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Biotecnologa Industrial | Biotecnologa y

Alimentos

La biotecnologa y los alimentos


La biotecnologa relacionada con el sector de alimentos es la ms tradicional, los
ms conocidos son los procesos de fermentacin en productos panificados, bebidas
alcohlicas (vino, cerveza) y lcteos (quesos, yogures).
Los cultivos microbianos asociados a estos tienen una larga tradicin de utilizacin
y pueden ser mejorados utilizando mtodos de ingeniera gentica. Estas
modificaciones pueden introducir cambios deseados en los productos mejorando
por ejemplo parmetros de calidad sensorial, la capacidad para producir
compuestos antimicrobianos, etc.
Diferentes enzimas naturales y recombinantes se aplican en procesos y productos
alimenticios:

en la industria del almidn y del azcar, en la fabricacin de jarabes de


glucosa y fructuosa de maz y dextrosa.

en la produccin de quesos, para romper la casena de la leche y permitir su


coagulacin, para resaltar el sabor y para acelerar la maduracin.

en panificacin, para blanquear la harina, facilitar la accin de la levadura,


mejorar la estructura de la masas, etc.

para la optimizacin del proceso de extraccin y refinacin de aceites.

en enologa, para acelerar el tiempo de prensada, acelerar el proceso de


maduracin, la liberacin de aromas, y mejorar el color y sabor. Tambin para
remover la urea producto de la fermentacin.

en la industria de la carne, para favorecer su tiernizacin, facilitar la


remocin de la carne de los huesos y en la produccin de hidrolizados de
protenas.

en la elaboracin de cerveza, para evitar su enturbiamiento durante el


almacenamiento.

Los aportes que la biotecnologa ha realizado en los ltimos aos a procesos y


productos de la industria alimentaria incluyen:

Productos con mayor valor nutricional y organolptico (nutrientes, poder


antioxidante, et.).

Nuevos alimentos funcionales para la prevencin de enfermedades segn


los diferentes grupos de consumidores (alimentos hipoalergnicos, para
diabticos, etc).

Nuevas fuentes de materias primas (algas, invertebrados, etc.) por medio


de la introduccin y expresin de genes especficos que incrementan el

contenido de sustancias de inters para la industria alimentaria (pigmentos,


protenas, etc.).

Uso de biosensores para control de procesos (PH, deteccin de


contaminantes, etc).

Enzimas con caractersticas especficas (termorresistentes, mayor velocidad


de reaccin) para su utilizacin en procesos de fermentacin en distintos
sectores.

Biotecnologa alimentaria riesgos o beneficios?

Cmo alimentar a una poblacin en crecimiento? Foto: Brbara Castrejn Gmez.

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Miriam Maltos, DGDC-UNAM


03/12/2012
Actualidades
Tecnologa
I.

Aportes al futuro alimentario

II.

Vigilancia de riesgos

La biotecnologa es una disciplina que se desarrolla con enfoques multidisciplinarios, ya que involucra a varias
ciencias como la biologa, la gentica, la agronoma, la qumica, y la medicina. Sus aplicaciones poseen un
carcter multisectorial, con grandes repercusiones en prcticamente todas las industrias, entre ellas la
farmacutica, la agrcola y la alimentaria.
En la produccin de alimentos, el impacto de la biotecnologa es evidente en procesos como la fabricacin de
bebidas alcohlicas o del queso, a tal grado que los productores han modificado las tcnicas de elaboracin
tradicional para dar paso a mejoras basadas en innovaciones biotecnolgicas.
Dentro de los laboratorios de investigacin, los especialistas en biotecnologa alimentaria, evalan la
introduccin del conocimiento gentico de los seres vivos, particularmente de los microorganismos, para
obtener ventajas en trminos del proceso.
Un ejemplo es la cerveza ligera, aquella a la que se le introdujo una levadura que puede degradar con mayor
eficiencia los carbohidratos de la cebada. En este caso, los cientficos realizaron un mejoramiento gentico
intencional que permiti una optimizacin del proceso. Logros similares prometen ser determinantes para el
futuro alimentario.
Para el investigador Agustn Lpez Mungua Canales, la biotecnologa alimentaria podra ser una solucin
tecnolgica que ayude a contender con una situacin tan compleja como la escasez de comestibles.

Aportes al futuro alimentario


El mundo enfrenta una demanda alimentaria que para el ao 2050 requerir el aumento del 70% de la
produccin actual de alimentos, considerando que la poblacin llegue a los 9 mil millones de seres humanos,
segn datos de la Organizacin de las Naciones Unidas para la Alimentacin y la Agricultura (FAO).
En este contexto es prioritario buscar estrategias para producir ms usando menos energa, un reto
gigantesco en el que biotecnologa tiene posibilidad de convertirse en el actor principal en la contencin del
problema, declar el investigador del Instituto de Biotecnologa de la UNAM.
La falta de alimentos viene acompaada de problemticas difciles de combatir como la insuficiencia de agua,
el cambio climtico y las plagas. Aunado a estos factores tambin est la modificacin de los hbitos
alimentarios de la poblacin y el impacto brutal que se tiene en el medio ambiente a raz de la
sobreexplotacin del campo.
El investigador record que la biotecnologa busca mejores rendimientos agrcolas a travs de plantas
resistentes a plagas, es decir, a partir de modificaciones genticas se le introduce al cultivo una protena no
txica que sirva como insecticida, evitando la aplicacin de pesticidas y agroqumicos que pueden ser
riesgosos para la salud y el suelo.
A la vez que propone cultivos resistentes a herbicidas; en este caso lo que se introduce a la planta es una
protena que elimina la hierba invasora sin necesidad de la intervencin humana, lo cual permite que la
produccin sea mucho ms eficiente, adems de ayudar a reducir los costos de mano de obra en la
produccin agrcola.
Las plantas modificadas a travs de la biotecnologa pueden ser ms resistentes a los cambios de temperatura
o a la sequa, ms nutritivas si les adiciona vitaminas u otros elementos que el organismo requiere, entre otras
ventajas alimentarias y productivas, mismas que han sido exitosas en diversos pases. En Mxico, un caso
particularmente exitoso del uso de esta tecnologa fue la contencin de la plaga del gusano rosado, en el norte
del pas.
El doctor Lpez Mungua consider que esta actividad cientfica puede convertirse en pilar fundamental para
lograr el abasto alimentario requerido por la poblacin. El problema en Mxico es que nos estamos quedando
atrs, pues no existe una poltica alimentaria que vincule a la ciencia y a la industria, con los agricultores y la
legislacin, no hay un engranaje que permita ir a la vanguardia o al menos ir a la par de otros pases que ya
estn trabajando la biotecnologa.
Vigilancia de riesgos
Las innovaciones resultado de la biotecnologa alimentaria han generado diversas reacciones. La
Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha establecido que las plantas modificadas genticamente pueden
contribuir a transformar la salud humana y el desarrollo, aunque desde luego esto tiene que darse con todo el
cuidado y con todas las precauciones que una tecnologa tan poderosa como esta genera.
Por este motivo se ha instaurado la bioseguridad, la cual permite evaluar los riesgos y determina qu tipo de
legislacin y regulacin se requiere para que un proceso biotecnolgico y un producto modificado
genticamente lleguen al consumidor como alimento o como producto farmacutico, indic Lpez Mungua.

Los riesgos de la biotecnologa han suscitado una controversia entre cientficos. Por un lado, quienes apoyan
la siembra de organismos genticamente modificados por sus ventajas para aumentar la productividad; por
otro, los que alertan que puede traer daos irreparables al ambiente, destruccin o desaparicin de algunas
variedades de plantas.
En el caso de las variedades nativas de maz en Mxico, algunos cientficos han expresado que es mejor
evitar la siembra de maz transgnico como una medida precautoria. Actualmente, varios grupos de
investigacin en el pas y el mundo estn dedicados a reunir conocimiento que permita confirmar o rechazar
los posibles riesgos ambientales de las plantas transgnicas.
Los crticos manifiestan la necesidad de contar con estatutos ms rigurosos y completos, destinados a la
regulacin del desarrollo y uso de productos derivados de la biotecnologa alimentaria. Sin duda, frente al
aumento de la poblacin, urgen reacciones ante la probabilidad de una mayor crisis alimentaria.

La Biotecnologa en la Industria Alimentaria


Publicado por Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET) el 25 abril, 2007
Comentarios (44)

Terapia gnica, biosensor, biorremediacin, biocombustible, probitico, alimento transgnico,


etc., son trminos empleados con cierta frecuencia en los medios de comunicacin y en el lenguaje cotidiano,
a pesar de que en ocasiones se desconozca su significado preciso. Todos ellos pueden englobarse dentro de
la ciencia de la Biotecnologa que, segn la Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo Econmico
(OCDE), comprende un conjunto de tcnicas que modifican organismos vivos, transforman sustancias de
origen orgnico o utilizan procesos biolgicos para producir un nuevo conocimiento o desarrollar productos y
servicios. Las principales reas de aplicacin de la Biotecnologa son: (i) la agroalimentacin; (ii) el medio
ambiente y la industria; y (iii) la salud humana y la sanidad animal. Asimismo, se ha descrito el empleo de la
biotecnologa en la restauracin de obras de arte, tales como pinturas o monumentos.
En el cuaderno divulgativo Biotecnologa y alimentos. Preguntas y respuestas, publicado por
la Sociedad Espaola de Biotecnologa, se define la biotecnologa de alimentos como el conjunto de tcnicas
o procesos que emplean organismos vivos o sustancias que provengan de ellos para producir o modificar un
alimento, mejorar las plantas o animales de los que provienen los alimentos, o desarrollar microorganismos
que intervengan en los procesos de elaboracin de los mismos. Aunque la mayora de los consumidores
asocie la biotecnologa de alimentos con los alimentos transgnicos, es decir, aqullos que son, contienen o
han sido producidos a partir de organismos modificados genticamente, probablemente un porcentaje menor
de la poblacin sea consciente de que en la prctica totalidad de los alimentos que ingiere ha intervenido
algn proceso biotecnolgico. La aplicacin de la biotecnologa a la obtencin de alimentos no es en absoluto
una prctica reciente.
As, aunque de una forma emprica, hace milenios que el hombre
comenz a seleccionar y mejorar artificialmente las plantas y los
animales que consuma y aprendi a utilizar los microorganismos para
obtener nuevos alimentos (vino, cerveza, pan con levadura, queso,
etc.) mediante procesos de fermentacin. A este tipo de biotecnologa
El uso de la biotecnologa en la produccin de
se le denomina tradicional, en contraposicin con la moderna, que
alimentos no es en absoluto una prctica
emplea la ingeniera gentica para obtener plantas, animales y
reciente. En la imagen, elaboracin de vino por
microorganismosmodificados
genticamente.
Las
ventajas
la
antigua
civilizacin
egipcia
(www.touregypt.net/featurestories/diet.htm).

fundamentales de la biotecnologa moderna frente a la tradicional consisten en que la primera permite


introducir selectivamente las modificaciones de
inters en un determinado organismo, as como
saltar la barrera de especie, es decir, introducir un
gen de inters de una especie en otra distinta para
conferirle una caracterstica determinada.
Aplicaciones de la biotecnologa en la industria
alimentaria
1. Mejora de la calidad de las materias primas de
origen vegetal y animal
Aunque
los
primeros cultivos
transgnicos obtenidos (plantas resistentes a Herman, el primer toro transgnico del mundo, fue desarrollado por
insectos y/o tolerantes a herbicidas) posean ventajas la empresa GenPharm International en 1990. Este animal posea el
fundamentalmente para los agricultores, se estn gen para la lactoferrina humana (HLF), una protena de importancia
desarrollando en la actualidad cultivos que presentan teraputica para la salud humana. Este gen fue transmitido a su
beneficios ms evidentes para el consumidor y/o para descendencia, obtenindose en 1994 las primeras vacas
la
industria
alimentaria,
tales
como transgnicas que producan HLF en su leche. Imagen tomada
propiedadesnutricionales,
funcionales
y/o de:http://www.txtwriter.com/backgrounders/Genetech/GEpage04.htm
tecnolgicas mejoradas. En lo que se refiere a l
los animales transgnicosdestinados a la produccin
de alimentos, se han obtenido, entre otros,cerdos transgnicos clonados ricos encidos grasos omega
3 y peces de mayor tamao, pero en la actualidad no existe autorizacin para la comercializacin de ningn
animal transgnico destinado a la alimentacin.
No obstante, la produccin de protenas de inters teraputico para el ser humano en la leche de
determinadas especies domsticas (granjas farmacuticas) presenta un
gran inters para la industria farmacutica, pues permite la obtencin de
cantidades mucho ms elevadas de protenas biolgicamente activas en
comparacin con las obtenidas mediante los mtodos de purificacin
tradicionales.
Las bacterias lcticas pueden
Procesado y conservacin de los alimentos
Tradicionalmente, el hombre ha empleado de forma emprica emplearse en la industria alimentaria
microorganismos (fundamentalmente, bacterias lcticas, levaduras y como: (i) cultivos iniciadores para la
mohos) para la elaboracin de una gran variedad de alimentos obtencin de una gran variedad de
fermentados, entre los que se incluyen: (i) derivados de la leche; (ii) pan y alimentos fermentados; (ii) probiticos;
derivados de cereales; (iii) bebidas; (iv) derivados de vegetales; y (v) (iii) productores heterlogos de
sustancias de inters; y (iv)
derivados del pescado.
Desde la demostracin a mediados del siglo XIX por Louis Pasteur de bioconservantes.
que los microorganismos son los responsables de la fermentacin de los alimentos, las fermentaciones
industriales se han convertido en procesos estrictamente controlados en los que se emplean cultivos
iniciadores muy especializados que permiten garantizar y estandarizar las caractersticas organolpticas del
producto final. Pero el papel de los microorganismos (principalmente bacterias lcticas), y/o de sus
metabolitos, en la industria alimentaria no se limita a la produccin de alimentos fermentados, sino que
tambin pueden emplearse con los siguientes fines:

2.

2a) Como cultivos probiticos

La Organizacin Mundial de la Salud ha definido los probiticos como organismos vivos que ingeridos en
dosis definidas ejercen efectos beneficiosos para la salud. Los microorganismos ms empleados con este fin
en la industria alimentaria son las bacterias lcticas (fundamentalmente, Streptococcus termophilus y
microorganismos del gnero Lactobacillus) y las levaduras (principalmente Saccharomyces cerevisiae). Los
alimentos que contienen microorganismos probiticos suelen presentarse al consumidor en forma de yogur u
otros derivados lcteos fermentados. La importancia que los consumidores confieren a este tipo de alimentos
en la sociedad actual se refleja en su considerable volumen de produccin y ventas.
2b) Como factoras celulares para la produccin de enzimas y otros compuestos
Desde hace aproximadamente tres dcadas, numerosas enzimas (renina y otras proteasas, lactasas,
amilasas, etc.) y otros compuestos como aditivos (espesante E-415: goma xantana; conservador E-234:
nisina; etc.), aminocidos (potenciador del sabor E-621: glutamato monosdico; agente de tratamiento de la
harina E-921: cistena; etc.), vitaminas (colorante E-101: riboflavina; antioxidante E-300: cido ascrbico, etc.),
empleados en la industria alimentaria, pueden producirse con la ayuda de microorganismos modificados
genticamente. Este mtodo de produccin presenta las siguientes ventajas: (i) permite producir compuestos
que no se pueden obtener por sntesis qumica o que estn producidos por microorganismos difciles de
cultivar; (ii) ofrece la posibilidad de optimizar la produccin de los compuestos de inters y de reducir los
costes de produccin; y (iii) ocasiona un menor impacto ambiental que la sntesis qumica, puesto que no
necesita condiciones extremas de temperatura y presin ni sustancias qumicas peligrosas, siendo adems
los residuos de la produccin ms fcilmente biodegradables. As, aunque los ingredientes mayoritarios de
productos como pan, queso, vino y cerveza no estn modificados genticamente, es posible encontrar en su
composicin aditivos y/o enzimas producidos mediante ingeniera gentica.
2c) Como bioconservantes
Se denomina bioconservacin al procedimiento que permite aumentar la vida til e incrementar la calidad
higinico-sanitaria de los alimentos mediante la actividad de determinados microorganismos y/o sus
metabolitos. En este sentido, las bacterias lcticas tienen la capacidad de inhibir el desarrollo de
microorganismos alterantes y patgenos de los alimentos mediante
diversos mecanismos, entre los que se incluye la produccin de
metabolitos como el cido lctico y las bacteriocinas. Esta aplicacin de la
biotecnologa a la conservacin de los alimentos ser tratada en
profundidad en un prximo blog.
3. Control de la seguridad alimentaria
Las crisis alimentarias acaecidas durante los ltimos aos, as como
los avances experimentados en los mtodos de produccin y
transformacin de los alimentos, pusieron de manifiesto la necesidad de La biotecnologa ofrece la posibilidad de
actualizar la legislacin alimentaria europea, lo que desemboc en la emplear mtodos inmunoqumicos y
adopcin del Reglamento 178/2002 y, posteriormente, en la publicacin genticos para el control de la seguridad
en todos los eslabones de la cadena
del denominado Paquete de Higiene.
El nuevo enfoque adoptado para asegurar la inocuidad de los alimentaria, de la granja a la mesa.
alimentos considera que cada eslabn de la cadena de produccin de alimentos, desde la produccin primaria
y la produccin de piensos para animales hasta la venta al consumidor final (lo que se ha denominado con la
expresin de la granja a la mesa), tiene el potencial de influir en la seguridad alimentaria. En este contexto,
aparece el concepto de trazabilidad, es decir, la posibilidad de identificar el origen de un alimento y poder
seguir su rastro durante toda su vida til. La trazabilidad es una herramienta que asegura y/o restablece la
seguridad alimentaria y que ayuda a evitar fraudes y a recuperar la confianza del consumidor en la seguridad
de los productos alimenticios. Como se describe a continuacin, la biotecnologa puede aportar soluciones

tanto para el control de la seguridad alimentaria como para satisfacer la obligatoriedad de garantizar la
trazabilidad de los productos alimenticios.
3.1. Deteccin de agentes nocivos en los alimentos
Las tcnicas biotecnolgicas para la deteccin de agentes nocivos (microorganismos patgenos y/o sus
toxinas, alrgenos, residuos de tratamientos veterinarios, contaminantes abiticos de origen ambiental, etc.)
en los alimentos pueden emplearse individualmente o en combinacin con tcnicas analticas tradicionales
(como HPLC y cromatografa de gasesacopladas a espectrometra de masas). Los sistemas biotecnolgicos
de deteccin estn basados en tcnicas inmunoqumicas (ELISA, dispositivos de flujo lateral, ensayos de
aglutinacin con partculas de ltex, etc.), genticas (hibridacin de ADN, PCR y sus variantes, como PCR
cuantitativa en tiempo real, etc.), u otras (por ejemplo, deteccin de la bioluminiscencia del ATP). En muchos
casos, estas tcnicas se presentan bajo el formato de kitscomerciales sencillos de utilizar, que producen
resultados de forma rpida y que permiten la realizacin de ensayos de campo gracias a su portabilidad.
Asimismo, como se describi en unblog anterior, cada vez se dispone de una mayor variedad de
nanodispositivos compactos de anlisis (biosensores) para la deteccin de agentes nocivos presentes en los
alimentos.
3.2. Trazabilidad de los organismos modificados genticamente
Con el fin de que los consumidores puedan tomar decisiones razonadas acerca de los productos
alimenticios que adquieren, as como de que recuperen la confianza perdida con motivo de las crisis
alimentarias, es imprescindible que en el etiquetado de los alimentos aparezca una informacin lo ms veraz
y completa posible acerca de su composicin y forma de obtencin. En lo que se refiere a los alimentos y
piensos modificados genticamente, las normas relativas a las exigencias de etiquetado y
trazabilidad aparecen recogidas en los Reglamentos (CE) 1829/03 y 1830/03 del Parlamento Europeo y del
Consejo. Se trata, en definitiva, de que todos los eslabones de la cadena de produccin de alimentos
conozcan y transmitan a sus clientes la informacin relativa al empleo de organismos modificados
genticamente en sus productos. Los mtodos de anlisis de la presencia de organismos modificados
genticamente en los alimentos se basan en la deteccin de protenas (ELISA, dispositivos de flujo lateral) o
de ADN (mtodos basados en la tcnica de PCR, y, con menor frecuencia, microarrays). Es importante
destacar que cada uno de los eventos autorizados en la Unin Europea posee un mtodo de deteccin
especficamente desarrollado por la empresa que lo comercializa, lo que es imprescindible para solicitar su
autorizacin. La evaluacin cientfica y la validacin de estos mtodos se llevan a cabo por el Laboratorio
Comunitario de Referencia para Alimentos y Piensos Modificados Genticamente (CRL) en colaboracin
con la Red Europea de Laboratorios de Organismos Modificados Genticamente.
3.3. Identificacin de especies
La sustitucin de especies animales o vegetales por otras similares con menor valor econmico es uno de
los fraudes alimentarios ms frecuentes. Esta prctica supone no slo consecuencias econmicas, sino que,
en algunas ocasiones, puede originar problemas de salud en los consumidores (alergias) o conllevar
implicaciones ticas o religiosas. La identificacin de especies puede llevarse a cabo mediante mtodos
inmunoqumicos, como ELISA o Western blot, o genticos, basados en el anlisis de los
denominados marcadores moleculares genticos. stos consisten en secuencias de cidos nucleicos
capaces de proporcionar informacin especfica sobre un organismo. Su identificacin se realiza mediante
diferentes mtodos, entre los que se incluyen: Southern blot, anlisis de los polimorfismos de los fragmentos
de restriccin (RFLP) y diferentes variantes de la tcnica de PCR.
Conclusiones y perspectivas

La biotecnologa ofrece un nmero importante de recursos a la industria alimentaria, que comprenden


desde la produccin de materias primas y su transformacin, hasta el control de la seguridad alimentaria. En
el Eurobarmetro sobre Biotecnologa realizado en 2005 los ciudadanos europeos se muestran optimistas en
lo que se refiere a la contribucin de la tecnologa en general a la sociedad. Ahora bien, aunque el empleo de
la biotecnologa moderna en el mbito de la salud (terapia gnica, nanotecnologa, etc.) es valorado
positivamente por la mayora de los encuestados, los consumidores son reacios a aceptar los alimentos
modificados genticamente. En este sentido, existen numerosos grupos detractores de esta tecnologa, cuya
oposicin se basa en la existencia de posibles peligros a largo plazo para la salud de los consumidores y para
el medio ambiente. Por otra parte, la mayora de los cientficos defienden el uso controlado y regulado de los
organismos
modificados
genticamente,
basndose,
fundamentalmente,
en
razones medioambientales y econmicas. La legislacin europea garantiza el derecho de los consumidores a
escoger libremente, mediante el correcto etiquetado y la trazabilidad de los productos alimentarios, si desean
o no adquirir alimentos modificados genticamente. No obstante, es tambin de suma importancia que se
realice una labor de divulgacin acerca de esta tecnologa que asegure que la libre eleccin de los
consumidores se realiza desde el pleno conocimiento de las posibles ventajas e inconvenientes de este tipo
de alimentos.
Bibliografa
Biotecnologa
y
Alimentos
(2003).
Sociedad
Espaola
de
Biotecnologa.
- La
Biotecnologa en
el
Sector
Alimentario
(2005).
Genoma
Espaa.
- Aplicaciones de la Biotecnologa a la Seguridad Alimentaria (2005). AESA/Genoma Espaa.

Evaluacin de residuos de papa, yuca y naranja


para la produccin de etanol en cultivo discontinuo
utilizando Saccharomyces cerevisiae
Leidy Patricia Quintero Mora*; Yenis Martnez Castilla; Josman Andrey Velasco Mendoza;
Ashly Arvalo
Rodrguez; Yaneth Amparo Muoz; Nstor Andrs Urbina Suarez
Universidad Francisco de Paula Santander (UFPS), Avenida Gran Colombia No. 12E-96,
Ccuta, Colombia.
*
Patriciaquintero@hotmail.com
Fecha Recepcin: 16 de julio de 2014
Fecha Aceptacin: 25 de enero de 2015

Resumen
El presente trabajo de investigacin tuvo como objetivo producir etanol utilizando un jarabe
glucosado elaborado a partir de residuos de papa, naranja y yuca, por cultivo discontinuo
como una alternativa para el manejo de los residuos generados. Para cumplir con el
objetivo planteado se utilizaron cepas Saccharomyces cerevisiae, una cepa nativa (LYP) y
una cepa control (CTL) obtenida del Cepario de la Universidad. Posteriormente, para la
elaboracin de los medios de fermentacin los residuos se sometieron a un tratamiento de
hidrlisis qumica con cido clorhdrico al 2%v, temperatura de 75C y 8 horas, estos
parmetros fueron seleccionados como resultado del anlisis estadstico del diseo factorial
33 el cual encontr diferencias estadsticamente significativas (p0,05) en las variables
evaluadas sobre la generacin de azucares reductores. Finalmente, se realizaron
fermentaciones de 500ml a 30C 150rpm con base en un diseo factorial 42 para la
evaluacin de los sustratos fermentativos y el microorganismo fermentador, en donde se
encontr que no existen diferencias significativas (p0,05) tanto para los sustratos como
para las cepas: control (CTL) y nativa (LYP), en la produccin de etanol. Sin embargo, en
las interacciones entre variables si se encontraron diferencias altamente significativas
(p0,05), la mayor produccin de etanol obtenido fue de 3,15 y 2,6%v para la cepa LYP y
CLT, respectivamente, cuando se emplearon los jarabes de naranja y yuca como fuente de
carbono.
Palabras clave: Hidrlisis qumica, etanol, residuos agroindustriales.

Evaluation of ethanol production from potato, cassava and


orange
wastage in discontinuos cultivation using Saccharomyces
cerevisiae
Abstract
The present research aimed to produce ethanol using glucose syrup made from potato,
orange and cassava wastage, using discontinuos cultivation as an alternative to handle the
wastage generated. In order to meet the main objective two strains of Saccharomyces
cerevisiae were used, a native strain (LYP) and control strain (CTL) obtained from the strain
stock of the University. Subsequently, for the preparation of the fermentation mediums, the
wastage was subjected to a chemical hydrolysis treatment with hydrochloric acid 2%v, at a
temperature of 75C for 8 hours, these parameters were selected as a result of statistical
analysis of the factorial design 33 which throws statistically significant differences (p0.05)
in the variables evaluated on the generation of reducing sugars. Finally, 500ml
fermentations were performed at 30C, 150rpm based in a factorial design 42 in order to
evaluate the fermentative substrates and fermenting microorganism, where no significant
differences were found (p0.05), for both substrates and strains: (CTL) and (LYP), in
ethanol production. However, regarding the interactions between the variables, some highly
significant differences were found (p0.05), the highest production of ethanol obtained was
3.15 and 2.6% for strains LYP and CLT respectively, when they used the orange syrup and
cassava as carbon source.
Keywords: chemical Hydrolysis, ethanol, waste.

Avaliao dos resduos de batata, mandioca e


laranja para a produo de etanol em cultivo
lote usando Saccharomyces cerevisiae

Resumo
A presente pesquisa teve como objetivo produzir bioetanol utilizando um xarope de glicose
feita a partir de residuos de batatas, laranjas e mandioca, para o cultivo de lote, como uma
alternativa para a gesto dos resduos gerados. A cepa nativa de Saccharomyces cerevisiae,
e uma estirpe de controle obtido a partir da coleo de cultura da Universidade foi usado
para atingir o objetivo. Em seguida, para a preparao de meios de fermentao de
resduos foi usada uma hidrlise qumica utilizando cido clordrico 2%v, 75C e 8 horas,
estes parmetros foram seleccionados como um resultado da anlise estatstica
planejamento experimental 33,apresentando uma diferena estatisticamente significativas
(p0,05) nas variveis avaliadas na gerao de acares redutores. Finalmente
fermentaes 500ml foram realizados a 30C 150rpm com base em um planejamento
fatorial 42 para avaliao de substratos de fermentao e fermentao do microorganismo,
onde no foran encontradas diferenas significativas (p0,05) para ambos os substratos
como para as estirpes: controle (CTL) e nativos (LYP) na produo de etanol. No entanto
interaes entre as variveis se diferenas significativas (p 0,05), aumento da produo
de etanol obtida foi encontrado 3,15 e 2,6%v para tenso LYP e CLT, respectivamente,
quando utilizado laranja e mandioca como fonte de carbono.
Palabras-chave: Hidrlise qumica, etanol, resduos agro-industrial.

Cita: Quintero Mora LP, Martnez Castilla Y, Velasco Mendoza JA, Arvalo Rodrguez A,
Muoz YA, Urbina Suarez NA. Evaluacin de residuos de papa, yuca y naranja para la
produccin de etanol en cultivo discontinuo utilizandoSaccharomyces cerevisiae. rev.ion.
2015;28(1):43-53.

Introduccin
A nivel mundial, la preocupacin por el aprovechamiento de residuos ha tomado gran
fuerza entre la comunidad cientfica y sobre todo a nivel industrial, en donde los procesos
de transformacin generan subproductos que pueden ser tiles en otras actividades. De
hecho, estudios recientes han demostrado que las cscaras de frutas como la naranja
contienen antioxidantes que podran tener un efecto benfico en la salud humana [1]. Sin
embargo, los residuos generados en las transformaciones agroindustriales y por las
prdidas pos-cosecha en Colombia an no han sido aprovechados eficientemente, en parte,
porque su valor es an desconocido y, sobretodo, por la falta de mtodos apropiados para
la preparacin y caracterizacin de sustancias con la suficiente calidad e inocuidad como
para ser usadas en los procesos de mayor valor agregado [2].
Actualmente, el desarrollo de los recursos energticos tiene fuertes implicaciones en la
economa de los pases y est estrechamente vinculado con el ambiente por el impacto
negativo que genera sobre ste, lo cual hace necesario desarrollar acciones que en forma
conjunta contribuyan a su solucin. La generacin de alternativas energticas distintas a las
convencionales obtenidas principalmente de la explotacin del petrleo, ha conllevado al
uso de materias primas naturales dando lugar a los llamados biocombustibles dentro de los
cuales se destaca el bioetanol.
El etanol es considerado un recurso energtico sostenible, puesto que ofrece diversas
ventajas sobre los derivados del petrleo, como son: la disminucin en la produccin de
gases invernadero, disminucin del costo del combustible, mayor seguridad energtica y
apoyo a producciones agrcolas. ste se obtiene a partir de microorganismos, los cuales
realizan la fermentacin de azcares que se encuentran en productos vegetales, que

pueden provenir de subproductos de grandes procesos industriales, para la produccin del


azcar como la melaza. Emplear estos subproductos, como sustratos para ser fermentados
y obtener etanol, generan una oportunidad importante en el desarrollo de nuevas formas
de energa renovable y en los cuales se encuentre un desarrollo sostenible con el medio
ambiente [3].
Para satisfacer plenamente la demanda de etanol como alcohol carburante a nivel mundial,
se han desarrollado diferentes metodologas durante las dos ltimas dcadas y se han
empleado diferentes sustratos no convencionales como materia prima para su produccin,
entre ellos los ms competitivos son la caa de azcar y el maz, debido a que a partir de
estos sustratos agroindustriales se logran alcanzar excelentes rendimientos; pero para
abarcar y satisfacer la demanda actual de este combustible se requiere ampliar la cobertura
de los cultivos y/o sustratos destinados para tal fin [4]
La bsqueda de alternativas en la produccin de etanol a partir de materias primas no
tradicionales, es necesaria debido al aumento de la produccin del mismo en el mundo, el
cual ha estado a la par con el desarrollo de nuevas tecnologas que permiten obtener
alcohol a partir de residuos de: madera, desechos slidos y todos los materiales que
contengan celulosa y hemicelulosa, lo que permite revalorizar los residuos de varias
industrias convirtindolos en materia prima para la obtencin de etanol [5].
La importancia de trabajar con residuos orgnicos radica en que la produccin actual de
bioetanol es a travs de cultivos energticos los cuales deberan destinarse para el consumo
humano, como por ejemplo los cultivos de caa y maz. Los residuos orgnicos que se
emplearon para la produccin de este biocombustible en esta investigacin no representa la
posibilidad de disminuir un alimento til para el ser humano que afecte su alimentacin, ya
que por el contrario estos estn generando un problema ambiental en la central de
abastos.
Actualmente, parte de los residuos orgnicos generados en la Central de Abastos de la
ciudad de Ccuta, se encuentran en estado de descomposicin, unos en mayor grado que
otros. Un pequeo porcentaje de los mismos son tratados en una planta de compostaje
dentro de la central, el resto son llevados directamente al relleno sanitario
desaprovechando el posible uso que se le podra dar a estos residuos. La presente
investigacin surge con el objetivo de evaluar el potencial que pueden tener los residuos
orgnicos, tales como: cscaras de naranja, desechos de papa y yuca de la central de
abastos de la ciudad de Ccuta, para la produccin de etanol como biocombustible, a partir
de los cuales se pueden obtener jarabes mediante hidrlisis qumica para ser utilizados
como sustratos en procesos fermentativos utilizando un cepa nativa de Saccharomyces
cerevisiae como microorganismo fermentador, generando de esta manera un valor
agregado para los mismos y contribuyendo as en la bsqueda de nuevas materias primas
que sustituyan a las tradicionales materias azucaradas para tal fin.

Metodologa experimental
Microorganismo
Se utiliz una cepa nativa de Saccharomyces cerevisiae (LPY) aislada de una bebida
artesanal fermentada del municipio de Durania, Norte de Santander, en un trabajo de
investigacin previo por Arvalo [6]. Como control se utiliz una cepa de Saccharomyces
cerevisiae (CTL) del cepario del Centro de Investigaciones Agrarias y Ambientales, de la
Universidad Francisco de Paula Santander. Las cuales fueron incubadas a 28 +/- 2C
durante 3 das en agar Sabouraud para su activacin.
Residuos Orgnicos
Las muestras de los residuos de papa, yuca y naranja fueron tomadas al azar de la central
de abastos de la ciudad de Ccuta CENABASTOS PROPIEDAD HORIZONTAL,
especficamente de las bodegas de mayoristas que comercializan estos productos, lo cual
facilit su recoleccin. Posteriormente estos fueron lavados y secados a 85C durante 2
horas. Finalizado el tiempo de secado, los residuos fueron molidos y tamizados con una

malla #60, obteniendo las harinas usadas para la elaboracin de los diferentes medios de
fermentacin.
Hidrlisis qumica
Para determinar las parmetros de hidrlisis llev a cabo un diseo factorial 3 3 con tres
concentraciones cido clorhdrico (2, 3, 4%v) temperatura (45, 60, 75C) y tiempo de
accin (20, 30 y 45 minutos) donde se tuvo como variable de respuesta la concentracin de
azcares reductores liberados, los cuales fueron determinados mediante tcnicas
colorimtricas utilizando el reactivo 3,5-cido dinitrosalicilico (DNS) [7]. Para el proceso de
hidrlisis se prepar una solucin de harina con una concentracin de 100 g/L en agua
destilada [8], con la harina obtenida a partir de cada residuo en el pre-tratamiento,
posteriormente se adicion el cido clorhdrico relacin 1:1, mililitros de solucin de harina
de papa o yuca- mililitros de cido. En el caso de la harina de naranja la solucin se realiz
directamente en cido. Las soluciones se llevaron a un bao mara durante el tiempo
establecido en el diseo factorial. Las soluciones se filtraron con papel filtro y al jarabe
obtenido se le ajust el pH entre 4-4,5 con NaOH 5N para posteriormente preparar el medio
de fermentacin.
Medio de fermentacin
Como sustrato y fuente de carbono se utiliz el hidrolizado obtenido de cada tipo de residuo
(papa, yuca y naranja), el pH fue ajustado a 4,5 0,2 con NaOH 5N, el medio fermentativo
fue suplementado con urea, Fosfato diamnico (DAP), MgSO4.7H2O en concentraciones de
700ppm, 571ppm, 1g/L, respectivamente. Los azcares fueron ajustados a un valor
correspondiente al 5% suplementando el medio con glucosa.
Fermentacin
La preparacin del inculo se realiz a partir de un cultivo joven de la levadura, para esto
se prepar una suspensin celular en solucin salina 8,5g/L estril hasta obtener una
turbidez igual al patrn 5 de McFarland. Posteriormente, se inocul en cada medio
fermentativo a base de los residuos a evaluar (papa, yuca, naranja y la mezcla entre ellos),
se dej incubando 24 horas, a una temperatura de 30C, 150rpm y pH de 4,5. La
fermentacin alcohlica para cada unidad experimental se llev a cabo en un reactor con un
volumen efectivo de trabajo de 500mL. El proceso se realiz a una temperatura de 28C +
2C, 150rpm y pH entre 4,5 - 5.
Diseo experimental
La Tabla 1 describe el diseo factorial 42 para los ensayos de fermentacin con dos
repeticiones para un total de 16 experimentos, con la finalidad de evaluar no solo el
sustrato de fermentacin sino el microorganismo fermentador, para lo cual se utiliz cepa
nativa de Saccharomyces cerevisiae y una cepa control de Saccharomyces
cerevisiaeobtenida del Banco de Cepas de la Universidad Francisco de Paula Santander. Para
ello se tuvo como variable de respuesta la concentracin de etanol producido, el cual fue
determinado mediante la tcnica de dicromato de potasio que se fundamenta en la reaccin
con el carbono presente en el etanol [9].

Anlisis estadstico
El anlisis estadstico de los resultados obtenidos en las etapas de hidrlisis qumica y
fermentacin, se llev a cabo mediante un anlisis de varianza multifactorial (ANOVA), con
un nivel de confianza del 95%, en el software STATGRAPHICS centurin XV.II
Seguimiento y determinacin de parmetros cinticos
Para esto se tomaron muestras cada 2 horas para los respectivos anlisis, determinacin de
la concentracin de etanol, concentracin de azcares reductores y la concentracin de
biomasa celular. A partir de los datos obtenidos, se determinaron los rendimientos
observados de biomasa a partir de sustrato (Yx/s) y de producto a partir de sustrato (Yp/s),
as como tambin la velocidad especfica de crecimiento ().

Resultados y Discusin
Hidrlisis qumica
La Tabla 2 relaciona los valores promedios obtenidos en el diseo experimental 33 de la
hidrlisis qumica. Al realizar el anlisis estadstico, dentro de los efectos principales en el
anlisis de varianza multifactorial se encontr que las tres variables: concentracin de
cido, tiempo de accin y temperatura, generan un efecto estadstico altamente
significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores, al igual que las
diferentes interacciones posibles entre las variables estudiadas. Estos resultados son
similares a los reportados por Kim y Hamdy [10] y a los reportados por Alarcn [11]
quienes estudiaron estas tres variables: temperatura (60 y 95C), concentracin de cido
sulfrico (1 y 5%v) y tiempo (1 y 5h), al analizar los datos en el software Manitab 15.0 se
encontraron diferencias estadsticamente significativas entre los tres factores para el
tratamiento del almidn.
El anlisis de varianza simple mostr que para cada una de las variables, el mejor nivel
evaluado fue, la concentracin de 2%v del cido clorhdrico, 75C de temperatura y tiempo
de accin de 30 minutos, puesto que fue en estos niveles donde se evidenci la mayor
liberacin de azcares reductores totales ATR, (ver Tabla 3), por lo que la estadstica
sugera trabajar con dichos niveles como parmetros de hidrlisis.
Durante el proceso de hidrlisis cida adems de producirse azcares fermentables, se ha
reportado que se generan productos de la degradacin de los azcares que inhiben el
metabolismo del microorganismo fermentador, dependiendo de su concentracin,
provocando una produccin deficiente de etanol. Los compuestos inhibidores de
fermentacin obtenidos a partir de los procesos qumicos sobre materiales lignocelulsicos
y almidn, son clasificados en tres grupos: derivados del furano o furaldehidos como el
furfural y el 5-hidroximetilfurfural (5-HMF), cidos orgnicos como el actico, frmico y
levulnico y compuestos fenlicos [12]. As, la cantidad de dichos productos de degradacin
depende tanto de la composicin de la biomasa tratada, como de las condiciones utilizadas
en el pre-tratamiento, como temperatura, presin, tiempo, pH y adicin de catalizadores.
Mientras mayores sean estas variables se espera mayor generacin de inhibidores. [13]

Sin embargo, al obtener valores medios de (ATR) tan bajos, es posible que no se haya
realizado la hidrlisis completa de las molculas de almidn presente en los residuos, al
encontrarse el valor medio de ATR ms bajo en la variable tiempo, se plante la prueba del
yodo, como una prueba adicional para determinar el tiempo en el que ya no hubiera accin
hidroltica significativa en la obtencin de azcares reductores.

La prueba consisti en preparar una solucin de almidn y someterla a una temperatura de


75C y una concentracin de cido clorhdrico de 2%v, cada hora se tom una muestra de
aproximadamente 3ml a la cual se le adicionaron 3 gotas de lugol, posteriormente se
observaba el viraje de color, la prueba se detuvo cuando se observ que no haba viraje
significativo en color a negro. Se observ que a partir de la octava hora de hidrlisis no se
observaba un cambio significativo en el viraje del color, por lo que se tom esta hora como
tiempo de finalizacin de la prueba. Finalmente, se prepar una solucin de almidn y se
someti a hidrlisis utilizado 2%v de cido clorhdrico, temperatura de 75C y tiempo de 8
horas, finalizado dicho tiempo se obtuvo un aumento en la concentracin de azcares, con
un valor de 8,71g/L, lo que evidencia que el aumento del tiempo de accin favoreci la

hidrlisis del almidn. Finalmente, bajo el criterio de la mayor concentracin de azcares


reductores obtenidos, se seleccionaron las condiciones de operacin para el proceso de
hidrlisis qumica, que fueron cido clorhdrico al 2%v, temperatura de 75C y 8 horas,
para obtener los jarabes usados en la elaboracin del medio de fermentacin, de acuerdo
con los resultados estadsticos obtenidos, revisin bibliogrfica y la prueba de yodo.
Fermentacin
El seguimiento a la produccin de etanol en las fermentaciones con los jarabes obtenidos,
se evidenci que la produccin de etanol es muy baja como se observa en la Figura 1, y se
present hacia las ltimas horas del proceso. Debido a la deficiencia en la produccin de
etanol observada, probablemente a la poca disponibilidad de azcares reductores se opt
por la suplementacin de cada uno de ellos con glucosa ajustando este requerimiento al 5%
del volumen efectivo de la fermentacin. La produccin de etanol a partir de las cepas
utilizadas evidenci que su comportamiento fue similar en cada uno de los jarabes
suplementados (ver Figura 1), obteniendo como resultado la mayor produccin de este
metabolito a partir del sustrato del jarabe de naranja. Este resultado sugiere que debido al
alto grado de descomposicin de los residuos hacen necesario suplementar los jarabes
puesto que la fuente de carbono obtenida del tratamiento de hidrlisis qumica no es
suficiente para obtener rendimientos ptimos en la produccin de etanol.

Los valores de etanol alcanzados en los jarabes suplementados y sin suplementar de papa
son superiores a los reportados por Sossa et al. [12] quienes evaluaron un sistema
discontinuo secuencial compuesto por clulas deBacillus licheniformis para la hidrlisis de
almidn de papa y Saccharomyces cerevisiae para la produccin de etanol a partir del

hidrolizado, obteniendo porcentajes bajos de etanol 0,47 y 0,74%v, tanto en clulas libres
como inmovilizadas, respectivamente. En otras investigaciones realizadas con almidn de
yuca se reportan valores de 44,4 y 66g/L de etanol empleando -amilasas y glucoamilasas
en la hidrlisis enzimtica en un proceso de sacarificacin fermentacin [13]. En la
Universidad Nacional de Colombia, Monsalve et al. [14], obtuvo etanol a partir de cscaras
de banano y almidn de yuca mediante hidrlisis cida con cido sulfrico y fermentacin
con Saccharomyces cerevisiae y Zymomonas mobilis con concentraciones cercanas al 8%v
de etanol. Por otra parte, en una investigacin realizada por Tejeda et al. [15] para la
produccin de etanol a partir de la fermentacin alcohlica de jarabes glucosados derivados
de cscaras de naranja y pia empleando hidrlisis qumica con cido sulfrico al 5%v y
temperatura de 120C logran obtener 13,98g/L de etanol en cscaras de naranja y 1,22g/L
de etanol en cscaras de pia. Estos valores son inferiores respecto a los obtenidos en esta
investigacin empleando hidrlisis cida con cido clorhdrico diluido a bajas temperaturas
Diseo experimental
Dentro de los efectos principales al estudiar los resultados en el software (Tabla 4), se
encontr que no existen diferencias significativas (p0,05) en la produccin de etanol (g/L)
utilizando como sustratos fermentativos los jarabes obtenidos despus de un proceso de
hidrlisis de los residuos de papa, yuca, naranja y una mezcla entre ellos, por lo que al
utilizar cualquiera de stos se pueden encontrar resultados similares en los rendimientos de
etanol. Tampoco se encontraron diferencias significativas (p0,05), en la produccin de
etanol (g/L) a partir de los jarabes estudiados utilizando como microorganismos
fermentadores una cepa de Sacharomyces cerevisiae (cepa CTL) y una cepa nativa
de Sacharomyces cerevisiae (cepa LYP). Lo que indica que en condiciones iguales de
operacin la cepa LYP y la cepa CTL tienen la misma capacidad de produccin de etanol.

Sin embargo, al estudiar las interacciones entre las variables evaluadas, el tipo de sustrato
fermentativo y el tipo de microorganismo fermentador, se encuentran que existen
diferencias altamente significativas (p0,05) con respecto a la produccin de etanol (g/L),
ya que la capacidad fermentativa de las cepas LYP y CTL, en cada uno de los cuatro jarabes
de fermentacin (papa, yuca, naranja y mezcla) es diferente. Se observ que el mejor
comportamiento de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes de naranja y yuca
respectivamente, con valores de 25,05 y 20,65g/L en la produccin de etanol. El
comportamiento ms desfavorable de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes mezcla y
naranja, con valores de 19g/L cada una en la produccin de etanol, (ver Figura 2). Cabe
resaltar que la cepa control (CTL) present mejores resultados en tres de los cuatros
sustratos evaluados frente a la cepa nativa (LYP) que solo present resultados superiores
en el sustrato de jarabe de naranja. Los valores graficados son promedios de los resultados
obtenidos.

Determinacin de parmetros cinticos


Las cinticas realizadas para los jarabes muestran que el consumo de azcares reductores
en algunos casos fue deficiente respecto al crecimiento reportado de las levaduras. La
Figura 3a y 3c seala la inhibicin por sustrato que sufrieron los microorganismos,
atribuible a la poca disponibilidad de azcares que presentaron los sustratos y
probablemente a ciertos productos de degradacin de azcares, de degradacin de la
lignina, componentes derivados de la estructura lignocelulsica y por ltimo iones de
metales pesados que se pueden dar en una hidrlisis qumica [16,17], por lo tanto, la
produccin de biomasa como la de etanol iba estar directamente afectada, como lo
reportaron Fonseca et al. [18], los cuales postulan que el anlisis de etanol en las muestras
hidrolizadas tiene una relacin directa con los azcares presentes en el medio. Lo anterior
gener que el medio tuviese que suplementarse con glucosa de tal forma que se pudiese
evitar este tipo de inhibiciones. La Figura 4, muestra la relacin entre las principales
variables, la concentracin de biomasa, azcares reductores totales y etanol producido
durante las 30 horas de proceso en las fermentaciones en las que se suplement con
glucosa. Se observ que el consumo de sustrato por el microorganismo y produccin de
biomasa es directamente proporcional al tiempo de proceso. La mayor concentracin de
biomasa alcanzada para las cepas LYP y CTL Fue de 5,78 y 7,2g/L, respectivamente, en el
jarabe mezcla.
Los parmetros cinticos fueron determinados en las fermentaciones en las que los medios
fueron suplementados con glucosa y los valores obtenidos se encuentran en la Tabla 5. Los
rendimientos de biomasa con respecto al sustrato son bajos puesto que lo que se deseaba
era que la levadura utilizara el sustrato para la produccin de metabolitos primarios y no
para su crecimiento. Los rendimientos de biomasa ms altos se encontraron en el jarabe
mezcla para las dos cepas, 0,115 y 0,116, en esta fermentacin la fase exponencial fue
ms larga agotando el sustrato disponible para la fermentacin. Los valores de
rendimientos de producto obtenidos de acuerdo con Boudarel [19] se encuentran dentro de
los rangos de rendimientos experimentales los cuales varan entre 90 y 95% del terico, es
decir, de 0,469 a 0,485. Los rendimientos en la industria varan entre 87 y 93% del
rendimiento terico.

Para evaluar la bioconversin de la glucosa en etanol se aprecia que el mayor rendimiento


observado para las cepas LYP y CTL se present en la fermentacin con jarabe de naranja y
jarabe de papa respectivamente (0,475 y 0,49) y los rendimientos ms bajos se
presentaron en el jarabe de papa para la cepa nativa y en el jarabe de naranja para la cepa
control. Los valores obtenidos en este trabajo son inferiores a los reportados por
Gonzales et at. [3] quienes mediante la hidrlisis enzimtica para el almidn de papa y
adicin de un promotor en una concentracin de 0,2mg/kg de sustrato hidrolizado,
obtuvieron un rendimiento de etanol del 0,5. Sin embargo, los resultados obtenidos son
superiores frente al estudio realizado por Castao et al. [13], en donde utilizando procesos
de sacarificacin-fermentacin simultneos (SSF) mediante hidrlisis enzimtica obtuvieron
rendimientos de 0,41 y una productividad de 1,02g/L.h. Finalmente, se observ que a
medida que las velocidades especficas de crecimiento disminuyen se observa un aumento
en la productividad de etanol y por tanto en la eficiencia de la fermentacin, esto es debido
a que el microorganismo est metabolizando los azcares liberados en el proceso de
hidrlisis por la va fermentativa para la produccin del metabolito de inters y no est
utilizando el sustrato para su crecimiento.

Conclusiones
En el anlisis estadstico realizado arroj que para determinar las condiciones de operacin
de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en cuenta variables como: temperatura,
tiempo y concentracin de cido, ya que dentro de los efectos principales se encontr que
estas variables generan un efecto estadstico significativo (p0,05) sobre la generacin de
azcares reductores. El estado de descomposicin de los residuos hacen que la cantidad de
azcares fermentables disponibles sea muy baja para utilizarlos como sustratos de
fermentacin en la produccin de etanol, lo que hace necesario su suplementacin con otra
fuente de carbono como glucosa u otro residuo agroindustrial rico en azcares fermentables
para obtener mejores rendimientos en la produccin de este metabolito.
Sin embargo, cabe mencionar que los valores de Yp/s obtenidos indican que existi un buen
nivel de aprovechamiento del sustrato por parte del microorganismo. En general, la
produccin de etanol a partir de los sustratos es menor, frente a otras investigaciones en la
produccin de etanol de primera generacin.
El anlisis estadstico realizado para el proceso hidroltico indic que para determinar las
condiciones de operacin de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en cuenta
variables como: temperatura, tiempo y concentracin de cido, ya que dentro de los
efectos principales se encontr que estas variables generan un efecto estadstico altamente
significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores.
El estado de descomposicin de los residuos hacen que la cantidad de azcares
fermentables disponibles sea muy baja para utilizarlos como sustratos de fermentacin en
la produccin de etanol, lo que hace necesario su suplementacin con otra fuente de
carbono como glucosa u otro residuo rico en azcares fermentables para obtener mejores
rendimientos en la produccin de este metabolito. Sin embargo, cabe mencionar que los

valores de Yp/sobtenidos indican que existi un alto grado de aprovechamiento del sustrato
por parte del microorganismo.
En general, la produccin de etanol a partir de los sustratos evaluados es mayor, frente a
otras investigaciones en la produccin de etanol de segunda generacin en las cuales se
emplea como pre-tratamiento la hidrlisis qumica [15], pero menor frente a las cuales la
hidrlisis es de carcter enzimtico [13]. No obstante, aunque en la actualidad no se pueda
reemplazar del todo el uso de los cultivos energticos si se puede pensar en disminuir su
uso, buscando otras fuentes que se puedan incluir en los procesos productivos y ser
utilizados a la par; es all donde esta investigacin permite dilucidar dos beneficios
potenciales: el disminuir hasta en un 1% el uso de azcares provenientes de cultivos para
consumo humano como maz, remolacha y caa de azcar haciendo uso de residuos que
adems de aportar una pequea cantidad de azcar, hace un gran aporte a la problemtica
medio ambiental ya que al ser aprovechados generan un valor agregado y se disminuye la
acumulacin excesiva de los mismos en rellenos sanitarios donde su manejo inapropiado
puede repercutir en el detrimento medio ambiental.
Los residuos orgnicos siempre van a estar presentes tanto en la cadena productiva como
en la alimentaria de las sociedades, convirtindolos en materia prima con potencial para la
produccin de energa de tipo renovable en forma de etanol, puesto que no tienen costo
alguno y no compite con el suelo para la produccin de alimentos. Dado que las
concentraciones de alcohol alcanzadas no son competitivas frente a las obtenidas
industrialmente a partir de sustratos tradicionales es imprescindible continuar investigando
acerca del tema especficamente en las etapas de tratamiento de los residuos, que
permitan mejorar los rendimientos en la liberacin de azcares simples para ser sometidos
a fermentaciones alcohlicas con el objetivo de producir etanol.

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Inicio > Vol. 28, nm. 1 (2015) > Quintero Mora

Evaluacin de residuos de papa, yuca y naranja


para la produccin de etanol en cultivo discontinuo
utilizando Saccharomyces cerevisiae
Leidy Patricia Quintero Mora*; Yenis Martnez Castilla; Josman Andrey Velasco
Mendoza; Ashly Arvalo
Rodrguez; Yaneth Amparo Muoz; Nstor Andrs Urbina Suarez
Universidad Francisco de Paula Santander (UFPS), Avenida Gran Colombia No. 12E-96,
Ccuta, Colombia.
*
Patriciaquintero@hotmail.com
Fecha Recepcin: 16 de julio de 2014
Fecha Aceptacin: 25 de enero de 2015

Resumen

El presente trabajo de investigacin tuvo como objetivo producir etanol utilizando un


jarabe glucosado elaborado a partir de residuos de papa, naranja y yuca, por cultivo
discontinuo como una alternativa para el manejo de los residuos generados. Para
cumplir con el objetivo planteado se utilizaron cepas Saccharomyces cerevisiae, una
cepa nativa (LYP) y una cepa control (CTL) obtenida del Cepario de la Universidad.
Posteriormente, para la elaboracin de los medios de fermentacin los residuos se
sometieron a un tratamiento de hidrlisis qumica con cido clorhdrico al 2%v,
temperatura de 75C y 8 horas, estos parmetros fueron seleccionados como resultado
del anlisis estadstico del diseo factorial 33 el cual encontr diferencias
estadsticamente significativas (p0,05) en las variables evaluadas sobre la generacin
de azucares reductores. Finalmente, se realizaron fermentaciones de 500ml a 30C
150rpm con base en un diseo factorial 42 para la evaluacin de los sustratos
fermentativos y el microorganismo fermentador, en donde se encontr que no existen
diferencias significativas (p0,05) tanto para los sustratos como para las cepas:
control (CTL) y nativa (LYP), en la produccin de etanol. Sin embargo, en las
interacciones entre variables si se encontraron diferencias altamente significativas
(p0,05), la mayor produccin de etanol obtenido fue de 3,15 y 2,6%v para la cepa
LYP y CLT, respectivamente, cuando se emplearon los jarabes de naranja y yuca como
fuente de carbono.
Palabras clave: Hidrlisis qumica, etanol, residuos agroindustriales.

Evaluation of ethanol production from potato, cassava and


orange
wastage in discontinuos cultivation using Saccharomyces
cerevisiae
Abstract
The present research aimed to produce ethanol using glucose syrup made from potato,
orange and cassava wastage, using discontinuos cultivation as an alternative to handle
the wastage generated. In order to meet the main objective two strains
of Saccharomyces cerevisiae were used, a native strain (LYP) and control strain (CTL)
obtained from the strain stock of the University. Subsequently, for the preparation of
the fermentation mediums, the wastage was subjected to a chemical hydrolysis
treatment with hydrochloric acid 2%v, at a temperature of 75C for 8 hours, these
parameters were selected as a result of statistical analysis of the factorial design
33 which throws statistically significant differences (p0.05) in the variables evaluated
on the generation of reducing sugars. Finally, 500ml fermentations were performed at
30C, 150rpm based in a factorial design 42in order to evaluate the fermentative
substrates and fermenting microorganism, where no significant differences were found
(p0.05), for both substrates and strains: (CTL) and (LYP), in ethanol production.
However, regarding the interactions between the variables, some highly significant
differences were found (p0.05), the highest production of ethanol obtained was 3.15

and 2.6% for strains LYP and CLT respectively, when they used the orange syrup and
cassava as carbon source.
Keywords: chemical Hydrolysis, ethanol, waste.

Avaliao dos resduos de batata, mandioca e


laranja para a produo de etanol em cultivo
lote usando Saccharomyces cerevisiae
Resumo
A presente pesquisa teve como objetivo produzir bioetanol utilizando um xarope de
glicose feita a partir de residuos de batatas, laranjas e mandioca, para o cultivo de
lote, como uma alternativa para a gesto dos resduos gerados. A cepa nativa de
Saccharomyces cerevisiae, e uma estirpe de controle obtido a partir da coleo de
cultura da Universidade foi usado para atingir o objetivo. Em seguida, para a
preparao de meios de fermentao de resduos foi usada uma hidrlise qumica
utilizando cido clordrico 2%v, 75C e 8 horas, estes parmetros foram seleccionados
como um resultado da anlise estatstica planejamento experimental 33,apresentando
uma diferena estatisticamente significativas (p0,05) nas variveis avaliadas na
gerao de acares redutores. Finalmente fermentaes 500ml foram realizados a
30C 150rpm com base em um planejamento fatorial 42 para avaliao de substratos
de fermentao e fermentao do microorganismo, onde no foran encontradas
diferenas significativas (p0,05) para ambos os substratos como para as estirpes:
controle (CTL) e nativos (LYP) na produo de etanol. No entanto interaes entre as
variveis se diferenas significativas (p 0,05), aumento da produo de etanol obtida
foi encontrado 3,15 e 2,6%v para tenso LYP e CLT, respectivamente, quando utilizado
laranja e mandioca como fonte de carbono.
Palabras-chave: Hidrlise qumica, etanol, resduos agro-industrial.

Cita: Quintero Mora LP, Martnez Castilla Y, Velasco Mendoza JA, Arvalo Rodrguez A,
Muoz YA, Urbina Suarez NA. Evaluacin de residuos de papa, yuca y naranja para la
produccin de etanol en cultivo discontinuo utilizando Saccharomyces cerevisiae.
rev.ion. 2015;28(1):43-53.

Introduccin
A nivel mundial, la preocupacin por el aprovechamiento de residuos ha tomado gran
fuerza entre la comunidad cientfica y sobre todo a nivel industrial, en donde los
procesos de transformacin generan subproductos que pueden ser tiles en otras
actividades. De hecho, estudios recientes han demostrado que las cscaras de frutas

como la naranja contienen antioxidantes que podran tener un efecto benfico en la


salud humana [1]. Sin embargo, los residuos generados en las transformaciones
agroindustriales y por las prdidas pos-cosecha en Colombia an no han sido
aprovechados eficientemente, en parte, porque su valor es an desconocido y,
sobretodo, por la falta de mtodos apropiados para la preparacin y caracterizacin de
sustancias con la suficiente calidad e inocuidad como para ser usadas en los procesos
de mayor valor agregado [2].
Actualmente, el desarrollo de los recursos energticos tiene fuertes implicaciones en la
economa de los pases y est estrechamente vinculado con el ambiente por el impacto
negativo que genera sobre ste, lo cual hace necesario desarrollar acciones que en
forma conjunta contribuyan a su solucin. La generacin de alternativas energticas
distintas a las convencionales obtenidas principalmente de la explotacin del petrleo,
ha conllevado al uso de materias primas naturales dando lugar a los llamados
biocombustibles dentro de los cuales se destaca el bioetanol.
El etanol es considerado un recurso energtico sostenible, puesto que ofrece diversas
ventajas sobre los derivados del petrleo, como son: la disminucin en la produccin
de gases invernadero, disminucin del costo del combustible, mayor seguridad
energtica y apoyo a producciones agrcolas. ste se obtiene a partir de
microorganismos, los cuales realizan la fermentacin de azcares que se encuentran
en productos vegetales, que pueden provenir de subproductos de grandes procesos
industriales, para la produccin del azcar como la melaza. Emplear estos
subproductos, como sustratos para ser fermentados y obtener etanol, generan una
oportunidad importante en el desarrollo de nuevas formas de energa renovable y en
los cuales se encuentre un desarrollo sostenible con el medio ambiente [3].
Para satisfacer plenamente la demanda de etanol como alcohol carburante a nivel
mundial, se han desarrollado diferentes metodologas durante las dos ltimas dcadas
y se han empleado diferentes sustratos no convencionales como materia prima para su
produccin, entre ellos los ms competitivos son la caa de azcar y el maz, debido a
que a partir de estos sustratos agroindustriales se logran alcanzar excelentes
rendimientos; pero para abarcar y satisfacer la demanda actual de este combustible se
requiere ampliar la cobertura de los cultivos y/o sustratos destinados para tal fin [4]
La bsqueda de alternativas en la produccin de etanol a partir de materias primas no
tradicionales, es necesaria debido al aumento de la produccin del mismo en el mundo,
el cual ha estado a la par con el desarrollo de nuevas tecnologas que permiten obtener
alcohol a partir de residuos de: madera, desechos slidos y todos los materiales que
contengan celulosa y hemicelulosa, lo que permite revalorizar los residuos de varias
industrias convirtindolos en materia prima para la obtencin de etanol [5].
La importancia de trabajar con residuos orgnicos radica en que la produccin actual
de bioetanol es a travs de cultivos energticos los cuales deberan destinarse para el
consumo humano, como por ejemplo los cultivos de caa y maz. Los residuos
orgnicos que se emplearon para la produccin de este biocombustible en esta
investigacin no representa la posibilidad de disminuir un alimento til para el ser
humano que afecte su alimentacin, ya que por el contrario estos estn generando un
problema ambiental en la central de abastos.

Actualmente, parte de los residuos orgnicos generados en la Central de Abastos de la


ciudad de Ccuta, se encuentran en estado de descomposicin, unos en mayor grado
que otros. Un pequeo porcentaje de los mismos son tratados en una planta de
compostaje dentro de la central, el resto son llevados directamente al relleno sanitario
desaprovechando el posible uso que se le podra dar a estos residuos. La presente
investigacin surge con el objetivo de evaluar el potencial que pueden tener los
residuos orgnicos, tales como: cscaras de naranja, desechos de papa y yuca de la
central de abastos de la ciudad de Ccuta, para la produccin de etanol como
biocombustible, a partir de los cuales se pueden obtener jarabes mediante hidrlisis
qumica para ser utilizados como sustratos en procesos fermentativos utilizando un
cepa nativa de Saccharomyces cerevisiae como microorganismo fermentador,
generando de esta manera un valor agregado para los mismos y contribuyendo as en
la bsqueda de nuevas materias primas que sustituyan a las tradicionales materias
azucaradas para tal fin.

Metodologa experimental
Microorganismo
Se utiliz una cepa nativa de Saccharomyces cerevisiae (LPY) aislada de una bebida
artesanal fermentada del municipio de Durania, Norte de Santander, en un trabajo de
investigacin previo por Arvalo [6]. Como control se utiliz una cepa
de Saccharomyces cerevisiae (CTL) del cepario del Centro de Investigaciones Agrarias
y Ambientales, de la Universidad Francisco de Paula Santander. Las cuales fueron
incubadas a 28 +/- 2C durante 3 das en agar Sabouraud para su activacin.
Residuos Orgnicos
Las muestras de los residuos de papa, yuca y naranja fueron tomadas al azar de la
central de abastos de la ciudad de Ccuta CENABASTOS PROPIEDAD HORIZONTAL,
especficamente de las bodegas de mayoristas que comercializan estos productos, lo
cual facilit su recoleccin. Posteriormente estos fueron lavados y secados a 85C
durante 2 horas. Finalizado el tiempo de secado, los residuos fueron molidos y
tamizados con una malla #60, obteniendo las harinas usadas para la elaboracin de los
diferentes medios de fermentacin.
Hidrlisis qumica
Para determinar las parmetros de hidrlisis llev a cabo un diseo factorial 33 con tres
concentraciones cido clorhdrico (2, 3, 4%v) temperatura (45, 60, 75C) y tiempo de
accin (20, 30 y 45 minutos) donde se tuvo como variable de respuesta la
concentracin de azcares reductores liberados, los cuales fueron determinados
mediante tcnicas colorimtricas utilizando el reactivo 3,5-cido dinitrosalicilico (DNS)
[7]. Para el proceso de hidrlisis se prepar una solucin de harina con una
concentracin de 100 g/L en agua destilada [8], con la harina obtenida a partir de cada
residuo en el pre-tratamiento, posteriormente se adicion el cido clorhdrico relacin
1:1, mililitros de solucin de harina de papa o yuca- mililitros de cido. En el caso de la

harina de naranja la solucin se realiz directamente en cido. Las soluciones se


llevaron a un bao mara durante el tiempo establecido en el diseo factorial. Las
soluciones se filtraron con papel filtro y al jarabe obtenido se le ajust el pH entre 44,5 con NaOH 5N para posteriormente preparar el medio de fermentacin.
Medio de fermentacin
Como sustrato y fuente de carbono se utiliz el hidrolizado obtenido de cada tipo de
residuo (papa, yuca y naranja), el pH fue ajustado a 4,5 0,2 con NaOH 5N, el medio
fermentativo fue suplementado con urea, Fosfato diamnico (DAP), MgSO4.7H2O en
concentraciones de 700ppm, 571ppm, 1g/L, respectivamente. Los azcares fueron
ajustados a un valor correspondiente al 5% suplementando el medio con glucosa.
Fermentacin
La preparacin del inculo se realiz a partir de un cultivo joven de la levadura, para
esto se prepar una suspensin celular en solucin salina 8,5g/L estril hasta obtener
una turbidez igual al patrn 5 de McFarland. Posteriormente, se inocul en cada medio
fermentativo a base de los residuos a evaluar (papa, yuca, naranja y la mezcla entre
ellos), se dej incubando 24 horas, a una temperatura de 30C, 150rpm y pH de 4,5.
La fermentacin alcohlica para cada unidad experimental se llev a cabo en un
reactor con un volumen efectivo de trabajo de 500mL. El proceso se realiz a una
temperatura de 28C + 2C, 150rpm y pH entre 4,5 - 5.
Diseo experimental
La Tabla 1 describe el diseo factorial 42 para los ensayos de fermentacin con dos
repeticiones para un total de 16 experimentos, con la finalidad de evaluar no solo el
sustrato de fermentacin sino el microorganismo fermentador, para lo cual se utiliz
cepa nativa de Saccharomyces cerevisiaey una cepa control de Saccharomyces
cerevisiae obtenida del Banco de Cepas de la Universidad Francisco de Paula
Santander. Para ello se tuvo como variable de respuesta la concentracin de etanol
producido, el cual fue determinado mediante la tcnica de dicromato de potasio que se
fundamenta en la reaccin con el carbono presente en el etanol [9].

Anlisis estadstico
El anlisis estadstico de los resultados obtenidos en las etapas de hidrlisis qumica y

fermentacin, se llev a cabo mediante un anlisis de varianza multifactorial (ANOVA),


con un nivel de confianza del 95%, en el software STATGRAPHICS centurin XV.II
Seguimiento y determinacin de parmetros cinticos
Para esto se tomaron muestras cada 2 horas para los respectivos anlisis,
determinacin de la concentracin de etanol, concentracin de azcares reductores y la
concentracin de biomasa celular. A partir de los datos obtenidos, se determinaron los
rendimientos observados de biomasa a partir de sustrato (Yx/s) y de producto a partir
de sustrato (Yp/s), as como tambin la velocidad especfica de crecimiento ().

Resultados y Discusin
Hidrlisis qumica
La Tabla 2 relaciona los valores promedios obtenidos en el diseo experimental 33 de
la hidrlisis qumica. Al realizar el anlisis estadstico, dentro de los efectos principales
en el anlisis de varianza multifactorial se encontr que las tres variables:
concentracin de cido, tiempo de accin y temperatura, generan un efecto estadstico
altamente significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores, al igual
que las diferentes interacciones posibles entre las variables estudiadas. Estos
resultados son similares a los reportados por Kim y Hamdy [10] y a los reportados por
Alarcn [11] quienes estudiaron estas tres variables: temperatura (60 y 95C),
concentracin de cido sulfrico (1 y 5%v) y tiempo (1 y 5h), al analizar los datos en
el software Manitab 15.0 se encontraron diferencias estadsticamente significativas
entre los tres factores para el tratamiento del almidn.
El anlisis de varianza simple mostr que para cada una de las variables, el mejor nivel
evaluado fue, la concentracin de 2%v del cido clorhdrico, 75C de temperatura y
tiempo de accin de 30 minutos, puesto que fue en estos niveles donde se evidenci la
mayor liberacin de azcares reductores totales ATR, (ver Tabla 3), por lo que la
estadstica sugera trabajar con dichos niveles como parmetros de hidrlisis.
Durante el proceso de hidrlisis cida adems de producirse azcares fermentables, se
ha reportado que se generan productos de la degradacin de los azcares que inhiben
el metabolismo del microorganismo fermentador, dependiendo de su concentracin,
provocando una produccin deficiente de etanol. Los compuestos inhibidores de
fermentacin obtenidos a partir de los procesos qumicos sobre materiales
lignocelulsicos y almidn, son clasificados en tres grupos: derivados del furano o
furaldehidos como el furfural y el 5-hidroximetilfurfural (5-HMF), cidos orgnicos
como el actico, frmico y levulnico y compuestos fenlicos [12]. As, la cantidad de
dichos productos de degradacin depende tanto de la composicin de la biomasa
tratada, como de las condiciones utilizadas en el pre-tratamiento, como temperatura,
presin, tiempo, pH y adicin de catalizadores. Mientras mayores sean estas variables
se espera mayor generacin de inhibidores. [13]
Sin embargo, al obtener valores medios de (ATR) tan bajos, es posible que no se haya
realizado la hidrlisis completa de las molculas de almidn presente en los residuos,
al encontrarse el valor medio de ATR ms bajo en la variable tiempo, se plante la

prueba del yodo, como una prueba adicional para determinar el tiempo en el que ya no
hubiera accin hidroltica significativa en la obtencin de azcares reductores.

La prueba consisti en preparar una solucin de almidn y someterla a una


temperatura de 75C y una concentracin de cido clorhdrico de 2%v, cada hora se
tom una muestra de aproximadamente 3ml a la cual se le adicionaron 3 gotas de
lugol, posteriormente se observaba el viraje de color, la prueba se detuvo cuando se
observ que no haba viraje significativo en color a negro. Se observ que a partir de la
octava hora de hidrlisis no se observaba un cambio significativo en el viraje del color,
por lo que se tom esta hora como tiempo de finalizacin de la prueba. Finalmente, se
prepar una solucin de almidn y se someti a hidrlisis utilizado 2%v de cido
clorhdrico, temperatura de 75C y tiempo de 8 horas, finalizado dicho tiempo se
obtuvo un aumento en la concentracin de azcares, con un valor de 8,71g/L, lo que

evidencia que el aumento del tiempo de accin favoreci la hidrlisis del almidn.
Finalmente, bajo el criterio de la mayor concentracin de azcares reductores
obtenidos, se seleccionaron las condiciones de operacin para el proceso de hidrlisis
qumica, que fueron cido clorhdrico al 2%v, temperatura de 75C y 8 horas, para
obtener los jarabes usados en la elaboracin del medio de fermentacin, de acuerdo
con los resultados estadsticos obtenidos, revisin bibliogrfica y la prueba de yodo.
Fermentacin
El seguimiento a la produccin de etanol en las fermentaciones con los jarabes
obtenidos, se evidenci que la produccin de etanol es muy baja como se observa en
la Figura 1, y se present hacia las ltimas horas del proceso. Debido a la deficiencia
en la produccin de etanol observada, probablemente a la poca disponibilidad de
azcares reductores se opt por la suplementacin de cada uno de ellos con glucosa
ajustando este requerimiento al 5% del volumen efectivo de la fermentacin. La
produccin de etanol a partir de las cepas utilizadas evidenci que su comportamiento
fue similar en cada uno de los jarabes suplementados (ver Figura 1), obteniendo
como resultado la mayor produccin de este metabolito a partir del sustrato del jarabe
de naranja. Este resultado sugiere que debido al alto grado de descomposicin de los
residuos hacen necesario suplementar los jarabes puesto que la fuente de carbono
obtenida del tratamiento de hidrlisis qumica no es suficiente para obtener
rendimientos ptimos en la produccin de etanol.

Los valores de etanol alcanzados en los jarabes suplementados y sin suplementar de


papa son superiores a los reportados por Sossa et al. [12] quienes evaluaron un
sistema discontinuo secuencial compuesto por clulas de Bacillus licheniformis para la
hidrlisis de almidn de papa ySaccharomyces cerevisiae para la produccin de etanol
a partir del hidrolizado, obteniendo porcentajes bajos de etanol 0,47 y 0,74%v, tanto
en clulas libres como inmovilizadas, respectivamente. En otras investigaciones
realizadas con almidn de yuca se reportan valores de 44,4 y 66g/L de etanol
empleando -amilasas y glucoamilasas en la hidrlisis enzimtica en un proceso de
sacarificacin fermentacin [13]. En la Universidad Nacional de Colombia, Monsalve et
al. [14], obtuvo etanol a partir de cscaras de banano y almidn de yuca mediante
hidrlisis cida con cido sulfrico y fermentacin con Saccharomyces cerevisiae y
Zymomonas mobilis con concentraciones cercanas al 8%v de etanol. Por otra parte, en
una investigacin realizada por Tejeda et al. [15] para la produccin de etanol a partir
de la fermentacin alcohlica de jarabes glucosados derivados de cscaras de naranja
y pia empleando hidrlisis qumica con cido sulfrico al 5%v y temperatura de 120C
logran obtener 13,98g/L de etanol en cscaras de naranja y 1,22g/L de etanol en
cscaras de pia. Estos valores son inferiores respecto a los obtenidos en esta
investigacin empleando hidrlisis cida con cido clorhdrico diluido a bajas
temperaturas

Diseo experimental
Dentro de los efectos principales al estudiar los resultados en el software (Tabla 4), se
encontr que no existen diferencias significativas (p0,05) en la produccin de etanol
(g/L) utilizando como sustratos fermentativos los jarabes obtenidos despus de un
proceso de hidrlisis de los residuos de papa, yuca, naranja y una mezcla entre ellos,
por lo que al utilizar cualquiera de stos se pueden encontrar resultados similares en
los rendimientos de etanol. Tampoco se encontraron diferencias significativas
(p0,05), en la produccin de etanol (g/L) a partir de los jarabes estudiados utilizando
como microorganismos fermentadores una cepa de Sacharomyces cerevisiae (cepa
CTL) y una cepa nativa de Sacharomyces cerevisiae (cepa LYP). Lo que indica que en
condiciones iguales de operacin la cepa LYP y la cepa CTL tienen la misma capacidad
de produccin de etanol.

Sin embargo, al estudiar las interacciones entre las variables evaluadas, el tipo de
sustrato fermentativo y el tipo de microorganismo fermentador, se encuentran que
existen diferencias altamente significativas (p0,05) con respecto a la produccin de
etanol (g/L), ya que la capacidad fermentativa de las cepas LYP y CTL, en cada uno de
los cuatro jarabes de fermentacin (papa, yuca, naranja y mezcla) es diferente. Se
observ que el mejor comportamiento de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes de
naranja y yuca respectivamente, con valores de 25,05 y 20,65g/L en la produccin de
etanol. El comportamiento ms desfavorable de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes
mezcla y naranja, con valores de 19g/L cada una en la produccin de etanol,
(ver Figura 2). Cabe resaltar que la cepa control (CTL) present mejores resultados
en tres de los cuatros sustratos evaluados frente a la cepa nativa (LYP) que solo
present resultados superiores en el sustrato de jarabe de naranja. Los valores
graficados son promedios de los resultados obtenidos.

Determinacin de parmetros cinticos


Las cinticas realizadas para los jarabes muestran que el consumo de azcares
reductores en algunos casos fue deficiente respecto al crecimiento reportado de las
levaduras. La Figura 3a y 3cseala la inhibicin por sustrato que sufrieron los
microorganismos, atribuible a la poca disponibilidad de azcares que presentaron los
sustratos y probablemente a ciertos productos de degradacin de azcares, de
degradacin de la lignina, componentes derivados de la estructura lignocelulsica y por
ltimo iones de metales pesados que se pueden dar en una hidrlisis qumica [16,17],
por lo tanto, la produccin de biomasa como la de etanol iba estar directamente
afectada, como lo reportaron Fonseca et al. [18], los cuales postulan que el anlisis de
etanol en las muestras hidrolizadas tiene una relacin directa con los azcares
presentes en el medio. Lo anterior gener que el medio tuviese que suplementarse con
glucosa de tal forma que se pudiese evitar este tipo de inhibiciones. La Figura 4,
muestra la relacin entre las principales variables, la concentracin de biomasa,
azcares reductores totales y etanol producido durante las 30 horas de proceso en las
fermentaciones en las que se suplement con glucosa. Se observ que el consumo de
sustrato por el microorganismo y produccin de biomasa es directamente proporcional
al tiempo de proceso. La mayor concentracin de biomasa alcanzada para las cepas
LYP y CTL Fue de 5,78 y 7,2g/L, respectivamente, en el jarabe mezcla.
Los parmetros cinticos fueron determinados en las fermentaciones en las que los
medios fueron suplementados con glucosa y los valores obtenidos se encuentran en
la Tabla 5. Los rendimientos de biomasa con respecto al sustrato son bajos puesto
que lo que se deseaba era que la levadura utilizara el sustrato para la produccin de
metabolitos primarios y no para su crecimiento. Los rendimientos de biomasa ms

altos se encontraron en el jarabe mezcla para las dos cepas, 0,115 y 0,116, en esta
fermentacin la fase exponencial fue ms larga agotando el sustrato disponible para la
fermentacin. Los valores de rendimientos de producto obtenidos de acuerdo con
Boudarel [19] se encuentran dentro de los rangos de rendimientos experimentales los
cuales varan entre 90 y 95% del terico, es decir, de 0,469 a 0,485. Los rendimientos
en la industria varan entre 87 y 93% del rendimiento terico.

Para evaluar la bioconversin de la glucosa en etanol se aprecia que el mayor


rendimiento observado para las cepas LYP y CTL se present en la fermentacin con
jarabe de naranja y jarabe de papa respectivamente (0,475 y 0,49) y los rendimientos
ms bajos se presentaron en el jarabe de papa para la cepa nativa y en el jarabe de
naranja para la cepa control. Los valores obtenidos en este trabajo son inferiores a los
reportados por Gonzales et at. [3] quienes mediante la hidrlisis enzimtica para el
almidn de papa y adicin de un promotor en una concentracin de 0,2mg/kg de
sustrato hidrolizado, obtuvieron un rendimiento de etanol del 0,5. Sin embargo, los
resultados obtenidos son superiores frente al estudio realizado por Castao et al. [13],
en donde utilizando procesos de sacarificacin-fermentacin simultneos (SSF)
mediante hidrlisis enzimtica obtuvieron rendimientos de 0,41 y una productividad de
1,02g/L.h. Finalmente, se observ que a medida que las velocidades especficas de

crecimiento disminuyen se observa un aumento en la productividad de etanol y por


tanto en la eficiencia de la fermentacin, esto es debido a que el microorganismo est
metabolizando los azcares liberados en el proceso de hidrlisis por la va fermentativa
para la produccin del metabolito de inters y no est utilizando el sustrato para su
crecimiento.

Conclusiones
En el anlisis estadstico realizado arroj que para determinar las condiciones de
operacin de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en cuenta variables como:
temperatura, tiempo y concentracin de cido, ya que dentro de los efectos principales
se encontr que estas variables generan un efecto estadstico significativo (p0,05)
sobre la generacin de azcares reductores. El estado de descomposicin de los
residuos hacen que la cantidad de azcares fermentables disponibles sea muy baja
para utilizarlos como sustratos de fermentacin en la produccin de etanol, lo que hace
necesario su suplementacin con otra fuente de carbono como glucosa u otro residuo
agroindustrial rico en azcares fermentables para obtener mejores rendimientos en la
produccin de este metabolito.
Sin embargo, cabe mencionar que los valores de Yp/s obtenidos indican que existi un
buen nivel de aprovechamiento del sustrato por parte del microorganismo. En general,
la produccin de etanol a partir de los sustratos es menor, frente a otras
investigaciones en la produccin de etanol de primera generacin.
El anlisis estadstico realizado para el proceso hidroltico indic que para determinar
las condiciones de operacin de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en
cuenta variables como: temperatura, tiempo y concentracin de cido, ya que dentro
de los efectos principales se encontr que estas variables generan un efecto estadstico
altamente significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores.
El estado de descomposicin de los residuos hacen que la cantidad de azcares
fermentables disponibles sea muy baja para utilizarlos como sustratos de fermentacin
en la produccin de etanol, lo que hace necesario su suplementacin con otra fuente
de carbono como glucosa u otro residuo rico en azcares fermentables para obtener
mejores rendimientos en la produccin de este metabolito. Sin embargo, cabe
mencionar que los valores de Yp/s obtenidos indican que existi un alto grado de
aprovechamiento del sustrato por parte del microorganismo.
En general, la produccin de etanol a partir de los sustratos evaluados es mayor, frente
a otras investigaciones en la produccin de etanol de segunda generacin en las cuales
se emplea como pre-tratamiento la hidrlisis qumica [15], pero menor frente a las
cuales la hidrlisis es de carcter enzimtico [13]. No obstante, aunque en la
actualidad no se pueda reemplazar del todo el uso de los cultivos energticos si se
puede pensar en disminuir su uso, buscando otras fuentes que se puedan incluir en los
procesos productivos y ser utilizados a la par; es all donde esta investigacin permite
dilucidar dos beneficios potenciales: el disminuir hasta en un 1% el uso de azcares
provenientes de cultivos para consumo humano como maz, remolacha y caa de
azcar haciendo uso de residuos que adems de aportar una pequea cantidad de

azcar, hace un gran aporte a la problemtica medio ambiental ya que al ser


aprovechados generan un valor agregado y se disminuye la acumulacin excesiva de
los mismos en rellenos sanitarios donde su manejo inapropiado puede repercutir en el
detrimento medio ambiental.
Los residuos orgnicos siempre van a estar presentes tanto en la cadena productiva
como en la alimentaria de las sociedades, convirtindolos en materia prima con
potencial para la produccin de energa de tipo renovable en forma de etanol, puesto
que no tienen costo alguno y no compite con el suelo para la produccin de alimentos.
Dado que las concentraciones de alcohol alcanzadas no son competitivas frente a las
obtenidas industrialmente a partir de sustratos tradicionales es imprescindible
continuar investigando acerca del tema especficamente en las etapas de tratamiento
de los residuos, que permitan mejorar los rendimientos en la liberacin de azcares
simples para ser sometidos a fermentaciones alcohlicas con el objetivo de producir
etanol.

Referencias bibliogrficas
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