en Laboratorios Zerboni, S.A, se consideran las siguientes caractersticas de desempeo
analtico como parmetros de evaluacin a realizar:
Categora II: Procedimientos analticos para la determinacin de impurezas (en particular, productos de
degradacin) en muestras de frmacos, preparados farmacuticos y aditivos.
Caractersticas de desempeo a evaluar bajo la categora II: Linealidad del sistema, Precisin del sistema,
Selectividad del mtodo analtico, Lmites de deteccin y de cuantificacin, Linealidad del mtodo, Precisin
y exactitud del mtodo, Precisin intermedia del mtodo y Estabilidad de la muestra analtica.
6.4.1 Linealidad del sistema.

Parmetro que permite asegurar que los resultados analticos obtenidos son proporcionales a la concentracin
del analito de inters dentro de un intervalo determinado. Se determina a partir de una curva de calibracin
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(Respuesta analtica Vs Concentracin) y realizando la determinacin un mismo analista, por duplicado y bajo las
mismas condiciones de anlisis.
6.4.1.1 Empleando matraces volumtricos de 200.0 mL y Solucin de amonio como disolvente, preparar de
manera independiente cuatro soluciones Stock, dos con cada compuesto de inters, segn lo indicado en la
tabla No. 2
SOLUCIN STOCK.
Sustancia de referencia.
Peso equivalente (mg)
Concentracin (g/ mL)
cido saliclico.
Sulfapiridina.
5.000
5.000
25.000
25.000
Tabla No. 2: Solucin Stock de referencia para evaluacin de la Linealidad del sistema.
6.4.1.2 A partir de cada una de las soluciones Stock y empleando solucin de amonio como disolvente, realizar
cuantitativamente diluciones correspondientes y obtener las soluciones de referencia para cada uno de los
compuestos de inters segn lo indica la tabla No. 3:
SOLUCIONES DE REFERENCIA.
Soluciones
Stock de
referencia.
Concentracin (g/ mL)
Alcuota.
(mL)
Porcentaje.
(%)
cido saliclico
Sulfapiridina.
(0.5 / 25)
10.0
0.500
0.500
(0.5 / 10)
25.0
1.250
1.250
(1.0 / 10)
50.0
2.500
2.500
(2.0 / 10)
100.0
5.000
5.000
(3.0 / 10)
150.0
7.500
7.500
Tabla No. 3: Soluciones de referencia para evaluacin de la Linealidad del sistema.

6.4.1.3 Filtrar cada una de las soluciones a travs de un filtro PVDF de 0.45 m, colectar el filtrado en un vial
para cromatografa y proceder segn se indica en el apartado 5.4.1.9 Procedimiento de este documento.
6.4.1.4 Registrar las respuestas obtenidas, trazar una grfica de Concentracin de analito de inters evaluado
(cido saliclico / Sulfapiridina) Vs Respuesta analtica medida (rea bajo la curva) e incluir en ella la
ecuacin de la recta, la lnea de ajuste y el coeficiente de determinacin. Calcular el valor de la pendiente
(b1), la ordenada al origen (b0), el coeficiente de determinacin (r 2), el coeficiente de variacin de
regresin (CV y/x) y el intervalo de confianza para la pendiente (IC(1)).
6.4.1.5 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Linealidad
del sistema (Ver Anexo no. 3) y verificar el cumplimiento de cada uno de los criterios de aceptacin
establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente protocolo de
verificacin respecto a ste parmetro de evaluacin.
6.4.2 Precisin del Sistema.
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Parmetro que permite verificar el grado de concordancia de resultados analticos individuales cuando el mtodo
se aplica repetidamente a diferentes fracciones de una referencia. Se determina a partir del anlisis de una
solucin de referencia cuya concentracin corresponde al 100.0 % establecido en la linealidad del sistema,
realizando la determinacin un mismo analista, por sextuplicado y bajo las mismas condiciones de anlisis.
6.4.2.1 A partir de las soluciones Stock preparadas para la evaluacin de linealidad del sistema y empleando
solucin de amonio como disolvente, realizar cuantitativamente la dilucin correspondiente y obtener las
soluciones de referencia de Sulfapiridina y cido saliclico a la concentracin del 100.0 %.
6.4.2.2 Filtrar cada una de las soluciones a travs de un filtro PVDF de 0.45 m, colectar los filtrados en un vial
para cromatografa y proceder segn se indica en el apartado 5.4.1.9 Procedimiento de este documento.
6.4.2.3 Registrar las respuestas obtenidas y calcular la media aritmtica, la desviacin estndar y el %CV.
6.4.2.4 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Precisin del
sistema (Ver Anexo no. 4) y verificar el cumplimiento de cada uno de los criterios de aceptacin
establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente protocolo de
verificacin respecto a ste parmetro de evaluacin.
6.4.3 Selectividad del Mtodo analtico.
Se confirmar que el mtodo analtico de inters es capaz de cuantificar cada uno de los compuestos de
degradacin de la Sulfasalazina, cido saliclico y Sulfapiridina, sin que exista interferencia de otras sustancias
presentes, principalmente excipientes. Se determinar tanto con soluciones blanco de reactivos como con
soluciones de estndar adicionado al 0.0%, 100.0% y 150.0 % de cada uno de los compuestos de inters, realizando
la determinacin un mismo analista por duplicado y bajo las mismas condiciones de anlisis.
6.4.3.1 Filtrar una porcin de cada una de las siguientes soluciones a travs de un filtro PVDF de 0.45 m y
colectar el filtrado en un vial para cromatografa: Solucin de amonio y Fase mvil. Estas soluciones
sern las denominadas Soluciones blanco.
6.4.3.2 Preparar de manera independiente una solucin de cido saliclico (5.0 g/ mL) y una solucin de
Sulfapiridina (5.0 g/ mL) segn se indica en el apartado 5.4.1.2 Solucin de referencia b de este
documento. Estas soluciones sern denominadas Solucin compuesto de referencia.
6.4.3.3 Tomar no menos de 20 unidades de medicamento Sulfasalazina, Tabletas con capa entrica, registrar su
peso promedio y macerar hasta obtener un polvo fino en un mortero limpio y seco.
Pesar
cuantitativamente por sextuplicado el peso equivalente a 25.00 mg de Sulfasalazina y transferir
cuantitativamente a un matraz volumtrico de 25 mL. Adicionar a cada matraz volumtrico la cantidad de
Solucin stock de sustancias de referencia (punto 6.2.2 del presente documento) y solucin de amonio
segn lo indicado en la tabla no. 4 y proceder segn lo indicado en el apartado 5.4.1.3 Solucin muestra
de este documento a partir de sonicar dentro de un bao de agua..
SOLUCIONES DE PRUEBA.
Soluciones
de
prueba.
Solucin
Stock
sustancias
de referencia
(mL)
Solucin
de amonio
(mL)
9 - 10
0.0
20.0
Cantidad
compuestos de inters
(g)
cido
Sulfapiridina
saliclico
0.000
0.000
Concentracin
(g / mL)
cido
Sulfapiridina
saliclico
*
0.000
0.000 *
11 12
5.0
15.0
125.000
125.000
5.000
5.000
100.0
13 - 14
7.5
12.5
187.500
187.500
7.500
7.500
150.0
Porcentaje
(%)
0.0 *
10
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Tabla No. 4: Soluciones prueba para evaluacin de la selectividad del mtodo analtico.
NOTA:
* Las soluciones de prueba pueden presentar cierto porcentaje de cada uno de los compuestos de
inters provenientes del medicamento de referencia, por lo que al recobro de los placebos cargados
al 100.0% y 150.0% deber de restrseles la cantidad de dichos compuestos determinados en el
placebo cargado al 0.0%.
6.4.3.4 Inyectar al equipo cromatogrfico cada una de la soluciones blanco, soluciones de compuestos de
referencia as como cada una de las soluciones de prueba (0.0%, 100.0% y 150.0%) segn lo indicado en
el apartado 5.4.1.9 Procedimiento de este documento.
6.4.3.5 Registrar las respuestas obtenidas. Comparar los resultados obtenidos de las soluciones prueba al 100.0%
con los obtenidos tanto de las soluciones prueba al 0.0 % y 150.0 % as como con las soluciones blanco de
reactivos y soluciones de compuestos de inters; verificar que las seales de cido saliclico y
Sulfapiridina sean respuestas debidas a stos analitos de inters y que el incremento de sus respectivas
respuestas (rea bajo la curva) sea proporcional a la concentracin de cada compuesto de inters.
6.4.3.6 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de
Especificidad del mtodo analtico (Ver Anexo no. 5) y verificar el cumplimiento de cada uno de los
criterios de aceptacin establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente
protocolo de verificacin respecto a ste parmetro de evaluacin.
6.4.4
Lmite de deteccin y lmite de cuantificacin.

El lmite de cuantificacin del mtodo analtico est definido en la tcnica analtica en el punto 5.4.1.9
Procedimiento indicando que: descartar toda seal con 0.05 veces el rea de la seal principal obtenida con la
solucin de referencia b , lo cual en trminos de concentracin es equivalente a 0.5 g/ mL de cido saliclico y
Sulfapiridina, respectivamente.
Dicha concentracin est contemplada dentro del intervalo de linealidad del
sistema considerado (punto inicial de la curva), por lo que experimentalmente slo se determinar y evaluar el
lmite de deteccin a partir del valor del limite de cuantificacin ya establecido.
6.4.4.1 El lmite de deteccin terico correspondiente a cido saliclico y Sulfapiridina a partir del valor de lmite
de cuantificacin, 0.5 g/ mL, es de 0.15 g/ mL para cada uno de los analitos de inters (esto
considerando una proporcin de dicha respuesta de 3 a 1, con respecto a la proporcin 10 a 1 considerado
para el lmite de cuantificacin).
6.4.4.2 Verificar experimentalmente que dichos lmites corresponden al lmite de deteccin y cuantificacin para
cada uno de los compuestos de inters.
6.4.4.3 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin del Lmite de
deteccin, Lmite de cuantificacin (Ver Anexo no. 6) y verificar el cumplimiento de cada uno de los
criterios de aceptacin establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente
protocolo de verificacin para estos parmetros de evaluacin.
6.4.5 Linealidad del Mtodo.

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Este parmetro se evaluar a partir de placebos cargados a cinco diferentes concentraciones de cido saliclico y
Sulfapiridina adicionados; cada uno tratado analticamente de manera independiente, realizando el anlisis por
triplicado por un mismo analista y bajo las mismas condiciones de anlisis.
6.4.5.1 Preparar una solucin estndar segn se indica en el apartado 5.4.1.2 Solucin de referencia b, de este
documento.
6.4.5.2 Tomar no menos de 20 unidades de medicamento Sulfasalazina, Tabletas con capa entrica, registrar su
peso promedio y macerar hasta obtener un polvo fino en un mortero limpio y seco.
Pesar
cuantitativamente el peso equivalente a 25.00 mg de Sulfasalazina y transferir cuantitativamente a un
matraz volumtrico de 25 mL. Adicionar a cada matraz volumtrico la cantidad de Solucin stock de
sustancias de referencia (punto 6.2.2 del presente documento) y solucin de amonio segn lo indicado en
la tabla no. 5 y proceder segn lo indicado en el apartado 5.4.1.3 Solucin muestra de este documento a
partir de sonicar dentro de un bao de agua..
Soluciones
de
prueba.
Solucin
Stock
sustancias
de referencia
(mL)
Solucin
de amonio
(mL)
1-3
0.00
20.0
4-6
0.75
19.25
Cantidad
(g)
cido
Sulfapiridina
saliclico
0.000
0.000
18.750
Concentracin
(g / mL)
cido
Sulfapiridina
saliclico
0.000
0.000
Porcentaje
(%)
0.0 *
18.750
0.750
0.750
15.0
7-9
2.50
17.50
62.500
62.500
2.500
2.500
50.0
10 - 12
4.00
16.0
100.000
100.000
4.000
4.000
80.0
13 - 15
5.00
15.0
125.000
125.000
5.000
5.000
100.0
16- 18
5.50
14.5
137.500
137.500
5.500
5.500
110.0
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Tabla No. 5: Soluciones prueba para evaluacin de linealidad del mtodo analtico.
NOTA:
* Las soluciones de prueba pueden presentar cierto porcentaje de cada uno de los compuestos de
inters provenientes del medicamento de prueba, por lo que al recobro de las soluciones de estndar
adicionado deber de restrseles la cantidad de dichos compuestos determinados en la solucin
muestra al 0.0%.
6.4.5.3 Inyectar al equipo cromatogrfico tanto la Solucin de referencia b como cada una de las soluciones
muestra segn se indica en el apartado 5.4.1.9 Procedimiento de este documento.
Registrar las
respuestas obtenidas y calcular la cantidad recuperada de cada compuesto de inters, cido saliclico y
Sulfapiridina, expresada en mg, segn se indica en el apartado 5.4.1.10 Clculos de este documento.
6.4.5.4 Reportar la relacin cantidad adicionada Vs cantidad recuperada de cada compuesto de inters y trazar la
grfica respectiva. Utilizando el mtodo de estimacin por mnimos cuadrados calcular el valor de la
pendiente (b1), la ordenada en el origen (b 0), el coeficiente de determinacin (r 2), el intervalo de confianza
para la pendiente (IC(1)), el intervalo de confianza para la ordenada al origen (IC(0)) y el coeficiente de
variacin de regresin (CV y/x).
6.4.5.5 Calcular el %recobro de cada placebo adicionado y obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto
de la cantidad adicionada expresada en porcentaje. Calcular el promedio aritmtico (y), la desviacin
estndar (S), el coeficiente de variacin (CV) y el intervalo de confianza para la media poblacional IC()
del porcentaje de recobro.
6.4.5.6 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Linealidad

del mtodo (Ver Anexo no. 7) y verificar el cumplimiento de cada uno de los criterios de aceptacin
establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente protocolo para este
parmetro de evaluacin.
6.4.6 Exactitud y repetibilidad del Mtodo.
Este parmetro se evaluar a partir de placebos cargados al 100.0 % de cido saliclico y Sulfapiridina, cada uno
tratado analticamente de manera independiente, realizado por sextuplicado por el mismo analista y bajo las mismas
condiciones de anlisis.
6.4.6.1 Preparar una solucin estndar segn se indica en el apartado 5.4.1.2 Solucin de referencia b, de este
documento.
6.4.6.2 Preparar de manera independiente seis placebos cargados al 100.0 % de cada compuesto de inters segn
lo indicado en la Tabla No. 5: Soluciones de prueba para evaluacin de linealidad del mtodo analtico
del presente Protocolo de verificacin. Tratar cada una de las muestras segn se indica en el apartado
5.4.1.3 Solucin muestra de este documento a partir de sonicar dentro de un bao de agua..
6.4.6.3 Inyectar al equipo cromatogrfico tanto la Solucin de referencia b como cada una de las soluciones
muestra segn se indica en el apartado 5.4.1.9 Procedimiento de este documento.
Registrar las
respuestas obtenidas y calcular la cantidad recuperada de cada compuesto de inters, cido saliclico y
Sulfapiridina, expresada en mg, segn se indica en el apartado 5.4.1.10 Clculos de este documento.
6.4.6.4 Calcular el %recobro de cada placebo adicionado y obtener el cociente de la cantidad recuperada respecto
de la cantidad adicionada expresada en porcentaje para cada uno de los compuestos de inters. Calcular
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el promedio aritmtico (y), la desviacin estndar (S), el coeficiente de variacin (CV) y el intervalo de
confianza para la media poblacional IC() del porcentaje de recobro.
6.4.6.5 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Exactitud y
repetibilidad del mtodo (Ver Anexo no. 8) y verificar el cumplimiento de cada uno de los criterios de
aceptacin establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente protocolo
para este parmetro de evaluacin.
6.4.7
Reproducibilidad del mtodo analtico (Precisin intermedia).

La evaluacin de este parmetro se determinar a partir del anlisis de producto terminado Sulfasalazina,
tabletas con capa entrica (concentracin correspondiente al placebo cargado al 100.0 %) sometiendo las muestras
al proceso de cuantificacin de Impurezas, realizando el anlisis dos analistas diferentes, bajo las mismas
condiciones de anlisis en dos das diferentes.
6.4.7.1 Realizar la determinacin de cuantificacin de Impurezas descrita en el apartado 5.4.1 de este documento,
empleando Sulfasalazina, tabletas con capa entrica, producto terminado aprobado como muestra de
anlisis, tomando en cuenta las siguientes consideraciones:
El anlisis debe realizarse por triplicado, empleando en el mismo cromatgrafo, en dos das y por
dos analistas diferentes.
Cada analista debe preparar su solucin de referencia b por da de anlisis y obtener sus recobros
correspondientes.
En caso de que el medicamento no contenga cido saliclico y Sulfapiridina, realizar la
determinacin preparando placebos cargados al 100.0 % siguiendo lo descrito en el apartado
6.4.6.2 del presente documento.
6.4.7.2 Con los resultados obtenidos, reportar el % cido saliclico y % Sulfapiridina, calcular la media aritmtica
(y), la desviacin estndar (S) y el coeficiente de variacin (CV), empleando los resultados obtenidos de
los dos analistas, y en los dos das de anlisis.
6.4.7.3 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Precisin
del mtodo (Ver Anexo no. 9) y verificar el cumplimiento de cada uno de los criterios de aceptacin
establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente protocolo para este
parmetro de evaluacin.
6.4.8
Estabilidad de la muestra analtica.

La estabilidad de la muestra analtica se determinar mediante la comparacin del % cido saliclico y
%Sulfapiridina provenientes del anlisis de cuantificacin de Impurezas del medicamento Sulfasalazina, tabletas
con capa entrica, efectuando un anlisis por triplicado y analizadas por CLAR a los tiempos 0.0, 24.0 y 48.0
horas, respectivamente. La determinacin analtica la realizar un mismo analista bajo las mismas condiciones de
anlisis y durante el periodo de prueba, las muestras analticas sern almacenadas bajo condiciones ambientales y
analizadas al tiempo de anlisis preestablecido.
6.4.8.1 Realizar la determinacin de cuantificacin de Impurezas descrita en el apartado 5.4.1 de este documento,
empleando Sulfasalazina, tabletas con capa entrica, producto terminado aprobado como muestra de
anlisis, tomando en cuenta las siguientes consideraciones:
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El anlisis debe efectuarse por triplicado, por un mismo analista y bajo las mismas condiciones
analticas.
Se debe preparar una solucin de referencia b por da de anlisis y obtener los recobros
correspondientes.
Una vez analizadas las muestras analticas, almacenarlas dentro del carrusel del equipo
cromatogrfico (condiciones ambientales de humedad y temperatura), en viales mbar
(protegidas de la luz) y reinyectarlas a las 24.0 y 48.0 horas despus de su anlisis inicial.
En caso de que el medicamento no contenga cido saliclico y Sulfapiridina, realizar la
determinacin preparando placebos cargados al 100.0 % siguiendo lo descrito en el apartado
6.4.6.2 del presente documento.
6.4.8.2 Con los resultados obtenidos, reportar el % Sulfapiridina y %cido saliclico a cada tiempo de anlisis
(inicial, 24.0 y 48.0 horas, respectivamente) y calcular la media aritmtica del anlisis inicial (y 0) y de
cada tiempo de anlisis (yi); as como la diferencia absoluta de la media aritmtica de cada tiempo de
anlisis respecto del anlisis inicial (di).
6.4.8.3 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Estabilidad
de la muestra analtica (Ver Anexo no. 10) y verificar el cumplimiento de cada uno de los criterios de
aceptacin establecidos en la tabla No. 6 del apartado 7. Criterios de aceptacin del presente protocolo
para estos parmetros de evaluacin.
7. CRITERIOS DE ACEPTACIN.
Los criterios de aceptacin considerados en el presente protocolo de verificacin de mtodos analticos para la cuantificacin de
Impurezas, cido saliclico y Sulfapiridina, por Cromatografa de lquidos de alta resolucin (CLAR) se presentan en la tabla No.
6, teniendo sustento en lo establecido en la Gua de validacin de mtodos analticos editada por el Colegio Nacional de Qumicos
Farmacuticos Bilogos:
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CRITERIOS DE ACEPTACIN.
Evaluacin.
Verificacin de parmetros.
Linealidad
del sistema.
Coeficiente de determinacin.
r2 0.98
Intervalo de confianza para la pendiente.
IC (1), no debe incluir el cero.
Precisin del sistema.
Coeficiente de variacin.
CV 1.5 %
Lmite de deteccin.
LD con base en la seal de ruido.
LD, tres veces la seal ruido.
Lmite de cuantificacin.
LC con base en la seal de ruido.
LC, diez veces la seal ruido.
Especificidad del
mtodo analtico.
Respuesta analtica.
La respuesta del mtodo nicamente debe

ser debida al compuesto de inters
(Sulfasalazina)
Cantidad adicionada Vs Cantidad recuperada.

Linealidad
del mtodo.
Exactitud y repetibilidad
del mtodo.
r2 0.98
IC (1), debe incluir la unidad.
IC (0), debe incluir el cero.
CVy/x del % recobro 2.0 %
Porcentaje de recobro.
IC () debe incluir el 100.0 %

el promedio aritmtico del % recobro debe
estar en el intervalo 98.0 % 102.0 %
%CV del % Recobro 2.0 %
Intervalo de confianza poblacional.
IC () debe incluir el 100.0 %

el promedio aritmtico del % recobro debe
estar en el intervalo 98.0 % 102.0 %
%CV del % Recobro 2.0 %
Precisin intermedia
del mtodo.
Porcentaje de recobro.
CV 2.0 %
Estabilidad de la muestra
analtica.
Diferencia absoluta de la media aritmtica de

cada tiempo analizado respecto al anlisis del
tiempo inicial.
di 2.0 %
Tabla No. 6: Criterios de aceptacin para la Verificacin del mtodo analtico empleado en la cuantificacin de cido saliclico y
Sulfapiridina, por CLAR en la determinacin de Impurezas en Sulfasalazina, tabletas con capa entrica.
8.0 REFERENCIAS.
Impurities H and J; Sulfasalazine, 01/2008:0863. Monographs, European Pharmacopoeia 7.0 (2011): 3015.
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Validacin de Mtodos Analticos. Recomendaciones para su presentacin
ante la FEUM; FEUM 10 (2011) II: 2569-2580.
Gua de validacin de mtodos analticos; Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos, Mxico A.C. Registro
ante la DGP F-032 (2002).
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<1225> Validacin de Procedimientos Farmacopicos; Informacin general, USP 34a (2011)1: 1093 1099.
Sulfasalzine, J. Patrick McDonnell; Analytical Profiles of Drug Substances Vol. 5, edit by Klaus Florey, Academic Press
INC (1976): 515 532.
ELABOR:
REVIS:
_________________________
________________________
QFB. Ricardo Snchez Uribe.

Qumico Instrumentista.
MAR 13
QFI. Martn Villa de vila.

Jefe de Instrumentacin Analtica.
MAR 13
AUTORIZ:
__________________________
Bt. Rubn Rosas Santos.
Gerente Investigacin y Desarrollo
MAR 13
AUTORIZ:
______________________
QFB. Patricia Arteaga Reyes.
Responsable Sanitario
MAR 13
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Fax: 55 94 65 56
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9.0 A N E X O S.
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ANEXO No. 1 CONSIDERACIONES PRELIMINARES A LA VERIFICACIN

DEL MTODO ANALTICO.
SUSTANCIA DE REFERENCIA.
Sustancia de
referencia.
Estatus.
No. lote.
cido saliclico.
No.
Control.
Fabricante /
Proveedor.
Fecha de
anlisis.
Fecha
caducidad.
Valoracin.
Bitcora de
registro.
INSTRUMENTACIN ANALTICA.
Sulfapiridina.
Instrumento / equipo.
Marca.
Modelo No.
Serie No.
Bitcora registro de uso.
Cromatgrafo de lquidos
de alta resolucin (HPLC).
Balanza analtica.
Microbalanza analtica.
Sonicador.
Purificador de agua.
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REACTIVOS QUMICOS.
Grado de
pureza.
Reactivo.
No. lote.
Fabricante.
Bitcora de ubicacin.
Fosfato monobsico de sodio anhidro.

Acetato de sodio anhidro.
cido actico glacial.
Hidrxido de amonio.
Metanol grado HPLC.
Agua.
ANEXO No. 2 ADECUABILIDAD DEL SISTEMA.

Parmetro analtico de evaluacin: _____________________________________________.
CROMATGRAFO DE LQUIDOS DE ALTA RESOLUCIN (HPLC).
Cromatgrafo de lquidos de
alta resolucin (HPLC):
Detector:
Columna:
Fase mvil:
Flujo:
Volumen de inyeccin:
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ANEXO
No. 3
SUSTANCIAS DE REFERENCIA.
ACIDO SALICLICO.
SULFAPIRIDINA.
Nmero de lote:
Nmero de control:
Valoracin:
Peso (mg):
Concentracin final
(g/ mL):
Fecha de anlisis:
Bitcora de descargo:
LINEALIDAD DEL SISTEMA.

SUSTANCIA
DE REFERENCIA.
ADECUABILIDAD
DEL SISTEMA
CROMATOGRFICO.
Parmetro.
Nombre:
Analito
de inters.
Tiempo de retencin.
No. lote:
cido
saliclico.
Sulfapiridina.
No. control:
6.0 minutos aprox.

7.0 minutos aprox.
Resolucin..
Sulfapiridina
cido saliclico.
Peso(mg):
No menor a 2.0
Desviacin estndar
relativa.
cido saliclico,
Pureza (%):
Sulfapiridina,
3 inyecciones repetidas.
Fecha de anlisis:
No mayor al 2.0 %
Resultado.
Dictamen.
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EVALUACIN DE LA LINEALIDAD DEL SISTEMA.
Solucin estndar.
Solucin
Stock.
Dilucin.
Concentracin
(g/ mL)
Respuesta.
(ABC)
Solucin estndar.
Solucin
Stock.
Concentracin
(g/ mL)
Dilucin.
(2.5 / 100)
(2.5 / 100)
(0.5 / 10)
(0.5 / 10)
(12.5 / 100)
(12.5 / 100)
(2.5 / 10)
(2.5 / 10)
(5.0 / 10)
(5.0 / 10)
(7.5 / 10)
(7.5 / 10)
Respuesta.
(ABC)
BASE DE DATOS.
Solucin.
X: Concentracin
(g/ mL)
Y: Respuesta
(ABC)
7
8
9
10
11
12
ESTADSTICO DE PRUEBA.
ANEXO No. 3 Cont.

SISTEMA.
Clculos estadsticos.
LINEALIDAD DEL
x :
y :
BASE DE DATOS.
Solucin.
1
2
3
4
5
6
X: Concentracin
(g/ mL)
x2 :
2
Y: y
Respuesta
:
(ABC)
xy:
n:
Regresin lineal.
b1:
b0:
r2:
Intervalo de confianza para la pendiente.
Sy/x:
Sb1:
t0.975, n-2:
IC (1):
22
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Dictamen:
EVALUACIN DE LA PRECISIN DEL SISTEMA.

Solucin
Stock.
Dilucin.
Concentracin
(g/ mL)
Solucin
Estndar.
RESPUESTA (ABC)
1
2
3
(5.0 / 10)
4
5
6
ANEXO No. 4
PRECISIN DEL SISTEMA.
Nombre:
No. lote:
No. control:
Peso (mg):
Pureza (%):
Fecha de anlisis:
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Dictamen:
ANEXO No. 5
SELECTIVIDAD DEL MTODO ANALTICO.
SOLUCIN STOCK, SUSTANCIAS DE REFERENCIA.
Solucin.
1
2
3
4
5
6
X:
Nombre:
Concentracin
(g/ mL)
No. lote:
Y: Respuesta
(ABC)
cido saliclico.
Sulfapiridina.
y :
SOLUCIONES BLANCO Yy
COMPUESTOS
DE REFERENCIA.
2
:
Peso (mg):
Pureza (%):
Composicin.
Solucin.
Concentracin (g/ mL):
Fecha de anlisis:
Solucin blanco 1.
Solucin de amonio.
Solucin blanco 2.
Fase mvil.
Compuesto de
referencia 1.
cido saliclico.
Compuesto de
referencia 2.
Sulfapiridina.
No.
Concentracin.
(g/ mL)
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
n : Solucin
:
S:
% CV:
Respuesta
(ABC)
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SOLUCIONES DE PRUEBA, ESTNDAR ADICIONADO.

Soluciones
de
prueba.
Solucin
Stock
sustancias
de referencia
(mL)
Solucin
de amonio
(mL)
Concentracin
(g / mL)
cido
Sulfapiridina
saliclico
Respuesta
(ABC)
cido
saliclico
Porcentaje
(%)
Sulfapiridina
9
10
11
12
13
14
ANEXO No. 5 Cont.
ESPECIFICIDAD DEL MTODO ANALTICO.

BASE DE DATOS.
Anlisis estadstico.
No. Solucin.
S:
% CV
Solucin blanco 1.
Solucin blanco 2.
Compuesto de referencia 1.
Compuesto de referencia 2.
Placebo cargado 0.0 %
25
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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MAR 13
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NUEVO
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Dictamen:
ANEXO No. 6
LMITE DE DETECCIN Y LMITE DE CUANTIFICACIN.

Nombre:
No. lote:
No. control:
Peso (mg):
Pureza (%):
Fecha de anlisis:
LD Y LC TERICOS.
Seal ruido promedio:
LD (ABC):
Solucin Stock
(g/ mL)
Dilucin.
Concentracin
(g/ mL)
LC (ABC):
LD terico*
(g / mL):
LC terico*
(g / mL):
26
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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Concentracin terica calculada por interpolacin de la curva de linealidad del sistema.
DETERMINACIN DE LOS LMITES DE DETECCIN Y CUANTIFICACIN.

Lmite.
LD
LC
Respuesta
(ABC)
Solucin.
Concentracin
(g/ mL)
Anlisis estadstico.
S:
% CV
1
2
1
2
Solucin de referencia b
ANEXO No. 7
LINEALIDAD DEL MTODO ANALTICO.

SOLUCIN DE REFERENCIA b.
Nombre:
cido saliclico.
Sulfapiridina.
No. lote:
Peso (mg):
Pureza (%):
Fecha de anlisis:

Nombre:
cido saliclico.
Sulfapiridina.
No. lote:
Peso (mg):
Pureza (%):
Fecha de anlisis:
27
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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Medicamento de prueba
No.
solucin
Peso
(mg)
Equivalente
Sulfasalazina
(mg)
Solucin
Stock
sustancias
de referencia
(mL)
Solucin
de
amonio
(mL)
Concentracin
(g / mL)
cido
saliclico
Sulfapiridina
Respuesta
(ABC)
cido
saliclico
Sulfapiridina
Porcentaje
(%)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
ANEXO No. 7 Cont.

Medicamento de prueba
No.
solucin
Peso
(mg)
Equivalente
Sulfasalazina
(mg)
Solucin
Stock
sustancias
de referencia
(mL)
Solucin
de
amonio
(mL)
Concentracin
(g / mL)
cido
saliclico
Sulfapiridina
Respuesta
(ABC)
cido
saliclico
Sulfapiridina
Porcentaje
(%)
10
11
12
13
14
15
16
17
18
28
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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BASE DE DATOS.
BASE DE DATOS.
Compuesto de inters (mg).

Soluciones
de prueba.
X:
Cantidad
adicionada.
Y:
Cantidad
recuperada.
Compuesto de inters (mg)
Recobro
(%)
Soluciones
de prueba.
X:
Cantidad
adicionada.
Y:
Cantidad
recuperada.
Recobro
(%)
10
11
12
13
14
15
16
17
18
ANEXO No. 7 Cont.
IC para la ordenada al origen.
x :
X:
y :
Sb0:
t0.975, n-2:
IC (0):
x :
y :
% CV variacin de regresin.
xy:
n:
Sy/x:
Regresin lineal.
% CVy/x:
b1:
b0:
r2:
IC para la pendiente.
Sy/x:
Sb1:
Dictamen:
t0.975, n-2:
IC (1):
29
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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ANEXO No. 8. EXACTITUD Y REPETIBILIDAD DEL MTODO ANALTICO.

Nombre:
cido saliclico.
Sulfapiridina.
No. lote:
Peso (mg):
Pureza (%):
Fecha de anlisis:

Nombre:
cido saliclico.
Sulfapiridina.
No. lote:
Peso (mg):
Pureza (%):
Fecha de anlisis:
30
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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Soluciones
de
prueba.
Solucin
Stock
sustancias
de referencia
(mL)
Concentracin
(g / mL)
cido
Sulfapiridina
saliclico
Solucin
de amonio
(mL)
Respuesta
(ABC)
cido
saliclico
Porcentaje
(%)
Sulfapiridina
1
2
3
4
5
6
ANEXO No. 8 Cont. EXACTITUD Y REPETIBILIDAD DEL MTODO ANALTICO.

BASE DE DATOS.
Compuesto de inters ( mg)
Solucin.
X:
Cantidad
adicionada.
Y:
Cantidad
recuperada.
Recobro (%)
1
2
3
4
5
6
IC media poblacional.
t0.975, n-1:
S:
IC ():
% CV:
Dictamen:
31
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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ANEXO No.9. PRECISIN INTERMEDIA DEL MTODO ANALTICO.

DA DE ANLISIS: _______________________________
MEDICAMENTO DE PRUEBA.
Nombre comercial:
Fabricante:
Nmero de lote:
Fecha de caducidad:
Marbete:
Presentacin:
Contenido de impuerzas (%)
Fecha de anlisis:
Nombre:
cido saliclico.
Analista A
Analista B
Sulfapiridina.
Analista A
Analista B
No. lote:
Peso (mg):
Pureza (%):
Fecha de anlisis:
32
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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ANEXO No.9 Cont. PRECISIN INTERMEDIA DEL MTODO ANALTICO.

EVALUACIN DE LA REPRODUCIBILIDAD DEL MTODO POR DA DE ANLISIS.
Da.
Analista.
Peso.
(mg)
Muestra.
Respuesta (ABC)
cido
saliclico.
Sulfapiridina.
% Impurezas
cido
saliclico.
Sulfapiridina.
1
A
2
3
4
B
5
6
1
2
3
4
B
5
6
ESTADSTICO DE PRUEBA GLOBAL.

:
S:
% CV:
Dictamen:
33
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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ANEXO No.10 ESTABILIDAD DE LA MUESTRA ANALTICA.

TIEMPO DE ANLISIS: _______________________________
MEDICAMENTO DE PRUEBA.
Nombre comercial:
Fabricante:
Nmero de lote:
Fecha de caducidad:
Marbete:
Presentacin:
Contenido de impuerzas (%)
Fecha de anlisis:
EVALUACIN DE LA REPRODUCIBILIDAD
ANLISIS.
cido saliclico. DEL MTODO POR DA DE
Sulfapiridina.
Nombre: Muestra.
Tiempo.
No. lote:
Inicial.
Peso (mg):
Pureza (%):
3
24.0 hrs.
Fecha de anlisis: 1
2
3
Peso.
Inicial.
(mg)
% 24.0
Impurezas
Respuesta 48.0
(ABC)
24.0 hrs.
hrs.
Inicial.
hrs.
48.0 hrs.
Sulfapiridina.
Sulfapiridina.
cido saliclico.
cido saliclico.
*
*
*
ANEXO No.10 Cont. ESTABILIDAD DE LA MUESTRA ANALTICA.

34
Tel. 56 71 13 44 y 56 71 70 88
Fax: 55 94 65 56
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EVALUACIN DE LA REPRODUCIBILIDAD DEL MTODO POR DA DE ANLISIS.
Tiempo.
48.0 hrs.
Muestra.
Peso.
(mg)
% Impurezas
Respuesta (ABC)
cido saliclico.
Sulfapiridina.
cido saliclico.
Sulfapiridina.
Condicin.
Parmetro
% cido saliclico.
(0)
24.0 horas
(y1)
di
(1)
d1 = 1 - 0 =
48.0 horas
(y2)
d2 = 2 - 0 =
Condicin.
Parmetro
24.0 horas
(y1)
% Sulfapiridina.
(0)
di
(1)
d1 = 1 - 0 =
48.0 horas
(y2)
d2 = 2 - 0 =
Dictamen:
35

Protocolo Verificacion Impurezas

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LABORATORIOS ZERBONI, S. A.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

Protocolo de Verificacin de Mtodos Farmacopeicos:

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE

Metodologa de evaluacin de desempeo analtico.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

4.2 Jefe de Instrumentacin Analtica:

4.3 Jefe de Desarrollo Galnico:

4.4 Gerente del Departamento de Investigacin y Desarrollo:

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

Fosfato monobsico de sodio anhidro GR.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

5.4 Mtodo farmacopeico a verificar.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE IMPUREZAS:

5.4.1.1 Solucin de amonio. Transferir cuantitativamente 0.75 mL de hidrxido de amonio concentrado a un

Solucin de referencia b. Pesar el equivalente a 2.50 mg de ER cido saliclico y 2.50 mg de ER

Sistema cromatogrfico. Cromatgrafo de lquido de alta resolucin (CLAR) acoplado a un detector

Adecuabilidad del sistema. Inyectar al equipo cromatogrfico la Solucin de referencia b segn se

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

Procedimiento. Inyectar al equipo cromatogrfico volmenes iguales de 20.0 L tanto de la solucin de

Determinar el porcentaje de cido saliclico y Sulfapiridina presentes en cada muestra

6. METODOLOGA DE EVALUACIN DE DESEMPEO DEL MTODO ANALTICO.

6.2 Soluciones reactivo.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA CROMATOGRFICO.

6.0 minutos aprox.

Sulfapiridina cido saliclico.

Desviacin estndar relativa.

cido saliclico, Sulfapiridina,

6.4.1 Linealidad del sistema.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

Peso equivalente (mg)

Concentracin (g/ mL)

Concentracin (g/ mL)

Tabla No. 3: Soluciones de referencia para evaluacin de la Linealidad del sistema.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

Lmite de deteccin y lmite de cuantificacin.

6.4.5 Linealidad del Mtodo.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

6.4.5.6 Realizar el descargo de informacin en la Hoja de registro correspondiente a la evaluacin de Linealidad

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

Reproducibilidad del mtodo analtico (Precisin intermedia).

Estabilidad de la muestra analtica.

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

MTODO ANALTICO DE CUANTIFICACIN DE CIDO SALICLICO Y SULFAPIRIDINA POR CLAR

Intervalo de confianza para la pendiente.

IC (1), no debe incluir el cero.

Precisin del sistema.

LD con base en la seal de ruido.

LD, tres veces la seal ruido.

LC con base en la seal de ruido.

LC, diez veces la seal ruido.

La respuesta del mtodo nicamente debe

Cantidad adicionada Vs Cantidad recuperada.

IC () debe incluir el 100.0 %

Intervalo de confianza poblacional.

IC () debe incluir el 100.0 %

%CV del % Recobro 2.0 %

Diferencia absoluta de la media aritmtica de