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Espectroscopia Raman

Thiago Jos Fatobene


Especialista de Produto
PerkinElmer do Brasil

Introduo Terica

Histrico
Primeiro postulado por Smekal
em 1923
Dr. Chandrasekhara Venkata
Raman
Primeiro a observar o
espalhamento Raman em
1928 (junto com K.S,
Krishnan)
Raman ganhou o prmio
Nobel de Fsica em 1930

Raman
Quando uma molcula irradiada, a energia pode ser transmitida, absorvida, ou
espalhada. A espectroscopia Raman baseada na deteco da luz espalhada.
No espalhamento Rayleigh (

), a interao da molcula com o fton no

provoca mudanas nos nveis de energia vibracional e/ou rotacional da molcula.


Assim
O efeito Raman pode ser explicado pela coliso

entre o fton incidente e

a molcula. Isto muda os nveis das energias vibracional e/ou rotacional da molcula
por um incremento (
E). Pela lei de conservao de energia, isto significa que as
energias dos ftons incidente e espalhado sero diferentes, ou seja

. Se a molcula absorve energia, E positiva, incidente > espalhada., estas so

as

do espectro (regra de Stokes de fluorescncia, incidente > fluorescncia).

Se a molcula perde energia, E negativa, incidente < espalhada, linhas


espectro.

do

O que os eletrons fazem

O que espalhamento Raman?

Raman

As linhas Stokes e anti-Stokes correspondem a vibrao


molecular da amostra em estudo

Raman

O espectro de Raman plotado em cm-1, mas esta


unidade no um valor absoluto como no IR e as medidas
no so feitas no MID-IR.
O espectro Raman o comprimento de onda da radiao
espalhada em relao ao da radiao de excitao (laser).
As leituras so feitas na regio do visvel e do NIR.
Radiao Detectada

Espectro Raman

785nm = 12739cm-1

0cm-1

852nm = 11739cm-1

1000cm-1

898nm = 11139cm-1

1600cm-1

OBS: laser = 785nm

Linhas Stokes e Anti-Stokes Espectro


Raman do Cyclohexano

Sem
mudana
de
energia

Ganho de
energia

Perda de
energia

Linhas Stokes e Anti-Stokes Espectro


Raman do Cyclohexano

No
Energy
Change

Energy
Gain

Espectro Raman

Energy
Loss

O espalhamento da luz esta ao nosso redor ..

O sol a fonte de todos os comprimentos de onda da luz visvel.


A luz azul espalhada pelas molculas da atmosfera mais que a luz vermelha,
porque essas molculas so menores que os comprimentos de onda da luz.
Isso explique o porque o cu azul e que no por do sol vemos uma luz vermelha.
H partculas grandes de gua nas nuvens que promovem um espalhamento
igual em todos os comprimentos de onda e com isso dando um efeito branco
a nuvem.

Efeito dos comprimentos de onda


Intensidade de espalhamanto = Kl(Pol)2v4
K uma constante
l o caminho ptico
Pol a polarisabilidade da molcula e nica para cada molcula.
V a freqncia da radiao incidente.
Isso significa que o laser azul d um sinal mais intenso que o vermelho
ou NIR.
No entanto, a fluorescencia compete com o espalhamento e se estiver
presente ser mais forte que o espalhamento e ir mascarar o
espectro Raman.
Esse o motivo do porque alguns laboratrios usam NIR FT-Raman.

Fluorescncia

Green laser
Red laser

785nm laser

Espectro de uma tampa de caneta


532 nm

785 nm

1064 nm

Lasers usados pela PE

O laser de 785nm aceito como o melhor, porque:


a) bom espalhamento Raman
b) alta sensibilidade com o detector CCD
c) reduo ou sem efeito da fluorescncia

Quando a fluorescncia um problema usa-se o NIR laser


(1064nm).
a) pouco ou nenhum efeito de fluorescncia
b) porm, fraco espalhamento e detectores menos sensveis.

Outras tcnicas: RR, SERS and SERRS


RR: Resonance Raman
Ocorre quando a energia de um fton do laser coincide com o de
uma transio eletrnica de um grupo cromforo do sistema em
estudo.
SERS: Surface Enhanced Raman Spectroscopy
O espectro Raman de uma molcula que absorvida sobre uma
superfcie de ouro ou prata pode ter o sinal significamente
aumentado.
SERRS: Surface Enhanced Resonance Raman Spectroscopy
Similar ao SERS, mas usa um laser com energia que coincide
com o grupo cromforo da molcula em estudo.
SERS / SERRS podem aumentar o sinal em at bilhes de vezes.

Rhodamine labelled oligonucleotide (SERS)

80 fmol

1000

1200

0.8 fmol

1400
Raman Shift cm

1600
-1

1800

1000

1200

1400
Raman Shift cm-1

1600

1800

Resonance Raman

Espectrmetros Dispersivos
Czerny-Turner

Sistema requer cerca de 10s para 1s de aquisio do espectro.


Diferentes partes do espectro so adquridas em diferentes tempos.
Grande problema para anlise de sistemas dinmicos.

Exemplo

Espectro Raman adquirido em 7


etapas.

Espectrmetros Dispersivos
Echelle

Aquisio do espectro instantaneamente.


Todos os comprimentos de ondas analisados simultaneamente sem
movimentao de nenhuma parte ptica..

3500 cm-1

1000
1500

500
1000

95 cm-1
500

Exemplo

HS

OH

NH

N
N

3000

2500

2000

1500

1000

500

FT-Raman
Ocasionalmente a amostra pode apresentar fluorescncia.
Neste caso, para um espectro limpo usa-se um laser Nd:YAG (NIR
1064nm).
Para sistemas YAG usa-se detectores InGaAs ou Germanio. Estes
possuem uma sensibilidade de at 20x menor que o de slica.
Para compensar a baixa sensibilidade usa-se lasers de 1 - 2w de potncia.
Porm, deve-se tomar cuidado para no queimar a amostra.

Benefcios

Raman
A espectroscopia Raman uma tcnica complementar ao Infravermelho.
Assim como o infravermelho, o espectro Raman pode ser usado para
identificao (finger print).
Fornece informaes sobre vibraes homo - nucleares simtricas como
os estiramentos -C=C- e S=S- que so fracas ou inativas no infravermelho.
Os anis aromticos possuem bandas fortes.
As amostras precisam de pouca ou nenhuma preparao.
uma tcnica no destrutiva. Anlise in situ.
O vidro um bom material para ser usado como janelas para medidas por
Raman.
No requer acessrios especiais
No h interferncia de umidade.

Espectro de IR e Raman do cido Benzico

IR

Raman

Comparao Raman, Mid IR, e Near IR

&'
'

!!!" #!!!

$ %
%

Raman

Raman

Raman

Raman
Touch Button
Compartimento
para vrios tipos de
amostras

Raman

Raman

Raman

Raman

Raman

RamanMicro 200

785nm laser
95 3200 cm-1 range
10cm-1 FWHM resolution, 3cm-1 pixel resolution.
10 micron spot
CT

RamanMicro 200
Raman Optical Head
Raman / Visible Image
selector

Spectrometer

Fiber Optic
Connectors
100W Halogen
Lamp

RamanMicro 200

Sample Holder

RamanMicro 200 Laser Spot Size

50 Micron
Pinhole

5X

Objective

Spot Size

Depth of Field

100x

10
m

20
m

50x

20
m

40
m

20x

100
m

250
m

5x

200
m

600
m

Laser Spot

10X

40X

100X

Comparao de Resoluo

10cm-1
4cm-1

Comparao de resoluo

10cm-1
4cm-1

RamanMicro 400

785nm laser
95 3200 cm-1 range
4cm-1 FWHM resolution, 1cm-1 pixel resolution.
10 micron spot
ECHELLE

Dentro do RamanMicro 200 & 400


Optical Head,
detailed block
diagram below

Laser

Objective Lens

High
Performance
TE cooled CCD
Detector

Spectrograph

Raman Microscope

RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe


Optical Head,
detailed block
diagram below

Objective Lens
Laser
Laser
Switch

Spectrograph

Objective Lens

RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe


Optical Head,
detailed block
diagram below

Objective Lens
Laser
Laser
Switch

Spectrograph

Objective Lens

Dentro do RamanStation 400F


Optical Head
Video
Head

Objective Lens

Laser
Switch

Laser

Motorized
XYZ Stage

Optical Probe Head,

detailed block diagram below

Spectrograph

Objective Lens

Aplicao

Anlise num frasco ambar de 4L

Raw Material
(Liquid)
Spectrum of
Bottle
Auto subtrao do
espectro do frasco

Spectrum with
glass removed

Micro Raman

Raman
Mapeamento
Mapeamento de um comprimido de 18mm x 8mm.

Imagem Qumica
As cores representam a composio
qumica

Aspirin

Caffeine

Acetoaminophen

3000

2500

2000

1500

1000

500

Imagem Qumica e Mapeamento

RamanStation 400 ou MicroRaman

Passo da XYZ stage < 1micron


Op
)
)
)
)
)

es de amostragem:
1.
Single point,
2.
Super-Macro (large spot),
3.
Grid sampling,
4.
Line scan,
5.
Depth profile.

Tintas de uma brochura comercial

Raman
Identificao de narcticos e substncias de abuso

Raman
Amphetamine
Methamphetamine

Cocaine

Heroin

Raman

Raman
Anlise de leos e gorduras

Polimorfismo
Polimorfismo so diferentes formas cristalinas
para uma mesma substncia.
O espectro Raman espcies de polimorfismo
so similares, mas diferenas pode ser
observadas.
Form A

Form B

Raman

*
+

3000

,-

2500

(
*
2

3000

*
/

2000

1500

1000

500

2500

2000

1500

1000

500

&1&

2500

3000

0 .

2000

1500

1000

500

3000

2500

2000

1500

1000

500

Raman de Tecido Canceroso

Diferenas

Canceroso

Tecido saudvel

3000

2500

2000

1500

1000

500

Alimentos
Sem interferncia da gua

Raman de Polmeros

PEAD

PVC

PET

Nylon 11

Raman
Hidrogenao do Fenil Acetileno
A hidrogenao do Fenil Acetileno para a formao do Estireno
e do Etil Benzeno um reao que envolve altas presses e
altas temperaturas.
A tcnica tradicional de anlise por CG. O que necessrio
uma amostragem de tempos em tempos provocando uma
alterao da presso e uma alterao do equilbrio da reao.
Com Raman isso no ocorre, uma vez que a reao
monitorada atravs de uma probe.

Raman
O reator consiste de:
Uma roda de ao inoxidvel impregnada de catalisador
Uma soluo de reao: Heptano (solvente) e Fenil Acetileno
Alta presso de H2

Raman
A cada 10 minutos foi coletado um espectro Raman
Mais de 50 espectros foram coletados durante todo o experimento
Atravs dos espectros visvel o consumo de Fenil Acetileno atravs
da queda da tripla ligao em 2115 cm-1

Raman
Hidrogenao

CC

C=C

Correlao entre Raman e CG


Starting Material CC
Desired Product C=C
Reaction Overshoot C-C

100

% Composition

80

60

40

20

10

20

30

40

50

60

70

80

Time / mins

Solido - CG

Sem preenchimento - Raman

Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
A rigidez e a resistncia ao
impacto de um polmero esta
diretamente associada ao seu grau
de cristalinidade.
Um melhor entendimento do
processo de cristalizao do
polmero pode resultar em frascos
de menor espessura e de mesma
resistncia.
Menos material mais economia e
menor o impacto sobre o meio
ambiente.

Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
Amostras cristalinas apresentam um pico em 1096 cm-1.
Material amorfo apresenta apenas um ombro em 1119 cm-1.

Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
Amostras cristalinas apresentam um pico estreito em
1730 cm-1.

Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
O grfico abaixo mostra a variao da cristalinidade
(1096/1119) em funo do comprimento do frasco.
O material essencialmente amorfo no topo e na base do
frasco e apresenta uma certa cristalinidade no resto do frasco.

PerkinElmer do Brasil Ltda.


Obrigado pela ateno!

Thiago Fatobene
Especialista de Aplicao
thiago.fatobene@perkinelmer.com

PerkinElmer do Brasil
Perdizes - So Paulo