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PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE FENOLES

Protocolo basado en una reaccin colorimtrica de oxido-reduccin,


empleando como agente oxidante reactivo de Folin-Ciocalteu.
PREPARACIN DE SOLUCIONES.
Solucin estndar de ac. glico (500 mg/L). Preparar una solucin
estndar disolviendo 500 mg de ac. glico en una pequea cantidad de
etanol y aforar con agua destilada hasta 1 L. Conservarla en el
refrigerador por un da o dos como mximo. Es conveniente congelar y
posteriormente descongelar pequeos volmenes para utilizarlos como
control.
Solucin estndar de carbonato de sodio (75 g/L). Pesar 75 g de
carbonato de sodio (Na2CO3) y aforar a 1L con agua destilada.
Solucin reactiva de FOLIN-CIOCALTEU: Preparar una solucin 1:10
2.- Realizar las diluciones de acuerdo a la siguiente tabla.
1. 3.- Agregar a cada muestra 250 L de FOLIN (1N) y mezclas (agitacin).
Esperar entre 3 a 8 minutos antes de agregar el Na 2CO3.
Posteriormente agregar 1250 L de Na2CO3 al 20%.
4.- Dejar reposar por 2 horas y posteriormente leer a 760 nm
Lde sol.
estndar
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
Total =
1100 L

L de
agua
destilada
500
480
460
440
420
400
380
360
340
320
300

L de
FOLIN
(1N)
250
250
250
250
250
250
250
250
250
250
250
2750

L de
Na2CO3
al 20%
1250
1250
1250
1250
1250
1250
1250
1250
1250
1250
1250
13750

Absorban
cia a 760
nm

Extraccin y determinacin de fenoles totales:


1. Pesar 500 mg de muestra y colocarlos en 10 ml de etanol. Conservar en
refrigeracin (0C) durante 48 h. De ser necesario triturar la muestra con
3 a 5 ml de etanol en un mortero y posteriormente aforar a 10 mL.
2. Tomar 1.5 ml de muestra y centrifugar a 1300 rpm por 15 min
3. Transferir 200 L de sobrenadante y agregar 300 L de agua destilada
4. Agregar 250 L de del reactivo Folin-Ciocalteu (Diluido 1:10)
5. Esperar entre 3 a 8 minutos antes de agregar el Na 2CO3.
6. Agregar 1250 L de Na2CO3 20%, conservar la solucin en la oscuridad a
23C. Esperar al menos 2 h antes de hacer las lecturas.
7. Leer a 760 nm