Está en la página 1de 7

UNIVERSIDAD DE COSTA RICA

Escuela de Qumica, Seccin de


Qumica Orgnica
Laboratorio de Qumica Orgnica I QU0213
I Semestre de 2015

Nombre: Jairo Vargas Mesen

Grupo: 01

Carn: B47375

Fecha: 14 de Abril del 2016

CROMATOGRAFIA
INTRODUCCIN:
La Cromatografa, es un proceso de separacin fsica de ciertos
compuestos presentes en una sustancia, el cual consta de dos
componentes para su funcionamiento. Uno de los componentes, es la
fase estacionaria, la cual es aquella que se encuentra inmvil durante
el proceso, por otro lado se tiene la fase mvil, la cual consiste en un
flujo de sustancia el cual se mueve a travs o por medio de la fase
estacionaria.1 La separacin de ciertos componentes depende de la
afinidad o compatibilidad que tengan los mismos a la fase mvil.
Para la separacin por el mtodo de cromatografa, se pueden
encontrar distintos mtodos como la cromatografa gas-solido, Liquida
de alta eficiencia y las cromatografas de capa fina y de columna, las
cuales se efectuaron en el laboratorio.
Tanto para Cromatografa de columna, como para la de capa fina se
utiliz silicagel o cido silcico, el cual es una sustancia solida polar
utilizada como fase fija en el experimento.
Para cromatografa de capa fina, la eficiencia de separacin se
determina por la relacin frontal de un componente la cual est dado
por:
d
Rf = 1 [ 1 ]
dd
Donde:
Rf: Relacin frontal
d1: Distancia recorrida por el componente, desde el punto de
aplicacin
df: Distancia entre el punto de aplicacin y el final de la placa

En el campo industrial, la Cromatografa liquida de alta eficiencia (Por


sus siglas en ingles HPLC), es altamente utilizada por su gran
selectividad y variedad de fases estacionarias. Su gran uso en la
industria se debe a las pocas delimitaciones que posee para llevar a
cabo el proceso, ya que, aspectos como la estabilidad trmica y la
volatilidad no afectan el proceso e incluso es capaz de efectuar
separaciones inicas, de polmeros y grupos multifuncionales. Entre
su amplio y verstil campo de trabajo se pueden encontrar la
utilizacin del mismo para medicina forense, Bioqumica, frmaco,
produccin de alimentos y procesamiento de los mismos, como la
separacin y purificacin de metaboltos y compuestos naturales.2
Esta prctica fue efectuada con el propsito de realizar una
cromatografa tanto de columna, como de dos dimensiones, con el fin
de separar e identificar los pigmentos principales de una sustancia.

RESULTADOS:
Cuadro I: Datos experimentales de Cromatografa de placa fina
obtenidos en el laboratorio.
Fase
mvil
H2O

Etanol

H2O+
Etanol
(1:1)
H2O+
Etanol

Sustancia
Fluorescena
Mezcl Fluorescena
Azul de
a
Metileno
Azul de Metileno
Fluorescena
Mezcl Fluorescena
Azul de
a
Metileno
Azul de Metileno
Fluorescena
Mezcl Fluorescena
Azul de
a
Metileno
Azul de Metileno
Fluorescena
Mezcl Fluorescena
Azul de
a
Metileno

Distancia
recorrida
2,5
2,5
0,0

Rf

0,0
2,25
2,25
0,1

0
0,9
0,9
0,04

0,1
2,0
2,0
~0,0

0,04
0,8
0,8
0

~0,0
2,0
2,0
0,0

0
0,8
0,8
0

1
1
0

(3:7)
H2O+
Etanol
(7:3)

Azul de Metileno
Fluorescena
Mezcl Fluorescena
Azul de
a
Metileno
Azul de Metileno

0,0
2,25
2,25
0,0

0
0,9
0,9
0

0,0

DISCUSIN:
Para el experimento de cromatografa se efectu la misma, tanto con
capa fina, como de columna. Para la cromatografa de capa fina se
utilizaron 4 diferentes fases mviles, entre sustancias puras y mezclas
de sustancias.
Dentro de las sustancias utilizadas se encuentran el H 2O, etanol, y
tres mezclas de ambas sustancias en diferentes proporciones.

Figura 1: Estructura molecular del etanol.

Como se observa en la figura 1, el etanol es un compuesto que debe


su polaridad a las interacciones presentes en el enlace entre el
carbn y el Oxigeno, en donde el Oxigeno, al ser mas electronegativo,
genera una carga parcial negativa de su parte y una parcialmente
positiva por parte del Carbn. Adems se considera un compuesto
protico gracias a la presencia de Hidrgenos en su estructura, lo cual
la convierte en una molcula capaz de denar protones.

Figura 2: Estructura molecular del agua y sus interacciones polares.

Por su parte, en la figura 2, se puede observar la estructura molecular


del agua, en la cual se muestra las interacciones electrnicas entre el
Oxigeno y los dos tomos de hidrogeno, los cuales son menormente
electronegativos, y que a su vez son los que le dan a la molcula la
caracterstica de ser protica.

Las sustancias que requeran ser eludas por las diferentes fases
mviles en la cromatografa, fueron: la fluorescena, el indicador Azul
de metileno, y una mezcla proporcional de ambas sustancias.

Figura 3: Estructura molecular de la Fluorescena.

La fluorescena es una sustancia Polar debido a las interacciones


entre los tomos de carbono, oxigeno e Hidrogeno presentes a lo
largo de toda su estructura, como se muestra en la figura 3, los
cuales generan cargas parciales y adems es una sustancia protica
por su habilidad de donar protones H +. La fluorescena es una
sustancia que posee aspectos compatibles tanto con el agua, como
con el etanol; es decir, sus propiedades polares y proticas son
similares, lo cual son aspectos que facilitan la elucin de la
sustancias, adems de la facilidad de formacin de puentes de
Hidrgenos, el cual es un aspecto que promueve la solubilidad de las
sustancias.3 Sin embargo, segn los datos recopilados y tabulados en
el cuadro I de la seccin de resultados, la fluorescena posee mayor
afinidad al agua.
En lo que respecta a los ensayos con H2O pura, la fluorescena obtuvo
una relacin frontal de recorrido (R f) igual a 1, es decir la capacidad
de elucin del agua con respecto a la fluorescena es mxima. Por
otra parte se tiene que al utilizar el Etanol, el R f obtenido para la
fluorescena es de 0,9; y al utilizar las mezclas de H 2O y etanol en
diferentes proporciones, el eluente con mayor cantidad de Etanol,
produca un Rf menor que aquel que posea mayor cantidad de H2O.
A pesar de que el H2O y el etanol son tanto polares, como proticas,
existe una mejor elucin por parte del agua, con respecto a la
fluorescena. Lo anterior es debido a que el agua posee la habilidad
de formar fcilmente puentes de hidrogeno al igual que la
fluorescena, aspecto el cual los hace ms afines y la convierte en una
sustancia fcilmente soluble en agua.4 Segn datos del ACOFARMA, la
Fluorescena es muy soluble en agua, mientras que en presencia de
Etanol es ligeramente soluble.5

Figura 4: Estructura molecular del indicador Azul de metileno.

En el caso del Azul de metileno, se puede observar en la figura 4 que


es unas sustancias con diferentes puntos de polaridad, dispersos a lo
largo de toda la estructura molecular. Se puede notar que las
secciones encerradas a color son los puntos de polaridad, mas sin
embargo la seccin encerrada en rojo es la que produce la mayor
polaridad en la molcula debido a las interacciones entre el cloro y el
azufre, debido a las diferencias de electronegatividad de ambos
compuestos, las cuales son mayores que las producidas por los
enlaces carbono, nitrgeno. Segn las propiedades de la sustancia,
esta posee afinidad con el agua y el etanol por sus caractersticas
polares, sin embargo, al realizar los ensayos en el laboratorio el azul
de metileno no tuvo movimiento relevante como se puede observar
en la Figura 5.

Figura 5: Fotografas de los resultados obtenidos en la seccin: Cromatografa de


placa fina.

Como se divisa en la figura, el azul de metileno puro (el cual se


encuentra en la parte derecha de cada placa) y el Azul de metileno
presente en la mezcla (el cual se encuentra en la parte central de
cada placa), no presentan movimiento alguno ~0 y se encuentran
sobre la lnea de aplicacin.
El azul de metileno es soluble en Agua y en Etanol, adems su estado
fsico es slido por lo cual se prepara una disolucin del mismo en
agua o etanol para poder utilizarlo como indicador.6
Sin embargo durante los ensayos realizados el mismo no corri en la
cromatografa de placa fina, algunos de los posibles factores que
pudieron haber afectado el experimento, es la pureza de los reactivos
utilizados en el laboratorio; otro aspectos posible es la afinidad que

posee este por la fase fija, en este caso silicagel en la placa, la cual es
una sustancia polar al igual que el Azul de metileno como se observa
en la figura 6, en donde las interacciones entre el oxigeno y el silicio,
los cuales generan cargas parciales a lo largo del compuesto.

Figura 6: Estructura molecular de la Silica gel.

Finalmente se efectu el proceso de Cromatografa de columna en la


cual se utiliz la silica gel como fase fija, H 2O y Etanol como fases
mviles y una mezcla de Azul de metileno y fluoreseina como
pigmentos principales.

Figura 6: Proceso de Cromatizacion de columna.

Como se observa en la figura 6, el lquido verde, pertenece a la


mezcla de Fluorescena y Azul de metileno utilizado, mientras la parte
blanca es la fase fija de silica gel, la cual se mezcl previamente con
agua para poder colocarla en la columna. Al aadir agua al proceso
de cromatizacion, como era de esperar, el H 2O al fluir en medio de la
silica gel, diluye a la fluorescena y la arrastra a travs de la columna.
Al concluir el arrastra de la Fluorescena, se cambio de diluyente por
Etanol y se esperaba un posible movimiento por parte del azul de
metileno, sin embargo, el mismo no fluy a travs de la columna
junto con el etanol. Durante el proceso se pudo observar que se
form un slido azul sobre la capa de silica gel, el cual se concluye
que es del Azul de metileno. Una posible teora, para explicar el fallo
de esta parte del experimento, es que la afinidad del azul de metileno
con la silica gel (fase fija), era mayor que con cualquiera de los

diluyentes y por ello no se movi a travs de la columna. Por otra


parte se tiene que el Azul de metileno es una sustancia fsicamente
solida y que su aspecto liquido se debe a la disolucin de la misma en
H2O, por lo que se puede determinar que la afinidad por parte del Azul
de metileno a la silica gel es tal, que al fluir el agua a travs de la
silica a lo largo de la columna, al azul de metileno se separ de la
mezcla y se precipito como un slido lo cual impidi el arrastre de la
sustancia.

CONCLUCIONES:

El proceso de cromatografa posee gran utilidad a nivel


industrial y sus diferentes mtodos de realizacin influyen en la
diversidad de aspectos y campos a los cuales se puede aplicar
dicho mtodo.
Es importante, el anlisis cualitativo de las sustancias deseadas
durante la separacin y de las que se encuentren en disolucin
con la misma, para as poder determinar las diferentes fases a
utilizar durante el proceso para un mayor y efectivo ensayo.
A nivel industrial existen diversos mtodos de cromatografa,
los cuales permiten la versatilidad y selectividad de productos a
ensayar, lo cual permite un anlisis y comparacin entre la
efectividad y productividad de cada proceso.

REFERENCIAS:
1
Santiago V. Luis Lafuente, M. I. (1997). Introduccin a la qumica
orgnica. Castelln, Espaa: Universitat Jaume.
2
Belmonte, M. I. (20 de 03 de 2014). Laboratorio de tecnicas
instrumentales UVA. Obtenido de
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisisqumicos/cromatografa-de-lquidos-hplc
3
Guarniso, A. (1998). Experimentos de Qumica Orgnica. Quindio,
Colombia: Ediciones Elizcom.
4
Torales., R. S. (2009). Hoja de datos de seguridad de Fluoreseina
sodica. Reactivos Quimica Meyer, 4.
5
ACOFARMA. (2011). Ficha de datos de seguridad. ACOFARMA, 3.
6
Escalante, D. J. (2013). MANUAL DE PREPARACIN DE REACTIVOS.
Laboratorio de Ciencias Fisiolgicas, 6.