Tema

:
Fosforilaci
Fosforilacin a nivel del Sustrato
Preparado: Dr. Cristbal Zambrano Parada
Bacterilogo U.Javeriana
Docente UFPS 03528

INTRODUCCIN
En general, la fosforilacin a nivel de sustrato implica enzimas solubles e intermedios qumicos. La
fosforilacin oxidativa ligada a la respiracin implica enzimas de membrana y un gradiente
transmembrana.
La D-glucosa es el principal combustible de la mayora de los organismos y ocupa una posicin
central en el metabolismo. En la gluclisis una molcula de glucosa se oxida en una serie de
reacciones catalizadas enzimticamente. Durante esta secuencia de reacciones parte de la
energa liberada se conserva en forma de NADH, el cual ser posteriormente oxidado en las
mitocondrias (fosforilacin oxidativa) para producir ATP. Sin embargo, durante la gluclisis, y
tambin en la oxidacin del acetil-CoA, aparecen algunas etapas en las que se produce ATP
mediante un mecanismo distinto de la fosforilacin oxidativa, la fosforilacin a nivel de sustrato.
La formacin de ATP (GTP) por transferencia de un grupo fosforilo al ADP (GDP) a partir de la
energa liberada en la rotura en un enlace rico en energa

DESCRIPCIN DE LAS REACCIONES. APROVECHAMIENTO DE LA ENERGA. ASPECTOS

MECANSTICOS DE LOS ENZIMAS
La fase de beneficios de la gluclisis incluye dos pasos de fosforilacin conservadores de energa
en los que parte de la energa libre de la molcula de glucosa se conserva en forma de ATP.

LA OXIDACION DEL GLICERALDEHIDO 3-FOSFATO Y LA TRANFERENCIA DE FOSFORILO

DESDE EL 1,3 BIFOSFOGLICERATO AL ADP.
El primer paso de esta reaccin en la generacin de un compuesto rico en energa, el 1,3bifosfoglicerato. En esta reaccin el grupo aldehdo del gliceraldehido 3-fosfato es deshidrogenado
a un anhdrido de cido carboxlico con cido fosfrico. Este tipo de anhdrido, llamado acil fosfato,
o
tienen una energa libre de hidrlisis muy elevada (G' = -49.3 kJ/mol). Por tanto, gran parte de la
energa libre de oxidacin del grupo aldehdo del gliceraldehido 3-fosfato se conserva mediante la
formacin del grupo acil-fosfato en C-1 del 1,3-bifosfoglicerato. El aceptor de hidrgeno en la
reaccin es el NAD+.

GLICERALDEHIDO 3-P DESHIDROGENASA

+
Esta reaccin es catalizada por la gliceraldehido 3-fosfato deshidrogenasa. La reduccin del NAD
tiene lugar mediante la transferencia enzimtica de un ion hidruro, produciendo NADH. El otro
tomo de hidrgeno de la molcula del sustrato aparece en disolucin. El gliceraldehido 3-fosfato
se une covalentemente al enzima durante la reaccin. El grupo aldehdo reacciona en primer lugar
con el -SH de un residuo de Cys esencial del centro activo del enzima producindose un
+
tiohemiacetal. Este intermedio enzima-sustrato es oxidado por el NAD , que se reduce y queda
unido al enzima, convirtindose en un intermedio acil-enzima covalente, un tioster. El NADH
+
ligado al enzima es reoxidado por el NAD libre. El enlace entre el grupo acilo y el grupo tiol del
enzima comporta una variacin de energa libre estndar muy elevada. En el siguiente paso este
enlace experimenta fosforlisis (ataque por el Pi) liberando el enzima y 1,3-bifosfoglicerato, cuya
formacin conserva gran parte de la energa libre formada en la oxidacin del grupo aldehdo del
gliceraldehido 3-fosfato.

A continuacin, el enzima fosfoglicerato kinasa transfiere el grupo fosforilo de alta energa desde el
grupo carboxilo del 1,3-bifosfoglicerato al ADP, formando ATP.

Estas dos reacciones constituyen conjuntamente un proceso de acoplamiento de energa donde el

1,3-bifosfoglicerato es el intermedio comn. Se forma en la primera reaccin, que puede ser
endergnica como sistema aislado) y se transfiere su grupo acil fosfato al ADP en la segunda
reaccin que es fuertemente exergnica. El resultado final de estas dos reacciones acopladas,
ambas reversibles en condiciones celulares, es que la energa liberada en la oxidacin de un grupo
aldehdo a carboxilato se conserva mediante la formacin acoplada de ATP a partir de ADP y Pi.

GENERACIN DE FOSFOENOLPIRUVATO Y TRANSFERENCIA DE FOSFORILO DESDE EL

FOSFOENOLPIRUVATO A ADP
La segunda reaccin glucoltica que genera un compuesto con potencial elevado de transferencia
del grupo fosforilo esta catalizada por la enolasa, que promueve la eliminacin reversible de una
molcula de agua del 2-fosfoglicerato, dando fosfoenolpiruvato. A pesar de la pequea variacin
relativa de la energa libre estndar de esta reaccin, hay una diferencia importante en la energa
libre estndar de hidrlisis de los grupos fosfato del reactivo y del producto. La del 2-fosfoglicerato
es -17.6 kJ/mol y la del fosfoenolpiruvato de -61.9 kJ/mol.

Finalmente, la transferencia del grupo fosforilo desde el fosfoenolpiruvato al ADP catalizada por la
piruvato quinasa conlleva la produccin de ATP por fosforilacin a nivel de sustrato. La reaccin
global tiene una variacin de energa libre estndar negativa y grande, debido a la conversin
espontnea de la forma enol del piruvato en la forma ceto. Al rededor de la mitad de la energa de
o
hidrlisis del fosfoenolpiruvato se conserva en la formacin del enlace fosfoanhdro del ATP (G' =
-30.5 kJ/mol), constituyendo el resto una gran fuerza propulsora que empuja la reaccin hacia la
sntesis de ATP. La reaccin de la piruvato kinasa es prcticamente irreversible en condicione
intracelulares.

CICLO DEL ACIDO CITRICO

OXIDACIN DE A-CETOGLURATO A SUCCINIL-COA Y CONVERSIN DEL SUCCINIL-COA

EN SUCCINATO
La descarboxilacin oxidativa del -cetoglutarato por accin del complejo de la -cetoglutarato
+
deshidrogenasa produce el succinil-CoA. En esta reaccin el NAD acta de aceptor de electrones
y el CoA es el transportador del grupo succinilo. La energa de oxidacin del -cetoglutarato se
conserva gracias a la formacin del enlace tioster del succinil-CoA. El complejo de la cetoglutarato deshidrogenasa posee tres enzimas, as como pirofosfato de tiamina (TPP,
+
transporta grupos aldehido activos), lipoato (transfiere electrones y grupos acilo), FAD, NAD y
coenzima A

El succinil-CoA, al igual que el acetil-CoA, tiene un enlace tioster con una energa libre estndar
o
de hidrlisis altamente negativa (G' =-36 kJ/mol). La energa liberada en la rotura de este enlace
se utiliza para promover la sntesis de un enlace fosfoanhdrido en GTP o ATP.
El enzima que cataliza esta reaccin reversible es conocido como succinil-CoA sintasa. Esta
reaccin conservadora de energa presenta un paso intermedio en el que la misma molcula de
enzima queda fosforilada en un residuo de His en el centro activo.
Este grupo fosforilo que posee un elevado potencial de transferencia de grupo, es transferido a
GDP (o ADP) para formar GTP (o ATP). Las clulas animales tienen dos isozimas, uno especfico
para ADP y otro para GDP.

La succinil-CoA sintasa tiene dos subunidades,

que presenta el resido fosfo-His y el sitio de unin
para CoA, y que confiere especificidad para ATP o
GTP. El sitio activo se encuentra en la interfase
entre subunidades. El centro activo de la succinilCoA incluye parte de las subunidades (azul) y
(marrn). Las hlices "poderosas" (azul oscuro y
marrn oscuro), una de cada subunidad, depositan
la carga parcial positiva del dipolo de la hlice cerca
del grupo fosfato (naranja) en la His de la cadena ,
estabilizando el fosfoenzima intermedio. El CoA se
muestra en color rojo.

EL RESTO DE ATP EN LA CLULA SE PRODUCE POR FOSFORILACIN OXIDATIVA

BIBLIOGRAFIA

Bioqumica. (3 Ed.). C.K. Mathews, K.E. van Holde, K.G. Arhen. Prentice Hall, Pearson
Educacion, Madrid. (2002)
Biochemistry (5 Ed.). J. M. Berg, J. L. Tymoczko and L. Stryer., W.H. Freeman. New York.
(2002)
Lehninger Principles of Biochemistry (3 Ed.). D.L. Nelson and M.M. Cox. Worth Pub.. New
York. (2000). Edicin en Castellano (2002)

Biochemistry (4 Ed.). G.L. Zubay. Wm C. Brown Publishers, Dubuque. (1998).

Protein-Protein Interaction Server

CD-ROM: The Cell: a Molecular Approach. G.M. Cooper. ASM Press Washington D.C. y
Sinauer Associates.
Molecular Biology of the Cell. The Problems Book. J. Wilson y T. Hunt. Garland Publishing,
Inc., Nueva York. (1994).
Biochemistry Resource Book. L.A. Moran y K. Gray Scrimgeour. Neil Patterson Publishers
Prentice Hall, Englewood Cliffs. (1994).
Bioqumica Cuantitativa. II Cuestiones sobre Metabolismo. J.M. Macarulla, A. Marino y A.
Macarulla. Editorial Revert, S.A., Barcelona. (1992).