DETERMINACION DE ACIDOS GRASOS POR CROMATOGRAFIA GC-MS Estindares: Con el fin de verificar el factor de respuesta, dos patrones de acidos grasos que estaban _presentes en las muestras por analizar, fueron someticlos a andlisis cromatografico, previa preparacién {¥ derivatizacién a diferentes concentraciones. Se siguié el procedimiento que se detalla a contintacién: Preparacién de os estdndares para calibracién: Se partis de dos acidos grasos grado reactivo Merci: Acido palmitico y cido estearico, De cada uno de ellos se prepard una solucién stock a una concentracién de 1000ppm y a partir de alli se realizaron 5 diluciones a las siguientes concentraciones 1000ppm, 500ppm, 250 ppm. 125 ppm y 63 ppm. las cuales fureron sometidas al siguiente protocolo de esterificacion (figura 2, para luego ser llevadas a analisis cromatografico y construnr la respectiva curva de calibracion: a. De cada estandar se hizo una solucién 2 una concentracién de 1000 ppm en hexano. b. De las soluciones anteriores se prepararon las diferentes diluciones a concentraciones de 1000ppm, 500ppm. 250ppm 125ppm y 63pm. Cada solucién se llevé a sequedad con nitrégeno gaseoso. © Acada una se le adicionaron 3mL de BF, en MeOH al 20%, Se sometieron a calentamiento a 80°C durante una hora mediante reflujo. A cade dilucién se le adicionaron 500uL de hexano, pasados uno minutos se recupers la fase superior correspondiente a la fase que contiene los acids grasos metilados presentes en el material vegetal. ©. Losésteres cle metilo de los acidos grasos estandares fueron entonces llevados a andlisis cromatografico obteniendo las siguientes ecuaciones de estandarizacién: ACIDO ESTEARICO, ACIDO PALMITICO. Repuesta~ 1.02X 10** Amt + 3.36X 10° Repuesta~ 1.05X 10** Amt + 2.80X 10° Coefi- Coefiente de deteccién= 0.990 ente de deteccion=0.994 Estandares (1000ppm) Diluciones ‘Secado con alto vacio ‘Adiciona cada dilucion de BFs en MeOH al 20% Calentamiento durante 1 hora (recipientes tapados) ‘An is cromatografico or GC-MS Figura 2. Protocolo derivatizacién de acidos grasos