INTRODUCCION AL

METABOLISMO
FINALIDADES:
1.- Obtencin de energa qumica de de la luz solar absorbida
2.- Conversin de principios nutritivos exgenos
3.- Ensamblaje para formar proteinas , AN y otros componentes
celulares
4.- Formacin y degradacin de biomolculas para funciones
celulares

RUTAS CATABOLICAS Y
ANABOLICAS

Catabolismo:

Fase degradativa
Molculas complejas se degradan en molculas ms
sencillas
Va acompaado de liberacin de energa qumica
ATP

Anabolismo:

Fase biosinttica
Biosntesis enzimtica de AN , proteinas , lpidos ,
Hidratos de carbono a partir de precursores
Necesita consumo de energa qumica aportada por el
ATP generado del catabolismo

La separacin entre anabolismo y

catabolismo es puramente formal
fisiologicamente ambas se desarrollan
simultneamente en el tiempo y en el
espacio, pero se regulan de forma
independiente.
Los productos intermedios del
metabolismo se llaman metabolitos

FASES DEL METABOLISMO:

Fase I grandes molculas se degradanpolisacridos en hexosas lpidos en cidos
grasos proteinas en AA
Fase II los productos anteriores se convierten
en intermediarios ms sencillos hexosas
ac.piruvico Acetil CoA - Ac.grasos y AA en
Acetil CoA
Fase III ruta catabolica final oxidacin a
dixido de carbono y agua.

LA BIOSINTESIS:
Fase III : genera moleculas precursoras
que en
Fase II : se convierten en moleculas
sillares
Fase III : ensamblan las moleculas de
fase II para construir macromoleculas.
La biosintesis comienza en faseIII
formando oxoacidos- AA proteinas
(Fase I)

LAS RUTAS CATABOLICAS Y

ANABOLICAS
NO SON INVERSAS Ventajas: controladas por Enzimas diferentes
Fase III punto central del catabolismo y
anabolismo
RUTA CENTRAL DOBLE FUNCION PUEDE
USARSE COMO VIA CATABOLICA O COMO
VIA ANABOLICA (ANFIBOLICA)

Metodos de estudio:
1.-Aislamiento y caracterizacion de E
2.-Mutantes auxotrofos (viven gracias a
nutrientes medios) orden de la ruta
3.- Uso de isotopos son inestables y
emiten particulas

 CLASIFICACION DE ORGANISMOS
1.-Aceptores de electrones:
aerobios aceptor el oxigeno
anaerobios aceptor nitrato (N2) , sulfato
(SH2) o CO2 (metano)
2.-Fuente de carbono:
autotrofos utilizan CO2 como fuente de
carbono (plantas algas etc)
heterotrofos utilizan compuestos organicos

3.-Fuente de energia:
Fototrofos energia de la luz
Quimiotrofos energia sustancia quimica
litotrofos oxidacion sust.inorganicas
organotrofos energia sust.organicas

CICLO ENERGETICO EN LAS CELULAS

Oxidacion glucosa genera perdida de
energia libre (trabajo a t y p constantes)
La energia perdida pasa a energia de
enlace (ATP) o energia redox
(NADH/FADH2)

CICLOS DE CARBONO-NITROGENOOXIGENO
Celulas fotosinteticas compuestos
organicos a partir de CO2 y agua
Celulas heterotrofa utilizan compues
tos organicos oxidandolos a CO2
Acompana esto el consumo de oxigeno
producido por los primeros y usado por
los segundos

Nitrogeno: se encuentra en proteinas

acidos nucleicos y otras biomoleculas
Vegetales lo obtienen del suelo como
nitrato lo reduce a NH3 AA y otros.
Asi se producen proteinas .
Los heterotrofos los utilizan y devuelven el nitrogeno al suelo

BIOQUMICA

Enzimologa

Enzimologa

Generalidades.
Clasificacin.
Modo de accin de las enzimas.
Cintica de las reacciones simples catalizadas
por enzimas. Ecuacin de Michaelis-Menten.
Actividad enzimtica. Unidades. Cuantificacin
de la actividad enzimtica.
Coenzimas.
Factores que afectan la cintica enzimtica.
Inhibidores enzimticos.
Regulacin de la catlisis enzimtica.

Las enzimas son protenas altamente especializadas

que tienen como funcin la catlisis o regulacin de la
velocidad de las reacciones qumicas que se llevan a
cabo en los seres vivos.

E+S

[ES]

E+P

Las enzimas son protenas* que catalizan

reacciones qumicas

No hacen factibles las reacciones imposibles

Son sustancias que, sin consumirse en una reaccin,
aumentan notablemente su velocidad.
Ello hace posible que en condiciones fisiolgicas
tengan lugar reacciones que sin catalizador
requeriran condiciones extremas de presin,
temperatura o pH.
Prcticamente todas las reacciones qumicas que
tienen lugar en los seres vivos estn catalizadas por
enzimas.

* En su mayora son protenas, hay ARN con capacidad cataltica

(ribozimas)

Aspectos generales de las enzimas

Las enzimas son catalizadores

especficos: cada enzima cataliza un
solo tipo de reaccin, y casi siempre
acta sobre
un nico sustrato o
un grupo muy reducido de ellos.

Sustrato: sustancia sobre la que acta la enzima

Reaccin catalizada por una enzima:

centro activo regin concreta de la enzima donde el sustrato se une

Enzima y su
sustrato

E+S

Unin al centro
activo

ES

Formacin de
productos

Complejo enzima-sustrato

E + P

El centro activo comprende

un sitio de unin formado por los

aminocidos que estn en contacto
directo con el sustrato y
un sitio cataltico, formado por los
aminocidos directamente implicados
en el mecanismo de la reaccin

El sustrato se une a la enzima luego se inicia la catlisis

Sitio de unin: es el que le da la especificidad a la enzima

Sitio
cataltico

Nomenclatura
Hay varias formas de nombrar una
enzima:
nombres particulares
nombre sistemtico
cdigo de la comisin enzimtica
(enzyme comission)

Nomenclatura:
nombres particulares

Antiguamente, los enzimas reciban nombres

particulares, asignados por su descubridor.
Ejemplos:

amilasa (hidrolisa el almidn)

glucoquinasa
Glc + ATP Glc-6P + ADP

Al ir aumentando el nmero de enzimas conocidos,

se hizo necesaria una nomenclatura sistemtica que
informara sobre la accin especfica de cada enzima
y los sustratos sobre los que actuaba.

Nomenclatura:
nombre sistemtico
Consta actualmente de 3 partes:
el sustrato preferente
el tipo de reaccin realizado
terminacin "asa"
ejemplo: la glucoquinasa
ATP:glucosa fosfo transferasa
Glc + ATP Glc-6P + ADP

Nomenclatura:
Comisin de Enzimas
El nombre es identificado por un cdigo numrico:

encabezado por las letras EC (enzyme commission)

seguidas de cuatro nmeros separados por puntos.

el primer nmero indica a cual de las seis clases
pertenece la enzima,
el segundo se refiere a distintas subclases dentro de
cada grupo,
el tercero y el cuarto se refieren a los grupos
qumicos especficos que intervienen en la reaccin.

Nomenclatura:
Comisin de Enzimas
Ej.: la ATP:glucosa fosfotransferasa
(glucoquinasa)
Glc + ATP Glc-6P + ADP
EC 2.7.1.2.
2: transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa el que acepta
el grupo fosfato.

Nomenclatura:
Comisin de Enzimas

Clases
1.
2.
3.
4.
5.
6.

xido-reductasas
Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas
Ligasas

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de transferencia de hidrgeno
(H) o electrones (e-) de un sustrato a otro
AH2 + B

Ared + Box

A + BH2

Aox + Bred

Clase 2: TRANSFERASAS

Catalizan la transferencia de un grupo qumico

(distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro

A-B +

A + C-B

Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis

A-B

H2O

AH + B-OH

Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o unin de sustratos

A-B

A + B

Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros
A

Fosfoglucosa isomerasa

EC 5.

Clase 6: LIGASAS

Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis

simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.)

A + B + XTP

A-B + XDP + Pi

Comisin de Enzimas
pgina web
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/

MODO DE ACCIN DE LAS

ENZIMAS
H2O2

Perfil energtico de una

reaccin espontnea

H2 O

O2

Perfil energtico de una

reaccin catalizada

MODO DE
ACCIN DE
LAS ENZIMAS

La accin de los catalizadores consiste en disminuir la

Energa de activacin

Las enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que

disminuyen la Ea an ms que los catalizadores inorgnicos.

Por ej, la descomposicin del agua oxigenada (H2O2) puede

ocurrir
sin catalizador
Ea= 18 Kcal/mol
con un catalizador inorgnico (platino) Ea= 12 Kcal/mol
con una enzima especfico (catalasa) Ea= 6 Kcal/mol

As, se puede calcular que el platino acelera la reaccin 20.000

veces, mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces.

MODO DE
ACCIN DE LAS
ENZIMAS
Para que una reaccin qumica tenga lugar, las
molculas de los reactantes deben
chocar con una energa y una orientacin
adecuadas.
La actuacin de la enzima
aumenta la concentracin efectiva de los sustratos
(aumenta la probabilidad de choque)
permite que los reactantes (sustratos) se unan a su centro
activo con una orientacin ptima para que la reaccin se
produzca y
modifica las propiedades qumicas del sustrato unido a su
centro activo, debilitando los enlaces existentes y
facilitando la formacin de otros nuevos

Modelo Llave-Cerradura

MODO DE
ACCIN DE LAS
ENZIMAS

Hay dos modelos sobre la forma en

que el sustrato se une al centro activo
del enzima:
el modelo llave-cerradura
el modelo del ajuste inducido

MODELO LLAVE-CERRADURA

La estructura del sustrato y la del centro activo son

complementarias
Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es
siempre correcto

MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO

el centro activo adopta la conformacin idnea slo en

presencia del sustrato.
La unin del sustrato al centro activo del enzima desencadena
un cambio conformacional que da lugar a la formacin del
producto.

Modelo del Ajuste Inducido

Perfil Energtico de una

Reaccin Espontnea

Perfil Energtico de una

Reaccin Catalizada

Cofactores - Coenzimas
A veces, un enzima requiere para su
funcin la presencia de sustancias no
proteicas que colaboran en la catlisis:
los cofactores. Pueden ser iones
inorgnicos como el Fe++, Mg++,
Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de los
enzimas conocidos requieren
cofactores.
Cuando el cofactor es una molcula
orgnica se llama coenzima.

Cofactores - Coenzimas

Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir de

vitaminas.
Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran
unidos covalentemente al enzima se llaman grupos
prostticos.
La forma catalticamente activa del enzima, es decir, el
enzima unida a su grupo prosttico, se llama
holoenzima. La parte proteica de un holoenzima
(inactiva) se llama apoenzima, de forma que:
apoenzima + grupo prosttico= holoenzima

Coenzima: NAD+
Deriva de la Vitamina B5
(cido nicotnico)

Coenzima:

FAD
Es grupo prosttico

Deriva de la Vitamina B2 (flavina)

FAD

forma oxidada

FADH2 forma reducida

CLASE 1: OXIDOREDUCTASAS

Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico
(distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro, segn
la reaccin:
A-B + C
A + C-B

Clase 3: HIDROLASAS

A-B + H2O

AH + B-OH
LACTASA

lactosa + agua

glucosa + galactosa

Clase 4: LIASAS

A+B

A-B
Acetato Descarboxilasa

cido actico

CO2 + Acetona

Clase 5: ISOMERASAS

Fosfotriosaisomerasa

Clase 6: LIGASAS

A-B + XDP + Pi

A + B + XTP
Piruvato Carboxilasa

Piruvato + CO2 + ATP

Oxaloacetato + ADP + Pi

CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad

de las reacciones catalizadas por enzimas.
La velocidad de una reaccin catalizada por una
enzima puede medirse con relativa facilidad, ya
que en muchos casos no es necesario
purificar o aislar la enzima.

Estos estudios proporcionan informacin directa

acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y
de la especifidad de la enzima.

CINTICA ENZIMTICA

MODELO CINTICO DE
MICHAELIS-MENTEN

Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inicial del

sustrato sobre la actividad enzimtica comenzaron a realizarse a
finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo
enzima-sustrato como intermediario del proceso de catlisis
enzimtica.
En 1913, Leonor Michaelis
y Maud Menten desarrollaron
esta teora y propusieron una
ecuacin de velocidad que explica el
comportamiento cintico de los
enzimas.

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

v = v3 = k3 [ES] =

V = velocidad de la reaccin catalizada por la enzima

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
=
v
3

=
k
3

[
E
S
]
=

V = velocidad de la reaccin catalizada por la enzima

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
=
v
3

=
k
3

[
E
S
]
=

La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten es una

hiprbola . La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la
curva experimental, y la KM corresponde a la concentracin de
sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms
sencillo utilizar la representacin doble recproca (1/v0 frente
a 1/[S]0), ya que es una lnea recta. Esta representacin doble
recproca recibe el nombre de
representacin de Lineweaver-Burk

La constante de Michaelis-Menten (KM)

es un parmetro cintico importante por
varias razones:

KM es la concentracin de sustrato para la cual

la velocidad de reaccin es la mitad de la
velocidad mxima.
El valor de KM da idea de la afinidad del enzima
por el sustrato:
a menor KM, mayor afinidad del enzima por el
sustrato, y
a mayor KM, menor afinidad.

ACTIVIDAD ENZIMTICA: se mide en

trminos de velocidad

UI: los moles de sustrato que la enzima

transforma en un minuto.

Katal: los moles de sustrato que la enzima

transforma en un segundo

Cuando se conoce el PM E pura y el nmero de

centros activos por molcula de enzima, las
medidas de actividad enzimtica permiten calcular
el nmero de recambio: nmero de moles que la
enzima convierte por cada centro activo y por
unidad de tiempo.

ACTIVIDAD ENZIMTICA: se mide en

trminos de velocidad

La velocidad de una reaccin catalizada por un

enzima puede medirse con relativa facilidad, ya
que en muchos casos no es necesario purificar
o aislar el enzima.
La medida se realiza siempre en las condiciones
ptimas de pH, temperatura, presencia de
cofactores, etc, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin
observada es la velocidad mxima (Vmax).
La velocidad puede determinarse bien midiendo la
aparicin de los productos o la desaparicin de los
reactivos.

ACTIVIDAD ENZIMTICA: se mide en

trminos de velocidad

vo

La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin

de los productos o la desaparicin de los reactivos.
- A medida que la reaccin transcurre, la
velocidad de acumulacin del producto va
disminuyendo porque se va consumiendo el
sustrato de la reaccin
- Para evitar esta complicacin se procede a
medir la velocidad inicial de la reaccin
(v0).
- La velocidad inicial de la reaccin es igual a
la pendiente de la curva de avance a tiempo
cero
- De esta forma, la medida de v0 se realiza
antes de que se consuma el 10% del total del
sustrato, de forma que pueda considerarse
la [S] como esencialmente constante a
lo largo del experimento.

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto

de la concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad
inicial de la reaccin, manteniendo la cantidad de
enzima constante.

Si representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una grfica

Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente

proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la
reaccin es de primer orden.
A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y
la velocidad ya no depende de [S]0. En este punto, la reaccin
es de orden cero y la velocidad es mxima (Vmax).

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de MichaelisMenten. Se dice que su cintica no es Michaeliana.

Esto ocurre con las enzimas alostricos, cuya grfica v

frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide

En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la

[S] en una zona crtica (cercana a la KM) se traduce en
grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

Factores que afectan la

cintica enzimtica
La actividad puede estar afectada por:
el pH
la temperatura
la fuerza inica
Inhibidores

Efecto del pH

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables

(carboxilos -COOH; amino -NH2; etc.) en las
cadenas laterales de sus aminocidos.
Segn el pH del medio, estos grupos pueden
tener carga elctrica positiva, negativa o neutra.
Como la conformacin de las protenas depende,
en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH
en el cual la conformacin ser la ms adecuada
para la actividad cataltica. Este es el llamado pH
ptimo.

La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar
drsticamente su actividad.
Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la protena, los
seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para mantener estable
el pH intracelular

Efecto el pH

Efecto de la Temperatura

Factores que afectan la cintica

enzimtica: INHIBIDORES
Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un
enzima: son los inhibidores.

Irreversibles
E + I EI
se unen fuertemente a la E y el complejo no se disocia

Reversibles
E + I EI

Inhibidores Reversibles
Pueden actuar de 3 modos:
ocupan temporalmente el centro activo por
semejanza estructural con el sustrato original:
inhibidor competitivo

alteran la conformacin espacial del enzima,

impidiendo su unin al sustrato: inhibidor no
competitivo
Se unen al complejo E-S impidiendo la catlisis
del sustrato: inhibidor acompetitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor competitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor no competitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor acompetitivo

Inhibidores Reversibles
inhibidor acompetitivo

S
P

Regulacin de la catlisis
enzimtica

las concentraciones del sustrato y de

los productos finales
presencia de inhibidores
modulacin alostrica
modificacin covalente
activacin por proteolisis (zimgenos)
isoenzimas

EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE

LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La velocidad de una reaccin

concentracin de sustrato.

enzimtica

depende

de

la

Adems, la presencia de los productos finales puede hacer que

la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su sentido

MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones
interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa).
R es la forma ms activa porque se une al sustrato con
ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en
equilibrio R <==> T

MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R.

Son los llamados moduladores positivos.
El propio sustrato es a menudo un modulador positivo.
Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre
una regin del enzima distinta del centro activo son los
activadores alostricos (modulador alostrico positivo)

MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Las sustancias que favorecen la forma T y

actan en lugares distintos del centro activo de
la enzima y disminuyen la actividad enzimtica:
son los moduladores alostricos negativos.

enzimas alostricas, no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten,

la grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide
En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una
zona crtica (cercana a la KM) se traduce en grandes variaciones en la
velocidad de reaccin.

Regulacin de la actividad enzimtica

por MODIFICACIN COVALENTE

Hay enzimas que pasan de la forma inactiva a la activa

unindose covalentemente a un grupo qumico de pequeo
tamao como el Pi o el AMP.
Tambin se da el caso inverso

El enzima no fosforilado
es inactivo

El enzima fosforilado
es activo

Regulacin de la actividad enzimtica

por ACTIVACIN PROTEOLTICA

Algunos enzimas no se sintetizan como tales, sino como

protenas precursoras sin actividad enzimtica. Estas
protenas se llaman proenzimas o zimgenos.

Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico que

origina la liberacin de uno o varios pptidos.

El resto de la molcula proteica adopta la conformacin y las

propiedades del enzima activo.

Ej.: enzimas digestivos se secretan en forma de zimgenos y

en el tubo digestivo se convierten en la forma activa. Es el
caso de la quimotripsina, que se sintetiza en forma de
quimotripsingeno

Regulacin de la actividad enzimtica

por ACTIVACIN PROTEOLTICA

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

POR MEDIO DE ISOENZIMAS

Algunos enzimas tienen distinta estructura molecular aunque su

funcin biolgica es similar. Se llaman isozimas o isoenzimas.
Estas diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios en
sus propiedades, de forma que cada isozima se adapta
perfectamente a la funcin que debe realizar.

As, podemos observar la existencia de isoenzimas en funcin de:

el tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta

isozimas distintos en msculo y corazn.
el compartimento celular donde acta: Por ejemplo, la malato
deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.
el momento concreto del desarrollo del individuo. Ej: algunos
enzimas de la glicolisis del feto son diferentes de los mismos enzimas
en el adulto.