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La deshidratacin, que consista bsicamente en retirar el agua de los tejidos, a

partir de soluciones alcohlicas y concentraciones trecientos. Esto no se puede


hacer directamente al alcohol de 100, ya que, en ese caso las protenas del
tejido, o de la parte del rgano que est utilizndose, precipitan, se rompen los
enlaces con el agua, entonces hay que retirar poco a poco el agua y
reemplazarlo por alcohol ?
Posteriormente a esto, viene una etapa que se llama aclaramiento; el nombre
se debe a que la muestra cuando es sometida a una solucin llamada xilol,
adquiere una transparencia, el objetivo no es este, sino que de emplear xilol,
es hacer visible la solucin alcohlica, el alcohol que est dentro de la muestra
con una solucin. Que le va a permitir a uno, poder generar los llamados tacos
o bloques, de parafina para hacer cortes. El xilol tiene entre sus componentes
alcoholes lquidos, al tener alcohol es afin con el ultimo alcohol que yo ocupe, y
al tener lquidos va a hacer afin tambin, con una solucin que voy a ocupar en
una etapa . Que es la inclusin, en donde, lo que se ocupa es parafina
histologa, esta parafina es como una vela, son bsicamente lquidos que uno
los puede mantener fundidos en estado lquido, pero a temperatura ambiente
se solidifican. Entonces cuando estn en estado lquido, la parafina histolgica,
si yo sumergi la muestra ah, la muestra absorbe, toda esa parafina
histolgica entra al tejido, o a los tejidos que conforman esta parte del rgano.
Reemplazando a lo que esta antes de l, que era el xilol, como el xilol
reemplazo al alcohol de 100.
Ahora con el calor, porque para que la parafina se mantenga fundida, se
requiere que esta parafina se conserve alrededor de los 60C. Con esta
cantidad de grados de calor, el alcohol del xilol se evapora, y quedan los
lpidos, que son afines a los lpidos de la parafina histolgica.
El aclaramiento, la finalidad es hacer visible estas etapas, combinables, el
aclarado no es el objetivo, solo es una consecuencia de la utilizacin del xilol.
Entonces, espero alrededor de dos das, para que se impregne la muestra con
la parafina, y a esta etapa se le llama Impregnacin. Mientras ocurre la
impregnacin, la parafina se encuentra en estado fundido, pero luego yo puedo
armar, formar con la parafina y esta muestra unos bloques, solidos cuando
coloco la muestra a temperatura ambiente.
En el auto trmico ocurren estas etapas que hemos mostrado, lo hace
automticamente uno lo programa, luego lo que se hace es la ltima etapa de
la inclusin, donde yo puedo mantener por mucho tiempo la muestra en una
estufa con la parafina liquida y cuando yo quiero armar el taco o el bloque,
para que luego lo pueda cortar, puedo utilizar unas placas de eucak*, pero
tambin se utilizan una especie de caset.. en donde yo coloco la muestra con
un poco de parafina histolgica lista y la dejo a temperatura ambiente y estos
bloquecitos que se arman, o estas plaquitas yo le puedo dar una forma

rectangular, cuadrada, de esto se obtiene algo as, como un cubo de hielo que
tuviera algo dentro, esto yo lo puedo cortar.
El objetivo de las tcnicas histolgicas de rutina, es obtener cortes histolgicos
de un tejido, pero para eso la muestra tiene que estar lo suficientemente dura,
para que cuando haga el corte, quede recto, porque no sirven irregulares;
Entonces todos estos procedimientos que realizamos antes, fue bsicamente
calentar el agua que estaba en los tejidos, por medio del alcohol y hacer un
reemplazo de los componentes del tejido hasta llegar a la inclusin, fue para
obtener este bloque de tejido endurecido que pueda cortar. Este bloquecito lo
voy a instalar en un aparato que se llama micrtomo, en el caso de
microscopia ptica y ultramicrotomo, cuando quiero realizar un corte para
microscopia electrnica, pero este se utiliza en. Estas perlitas blancas es el
taco, o el bloque de parafina, y lo que se utiliza es una navaja muy filosa, fina,
que corta altiro, y lo que se hace es desplazarla, esto va subiendo y bajando y
va cortando; se van obteniendo delgadas laminas, tanto o ms delgadas que
un catafilo de cebolla. Pero, por otro lado, que pasa cuando uno corta o saca el
catafilo de cebolla, la tendencia es a que se enrolle, es demasiado delgadita;
esto mismo puede pasar con un corte histolgico, entonces a medida que yo
voy obteniendo el corte, que es lo que tengo: All est la muestra y el resto es
parafina, dentro de la muestra tambin hay parafina, pero esta es parte del
bloque completo, lo que se hace inmediatamente, es someter la muestra a un
bao histolgico, que se utiliza un aspecto de olla en la cual se puede regular
la temperatura de agua, el agua es destilada, y aqu, esta agita se mantiene
alrededor de los 20C- 24C como mximo, y con eso, al tirar al agita estos
cortes, la parfina y la muestra entera se estira, se ablanda con el calor, pero si
tiende a disolverse porque son alrededor de 26-24 de temperatura, no
estamos a 60C, por lo tanto no se funde. Entonces al estirarse, me permite
ahora hacer lo que llamamos tres. Tomo el porta objetos al cual le coloco una
lumina de huevo, el cual me servir como pegamento, tomo esto, lo sumergi
en el agita y prcticamente lo que hago es capturar o recoger esa muestra
que esta estiradita all en el agua, la recojo, escurro un poquito el agua y la
vuelvo a colocar en una especia de tarima de plata, es una plancha. Por lo
tanto, obtengo un porta objetos con una muestra pegada, dicha muestra tiene
parafina histolgica estirada, esto yo ya lo podra observar, pero no voy a
distinguir muchas cosas, ya que, los tejidos no estn coloreados. Falta colorear
la muestra, destacar sus componentes, pero antes de hacer esto debo retirar la
parafina que nos fue muy til para hacer el corte, pero ahora que tengo
pegada la muestra estirada y cortada, entonces ahora voy a retirar la parafina,
voy a DESPARAFINAR, pero para eso tuve que haber hecho el pre montaje
primero, porque con el agua no me va a resultar, entonces hago el pre montaje
y posteriormente desparafino o deshidrato, y que nos est indicando el
nombre, que voy a hacer pasos inversos a lo que hice antes de utilizar la
parafina, que fue el ltimo componente que yo utilice antes de la parafina, el
xilol, por lo tanto en el proceso de rehidratacin o desparafinado lo primero que
voy a ocupar es xilol, y despus venan los alcoholes, pero cual fue el ltimo
alcohol que utilice antes: el de 100, ahora parto con ese, hasta que llego al

alcohol que tiene la menor graduacin, en donde esta solucin alcohlica tiene
mucha agua, voy restaurando poco a poco el agua y porque se debe hacer
esto, porque despus del desparafinado viene la tincin.
Que es el momento importante de la muestra, y estas soluciones coloradas que
estn aqu bsicamente son eso, soluciones acuosas, un colorante con agua,
entonces si estuviera la parafina aun en la muestra, el agua no podra entrar, lo
repele. Entonces por eso debo quitarla y ahora voy a reemplazar con colorante.
Y los colorantes que voy a explicar con ms detalles es la tincin de rutina, la
tincin de hematoxilina o eosina.
La hematoxilina es un colorante de color azul o morado, por lo tanto, todo lo
que es afn lo va a teir de ese color, ya eosina es un colorante rojo que va a
teir a los componentes afines de un color rojo o rosado e incluso anaranjado.
La afinidad que tienen estas colorantes con los componentes del tejido que yo
he procesado, tiene que ver o se realacionan con las caractersticas que tienen
tanto el colorante como el componente titular. Las caractersticas son:
caractersticas qumicas y elctricas.
La hematoxilina es un colorante que qumicamente se mantiene o tiene a un
pH bsico, va a tener afinidad con componentes titulares que tengan el pH
contrario, es decir, acido. La eosina es lo contrario, es un colorante cuya
propiedad qumica es de su pH acido, por lo tanto, va a teir a componentes
que tengan pH bsico. Estas son propiedades qumicas que se basan en el pH.
Otra propiedad es la elctrica, la hematoxilina al igual que la eosina son
soluciones, colorantes ms aguas, la porcin coloreada, en la hematoxilina
lleva carga elctrica positiva, las estructuras titulares las cuales tien van a
tener en sus componentes carga elctricas negativas. La eosina su porcin
coloreada tiene cara elctrica negativa por lo tanto esta porcin coloreada va a
ser atrapada por componentes titulares, cuya carga elctrica ser positiva.
Esta es una propiedad elctrica que se basa en los componentes de los
titulares. Por lo tanto, yo puedo fundamentar por que algo se tie con la
hematoxilina o la eosina.
La hematoxilina con sus propiedades, si yo tengo que tomar los componentes
titulares que va a teir, son los que tienen carga elctrica negativa o que se
mantienen bajo un pH bsico. Si yo tomo por ejemplo una clula: cul es la
parte de la clula que tiene mayor proporcin de componentes cidos? El
ncleo. ARN O ADN? ADN. Por lo tanto, si yo tengo que utilizar un colorante
sobre un tejido, que parte de esa clula se a teir con la hematoxilina, son los
ncleos.
En el citoplasma de la clula lo que hay bsicamente son protenas, y las
protenas dentro de la clula se mantienen bajo un ph bsico y una carga
elctrica positiva, por lo tanto, el colorante que lo va a teir es la eosina, que
tiene propiedades contrarias.

Ahora la matriz extracelular tambin tiene protenas como el colgeno, bueno


ellas tambin se van a teir con la eosina. Ahora, la matriz extracelular
tambin tiene otros componentes, como complejos de carbohidratos. Los
carbohidratos cuando forman cadenas largas tiene una carga elctrica neutra y
un pH neutro, lo cual es un problema, porque ni la hematoxilina ni la eosina,
tienen elementos neutros, entonces estos componentes que se mantiene
neutros, se van a mantener as, por lo tanto, cuando yo aclare y diga qu
caractersticas tiene una estructura que no se tio ni con hematoxilina ni
eosina, voy a decir que son CROMOFOBIA O CROMOTOPOS, que rechazan el
colorante. Los que si se tieron son CROMOFIBIA, sea atraen el colorante.
Dentro de la cromofibia, hay dos clasificaciones:
a) Basofibia b) Acidofibia:
El ncleo es basofibia, ya que, es afn con un colorante bsico (en relacin
al tipo de colorante al cual se une). Entonces el ncleo con hematoxilina o
eosina es cromofido, pero especficamente es basofibia ()
En cambio, para el citoplasma o el colgeno, si se tien con la eosina, que
es un colorante acido, son cromofido, pero especficamente con acidofidos.
Por otro lado, si hay algo en la matriz extracelular, carbohidratos, serian
cromofidos.
Si existen tinciones que llegan a los carbohidratos, pero las que estamos
hablando no.
Entonces con esta tincin, los elementos ricos en carbohidratos, no se tien.
Si veo que no se tie, es porque hay carbohidratos, por lo tanto, debo tomar
una muestra de esto, y probar con otras tinciones, y si estas se tien ya no
sern cromfobos, pero si persisten blancos, es porque no hay nada.
Los conceptos de basfilo o acidofilo, solo se emplean cuando ocupamos
colorantes con oh acido o bsico. Pero hay muchos colorantes que no se
mantienen con ninguna de estas caractersticas si no tengo fundamentos.
Lo que explicamos es la tincin de rutina.
*Cada vez que hay algo elstico en un tejido, y uno agrega eosina responde,
se tie. Pero no tiene fundamentos*
Hay otros colorantes como el azul de antiano, que da una coloracin celeste a
componentes ricos en carbohidratos, que muchas veces forman parte de las
glicoprotenas, pero estas glicoprotenas son de tipo acido, la parte proteica se
mantiene bajo una condicin acida (esto es lo que se tie). (o cadenas largas)
La tincin de rutina, me permite tener una visin generalizada de lo que voy a
ver. Aqu hay un tejido conectivo, asociado a un epitelo; lo que est entre los
vasos sanguneos y los ncleos son componentes de la matriz extracelular,
esos componentes que son fibrosos se van a teir con la eosina, si son ricos en

carbohidratos se van a teir con un azul de antiano, sino no se tienen


(blancos). Pero en la fibra de colgeno, fibras ., y fibras elsticas, las fibras
elsticas y las fibras de colgeno (que es el colgeno n1) se tienen con eosina,
por lo tanto, cmo puedo reconocer una respecto a la otra, si ambas se van a
teir igual? cmo puedo saber si hay ms fibras elsticas que colgenas? .
Tambin hay otro tipo de tincin que me destaca el colgeno, tincion de aspar
(mezcla de varios colorantes) y cada vez que se utiliza es para destacar el
colgeno tipo 1 que es el ms abundante del organismo, todo se tie de un
color rojo, hasta los ncleos se ven rojos, aqu ay otro tipo de tejido, pero el
colgeno tipo 1 se tie de color celestoso, entonces si yo quiero identificar
exclusivamente el colgeno tipo 1 y saber que tano hay respecto a otros
componentes, puedo utilizar esta combinacin porque si no el colgeno se
vera silofono* con la tcnica corriente, pero si yo adems coloco el de aspar se
ver bien.
Las tinciones especiales o especificas tienen un componente en particular, pero
la verdad es que nadie tiene la explicacin hasta ahora.
Al fenmeno en donde se cambia el color que da, no es el que yo espero se le
llama METRACROMAGIA, donde cambia el color. Y aqu hay un tipo de clula de
un tejido conectivo, se llaman clulas evada* o mactositos* y se explica por la
siguiente razn: el citoplasma de la clula hay protenas, las cuales se
mantienen con una carga elctrica positiva o un ph bsico, pero esta clula
cuando est en reposo, tiene una ventrculos en el citoplasma, las cuales se
llaman granulo y el obtenido de esos grnulos, se mantienen con una carga
elctrica negativa, entonces cuando pillo estas clulas y justo coincido que no
estn activas (sea no han eliminado el contenido de esos grnulos) ellas
capturan a la eosina , pero tambin capturan al hematoxilina en su citoplasma,
pero en esos grnulos superpuestos, por un lado se ven los grnulos teidos
(morado) pero el citoplasma de un color rosado y esa superposicin es lo que
genera lo de acromasia, que hace que yo vea un color purpura.
La tincin de bah , que utiliza acido peli, este tiene un fundamento, lo
importante es saber que elementos se puede teir con esto, da un color fucsia,
clulas secretoras, que es rica en glicoprotenas (carbohidratos + protenas)
pero aqu, las glicoprotenas presentes en la secrecin que guardan las clulas
en el citoplasma pueden ser neutras acidas o bsicas , cuando las
glicoprotenas son neutras: van a dar pas positivo, cuando eran acidas se tien
con azul de antiano, por lo tanto, esa estructura la puedo teir con . , pero si
hay un predominio de glicoprotenas neutras se van a teir principalmente con
la tincin de pas, si hubiese un predominio de glicoprotena acidas se van a
teir principalmente con azul de antiano.
No solamente ah glicoprotenas, sino, que tambin van a ver cadenas largas
de carbohidratos y estos se van a teir con cualquiera de estos dos, con bah o
azul de antiano. Entonces este colorante: bah y azul de antiano sirven ms o
menos para lo mismo, puedo teir casi los mismos elementos, pero si yo quiero
diferenciar el tipo de glicoprotenas que est presente, puedo ocupar una o la

otra. Pero si quiero diferenciar los carbohidratos que estn all, cualquiera de
las dos sirve.
Glicoprotena neutra bah
Entonces aqu se basa en la presencia de elementos neutros, pero tambin con
carga elctrica positiva, jams negativa sea nunca va a tener un ph acido
El azul de antian me sirve para destacar elementos neutros (carbohidratos
enteros) y me destaca las glicoprotenas cuando son acidas.
El glicocalis es una especializacin sper presente en el tejido epitetial y
especficamente presente en el intestino delgado como grueso, esta
especificacin consiste en cadenas largas de carbohidratos, que se depositan
sobre la superficie intestinal y que bsicamente tiene una funcin y por lo
tanto si es rica en carbohidratos, tambin la va a teir bah. Da un pas positivo.
Glicgeno, es una glicoprotena
Otro tipo de fibra que forma parte de la matriz extracelular, que va a estar
afuera de la clula, las fibras reticulares, son las ms escasas y muy finas. La
nica forma de poder visualizarla es utilizando tinciones especiales. La tincin
que se suele ocupar la reniculinas, que se basa en la utilizacin de sales de
plata. Estas son las tangenticas. Las fibras retinaculares siempre se van a
ver de un color negro, y todo lo dems se va a teir medio gris, blanco.
Finalmente otra forma de destacar componentes, pero en este caso algo
especfico (no me permite visualizar un tejido completo) , es la utilizacin de
esta tcnica: la inmunocito cinica o inmunohisto cinica, hay una directa y otra
indirecta.
Anticuerpo y antgeno. El antgeno es un componente extrao que ingresa al
organismo, y el organismo cuando se da cuenta de la presencia de esta,
genera una reaccin inmune, produciendo lo que se llama anticuerpo
Entonces el anticuerpo es la respuesta del organismo ante el antgeno.
Cuando nos vacunan, nos estn ingresando antgeno.
Esta tcnica lo que hace es emplear anticuerpos. Este anticuerpo lo pongo en
la muestra, estos anticuerpos previamente los marco con algo para que se
destaquen de tal manera, que cuando encuentren al antgeno que andamos
buscando, provoque una reaccin y para eso lo debo marcar con algn
elemento que lo pueda ver mediante el microscopio. Provocara alguna
reaccin.
Entonces basndose en eso, lo que hago es determinar si lo que ando
buscando en ese tejido est o no esta, si ver el tejido.
Cuando yo utilizo un anticuerpo marcado para encontrar un antgeno, a esto se
le llama inmunohistoquimica directa

Inmunohistoquimica indirecta la cual se emplea otro anticuerpo adems que el


que ya utilic, pero este anticuerpo es anti al anticuerpo ya utilizado. Obtengo
una reaccin ms grande, queda muy clarito. Esta sera la primera parte, la
pequea la que llega hasta la inmunohistoquimica directa. Pero la segunda
consiste en que agrego anticuerpos a este anticuerpo.
Esto se utiliza como reemplazo de los colorantes.
Una vez que hemos teido la muestra, ya empleado la inmunohistoquimica,
para poder tener este respaldo por mucho tiempo ms, debo proteger mi
trabajo entonces que es lo que me falta hacer el montaje final de la muestra.
La cubro con un vidrio muy delgado llamada cubreobjetos y la pego, se utiliza
una resina, y una gotita la coloco sobre la muestra y luego el cubreobjeto. Con
esto protejo la muestra. Y con una etiqueta le coloco el nombre. (la resina es
como una gota de agua de transparencia)
Existen cortes transversales, longitudinales y oblicuos.
Para realizar un corte se debe ver hacia donde voy a orientar la muestra, para
saber cmo van a ser los cortes. Las cuchillas cortan de arriba hacia abajo.
**si veo lumen** es porque en su mayora fue un corte transversal.
**si el lumen se ve ms alargado*/ es porque el corte fue longitudinal
**si no veo lumen, y s que la muestra es tubular** es parque es un corte
oblicuo
Si no veo el ncleo, por ejemplo, es porque corte por otro lado. Por eso es
necesario saber las caractersticas de las clulas para poder diferenciar entre si
existe dicho elemento, o si el corte fue el que produjo que no se viera
MICROSCOPIO
Tiene componentes pticos- mecnicos- iluminacin
Componente ptico: lentes oculares (bi-oculares) - lentes objetivos
(panormica =lente pequea que da un aumento muy bajo, permite tener una
visin generalizada 4X. Mediana= aumento mediano 10X. Mayor=la ms
utilizada, que utiliza un aceite 40X) las lentes objetivas aumenten 1 veces las
imgenes (10X)
Aumento ocular * aumento objetivo = aumento final
10X

(4-10-40)X

Las lentes objetivas son las que tienen distintos aumentos, la lente ocular solo
tiene uno (10)
La parte mecnica (las partes)
las partes de iluminacin: los componentes pticos utilizan luz de una
ampolleta, esta atraviesa una bandeja llamada platina, que es un orificio (aqu

va puesta la muestra) y el haz de luz la atraviesa y llega a tomar contacto con


la lente objetiva que se est utilizando. Finalmente llega a los oculares.
El lente que tiene la cinta roja = 4x = panormica
La lente que tiene cinta

= 10x = mediana

La lente que tiene cinta

= 40x = mayor. Permite estudiar tejidos

**cuando la x va antes del numero: es la cantidad de veces que estoy viendo


aumentada la muestra**
**cuando la x va despus del numero: indica la numeracin, del aumento que
da a la lente objetiva**
En histologa tenemos dos tipos de rganos que podemos observar:
rganos compactos o macizos: no tienen aparentemente una cavidad
rganos huecos: los que tienen un lumen (superficie) , cavidad
**clulas que forman parte de diferentes rganos: caliciformes (se tie con
todo menos con hematoxilina)
rgano compacto: tiene una corteza, una medula, y una zona donde ingresan
los vasos sanguneos (ingion?)
MICROSCOPIA ELECTRONICA
De trasmisin: emplea un haz de electrones que atraviesa la muestra, tiene el
tamao de una pieza, la ocupan para los rayos x
Poder de resolucin: capacidad de un instrumento ptico de mostrarme
separado elementos que estn estrechamente unido.
El microscopio electrnico tiene un mayor poder de resolucin que un
microscopio ptico, es tal que me permite ver elementos del citoplasma
Existe una escala de poder de resolucin
El que tiene el mayor poder de resolucin dentro de la microscopia electrnica,
es el de trasmisin
De barrido: la imagen no atraviesa la muestra, utiliza electrones, es
tridimensional. La muestra es bombardeada de electrones en todas las
direcciones, lo que genera una imagen tridimensional, que es capturada por un
proyector y de all se obtiene la foto
Veo la superficie de lo que estoy analizando, no puedo ver el interior de la
clula.
-En microscopia NO existen los milmetros- centmetros
-En microscopia ptica hablamos de micrmetros y en algunos casos
nanmetros

-En microscopia electrnica la unidad mayor que se utiliza es el nanmetro,


pero incluso se puede utilizar el antrometro que es la unidad ms pequea

La ubicacin anatmica por ejemplo de una parte de la trquea, un tejido


conectivo, una de sus ubicaciones anatmicas es la dermis reticular, si digo
que es la piel esta incorrecto.
Tejido muscular. Tejido nervioso (corte de medula espinal:
La cromatina de un tejido nervioso: eucromatido, el nuclolo se destaca

TEJIDO EPITELIAL
Existen los epitelios de revestimiento y glandulares
Las caractersticas son muy similares, excepto que los epitelios glandulares
secretan algo y lo liberan.
Yubsapuesta: una al lado de la otra
La membrana basal la tienen todos los epitelios (matriz especializada y es
sintetizada por las mismas clulas epitelios, esta evita que estas clulas
invadan otros tipos de tejidos conectivos asociado a ellos)
La membrana basal cumple muchas funciones, entre ello mantenerlo
diferenciado, controlado.
Quin puede tener un tejido conectivo que un epitelio resistiera?
Vasos sanguneos, porque una de las caractersticas, los epitelios son a
vasculares, entre sus clulas no caben vasos sanguneos all, y porque son tan
importantes los vasos sanguneos, porque llevan sangre sea oxgeno y
nutrientes
Cuando un epitelio es de revestimiento tiene una sola capa de clulas se
conoce como un epitelio simple o mono.
Si tuviese ms clulas, una montada sobre la otra, sera un epitelio extra.. o
pluri
En general los epitelios que tiene una sola capa de clula, la forma es la misma
Cuando los epitelios tienen ms capas de clulas lo comn es que las clulas
tengan distintas formas.
Que formas celulares son caractersticas: la ms comn, formas planas, clulas
cubicas, clulas cilndricas con lunares.
Si el ncleo es plano, la forma de la clula siempre ser aplanada. En un
epitelio de revestimiento

Ncleo ovalada: clula cilndrica


Clula piramidal, pero solo es caracterstica de un epitelio glanural.
Ncleo redondo o esfrico: epitelio de forma cubica