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Q.

F Mara tsaeet Palacios palacios

Gua de prcticas de Farmacognosla y Fltoqumlca

PRCTICA N 08
DETERMINACiN DE FLAVONOIDES

8.1

FLAVONOIDES:
Los flavonoides,
responsables

son compuestos fenlicos y son en su mayora pigmentos

de la coloracin de numerosas

flores y de algunos frutos. El

elemento comn de estos compuestos se han descrito varios millares de los


mismos,

esta relacionado

flavonoides

con un ncleo bsico:

se encuentras

generalmente

en

farmacolgicas

la

estn

ampliamente

forma

soluble

asociadas

el 2-fenil cromano.

distribuidos
de

Los

en el reino vegetal,

glicsidos.

con la reduccin

Sus

propiedades

de la permeabilidad

capilar. Entre estos tenemos a la rutina, la hesperidina y la quercetina.


FlavonoIs

At
OH
HO

R2

OH
H
OH
OCH3

H
H
OH
H

R2
OH

Aglycone
Quercetin
Kaempferol
. Myricetin
Isorhamnetin

OBJETIVOS:

8.2

Determinar la presencia del flavonoide rutina y hesperidna.

Conocer las reacciones qumicas de identificacin

para flavonoides.

DETERMINACiN DE LA RUTINA:
8.2.1 FUNDAMENTO:
La rutina

es un flavonoide

que tiene

una mejor

solubilidad

en medio

alcohlico, que se caracteriza por dar positiva la prueba de Shinoda con una
variacin

de

color

que depende

del tipo

de estructura,

asimismo

se

--

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Los ngeles de Chimbote

/ Escuela de Farmacia y Bioqumica

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Gua de prcticas de Farmacognosia V Fltoqumica

determina sus grupos fenlicos con el

F+3

y por dar fluorescencia

frente a la

luz UV.

8.2.2 MUESTRA:

Hojas de Ruta graveolans "Ruda"

8.2.3 MATERIALES
~
~

>

Y REACTIVOS:

ter etlico
Equipo soxhlet
Beaker de 100 y 250mL
Mg metlico
Tubos de ensayo
Alcohol etlico
H2S04 concentrado

>-

~
~

HCI concentrado
FeCb 1% y EtOH
Lmpara de Luz UV
Alcohol amilico
Placas cromatogrficas
Acetato de Plomo 5%

8.2.4 EXTRACCiN
Fraccionar las hojas y proceder a un desengrasado
el fin de eliminar

Concentrar

con agua caliente y decantar el lquido sobrenadante.

la rutina. Si se desea purificar,

cristalizaciones

DE IDENTIFICACiN

Reaccin de Shinoda o Cianidina: Caracteriza


benzopirona

efectuar

alcohol y por ltimo desecar.

8.2.5 REACCIONES

>-

Al residuo

el extracto acuoso y dejar en reposo por 5 das, tiempo en el

cual cristalizar
empleando

resinas y otros constituyentes.

las grasas,

tratarlo posteriormente

en soxhlet con ter, con

compuestos

Si la alcuota del extracto se encuentra

con 1mL de HCI concentrado

de estructura

en alcohol, se diluye

y un pedacito de cinta de Mgo. Despus de la

reaccin se espera 5 minutos, se aade 1mL de alcohol amlico, se mezclan


fases y se deja reposar hasta que se separen.
o

Si la alcuota del extracto os encuentra

en agua, se procede de la

misma manera, a partir de la adicin del HCI concentrado.


o

El Ensayo se considera positivo, cuando el alcohol amlico se colorea


de amarillo, naranja, carmelita o rojo. Intensos en todos los casos.

>-

Reaccin con el FeCb 1 %: Utilizar una solucin acuosa de rutina, aadirle


gotas del reactivo de FeCb 1%.

~ __ ~~~,-~
__ ~~~
__ ~~~~~
__ ~ __ ~~~
Universidad Los ngeles de Chimbote / Escuela de Farmacia y Bioqumica

66

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>8.3

Gua de Prcticas

de FarmaCOg/10Sia

V FitOQumlca

Observar a la Luz UV con y sin vapores amonaco en un cromatograma

DETERMINACiN
La hesperidina

DE LA HESPERIDINA:

es un complejo

ctroflavonolde

que se encuentra

en la

porcin blanca y coloreada de la cscara de naranja.

8.3.1
~

8.3.2

OBJETIVOS:
Determinar la presencia de hesperidina

FUNDAMENTO:
La Hesperidina, se caracteriza por ser soluble en alcohol diluido y como todo
flavonoide

tiene fluorescencia

frente a la Luz UV que se acenta en medio

alcalino.

8.3.3

MUESTRA: Cscara de Citrus sinensis "Naranja"

8.3.4

MATERIALES
~
~
~
~
~
~
~

>8.3.4

Y REACTIVOS:
~
);>

Alcohol diluido
NaOH 1%
Beaker de 100 y 250MI
HC110%
Pipetas de 5MI
Tubos de Ensayo
Lmpara UV
CIFe3

Embudo
H2S04 concentrado
Papel Filtro
HN03 concentrado
HCI concentrado
NaOH 30%
NH3 QP
Placas Cromatogrficas

~
);>

~
~

>~

EXTRACCiN:
Tratar 5 9 de la parte blanca de la cscara de naranja con una mezcla de 20
mL de alcohol diluido y 5mL de una solucin de NaOH 10%, dejar en reposo
24 h Y aadirle HCI al 10% hasta pH 5, con lo que se consigue precipitar la
hesperidina.
Dejar en reposo y filtrar, el lquido filtrado se vuelve a dejar en reposo, filtrar
nuevamente

sobre

el anterior

y lavar

el

pp.

hasta

reaccin

neutra.

__________
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Universidad

Los ngeles de Chimbote

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Q.F Mara Isabel palacios Palacios

Posteriormente

cura de Prcticas de sarmaccancsra

secar el residuo, con lo que se consigue

y Fitoqufmlca

que cristalice la

hesperidina.

8.3.5

>-

REACCIONES DE IDENTIFICACiN:
Tratar

mg del pp. ms gotas

de

H.2S04

concentrado,

coloracin amarillo rojizo, que por calentamiento

>

inicialmente

da

pasa a rojo.

Tratar mg del pp. ms gotas de Hel concentrado,

da coloracin

amarillo

intenso.

>

Tratar mg del pp. ms gotas de NaOH 30 %, da coloracin amarillo naranja.

>-

Reaccin de Shinoda similar a la Rutina

>-

Observar la Fluorescencia

a la lmpara UV con y sin vapores de NH3 en un

cromatograma

8.4

RESULTADOS:

__________
~~ __--~
Universidad

Los ngeles de Chimbote

----~~--~--~~~-----------------68
/ Escuela de Farmacia y Bioqumica

Q.F Mara Isabel Palacios palacIos

8.6

CONCLUSIONES:

8.7

CUESTIONARIO:

Gua de prcticas de FarmaCognoSla V FitoqumlCa

de la rutina y la hesperidina

Color de la fluorescencia

Qu color se observa con la rutina y la hesperidina

despus

de hacer la

reaccin de Shinoda.
~

Mencione

otros

tipos

de

flavonoides

que

existan

y esquernatice

su

estructura qumica.
~

De las reacciones

de identificacin

del (1) al (4) explique

por se producen

los cambios y/o aparicin de las colo raciones.


~

A que cree que se deba que los flavonoides presenten fluorescencia.

Propiedades

~ __ ~~~-,
Universidad

farmacolgicas

__ ~~~~

__ ~~

Los ngeles de Chimbote

de los flavonoides.

__ ~~~

__ ~~~~~

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70

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Ciua de Prcticas de FarmaCognosia V Fitocumica

PRCTICA N 9
DROGAS CON CUMARINAS
9.1

E IRIDOIDES

DROGAS CON CUMARINAS


Las cumarinas

son derivados

de la -benzopirona,

es una lctona

cclica que se caracteriza por que dan fluorescencia

frente a la Luz UV y que

se

cumarina

acenta

en

"coumarou'

medio

alcano.

El nombre

de

proviene

de

nombre verncula del "haba tonka" (Dipteryx odorata willd.), del

que se aisl en 1820. Casi todas las cumarinas se encuentran

sustituidas en

7 por un hidroxilo.
Cumarina

Fraxino
OCH3
HO~
HCO~O~O
:3

OBJETIVO:
~

Determinar la presencia de cumarinas en Plantas Medicinales

Observar la Fluorescencia

a la Luz UV

9.1.1 FUNDAMENTO:
Las cumarinas se extraen con acetona tambin en medio alcohlico dando
soluciones

coloreadas.

La Reaccin

de Baljet

es para detectar

grupos

lactnicos y la reaccin del hidroxamato es por el grupo carbonilo y la amina


formndose

9.1.2 MUESTRA:

un compuesto condensado.

Cichorium intybus "Achicoria" y Taraxacum offinacinale "Diente

de Len"

____~~

Universidad

__~~--~~~

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Los ngeles de Chimbote

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Gua de prcticas de Farmacognosia y Fltoqumlca

9.1.3 MATERIALES Y REACTIVOS:

~
~

Matraz de 250 mi
Refrigerante
Embudo
Tubos de ensayo
NaOH 5%
N03Ag 1N en acetona
FeCb
Acido Pcrico 1% en EtOH

>

NaOH 5%
Hel 0.5 mol/L
NaOH 2N
cido actico glacial
NH3
Clorhidrato de hidroxilamina
KOH 10%

en EtOH a110%

9.1.40BTENCfN:
Se toman 5 g de raz, fresca o desecada,
adiciona 50 mL de acetona

por reflujo por 30 minutos,

triturada

y pulverizada

y se le

ter de petrleo, se le somete a una extraccin


obtenindose

una solucin

de color amarillo.

Filtrar.

9.1.5 REACCIONES DE IDENTIFICACiN:


~

Reaccin
evaporaras

de Baljet: Si la alcuota
el solvente

no se encuentra

en alcohol,

en un bao de agua y redisolverse

debe

en la menor

cantidad de alcohol (1 mI) se le adiciona 1 mI del reactivo de Baijet, formado


por cantidades iguales de NaOH 10% Y de Acido pcrico 1 % en EtOH que se
deben mezclar en el momento del ensayo y llevar a BM hasta la aparicin
de una coloracin 6 precipitado rojo (++ y ++++) respectivamente.

>

Ensayo de Hidroxamato frrico: Una alcuota se coloca en un tubo y se


aade 1 gota de clorhidrato de hidroxilamina

en EtOH al 10%. Se aaden

gotas de KOH 10% en etanol y se calienta hasta burbujeo, se aaden unas


gotas de cido clorhdrico
de una coloracin

0.5 mol/L y una gota de FeCh

1%. El desarrollo

violeta (+), claro (++), intenso( +-H-) indica presencia de

cumarinas.
~

Del extracto tomar unos 5 mi y aadirle 2 mi de una solucin de NaOH 5%,


se acenta la coloracin amarilla y se ve un tenue precipitado.

>-

CCF.
o

Sistema de solvente:

Soporte

: Silicagel G

__-----__~~-- __~ __--~-Universidad

Los ngeles de Chimbote

CHCI3: AcOH:H20 (4:1:1)

~-- __--~~~-----------------74

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Gua de PrctIcas de FarmacOgnosia V Fltoqumlca

Revelador

: Luz UV, Sol. de N03Ag 1N en Acetona,


NaOH 2N

9.2

y EtOH(5:15) y AcOH glacial.

DROGAS CON IRIDOIDES:


Son

monoterpenos

ciclopentapirnico,
australianas:

que
los

se

iridoides

caracterizan
toman

por

su

un

nombre

esqueleto
de

unas

biciclico
hormigas

el iridodial, es el compuesto ms sencillo del grupo, se aisl a

partir de Iridomirmex y en estos insectos desempea

Iridoide

un papel de defensa.

Loganina

VaJepotriato

HO
Q-Gluc

ORl

Loganine

9.2.1 OBJETIVO
~

Determinar la presencia de iridoides en Plantas Medicinales

Detectar por cromatografa

la presencia de iridoides

9.2.2. FUNDAMENTO:
Se fundamenta

en una extraccin del iridoide en una especie vegetal fresca

y su posterior determinacin con vainillina en medio cido.

9.2.3 MUESTRA:

Plantago major "Llantn" - Valeriana officinalis "Valeriana"

9.2.4 MATERIALES

y REACTIVOS

Matraz de 250 mi

Metanol etanol Q.P.

__________
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Capilar de vidrio

Vainillina

Papel de filtro

HCI

Alcohol de 70

Placas cromatogrficas

H2S04 concentrado

Ans aldehdo

cido actico glacial

Lmpara UV

~
9.2.5 EXTRACCIN
Macerar algunos gramos de hojas de Plantaga
Va/erana
cantidad

Off valeriana",

y finamente

triturados

en

48 horas a temperatura ambiente. Filtrar.

9.2.6 REACCIONES

>-

recolectados

de alcohol de 70' para cubrir y dejar en reposo por

suficiente

espacio de

recin

majar llantn" o raz de

DE IDENTIFICACiN

Tomar del extracto con un capilar y puntear en un papel de filtro unas 5 a 10


veces, dejando secar despus de cada adicin. Colocar en la mancha 1 2
gotas de la solucin reactivo de vainillina clorhdrica,

calentar suaver:nente

por 5 minutos y observar la coloracin persistente que oscila entre la gama


del rosado al rojo en caso positivo.
~

9.3

CCF
o

Sistema de solvente: BuOH:AcOH:H20

Soporte:

Revelador: Vainillina Clorhdrica al 2%

(63:10:27)

Silicagel G

Anisaldehdo

en medio clorhdrico

AcOH:HCI (2:8)

Lmpara UV

RESULTADOS:

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9.5

CONCLUSIN:

9.6

CUESTIONARIO:
~

Qu

Gua de Prcticas de sarmaceanesta

color de fluorescencia

tiene

la cumarina

V Fltoqumica

y cuando se aade

vapores de amonaco que cambios se observa?


~

Qu

otras

especies

vegetales

contienen

glicsidos

cumarinicos

iridoides?
~

Importancia teraputica de las cumarinas y los iridoides

__________
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PRCTICA N 10
DROGAS CON TANINOS GLlCOS

y CA TQUICOS

OG

COOH

OH
~OH

08~OG
HO

0,----

HO

OH
OH

-,

Tanino glico

lB ~

OH

cido glico
10.1

,\
,\\\

OH

Catequina

OBJETIVOS:

Extraer los taninos de una droga vegetal

Caracterizar

a los taninos mediante reacciones qumicas de identificacin

diferenciacin
~

10.2

Cuantificar espectrofotomtricamente

los taninos en plantas medicinales

FUNDAMENTO:
Los taninos
degradarse
general

son sustancias
o hidrolizarse

son

coloidales

polmeros

de composicin quirrca cornpieja, que a\

se obtienen polifenoles
de alto peso

relativamente

molecular

que forman

simples. En
soluciones

en medio acuoso. Por su naturaleza fenlica reaccionan

sales de fierro dando coloraciones


reducir al permanganato,

azules o verdes,

con las

tienen capacidad

forman complejos con cationes divalentes como el

Pb+2, Hg+2.

10.3

MUESTRAS:
Vainas de Caesalpnea spnosa "tara" Raz de Krameria triandra "ratania del Per"
Hojas de Piper elongatum "matico"

__________
Universidad

~----------------~~----

Los ngeles de Chimbote

de

__ ----~

I Escuela de Farmacia y Bioqumca

---------------81

Q.F Mara Isabel palacios Palacios

10.4

MATERIALES

10.5

Gua de Prcticas de Farmacognosia VFitoQuimica

Y REACTIVOS:

Tubos de Prueba

FeCb 1%

Matraz de 250 mL

KMn041%

Refrigerante

Acetato de Hg 5%

Papel de Filtro

Solucin de gelatina

Embudo

Solucin de alcaloides

Cocina elctrica

Acetato de Pb 5%

EXTRACCiN:
Preparar

extractos

anticipacin,

etanlicos

al 50 % de las muestras

con 48 horas de

con agitacin permanente con la finalidad de extraer los taninos

de las muestras y puedan ser utilizadas en las determinaciones


de diferenciacin

REACIONES

cualitativas,

y de cuantifcacin.

CUALITATIVAS

Filtrar los extractos

DE IDENTIFICACiN:

y concentrar

para reducir el volumen

y prep~rar una

batera de tubos de prueba y realizar las siguientes reacciones:

REACCiN

DE COLORACiN

CON EL CLORURO FRRICO:

Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas del re activo de FeCb
1%;

observar el color que se forman:

>>-

Color azul-negruzco:

Taninos glicos

Color verde-azulado:

Taninos catquicos

REACCiN

DE XIDO REDUCCiN:

Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas del reactivo de KMn04
1%. La reaccin es positiva si desaparece el color violeta del permanganato

REACCiN

DE PRECIPITACiN:

Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas de los reactivos de


Acetato de Plomo 5%, Acetato de Mercurio 5%, Acetato de Cu 5%. Observar

.~ __ ~~
Universidad

__ ~~
__ ~~~
__ ~ __ ~~~
__ ~ __ ~~~
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la formacin

Gua de Prcticas de sarmaeocnesta y Fitoqumica

de precipitados

por la formacin

de complejos

metlicos

tanatos de Pb, Hg Y Cu; respectivamente.

REACCiN

DE

ClORHIDRICO

DIFERENCIACiN:

REACCiN

DEL

FORMOl

O REACCiN DE STIASNY

Los taninos glicos o catquicos se hidrolizan en medio cido y de forrnol.


Los taninos
catquicos

glicos

permanecen

se polimerizan

en solucin,

formando

mientras

una sustancia

que los taninos

insoluble de color rojo

llamado flobafeno o tanino rojo.

10.6

10.7

MATERIALES

Y REACTIVOS:

Matraz de 250 mL

Embudo

Beaker

HCI concentrado

Refrigerante

>

Formol al 38-40%

Cocina elctrica

Pipetas de 5,10 mL

>

Papel de Filtro

FeCb

PROCEDIMIENTO:

"

Tomar unos 50 mL de la muestra problema al 40%, aadir unos 5 mL de


HCI concentrado

y 10 mL de Formol al 38-40% y llevar a ebullicin por unos

30 minutos

en un sistema

de reflujo.

Los taninos

precipitados.

Los taninos catquicos forman precipitados

glicos

no forman

insolubles de color

rojo. Enfriar y filtrar la solucin, tomar una alcuota del filtrado y aadirle
gotas del reactivo de FeCI3 en presencia de acetato de sodio al 5%. Si se
forma una coloracin

azul oscura, indica la presencia de taninos glicos o

elgicos.

10.8

CUANTlFICACIN

DE

TANINOS

POR

ESPECTROFOTOMETRIA:

MTODO DEL CIDO FOSFOMOllBDICO


Se fundamenta
fosfomolbdico

en la capacidad

reductora

del tanino

sobre

el cido

que en medio alcalino da una coloracin azul que puede ser

ledo al espectrofotometro

a 700 nm.

____
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Gua de prcticas de Farmacognosla y Fitoqumica

10.8.1 MATERIALES Y REACTIVOS:

:
:
>

Etanol

Equipo de reflujo

Balanza Analtica

Tungstato de sodio

Erlenmeyer

>
>

Acido fosfomolbidico

Na2C03

Embudo

:
:

cido tnico

>

Papel de Filtro

>

Fiola de 50 mL

Pi eta de 5mL, 1 mL

2 mL

10.8.2 PROCEDIMIENTO
Pesar 10g de la droga en polvo, se lleva a un frasco cnico de 1000 mL con
500 mL de alcohol al 50%. Mantener en agitacin

durante 6 horas en un

agitador magntico, dejar en reposo por 8 horas, luego volver a agitar por 30
minutos y filtrar. Se transfieren

3 mL del filtrado a un matraz aforado y se

diluye con agua destilada hasta enrase (SOLUCIN MUESTRA).


Se prepara un juego de 4 matraces aforados de 50 mL cada uno y se rotula
como B (blanco), S (referencia),

M1 y M2 (muestra problema) y se procede

de la siguiente manera:
REACTIVOS
Solucin Muestra
Solucin de Referencia
Agua destilada

3.0 mL

5.0 mL

2.0 mL

4.0 mL

Reactivo para taninos


2.0 mL
2.0 mL
Se agita, se deja en reposo por 5 minutos
Solucin de Na2C03 20%
1.0 mL
1.0 mL
Se completa con aqua destilada hasta enrase y se mezcla bien.

Leer la absorbancia

M1 Y M2
1.0 mL

2.0 mL

1.0 mL

de la solucin de referencia y las muestras a 700 nm en

un trmino no mayor de 2 minutos.

10.8.3 CLCULOS:

o/

/0

T anmos
.
AmpxStxlOOO
== .
x 100
AstxMpx(IOO - %H)

__________~----------------~~----------~-------------------84

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Bioqumica

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Amp

= absorbancia

Ast

= Absorbancia del estndar


= masa del estndar (g)
= masa de la muestra problema (g)
= porcentaje de humedad de la droga

St
Mp
%H

10.9

de la muestra problema

RESULTADOS:

__________
~~--~~~--~--~~~--~~~~~----------------85

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10.12

Gua de Prcticas de Farmacognosia y FltOqumica

CUESTIONARIO:

Reacciones qumicas de las pruebas de identificacin

para los tar;


..

Mencione otros mtodos de cuantificacin

Cules son las propiedades medicinales de los taninos?

Cules son las especies medicinales que poseen taninos?

Propiedades

de los taninos

medicinales del Piper angustifolium

"rnatico"?

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