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INTRODUCCION

Por la estructura peptdica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las


protenas pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos
coloreados. Estas reacciones son la base para la determinacin cuantitativa y
cualitativa de las protenas. Por presentarse variaciones en la composicin de los
aminocidos de las diferentes protenas, se manifiestan diferentes colores y
grados de intensidad para una misma reaccin, ntimamente relacionado con la
naturaleza de la protena analizada.

FUNDAMENTO TEORICO
1.1.1 AMINOCIDOS
Los aminocidos son compuestos orgnicos que poseen un grupo carboxilo
y un grupo amino. Pueden ser , , , ....aminocidos, segn el grupo
amino est unido respectivamente al primero, segundo, tercero, cuarto...
tomo de carbono contando a partir del tomo de carbono del grupo
carboxilo. En la naturaleza existen distintos tipos de aminocidos que
desempean diferentes funciones, sin embargo, los aminocidos que
forman parte de las protenas son todos ellos -aminocidos. Existen 20 aminocidos diferentes que forman parte de las protenas. Todos ellos
tienen 3 una parte de su molcula en comn (formada por el tomo de
carbono unido a los grupos amino y carboxilo) y difieren entre s en la
naturaleza de la cadena lateral (habitualmente llamada grupo R).

Esenciales

No esenciales

Isoleucina (Ile)

Alanina (Ala)

Leucina (Leu)

Tirosina (Tyr)

Lisina (Lys)

Aspartato (Asp)

Metionina (Met)

Cistena (Cys)

Fenilalanina (Phe)

Glutamato (Glu)

Treonina (Thr)

Glutamina (Gln)

Triptfano (Trp)

Glicina (Gly)

Valina (Val)

Prolina (Pro)

Histidina
(His) (condicionalment
e)

Serina (Ser)

Arginina
(Arg) (condicionalment
e)

Asparagina (Asn)

1.1.2 PROTEINAS
Desde el punto de vista de su composicin elemental todas las protenas
contienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno, mientras que casi todas
contienen adems azufre (Cabe resaltar que en azcares y lpidos el
nitrgeno slo aparece en algunos de ellos). Hay otros elementos que
aparecen solamente en algunas protenas (fsforo, cobre, zinc, hierro, etc.).
Las

protenas

son

biomolculas

de

elevado

peso

molecular

(macromolculas) y presentan una estructura qumica compleja. Sin


embargo, cuando se someten a hidrlisis cida, se descomponen en una
serie de compuestos orgnicos sencillos de bajo peso molecular: los aminocidos. Este rasgo lo comparten las protenas con otros tipos de
macromolculas: todas son polmeros complejos formados por la unin de
unos pocos monmeros o sillares estructurales de bajo peso molecular.
Existen 20 -aminocidos diferentes que forman parte de las protenas. En
las molculas proteicas los sucesivos restos aminocidos se hallan unidos
covalentemente entre s formando largos polmeros no ramificados. El tipo
de enlace que los une recibe el nombre de enlace peptdico. Las cadenas
de aminocidos de las protenas no son polmeros al azar, de longitud
indefinida, cada una de ellas posee una determinada composicin qumica,
un peso molecular y una secuencia ordenada de aminocidos.

1.1.3CLASIFICACIN DE LAS PROTEINAS


Las protenas se clasifican en dos clases principales atendiendo a su
composicin. Las protenas simples u holoprotenas son las que estn
compuestas exclusivamente por aminocidos. Las protenas conjugadas o
heteroprotenas son las que estn compuestas por aminocidos y otra
sustancia de naturaleza no proteica que recibe el nombre de grupo
prosttico. Las protenas conjugadas pueden a su vez clasificarse en

funcin de la naturaleza de su grupo prosttico. As, se habla de


glucoprotenas, cuando el grupo prosttico es un glcido, lipoprotenas
cuando es un lpido, metaloprotenas cuando es un ion metlico,
fosfoprotenas cuando es un grupo fosfato, etc. Otro criterio de clasificacin
de las protenas es la forma tridimensional de su molcula. Las protenas
fibrosas son de forma alargada, generalmente son insolubles en agua y
suelen tener una funcin estructural, mientras que las protenas globulares
forman arrollamientos compactos 2 de forma globular y suelen tener
funciones de naturaleza dinmica (catalticas, de transporte, etc).

1.2

REACCIONES

CUALITATIVAS

DE

PROTENAS

AMINOCIDOS
a) REACCIN DE BIURET
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que
se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -) que se destruye al
liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un
lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret.
Debido a dicha reaccin fue que observamos que al agregar el reactivo de
sulfato de cobre mas solucin de protena precipito una coloracin violeta.
Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reaccin positiva.
Precipitando a una coloracin amarilla la reaccin nos torna negativa al no
haber presencia de protenas. La reaccin debe su nombre al biuret, una
molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la
ms sencilla que da positiva esta reaccin La presencia de protenas en
una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo
de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (de NaOH o KOH).
La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta,
debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+
y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de
los enlaces peptdicos presentando un mximo de absorcin a 540 nm.

Da positiva esta reaccin en todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces
peptdicos consecutivos en sus molculas.
b) REACCION DE LA NINHIDRINA
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno
carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta
por la aparicin de un color violceo o amarillo. Debido a que las protenas
y los aminocidos, poseen esta caracterstica, la reaccin sirve para
identificarlos. Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloracin
caracterstica, aparentemente debido a una oxidacin y reduccin
intramolecular de la ninhidrina en presencia de amonaco. Los aminocidos
porina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan
un color rojo que pasa rpidamente a amarillo. La reaccin se muestra en la
figura 1.

Reaccin para la deteccin de aminocidos, actualmente acoplada a


sistemas

de

valoracin

automtica.

La

ninhidrina

(hidrato

de

tricetohidrindeno) es un oxidante energtico que por una desaminacin


oxidativa de los aminocidos conduce a la formacin del aldehdo
correspondiente, con liberacin de amoniaco y gas carbnico y formacin
de la ninhidrina reducida o hidrindrantina. La molcula de hidridantina, en
presencia de otra de ninhidrina, condensa a travs del amoniaco
produciendo una estructura denominada indanona o prpura de Ruhemann,
manifestando un color rojizo, excepto para la prolina, hidroxiprolina y en
menor medida para la histidina. Presenta su mximo de absorbancia a los
570 nm.

c) REACCIN XANTOPROTEICA

La reaccin xantoproteica es un mtodo que se puede utilizar para


determinar la presencia de protenas solubles en una solucin, empleando
cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas
protenas

con

aminocidos

portadores

de

grupos

aromticos,

especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se


neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro.La reaccin
xantoproteica se puede considerar como una sustitucin electroflica
aromtica de los residuos de tirosina de las protenas por el cido ntrico
dando un compuesto coloreado amarillo a pH cido.

d) REACCIN DE MILLN
El anillo fenlico tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales
de Mercurio a pH cido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo
fenlico de la tirosina y las protenas que la contienen.El reactivo de Millon
se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de cido
ntrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente
altas de mercurio conduce a la formacin de Nitrato de mercurio (I)
Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente cido reacciona con el grupo
-OH de la tirosina produciendo una coloracin roja caracterstica.

e) REACCIN DE HOPKINS COLE


El anillo indlico presente en la cadena lateral de los alfa-aminocidos libres
o haciendo parte de pptidos y protenas se puede reconocer mediante
reaccin con el cido glioxlico a pH cido, puesto que forma complejos de
coloracin violeta o amarillo violeta, permitiendo as identificar al triptfano.
f) REACCIN DE FOLY
Cuando los aminocidos y las protenas que contienen grupos tilicos se
calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para
formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la formacin de un
precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato de plomo. Los
grupos tioles tambin reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia
de un exceso de amonaco para dar un complejo de color rojo.
g) REACCIN DE AMINOCIDOS QUE CONTIENEN AZUFRE CON
NITROPRUSIATO DE SODIO
Las protenas con grupos SH libres dan un color rojizo con nitroprusiato de
sodio en solucin amoniacal. Muchas protenas dan una reaccin negativa
en su estado nativo, pero cuando son desnaturalizadas, la reaccin es
positiva mostrando la presencia de grupos SH libres.

h) REACCIN DE SAKAGUCHI

El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona


con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino
formando complejos coloreados rosados o rojos.

i) PRUEBA DE PAULY
El cido diazobencnico reacciona con el grupo imidazolico de la histidina
para formar un producto diazotado de color rojo naranja con el grupo
fenlico de la tirosina.

CONCLUSIN
Existen diferentes pruebas para la identificacin de protenas y aminocidos que
permiten establecer un resultado positivo o negativo de acuerdo a las
caractersticas y composicin de cada una de ellas, evidenciado en coloraciones,
presencia de anillos, etc. Se establecieron las caractersticas de estas pruebas
para la identificacin cualitativa de sustancias que pueden contener aminocidos,
protenas o pptidos. Y cuando se usan varias pruebas en la muestra, se
pueden determinar ciertas sustancias en especfico.
Muchos resultados no dieron a los esperados (tericos) pero se pudo deber a la
contaminacin de las muestras o la contaminacin de los equipos (tubos de
ensayo).