RESUMEN

En el presente informe se tienen como objetivos la determinacin del

nmero de microorganismo aerobios mesfilos viables y la
determinacin del nmero de entero bacterias, para la realizacin de
esta prctica se utiliz 50 gramos de filete de doncella, al cual se le
agrego 450 ml de SSP (solucin salina peptonada) y se tritur en un
vaso de licuadora estril, se dej reposar durante 5 minutos
aproximadamente y posteriormente se extrajo 100 a 150 ml del
lquido sobrenadante, se tom un mililitro de muestra para conseguir
una dilucin

102

en un tubo de ensayo con 9 ml de SSP y de esta

ltima dilucin se extrajo un mililitro para conseguir una dilucin

103

en un nuevo tubo de ensayo, se continuo as hasta obtener

una dilucin

105 , seguido de esto se procedieron a realizar las

siembras mediante el mtodo de inclusin de placas en donde se

sembraron 1ml de alcuotas de las diluciones

102 ,103 , 104

105

, seguido del agregamiento de 15 ml de Agar estndar a 45 a cada

placa para la realizar la determinacin del nmero de
microorganismos aerobios viables; para el caso de la determinacin
de entero bacterias se sembraron alcuotas de diluciones
y

103

101 ,102

a las cuales se les agreg 15ml de Agar VRBG(Violeta de

etilo rojo neutro bilis glucosa) a 45-50C, se homogenizaron tanto las

placas con Agar estndar como las que tenan Agar VRBG con
movimientos rotativos en forma de 8, se dejaron solidificar para
posteriormente incubarlos a 35-37 C durante 48-72 horas, en el
caso de las placas para la determinacin de entero bacterias se les
agrego una capa ms de Agar VRBG(capa virgen) y se incubaron;
finalmente se cont el nmero de colonias y se cotejaron los
resultados obtenidos con lo estipulado en la norma.
Palabras clave: SSP, dilucin, Agar estndar, Agar VRBG, placas,
colonias, incubacin.

INTRODUCION
Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las
condiciones qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan
multiplicarse de forma controlada. En general podemos distinguir
cultivos lquidos y slidos en funcin de las caractersticas del medio y
cultivo discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de
nutrientes en el medio.
En la naturaleza, los microorganismos se encuentran
formando poblaciones mixtas con otros tipos de microorganismos.
Los cultivos de estas mezclas se llaman por ello cultivos mixtos. Sin
embargo, el conocimiento de los microorganismos se consigue
mediante el estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio
en cultivos puros.
En ocasiones el estudio molecular conduce a la caracterizacin de los
microorganismos, an en poblaciones mixtas. Sin embargo, la
identificacin bacteriana y la caracterizacin completa solo es posible
tras el aislamiento de la bacteria y la obtencin de cultivos puros.

OBJETIVOS
Opinar sobre la calidad de un producto a partir de la cantidad
de grupos microbianos que posea.
Aprender a realizar un anlisis microbiolgico.
Determinar el nmero de microorganismos aerbios mesfilos
viables, mediante el mtodo de inclusin de placas.
Aprender a utilizar el cuenta colonias.
Determinar el nmero de enterobacterias (grupo microbiano
procedente de intestinos de animales y el hombre).

MATERIALES
Los principales materiales empleados son:

1 Erlenmeyer de 450 ml
3 Tubos de prueba con 9 ml de solucin salina peptonada.
9 tubos de prueba con caldo brila.
Pipetas.
Vaso de licuadora esterilizada
Materiales de ensamblaje de la licuadora totalmente

esterilizada.
4 placas petri esterilizadas.
Un baln con PCA.
Un baln con VRBG.
Gradilla para colocar los tubos de prueba.
50 gramos de muestra (Doncella).
3
450 cm de solucin salina peptonada en un matraz.

ANALISIS EXPERIMENTAL
A)PREPARACION DE DILUCIONES DECIMALES

Se ensambla un vaso de licuadora estril.

Se tara la licuadora en una balanza de torsin.

Pesar 50 gramos de muestra (doncella).

Echar en la licuadora que se tar la muestra pesada.

Agregar 450

ml

de solucin salina peptonada (ssp) de un

matraz.

Triturar a mxima velocidad durante 2 minutos.

Dejar reposar 5 minutos.

Pasar un poco de lquido de la muestra licuada al matraz vaco y
1

considerar como dilucin

10

Tomar 1 ml de la dilucin

101

y agregarlo en un tubo de

prueba con 9 ml de solucin salina peptonada obtener la

dilucin

102 .

Hacer otras diluciones decimales tomando alcuotas de 1 ml y

llevndolo a tubos con 9ml de solucin salina peptonada, como
103 ,

104

y en esta experiencia hasta

105 .

B)SIEMBRAS
1. RECUENTO TOTAL DE MICROORGANISMOS
AEROBIOS MESOFILOS VIABLES (R.T)
METODO DE INCLUSION EN PLACAS O SIEMBRA EN
PROFUNDIDAD
4

10

Preparar diluciones hasta

Sembrar en placas enumeradas desde

104

.
101 , 102 , 103 ,

pero siempre empezando con la mas diluida, en este

caso la mas diluida es la de

104

101

y finalizando con la de

Tomar una alcuota de 1 ml y ponerlo en la placa de

Agregar 15 ml aproximadamente de PCA (agar) con

temperatura de 45 C
104 .

a 50 C

10

a la placa petri enumerada

Homogenizar con movimientos rotatorios en forma de 8.

4
Se repite los mismos pasos que la dilucin 10
para la
dilucin

103 ,102 , 101 .

Dejar solidificar.

Incubar a 35- 37 C / 48h 72h.

Contar el nmero de colonias, especialmente en las placas que

tengan entre 30 y 300 colonias.

Calcular el resultado y expresar en notacin decimal en UFC/g.
Cotejar el resultado con lo estipulado en la norma.

2. RECUENTO TOTAL DE ENTEROBACTERIAS.

METODO DE INCLUSIN EN PLACAS CON PLACA
VIRGEN.
101 ,102 , 103 .

Preparar diluciones decimales

Sembrar alcuotas de 1 ml por dilucin en placas estriles y

vacas, empezando de la dilucin ms enrarecida o diluida y

terminando en la dilucin ms concentrada.

Agregar 15 ml de VRBG (agar) con temperatura de 45 C
C

a la placa petri enumerada

103 .

a 50

Homogenizar con movimientos rotatorios en forma de 8.

Se repite los mismos pasos que la dilucin

dilucin

10 ,10 , 10

10

para la

Dejar solidificar.

Agregar nuevamente 15 ml de agar VRBG (capa virgen).

Incubar a 37 C / 24h 45h.

Contar el nmero de colonias de color rojo, con un ligero

precipitado blanco.
Escoger la placa que tenga entre 30 y 300 colonias.
Calcular el resultado y expresar en notacin decimal en UFC/g.
Cotejar el resultado con lo estipulado en la norma.

RESULTADOS
Diluciones

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

R.T.

59

75

Enterobacterian
a(rojo)
amarillo

59

73

10-3 ------------------- 75
100 --------------------- X
X = 75000 = 7.5x 104
Comparamos con la norma de alimentos y vemos que el lmite
es menor a 104 es de buena calidad y nuestra muestra es
menor, es de 7.5x 104 , por lo tanto es de calidad y apto para el
consumo humano.
Pero si en cambio si fuera superior de 106 es de mala
calidad

CONCLUSIONES:
-Es importante conocer los mtodos de anlisis para determinar
la calidad de un producto, para este caso nuestro pescado
doncella

-Conocer los lmites permisibles para organismos de comida

como el pescado Doncella
-Se puede determinar la calidad de un lote de producto,
realizando anlisis al azar, pequeas muestras de dicho lote.

- Como la muestra mostro un 7.5x 104 total de ENT y vemos que

el lmite es menor a 104 es de buena calidad comparando con
la norma de alimentos , es de calidad y apto para el consumo
humano.

BIBLIOGRAFIA

Norma digesa
Jay
Mossel
Frazier etc