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2.

MATERIALES Y MTODOS
2.1 MUESTRA ALIMENTICIA: Harina de soya, Frijol negro molido, pasta de cacao
2.2. MATERIALES
Material de vidrio:beaker, embudos, Fiolas de 10 ml, tubos de ensayo, pipetas
de 1, 5, 10 ml
Papel Filtro
Micropipeta de 100-1000 microlitros
Bolsas negras
Agitador
2.3 REACTIVOS
Solucin madre de catequina. 2mg/ml de metanol puro. Guardar en frasco
mbar a 4 C.
cido clorhdrico concentrado al 1% en metanol pro (blanco de dilucin)
cido clorhdrico concentrado al 8% en metanol puro
Vanillijna al 1% en metanol puro. Guardar en frasco mbar a 4 C.
Solucin reactiva (1:1): Mezclar a volmenes iguales la vanillina al 1% en
metanol puro con cido clorhdrico concentrado al 8% en metanol puro. Esta
dsolucin reactiva debe ser preparada en mismo da del anlisis de las
muestras. Esta solucin debe ser colocada en bao mara a 37C antes de
iniciar el anlisis de las muestras
2.4 EQUIPOS
Agitador magntico
Agitador orbital
Balanza analtica
Espectofotmetro}
Bao Mara

2.5 PROCEDIMIENTO
A. PREPARACIN DE LA MUESTRA

A 2g de muestra molida y tamizada hasta un dimetro de partcula de 60 mesh


se adicion 10 ml de una solucin al 1% de HCl concentrado en metanol y se
mantuvo en agitacin durante 20 minutos a temperatura ambiente en ausencia
de luz
Se filtr y se complet el volumen en una fiola de 10 ml con la solucin al 1%
de HCl concentrado en metanol
Si la solucin es muy oscura se debe diluir, tomando una alcuota de 0.5 ml y
llavarla a 10 ml

B. DETERMINACION DE LOS TANINOS

Se coloc en un tubo de ensayo una alcuota de 800 microlitros y se complet


el volumen a 1 ml con metanol puro se hicieron dos repeticiones.
Se adicion 5 ml de la solucin reactiva
En otro tubo de ensayo se prepar el blanco (1 ml metanol + 5 ml de reactivo
vanillina)
Colocar ,os tubos en Bao Mara a 37C por 20 minutos
Se enfri y se ley en el espectrofotmetro a 500 nm
Se hizo una curva patrn en las mismas condiciones utilizando catequina en
concentraciones de 0.2 a 1.0 mg/ml

3.RESULTADOS

Cuadro 1. Resultados del %equivalente de catequina de las muestras harina de


soya, pasta de cacao, frejol negro
Muestr
a
harina
de
soya
pasta
de
cacao
frejol
negro

Repeticin

Promed
io

R1
R2

0.017
0.02

0.0185

R1
R2

0.093
0.067

0.08

R1
R2

0.15
0.135

0.1425

Factor
de
diluci
n
no

Concentrac
in
alcuota
(mg/ml)
0.11731975

Muestra
total

%
catequin
as

1.173197
5

0.0586598
75

diluci
n 0.5
en 10
no

0.25468

50.936

25.468

0.39427375

3.942737
5

0.1971368
75

ANEXOS
CALCULOS
Estos fueron los resultados para calcular la curva patrn
CURVA DE
CATEQUINA
mg/m
L
Absorbancia
0.1
0.05
0.2
0.08
0.4
0.1
0.6
0.19
0.8
0.35
Con los datos de las absorbancias, se determin la siguiente siguiente grfica

Luego se obtuvo la siguiente ecuacin


y = 2.2335x + 0.076
Luego con esta ecuacin se procedi a calcular las concentraciones (mg/ml)
Se procede a calcular los % equivalente de catequina previo clculo de la
concentracin de muestra en las diluciones

soja

cacao
frejol
negro

Absorban
%Equivalente en
cia
mg/ml
catequina
0.078514
0.017
46
0.1139695
0.085992
0.02
02
0.12067
0.267946 2.679461
0.093
16
62
0.2837155
0.203140 2.031405
0.067
58
78
0.2256445
0.410019
0.15
94
0.411025
0.372632
0.135
1
0.3775225